Định lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)

Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)Đi ̣nh lượng đồng thời vitamin B1, B6 và B12 trong thuốc Neurobion, Scanneuron bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao và quang phổ hấp thụ phân tử (LV thạc sĩ)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN THU HẰNG ĐINH LƯỢNG ĐỒNG THỜI VITAMIN B1, B6 VÀ B12 ̣ TRONG THUỐC NEUROBION, SCANNEURON BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VÀ QUANG PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT Thái Nguyên, năm 2017 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN THU HẰNG ĐINH LƯỢNG ĐỒNG THỜI VITAMIN B1, B6 VÀ B12 ̣ TRONG THUỐC NEUROBION, SCANNEURON BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VÀ QUANG PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60.44.01.18 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Mai Xuân Trường Thái Nguyên, năm 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng bấ t cứ mô ̣t công trình nào Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thu Hằng Xác nhận Xác nhận Trưởng khoa chuyên môn giáo viên hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Thị Hiền Lan PGS.TS Mai Xuân Trường i LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực luận văn, tác giả nhận nhiều quan tâm, động viên giúp đỡ thầy giáo, cô giáo, bạn bè gia đình Tác giả bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: Khoa Hóa ho ̣c, Phòng Đào tạo - Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên, thầy cô giáo tham gia giảng dạy cung cấp kiến thức giúp suốt trình học tập nghiên cứu Đặc biệt tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo PGS.TS Mai Xuân Trường người tận tình hướng dẫn bảo giúp đỡ suốt trình nghiên cứu, thực hoàn thành luận văn Cuối xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè người bên tôi, động viên khuyến khích trình thực đề tài nghiên cứu Với thời gian nghiên cứu có hạn, khối lượng công viêc̣ lớn, khả nghiên cứu còn hạn chế, chắn luận văn tránh khỏi thiếu sót Tác giả mong nhận ý kiến đóng góp từ thầy giáo, cô giáo bạn đọc Xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng 04 năm 2017 Tác giả Nguyễn Thu Hằng ii MỤC LỤC Trang Trang bìa phụ Lời cam đoan i Lời cảm ơn .ii Mục lục iii Danh mục từ viết tắt iv Danh mục bảng, biểu v Danh mục hình vi MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan vitamin B1, B6 B12 1.1.1 Vitamin B1 1.1.2 Vitamin B6 1.1.3 Vitamin B12 11 1.2 Phương pháp phổ hấp thụ phân tử 14 1.2.1 Các định luật sở hấp thụ ánh sáng 14 1.2.2 Phương pháp lọc Kalman 15 1.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 22 1.3.1 Nguyên tắc phương pháp HPLC 23 1.3.2 Các đại lượng đặc trưng trình sắc kí 23 1.3.3 Sơ đồ máy HPLC 26 1.4 Kết xác định số chất theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao phổ hấp thụ phân tử 27 1.4.1 Kết xác định số chất theo phương pháp HPLC 27 1.4.2 Kết xác định số chất theo phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 30 Chương THỰC NGHIỆM 33 iii 2.1 Nội dung nghiên cứu 33 2.1.1 Phương pháp HPLC 33 2.1.