Các phương pháp hóa lý trong kiểm nghiệm thuốc

CÁC PHƯƠNG PHÁP HÓA LÝ TRONG KIỂM NGHIỆM THUỐCPHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ PHÂN TỬPHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO.Quang phổ hấp thụ UVVISQuang phổ hồng ngoại (IR)Quang phổ huỳnh quangQUANG PHỔ HẤP THỤ UVVISĐộ hấp thụĐộ hấp thụ tuân theo định luật Lambert – Beer và được biểu diễn bằng phương trình sau:A =

Trường Đại Học Thủ Dầu Một Khoa Khoa Học Tự Nhiện ĐỀ TÀI NHÓM VŨ DUY HẢI HOÀNG XUÂN ÁI Các phương pháp hóa lý kiểm nghiệm thuốc L/O/G/O HUỲNH QUỐC MINH NGUYỄN THANH BÌNH www.trungtamtinhoc.edu.vn CÁC PHƯƠNG PHÁP HÓA LÝ TRONG KIỂM NGHIỆM THUỐC Phần Phần PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ PHÂN TỬ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO www.trungtamtinhoc.edu.vn PHẦN PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ PHÂN TỬ I Quang phổ hấp thụ UV-VIS II Quang phổ hồng ngoại (IR) III Quang phổ huỳnh quang www.trungtamtinhoc.edu.vn I QUANG PHỔ HẤP THỤ UV-VIS Độ hấp thụ – Độ hấp thụ tuân theo định luật Lambert – Beer biểu diễn phương trình sau:   A Trong đó: T : Độ truyền qua I0 : cường độ ánh sáng đơn sắc tới I : cường độ ánh sáng đơn sắc sau truyền qua dung dịch K : hệ số hấp thụ phụ thuộc λ, thay đổi theo cách biểu thị nồng độ L : chiều dài lớp dung dịch www.trungtamtinhoc.edu.vn ĐIỀU KIỆN ÁP DỤNG: Ánh sáng phải đơn sắc Khoảng nồng độ phải thích hợp: định luật Lambert- beer giới hạn định nồng độ Dung dịch phải suốt Chất thử phải bền dung dịch bề tác dụng ánh sáng UV VIS www.trungtamtinhoc.edu.vn MÁY QUANG PHỔ Máy quang phổ thích hợp cho việc đo phổ vùng tử ngoại khả kiến gồm hệ quang học có khả tạo ánh sáng đơn sắc vùng từ 200 đến 800nm thiếp bị thích hợp để đo độ hấp thụ www.trungtamtinhoc.edu.vn HIỆU CHỈNH MÁY QUANG PHỔ Kiểm tra độ dài sóng HIỆU CHỈNH Kiểm tra độ hấp thụ Giới hạn ánh sáng lạc Độ phân giải Độ rộng giải phổ nguồn Cuvet www.trungtamtinhoc.edu.vn ỨNG DỤNG CỦA PHỔ UV-VIS TRONG KIỂM NGHIỆM THUỐC  Định tính khử tinh khiết: cực đại hấp thụ đặc trưng định tính chất  Định lượng: chọn điều kiện xây dựng quy trình định lượng Chọn bước sóng kính lọc Chọn khoảng nồng độ thích hợp Chọn điều kiện khác: loại trừ ảnh hưởng chất lạ, chọn pH dung môi thích hợp, thực phản ứng màu, www.trungtamtinhoc.edu.vn Các phương pháp định lượng:  Phương pháp đo phổ trực tiếp: − Đo phổ hấp thụ A dung dịch, tính nồng độ C dựa vào giá trị độ hấp thụ riêng:   A = E1%1cm         L = 1cm  C =   Để áp dụng phương pháp này, cần phải chuẩn hóa máy quang phổ bước sóng lẫn độ hấp thụ  Phương pháp gián tiếp: phương pháp đường chuẩn, so sánh thêm chuẩn Đặc điểm phương pháp gián tiếp:  Phải có chất chuẩn để so sánh  Có thể không cần phải chuẩn máy www.trungtamtinhoc.edu.vn  Phương pháp so sánh: theo định luật Lambert- beer suy ra:   Cx = Cs Trong đó: Ax độ hấp thụ dung dịch mẫu thử có nồng độ Cx As độ hấp thụ dung dịch chuẩn có nồng độ Cs  Chú ý: nồng độ dung dịch thử Cx Cs không chênh lệch nhiều www.trungtamtinhoc.edu.vn  Tiến hành tách sắc ký • Chuẩn bị mẫu thử • Tiêm mẫu Dung môi phải đáp ứng yêu cầu sau: Độ tinh khiết cao để pic lạ Có thể hòa lẫn với dung môi rửa giải Có cách tiêm mẫu vào cột Dùng bơm tiêm Cho đáp ứng nhỏ với detector  Dung môi dung dịch thử phải lọc qua màng lọc 0,45 Dùng van tiêm mẫu thể tích xác định www.trungtamtinhoc.edu.vn  Đo tín hiệu detector (detector UV-VIS) b) Tín hiệu detector a) Detector phải đáp ứng yêu cầu sau: • Hoạt động vùng tuyến tính • Có độ hấp thụ nhỏ dung môi • Tránh lọt không khí vào cột detector • Giữ cell làm thường xuyên • Tín hiệu detector đo chất khỏi cột sắc ký máy ghi lại dạng pic www.trungtamtinhoc.edu.vn CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG Phương pháp chuẩn hóa điện tích 04 Phương pháp chuẩn ngoại 01 03 Phương