CÁC PHƯƠNG PHÁP hóa lý TRONG KIỂM NGHIỆM THUỐC p1

KHOA DƯỢC BỘ MƠN HĨA PHÂN TÍCH – KIỂM NGHIỆM CHƯƠNG CÁC PHƯƠNG PHÁP HÓA LÝ TRONG KIỂM NGHIỆM THUỐC (2 giờ) Giảng viên: Phan Thị Thu Trang Email: phantttrang47@gmail.com Điện thoại: 0702396147 MỤC TIÊU HỌC TẬP Trình bày phương pháp định lượng quang phổ tử ngoại khả kiến Giải thích vận dụng kỹ thuật sắc ký pha đảo công tác kiểm nghiệm thuốc Trình bày phương pháp định lượng sắc ký lỏng hiệu cao: phương pháp chuẩn nội, chuẩn ngoại, thêm chuẩn, chuẩn hóa diện tích Vận dụng vào tập liên quan NỘI DUNG I Quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV-VIS Quang phổ hồng ngoại II Sắc ký lỏng hiệu cao I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.1 Độ hấp thụ Khi cho xạ đơn sắc qua mơi trường có chứa chất hấp thụ độ hấp thụ xạ tỷ lệ với nồng độ chất hấp thụ chiều dày môi trường hấp thụ (dung dịch chất hấp thụ) Mối quan hệ tuân theo định luật Lambert – Beer I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.1 Độ hấp thụ ❑ Trường hợp C tính mol/l, L tính cm A = ε L C → Khi C = mol/l L = cm A = ε (hệ số hấp thụ phân tử ) ❑ Trường hợp nồng độ C tính theo %(Kl/TT) 1%, L = 1cm thì: E (1%, 1cm ) hệ số hấp thụ riêng, đặc trưng cho chất ❑ Trong phân tích kiểm nghiệm hay dùng E (1%, 1cm) I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.2 Điều kiện áp dụng - Ánh sáng phải đơn sắc - Khoảng nồng độ phải thích hợp: định luật Lambert-Beer giới hạn định nồng độ - Dung dịch phải suốt - Chất thử phải bền dung dịch bền tác dụng ánh sáng UV-VIS I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.3 Máy UV - VIS ❑ Nguồn sáng ❑ Cuvet I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.3 Máy UV - VIS Sơ đồ máy chùm tia I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.3 Máy UV - VIS Sơ đồ máy hai chùm tia I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.4 Hiệu chuẩn máy ❑ Kiểm tra thang độ dài sóng ❑ Kiểm tra độ hấp thụ ❑ Giới hạn ánh sáng lạc ❑ Độ phân giải ❑ Độ rộng giải phổ nguồn ❑ Cuvet I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Định lượng Chọn khoảng nồng độ thích hợp + Dựa vào A ~ 0,2 – 0,8 + Biết E(1%,1cm) + Tính nồng độ thích hợp Vùng tuyến tính I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Định lượng Chọn điều kiện làm việc khác + Đối với chất phân tích bị lẫn tạp chất → Chiết chất phân tích khỏi tạp chất + Đối với chất phân tích khơng hấp thụ UV-VIS → Làm phản ứng màu + Chọn pH dung mơi thích hợp I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Các pp định lượng PP đo phổ trực tiếp PP gián tiếp PP so sánh PP thêm chuẩn so sánh PP đường chuẩn PP thêm đường chuẩn PP vi sai theo bước sóng PP định lượng hỗn hợp PP quang phổ đạo hàm I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Các pp định lượng PP đo phổ trực tiếp Đo độ hấp thụ A dung dịch, tính nồng độ C dựa vào giá trị độ hấp thụ riêng (có bảng tra cứu) Cần phải chuẩn hố máy quang phổ bước sóng lẫn độ hấp thụ I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Các pp định lượng PP gián tiếp + Phải có chất chuẩn để so sánh + Có thể khơng cần phải chuẩn máy Chuẩn Thử I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Các pp định lượng PP gián tiếp PP so sánh Chú ý: Nồng độ dung dịch thử CX dung dịch chuẩn CS không chênh lệch nhiều Các nồng độ gần nhau, kết xác I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Các pp định lượng PP gián tiếp PP thêm chuẩn so sánh Ưu điểm: loại trừ yếu tố ảnh hưởng gây sai số cho trình định lượng: Xử lý mẫu (chiết xuất), sai lệch thiết bị hoá chất thuốc thử I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Các pp định lượng PP gián tiếp PP đường chuẩn Chú ý: ❑ Khoảng tuyến tính A với C ❑ Cần làm thêm số điểm chuẩn với nồng độ gần (khác không 10%) không tuân theo Lambert – beer ❑ Vẽ đồ thị → xây dựng phương trình hồi qui tuyến tính ❑ r > 0,995 I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Các pp định lượng PP gián tiếp PP thêm đường chuẩn ✓ Thêm thể tích giống dung dịch thử vào dãy chuẩn chứa lượng khác xác chất chuẩn ✓ Đo độ hấp thụ dãy rơì vẽ đường chuẩn quan hệ mật độ quang với lượng chất chuẩn thêm vào ✓ Giao điểm đưịng chuẩn với trục hồnh (nồng độ) cho ta nồng độ chất cần định lượng I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS Các pp định lượng PP gián tiếp PP định lượng hỗn hợp Giải hệ Một số toán Bài 1: a/ Một dung dịch chất thuốc có nồng độ 6,4.10-4 M, đo độ hấp thụ dung dịch bước sóng 255 nm, dùng cuvet 1cm thu mật độ quang A = 0,847 Tính hệ số hấp thụ phân tử ε chất 255 nm ? b/ Cân xác 100 mg thuốc nói (có phân tử lượng Mw 200,0), đem hoà tan nước vừa đủ lít Đo độ hấp thụ λ 255nm với cuvet 1cm A = 0,556 Hãy tính độ tinh khiết mẫu thuốc Một số toán Bài Poldin methylsulfat có cực đại hấp thụ 257 nm Chuẩn bị dung dịch methanol với nồng độ đo độ hấp thụ dung dịch λ = 257nm, cuvet 1cm a/ Hệ có tn theo định luật Lambert-Beer khơng ? b/ Tính E1%1cm 257 nm c/ Tính hệ số hấp thụ phân tử ε Biết Mw poldin sulfat 451 d/ Hoà tan 500 mg Poldin methylsulfat methanol bình định mức dung tích lít, thêm methanol tới vạch Đo độ hấp thụ dung dịch λ 257nm, dùng cuvet cm, A = 0,946 Giả thiết tạp chất có mặt khơng hấp thụ ánh sáng bước sóng Hãy tính % độ tinh khiết mẫu thử Bài Tính nồng độ dung dịch Vitamin B12 biết pha loãng 200 lần đo độ hấp thụ 361 nm A = 0,450 Cho A (1%, 1cm) B12 361nm = 207 ... bày phương pháp định lượng quang phổ tử ngoại khả kiến Giải thích vận dụng kỹ thuật sắc ký pha đảo công tác kiểm nghiệm thuốc Trình bày phương pháp định lượng sắc ký lỏng hiệu cao: phương pháp. .. = 1cm thì: E (1%, 1cm ) hệ số hấp thụ riêng, đặc trưng cho chất ❑ Trong phân tích kiểm nghiệm hay dùng E (1%, 1cm) I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.2 Điều kiện áp... tia I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.3 Máy UV - VIS Sơ đồ máy hai chùm tia I - Phương pháp quang phổ phân tử Quang phổ hấp thụ UV VIS 1.4 Hiệu chuẩn máy ❑ Kiểm tra