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 33 2.2 Phương pháp nghiên cứu 34 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu lý thuyế t 34 2.2.2 Phương pháp thực nghiê ̣m 34 2.3 Đánh giá độ tin cậy quy trình phân tích 35 2.3.1 Giới hạn phát (LOD) 35 2.3.2 Giới hạn định lượng (LOQ) 35 2.3.3 Đánh giá độ tin cậy phương pháp 35 2.3.4 Đánh giá kết phép phân tích theo thống kê 36 2.4 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 37 2.4.1 Thiết bị 37 2.4.2 Dụng cụ 37 2.4.3 Hóa chất 37 2.4.4 Chế phẩm Neurobion 38 2.4.5 Chế phẩm Scanneuron 38 2.5 Chuẩn bị dung môi để hòa tan mẫu 38 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 40 3.1.1 Khảo sát phổ hấp thụ phân tử vitamin B1, B6 B12 40 3.1.2 Khảo sát khoảng tuyến tính tuân theo định luật Bughe – Lambe – Bia vitamin B1, B6 B12 Xác định số LOD LOQ 41 3.1.3 Khảo sát đánh giá độ tin cậy phương pháp nghiên cứu mẫu tự pha 48 3.1.4 Xác định hàm lượng B1, B6 B12 thuốc Neurobion Scanneuron 54 3.1.5 Khảo sát độ phép xác định vitamin B1, B6 B12 theo phương pháp thêm chuẩn 58 iv 3.2 Phương pháp HPLC 64 3.2.1 Xây dựng điều kiện để xác định đồng thời vitamin B1, B6 B12 64 3.2.2 Đánh giá phương pháp định lượng 67 3.2.3 Xác định vitamin B1, B6 B12 thuốc Neurobion thuốc Scanneuron 72 3.2.4 Khảo sát độ phép xác định vitamin B1, B6 B12 theo phương pháp thêm chuẩn 74 KẾT LUẬN 78 TÀI LIỆU THAM KHẢO 80 v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng Việt Tiếng Anh B1 Vitamin B1 Thiamine B6 Vitamin B6 Pyridoxine B12 Vitamin B12 Xyanocobalamin HPLC Phương pháp sắc kí lỏng hiệu High Performance Liquid cao Chromatography LOD Giới hạn phát Limit Of Detection LOQ Giới hạn định lượng Limit Of Quantity Sai số tương đối Relative Error Độ lệch chuẩn Standard Deviation RE S hay SD iv DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Trang Bảng 1.1 Hàm lượng vitamin B1 số thực phẩm Bảng 1.2 Hàm lượng vitamin B6 số thực phẩm 11 Bảng 1.3 Hàm lượng vitamin B12 số thực phẩm 14 Bảng 3.1 Đô ̣ hấ p thu ̣ quang củ a vitamin B1 ở cá c giá tri ̣ nồng độ 42 Bảng 3.2 Kết xá c nh ̣ LOD LOQ vitamin B1 43 Bảng 3.3 Đô ̣ hấ p thu ̣ quang củ a vitamin B6 ở cá c giá tri ̣ nồng độ 44 Bảng 3.4 Kết tính LOD LOQ vitamin B6 45 Bả ng 3.5 Đô ̣ hấ p thu ̣ quang củ a vitamin B12 giá trị nồ ng độ 46 Bảng 3.6 Kết tính LOD LOQ vitamin B12 48 Bả ng 3.7 Pha chế cá c dung di ch ̣ hỗ n hơ p̣ vitamin B1 và vitamin B6 48 Bả ng 3.8 Kế t quả tí nh nồ ng đô ̣, sai số củ a vitamin B1 và vitamin B6 hỗ n hơ p̣ 49 Bả ng 3.9 Pha chế cá c dung di ch ̣ hỗ n hơ p̣ vitamin B1 và vitamin B12 50 Bả ng 3.10 Kế t quả tí nh nồ ng đô ̣, sai số củ a vitamin B1 và vitamin B12 hỗ n hơ p̣ 50 Bả ng 3.11 Pha chế cá c dung di ch ̣ hỗ n hơ p̣ vitamin B6 vitamin B12 51 Bả ng 3.12 Kế t quả tí nh nồ ng đô ̣, sai số củ a vitamin B6 vitamin B12 hỗn hơ p̣ 52 Bảng 3.13 Pha dung dịch chuẩ n vitamin B1, vitamin B6, vitamin B12 và hỗ n hơ p̣ 53 Bả ng 3.14 Kế t quả tí nh nồ ng đô ̣, sai số củ a vitamin B1, vitamin B6 vitamin B12 53 