pháp thêm chuẩn 02 Phương pháp chuẩn nội www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.1 Phương pháp chuẩn ngoại - Phương pháp chuẩn ngoại phương pháp hai mẫu chuẩn mẩu thử tiến hành điều kiện - So sánh diện tích (chiều cao) pic mẫu thử với diện tích (chiều cao) pic mẫu chuẩn tính nồng độ chất mẫu thử Phương pháp chuẩn hóa: Một điểm Nhiều điểm www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.1 Phương pháp chuẩn ngoại  hóa điểm: chọn nồng độ mẫu chuẩn xấp xỉ với nồng độ • Chuẩn   mẩu thử Tính nồng độ mẫu thử theo công thức: Trong đó: CX: nồng độ mẫu thử SX (HX): diện tích (chiều cao) pic mẫu thử CS: nồng độ chất chuẩn SS (HS): diện tích (chiều cao) pic mẫu chuẩn www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.1 Phương pháp chuẩn ngoại Chuẩn hóa nhiều điểm: Đối với mẫu chuẩn ta tiến hành sau: -Chuẩn bị dãy chuẩn với nồng độ tăng dần tiến hành sắc ký -Vẽ đồ thị chuẩn biểu diễn tương quan diện tích S pic với nồng độ chất chuẩn C S1 X S2 www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.1 Phương pháp chuẩn ngoại  Đối với mẫu thử: Chuẩn bị dãy mẫu thử với nồng độ tăng dần  sắc ký - Áp kiện diện tích (chiều cao) pic chất thử vào đường chuẩn nồng độ Xây dựng phương trình hồi quy tuyến tính: Y = a + bCx Trong đó: Y : Diện tích pic a : Giao điểm đường chuẩn với trục tung b : Độ dốc đường chuẩn Cx: Nồng độ chất thử www.trungtamtinhoc.edu.vn Lưu ý: Độ lớn diện tích ( chiều cao) pic mẫu thử phải nằm đoạn tuyến tính đường chuẩn Khoảng tuyến tính S1 x S2 www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.2 Phương pháp chuẩn nội  Là phương pháp người ta thêm vào mẫu chuẩn lẫn mẫu thử lượng chất tinh khiết, tiến hành sắc ký điều kiện  Chất thêm gọi chuẩn nội www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.2 Phương pháp chuẩn nội  Yêu cầu chất chuẩn nội: Trong điều kiện sắc ký, chất chuẩn nội phải tách hoàn toàn có thời gian lưu gần với thời gian lưu chất phân tích Không phản ứng với thành phần mẫu thử Phải có độ tinh khiết cao dễ kiếm Có cấu trúc hóa học tương tự chất thử Có nồng độ xấp xỉ với nồng độ chất thử www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.2 Phương pháp chuẩn nội Phương pháp chuẩn hóa điểm   Phương Hệ số đáp pháp ứng Fx: chuẩn hóa nhiều điểm  Đối với mẫu thử: - Chuẩn bị dãy chuẩn có chứa •  Là phương  nội -Tapháp tiến chuẩn hành song song thêm lượng (hoặc nồng độ) chất chuẩn khác vào hai mẫuthêm chuẩn mẫu chuẩn nội thử với  lượng tất chứa chứa Tiến hànhhoặc sắc ký Trong đó: nồng độ thang chuẩn lượng nồng nội nội mC,mIS lần lượt(hoặc khối lượng củađộ) chất chuẩn chuẩn chuẩn  Công thức tínhtỉlượng nồng -Tính số ST/Sis dựađộvào kí độ vàcủavẽchuẩn đường chuẩn CC,CIShành lần lượtsắc nồng chuẩn nội thành phần trongchuẩn mẫu thử đường tìm nồng - Tiến SC, SIS lần lược diện tích pic chuẩn chuẩn nội độ chất thử (CT)  Tính lượng:  Tính nồng độ: www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.3 Phương pháp chuẩn hóa điện tích  Nguyên tắc: Hàm lượng phần trăm chất hỗn hợp nhiều thành phần tính tỷ lệ phần trăm diện tích pic so với tổng diện tích tất pic thành phần sắc đồ  Yêu cầu: - Tất thành phần rửa giải phát -Tất thành phần đáp ứng detector www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.3 Phương pháp chuẩn hóa điện tích •  Ví dụ: phân tách sắc ký hỗn hợp gồm thành phần: X,Y,Z - Hàm lượng phần trăm X ta tính sau: - Nếu xét đến đáp ứng khác detector cần xác định hệ số đáp ứng chất để hiệu sai khác www.trungtamtinhoc.edu.vn 7.3 Phương pháp chuẩn hóa điện tích Công thức hệ số đáp liên hệ với chất chuẩn: •   Trong đó: SS SX: diện tích pic chuẩn pic thử CS CX: nồng độ chất chuẩn chất thử fS: hệ số hiệu chỉnh chuẩn Phương trình tính %X là: •   www.trungtamtinhoc.edu.vn L/O/G/O Nhóm Thank you for listening www.trungtamtinhoc.edu.vn 49