Bảng 3.15 Kết tính nồng độ, sai số vitamin B1, B6 B12 mẫu thuốc Neurobion 55 Bảng 3.16 Kết tính nồng độ, sai số B1, B6 B12 mẫu thuốc Scanneuron 57 v Bảng 3.17 Thành phần dung dịch chuẩn B1, B6 B12 thêm vào dung dịch mẫu thuốc Neuronbion 59 Bảng 3.18 Kết xác định độ thu hồi vitamin B1, B6 B12 mẫu thuốc Neuronbion 60 Bảng 3.19 Thành phần dung dịch chuẩn B1, B6 B12 thêm vào dung dịch mẫu thuốc Scanneuron 62 Bảng 3.20 Kết xác định độ thu hồi vitamin B1, B6 B12 mẫu thuốc Scanneuron 63 Bảng 3.21 Giá trị đại lượng đặc trưng 68 Bảng 3.22 Kết khảo sát thời gian lưu 68 Bảng 3.23 Kết khảo sát diện tích pic 69 Bảng 3.24 Mối tương quan nồng độ diện tích pic vitamin B1, B6 B12 70 Bảng 3.25 Kết khảo sát độ lặp lại 72 Bảng 3.26 Kết phân tích thuốc Neurobion 73 Bảng 3.27 Kết phân tích thuốc Scanneuron 74 Bảng 3.28 Kết khảo sát độ 75 Bảng 3.29 Kết khảo sát độ 77 vi Vitamin B1 Lần bơm Vitamin B6 Thời Thời Thời gian Số liệu thống gian Số liệu thống gian Số liệu thống lưu kê lưu kê lưu kê (phút) (phút) 2,830 Vitamin B12 2,831 2,831 2,829 X (phút) 3,290 = 2,830 X 3,290 S = 0,0010 %RSD=0,035 3,290 3,291 5,250 = 3,290 X 5,250 S = 0,0006 %RSD=0,018 5,252 5,250 = 5,250 S = 0,0011 %RSD=0,021 Bảng 3.23 Kết khảo sát diện tích pic Lần bơm Vitamin B1 52911519 52911504 52911523 52911512 = 52911515; S = 8,37; %RSD = 1,6.10-5 X 79785034 Vitamin B6 X 79785112 79785024 = 79785067; S = 44,43; %RSD = 5,6.10-5 46373 Vitamin B12 79785098 46373 X 46374 46373 = 46373; S = 0,58; %RSD = 1,3.10-3 Kết bảng 3.21, 3.22 3.23 cho thấy: thông số hệ thống số đĩa lý thuyết độ phân giải nằm giới hạn cho phép Sai số tương đối diện tích pic thời gian lưu tìm thấy phù hợp Vì hệ thống sắc ký đảm bảo tính thích hợp với chất phân tích 3.2.2.3 Khảo sát độ tuyến tính phương pháp Độ tuyến tính khảo sát dung dịch chất chuẩn với nồng độ khác nhau: Các dung dịch vitamin B1 có nồng độ từ 200 - 1200 µg/mL, vitamin B6 có nồng độ từ 200 - 1200 µg/mL vitamin B12 có nồng độ từ 0,4 – 2,4 µg/mL pha loãng từ dung dịch B1, B6 B12 nước cất hai lần mục 3.2.2.1 69 Tiến hành chạy sắc ký dung dịch theo điều kiện sắc ký chọn Xác định phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic phương trình hồi quy tuyến tính hệ số tương quan R2 Kết khảo sát độ tuyến tính chất trình bày bảng 3.24 Bảng 3.24 Mối tương quan nồng độ diện tích pic vitamin B1, B6 B12 Vitamin B1 Vitamin B6 Vitamin B12 Nồng độ Diện tích pic Nồng độ Diện tích pic Nồng độ Diện tích pic (µg/mL) (mAuxphút) (µg/mL) (mAuxphút) (µg/mL) (mAuxphút) 200 34204807 200 20583854 0,4 25853 400 52911519 400 40243117 0,8 46373 600 73154412 600 60044943 1,2 68530 800 93006907 800 79784873 1,6 90396 1000 113752796 1000 99055277 2,0 110404 1200 133886413 1200 118406561 2,4 130972 y = 100255x +13141040 y=97899x + 1157443 y=52825x + 4799 R2=0,9999 R2=0,9997 R2=0,9996 Từ kết bảng 3.24 Biểu diễn phụ thuộc diện tích pic mAuxphút vitamin B1, B6, B12 theo nồng độ Kết thể hình 3.12; 3.13 3.14 160000000 140000000 120000000 100000000 y = 100255x + 13141040 R² = 0,9996 80000000 60000000 40000000 20000000 µg/mL 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 Hình 3.12 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic vitamin B1 70 mAuxphút 140000000 120000000 y = 97899x + 1157443 R² = 0,9999 100000000 80000000 60000000 40000000 20000000 µg/mL 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 Hình 3.13 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính mAuxphút nồng độ diện tích pic vitamin B6 140000 120000 100000 y = 52825x + 4799 R² = 0,9997 80000 60000 40000 20000 µg/mL 0 0.5 1.5 2.5 Hình 3.14 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic vitamin B12 3.2.2.4 Khảo sát độ lặp lại phương pháp sắc ký Đo dung dịch điều kiện sắc ký chọn, so sánh diện tích pic từ kết tính từ phương trình đường chuẩn diện tích pic dung dịch hỗn hợp điều kiện 71 Bảng 3.25 Kết khảo sát độ lặp lại Vitamin B1 Mẫu Hàm Diện tích pic (mAuxphút) lượng (µg/mL) Vitamin B6 Hàm Diện tích pic (mAuxphút) lượng (µg/mL) Vitamin B12 Diện tích pic (mAuxphút) Hàm lượng (µg/mL) 52920113 397,51 79553493 800,78 46583 0,791 53197869 399,55 79300186 798,19 46401 0,788 52911604 396,70 79403870 799,25 46299 0,786 53401349 401,58 79280542 797,99 47112 0,801 X Số X = 799,05 X = 0,792 S = 2,19 S = 1,28 S = 0,007 Sx = 1,10 Sx = 0,64 Sx = 0,0035 %RSD = 0,55 %RSD = 0,16 %RSD = 0,88 µ = 398,84  2,96 µ = 799,05  1,72 µ = 14,91  0,11 liệu thống kê = 398,84 Nhận xét: Từ kết bảng 3.25 cho thấy độ lệch chuẩn tương đối %RSD chất phân tích nhỏ 2% (vitamin B1: 0,48%; vitamin B6:1,02%; vitamin B12: 0,52%) sai số tương đối nhỏ Như vậy, phương pháp sắc ký định lượng đồng thời chất có độ lặp lại cao 3.2.3 Xác định vitamin B1, B6 B12 thuốc Neurobion thuốc Scanneuron 3.2.3.1 Xác định vitamin B1, B6 B12 thuốc Neurobion Cân xác 20 viên thuốc Neurobion (mỗi viên có chứa vitamin B1: 100 mg; vitamin B6: 200 mg; vitamin B12: 0,2 mg), sau tính khối lượng trung bình viên ( X = 0,6994g) nghiền thành bột mịn Cân xác 699,4 mg bột thuốc (tương đương với 100 mg B1; 200 mg B2 0,2 mg B12) cho vào bình định mức 50 mL sau hòa tan định mức nước cất hai lần rung siêu âm 15 phút ta dung dịch chứa B1= 2000 µg/mL; B6 = 4000 µg/mL B12 = µg/mL Pha loãng lần dung dịch nước 72 cất hai lần thu dung dịch chứa B1 = 400 µg/mL; B6 = 800 µg/mL B12 = 0,8 µg/mL Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 µm Đo dung dịch điều kiện sắc ký chọn, so sánh diện tích pic với dung dịch chuẩn (bảng 3.25) điều kiện Kết thu thể bảng 3.26 Bảng 3.26 Kết phân tích thuốc Neurobion Lượng STT cân (mg) Vitamin B1 Vitamin B6 Hàm Diện tích pic lượng Hàm Diện tích pic (µg/mL) lượng (µg/mL) Vitamin B12 Diện tích Hàm lượng pic (µg/mL) 699,5 53340287 400,97 79616772 801,43 46684 0,793 698,9 53222989 399,80 79377678 798,99 45907 0,778 699,3 53432993 401,90 79435427 799,58 46477 0,789 699,1 53374370 401,31 79442380 799,65 46680 0,793 Số liệu thống kê X = 400,99 X = 799,91 X = 0,788 S = 0,88 S = 1,05 S = 0,007 %RSD = 0,22 %RSD = 0,13 %RSD = 0,89 Nhận xét: Từ kết bảng 3.26 cho thấy độ lệch chuẩn tương đối %RSD chất phân tích nhỏ 2% (B1: 0,22%; B6: 0,13%; B12: 0,89%) Điều chứng tỏ thuốc Neurobion PT.Merck Tbk – Indonesia sản xuất đóng gói công ty TNHH Pierre Fabre Việt Nam đáp ứng yêu cầu chất lượng theo tiêu chuẩn dược phẩm Việt Nam 3.2.3.2 Xác định vitamin B1, B6 B12 thuốc Scanneuron Cân xác 20 viên thuốc Scanneuron (mỗi viên có chứa vitamin B1: 100 mg; vitamin B6: 200 mg; vitamin B12: 0,2 mg), sau tính khối lượng trung bình viên ( X = 0,8496g) nghiền thành bột mịn Cân xác 849,6 mg bột thuốc (tương đương với 100 mg B1; 200 mg B2 0,2 mg B12) cho vào 73 bình định mức 50 mL sau hòa tan định mức nước cất hai lần rung siêu âm 15 phút ta dung dịch chứa B1 = 2000 µg/mL; B6 = 4000 µg/mL B12 = µg/mL Pha loãng lần dung dịch nước cất hai lần thu dung dịch chứa B1 = 400 µg/mL; B6 = 800 µg/mL B12 = 0,8 µg/mL Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 µm Đo dung dịch điều kiện sắc ký chọn, so sánh diện tích pic với dung dịch chuẩn (bảng 3.26) điều kiện Kết thu thể bảng 3.27 Bảng 3.27 Kết phân tích thuốc Scanneuron Vitamin B1 Lượng STT cân Vitamin B6 Hàm Hàm lượng (mg) Diện tích pic lượng Diện tích pic (µg/mL) (µg/mL) Vitamin B12 Diện tích Hàm lượng pic (µg/mL) 849,9 53353321 401,10 79586814 801,13 46847 0,796 849,7 53213959 399,71 79409010 799,31 46168 0,783 849,3 53166850 399,24 79421426 799,44 46146 0,783 850,1 53229001 399,86 79460118 799,83 46606 0,791 Số liệu thống kê X = 399,98 X = 799,93 X = 0,788 S = 0,79 S = 0,83 S = 0,006 %RSD = 0,20 %RSD = 0,10 %RSD = 0,76 Nhận xét: Từ kết bảng 3.27 cho thấy độ lệch chuẩn tương đối %RSD chất phân tích nhỏ 2% (B1: 0,20% ; B6: 0,10%; B12: 0,76%) Điều chứng tỏ thuốc Scanneuron công ty TNHH liên doanh Stada Việt Nam sản xuất đáp ứng yêu cầu chất lượng theo tiêu chuẩn dược phẩm Việt Nam 3.2.4 Khảo sát độ phép xác định vitamin B1, B6 B12 theo phương pháp thêm chuẩn 74 3.2.4.1 Khảo sát độ phép xác định vitamin B1, B6 B12 thuốc Neurobion Độ phương pháp xác định phương pháp thêm chuẩn Cân xác lượng viên thuốc Neurobion sau thêm lượng xác bột chất chuẩn vitamin B1, B6 B12 hòa tan nước cất hai lần tương tự 3.2.3.1 Đem dung dịch sắc ký điều kiện với dung dịch chuẩn, lặp lại thực nghiệm với lần cân khác Dựa vào hàm lượng chất biết mẫu, lượng chất chuẩn thêm vào diện tích pic dung dịch mẫu dung dịch chuẩn tính lượng chất chuẩn tìm thấy so với lượng thêm vào Kết khảo sát thể bảng 3.28 Bảng 3.28 Kết khảo sát độ Chất chuẩn Mẫu CK (µg/mL) C (µg/mL) CT (µg/mL) Rev(%) 399,51 100,0 498,91 399,64 100,0 498,74 Vitamin B1 399,78 100,0 500,48 399,30 100,0 499,6 Số liệu thống kê: X = 99,88%; S = 0,75; %RSD = 0,75% 799,23 100,0 898,74 799,47 100,0 898,80 Vitamin B6 799,16 100,0 898,80 799,85 100,0 899,37 Số liệu thống kê: X = 99,48%; S = 0,13; %RSD = 0,13% 0,789 1,0 1,772 0,796 1,0 1,788 Vitamin B12 0,793 1,0 1,779 0,798 1,0 1,785 Số liệu thống kê: X = 98,80%; S = 0,71; %RSD = 0,72% Trong đó: CK : hàm lượng chất chuẩn xác định trước thêm chuẩn 75 99,4 99,1 100,7 100,3 99,5 99,3 99,6 99,5 97,9 99,5 98,6 99,2 C : hàm lượng chất chuẩn thêm vào mẫu CT : hàm lượng chất xác định sau thêm chuẩn Rev(%) : độ thu hồi Nhận xét: Từ kết bảng 3.28 cho thấy, độ thu hồi vitamin B1 99,1÷100,7%, vitamin B6 99,3÷99,6% vitamin B12 97,9÷99,5% Độ lệch chuẩn tương đối chất nhỏ 2% Do phương pháp sắc ký đạt yêu cầu độ 3.2.4.2 Khảo sát độ phép xác định vitamin B1, B6 B12 thuốc Scanneuron Độ phương pháp xác định phương pháp thêm chuẩn Cân xác lượng viên thuốc Scanneuron sau thêm lượng xác bột chất chuẩn vitamin B1, B6 B12 hòa tan nước cất hai lần tương tự 3.2.3.2 Đem dung dịch sắc ký điều kiện với dung dịch chuẩn, lặp lại thực nghiệm với lần cân khác Dựa vào hàm lượng chất biết mẫu, lượng chất chuẩn thêm vào diện tích pic dung dịch mẫu dung dịch chuẩn tính lượng chất chuẩn tìm thấy so với lượng thêm vào Kết khảo sát thể bảng 3.29 76 Bảng 3.29 Kết khảo sát độ Chất Mẫu CK (µg/mL) C (µg/mL) CT (µg/mL) Rev(% ) 401,03 100,0 501,94 100,9 Vitamin 399,22 100,0 498,50 99,3 B1 399,46 100,0 499,10 99,6 399,96 100,0 499,28 99,3 chuẩn Số liệu thống kê: X = 99,78%; S = 0,76; %RSD = 0,76% 799,79 100,0 899,58 99,8 Vitamin 799,35 100,0 898,76 99,4 B6 799,66 100,0 899,29 99,6 799,58 100,0 899,41 99,8 Số liệu thống kê: X = 99,65%; S = 0,19; %RSD = 0,19% 0,793 1,0 1,784 99,1 Vitamin 0,791 1,0 1,782 98,9 B12 0,797 1,0 1,786 99,3 0,796 1,0 1,783 99,0 Số liệu thống kê: X = 99,08%; S = 0,17; %RSD = 0,17% Trong đó: CK : hàm lượng chất chuẩn xác định trước thêm chuẩn C : hàm lượng chất chuẩn thêm vào mẫu CT : hàm lượng chất xác định sau thêm chuẩn Rev(%) : độ thu hồi Nhận xét: Từ kết bảng 3.29 cho thấy, độ thu hồi vitamin B1 99,3÷100,9%, vitamin B6 99,4÷99,8% vitamin B12 98,9÷99,3% Độ lệch chuẩn tương đối chất nhỏ 2% Do phương pháp sắc ký đạt yêu cầu độ 77 KẾT LUẬN Sau thời gian thực luận văn Chúng thu số kết sau: + Đã khảo sát điều kiện tối ưu cho phép xác định đồng thời hỗn hợp thành phần vitamin B1, B6 B12 theo phương pháp HPLC - Cột sắc ký: sử dụng cột C18 (250 mm x 4,6 mm ; 0,45 µm) - Pha động: hỗn hợp dung dịch NaH2PO4 0,015M : axetonitril tương ứng với tỷ lệ thể tích 83:17 - Detector UV-Vis: λ = 278 nm - Tốc độ dòng: 0,9 mL/phút - Thể tích bơm mẫu: 20 µL - Nhiệt độ phân tích: 30oC Thời gian lưu chất là: vitamin B1 2,83 phút, vitamin B6 3,29 phút vitamin B12 5,25 phút + Đã xác định vitamin B1, B6 B12 thuốc Neurobion theo phương pháp HPLC với độ xác cao độ thu hồi vitamin B1 99,1÷100,7%, vitamin B6 99,3÷99,6% vitamin B12 97,9÷99,5% + Đã xác định vitamin B1, B6 B12 thuốc Scanneuron theo phương pháp HPLC với độ xác cao độ thu hồi vitamin B1 99,3÷100,9%, vitamin B6 99,4÷99,8% vitamin B12 98,9÷99,3% + Đã khảo sát, xác đinh ̣ điều kiện tối ưu cho phép đo quang đố i với các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p vitamin B1, B6 B12 gồm có: - Khoảng bước sóng thích hợp để quét phổ từ 200-400 nm, vitamin B1 λmax = 248 nm, vitamin B6 λmax = 291 nm vitamin B12 λmax = 361 nm môi trường axit HCl 0,1M - Khoảng thời gian tối ưu để tiến hành thí nghiệm đo quang từ 30 đến 90 phút sau pha có thể tiế n hành thí nghiê ̣m ở nhiệt đô ̣ phòng 78 - Khảo sát, xác định khoảng tuyến tính độ hấp thụ quang vitamin B1 0,105 đến 40,0 μg/mL, vitamin B6 từ 0,310 đến 50,0 μg/mL vitamin B12 từ 0,206 đến 50,0 μg/mL + Đã xác định đồng thời vitamin B1, B6 B12 hỗn hợp cấu tử cho thấy: xác định vitamin B1, B6 hỗn hợp tương đối xác, phải sử dụng phương pháp thêm chuẩn để xác định hàm lươ ̣ng vitamin B12 mẫu thuốc Scanneuron, Neurobion + Sử dụng phương pháp thêm chuẩn xác định vitamin B1, B6 B12 mẫu thuốc Neurobion với độ thu hồi vitamin B1 từ 99,95% đến 100,20%, vitamin B6 từ 99,99% đến 100,11% vitamin B12 từ 99,68% đến 100,27% + Sử dụng phương pháp thêm chuẩn xác định vitamin B1, B6 B12 mẫu thuốc Scanneuron với độ thu hồi vitamin B1 từ 99,73% đến 100,10%, vitamin B6 từ 99,88% đến 100,12% vitamin B12 từ 99,57% đến 101,16% Kết xác định vitamin B1, B6 B12 thuốc Scanneuron, Neurobion theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử sử dụng chương trình lọc Kalman gần 79 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Lê Ngọc Anh (2011), Xác định đồng thời acetaminophen, loratadin dextromethorphan hydrobrommit thuốc viên nén hapacol-CF phương pháp trắc quang, Luận văn thạc sĩ khoa học hóa học, Trường Đại học Sư phạm- Đại học Thái Nguyên Bộ y tế (2010), Dược điển Việt Nam IV, Hà Nội Bộ y tế (2012), Dược điển Việt Nam, Hà Nội Trần Thúc Bình (2002), Nghiên cứu phương pháp xác định đồng thời cấu tử có phổ hấp thụ xen phủ có sử dụng vi tính, Luận án tiến sĩ hóa học, Hà Nội Nguyễn Thành Đạt, Trần Phương, Đỗ Thị Oanh, Thái Duy Thìn, Thái Phan Quỳnh Như (2001), Nghiên cứu định lượng số thuốc đa thành phần có chứa paracetamol phương pháp HPLC, Thông tin khoa học công nghệ dược- Trường Đại học dược Hà Nội Trầ n Tứ Hiế u (2003), Phân tích trắ c quang phổ hấ p thụ UV-Vis, NXB ĐHQG Hà Nội Trần Tứ Hiếu, Đặng Ứng Vận, Mai Xuân Trường (2004), “Sử dụng sai số tương đối để lập trình xác định đồng thời cấu tử có phổ hấp thụ xen phủ nhau” Tạp chí Phân tích Hóa, Lý Sinh học, T-9 Trang 31-34 Đặng Trần Phương Hồng, Trịnh Văn Quỳ (1998), Định lượng đồng thời vitamin B1 vitamin B6 phương pháp quang phổ đạo hàm, Thông báo kiểm nghiệm, Viện kiểm nghiệm – Bộ Y tế, tr 611 Vũ Duy Long (2014), Định lượng đồng thời paracetamol, clopheninamin maleat phenylephin hydroclorit thuốc TIFFY phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UV-Vis), Luận văn thạc sĩ khoa học hóa học, Trường Đại học Sư phạmĐại học Thái Nguyên 80 10 Phạm Luận (2006), Phép đo phổ hấp thụ phân tử UV-Vis, NXB ĐHQG Hà Nội 11 Phạm Luận (1995), sổ tay pha chế hóa chất Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội 12 Nguyễn Văn Ly Nguyễn Tấn Sỹ (2005), Xác định đồng thời vitamin B1, B6 B12 hỗn hợp phương pháp trắc quang dùng phổ đạo hàm, Tuyển tập công trình khoa học – Hội nghị khoa học phân tích hóa, lý sinh học Việt Nam lần thứ hai, tr 86-89 13 Liễu Thanh Nhàn (2016), Đi ̣nh lượng đồ ng thời acetaminophen, loratadin, dextromethophan HBr thuốc Rhumenol Flu 500 phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp phổ hấp thụ phân tử, Luận văn thạc sĩ khoa hóa học, Trường Đại học Sư phạm – Đại học Thái Nguyên 14 Hồ Viết Quý (2007), Các phương pháp phân tích công cụ hóa học đại, NXB ĐHSP Hà Nội 15 Hồ Viết Quý (1994), Xử lý số liệu thực nghiệm phương pháp toán học thống kê, Nhà xuất Đại học Sư phạm Quy Nhơn, Quy Nhơn 16 Thái Duy Thìn, Thái Phan Quỳnh Như, Trần Việt Hùng, Võ Thu Hà, Nguyễn Tuấn Anh, Hoàng Văn Đức (2005), Nghiên cứu ứng dụng phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao đo quang phổ UV-Vis để định tính, định lượng hoạt chất thành phần số thuốc có từ đến thành phần, Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu khoa học cấp - Trường Đại học dược Hà Nội 17 Phạm Thị Thanh Thủy (2013), Nghiên cứu xác định hàm lượng số kim loại vitamin B1, B6 phương pháp hấp thụ nguyên tử sắc ký lỏng hiệu cao nấm Linh chi nuôi trồng Thừa Thiên Huế, Luận văn thạc sĩ hóa học, Trường Đại học Vinh 18 Mai Xuân Trường (2008), Nghiên cứu phương pháp hấp thụ quang phân tử xác định đồng thời chất có phổ hấp thụ xen phủ dựa thuật toán lọc Kalman, Luận án Tiến sĩ hóa học, Đại học KHTN–ĐHQG Hà Nội 81 19 Viện kiểm nghiệm dược phẩm (1973), phương pháp định lượng, NXB Y học TIẾNG ANH 20 Alagar Raja M (2013), Analytical method development and validation of acetaminophen, dextromethorphan hydrobromide and doxylamine succinate in soft gel capsule dosage form by using RP-HPLC, World journal of pharmacy and pharmaceutical sciences Volume 2, Issue 6, pp 58525862 21 Dina T El-Sherbinya (2007), Simultaneous determination of loratadine and desloratadine in pharmaceutical preparations using liquid chromatography with a microemulsion as eluent, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Volume 43, Issue 4, 12 March 2007, pp 1236– 1242 22 Jain Pritam (2014), UV-AUC method development and validation for estimation of dextromethorphan hydrobromide, Surana Sanjay Department of Pharmaceutical, Chemistry, R C Patel Institute of Pharmaceutical Education and Research, Karwand Naka, Shirpur Maharashtra-425405, pp 57-62 23 Hatice Caglar (2014), HPLC method development and validation: Simultaneous determination of active ingredients in cough and cold pharmaceuticals, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences ISSN- 0975-1491 Vol 6, Issue 10, 2014, pp 421-428 24 Hussen Al-akraa (2013), New rapid RP-HPLC method for simultaneous determination of some decongestants and coygh-sedativex, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences ,vol 5, pp 234-241 25 K.B Shalini (2014), Devvelopment and validation of loratadine in bulk and pharamaceutical dosage form by UV spectroscopc method, International 82 Journal of Pharmaceutical Research & Analysis, Shalini KB, Vol4, Issue1, 2014, pp 39-43 26 Kotaiah.Paidipala (2013), Method development and validation of RP-HPLC method for simultaneous estimation of dextromethorphan hydrobromide, phenylephrine hydrochlorit and triprolidine hydrochlorit in bulk and combined dosage forms, Department of Pharmaceutical Analysis, Sri Shivani College Of Pharmacy,Mulugu Road, Warangal, Andra pradesh, India, pp 172-179 27 P Narmada (2012), Simultaneous estimation of Cetrizine hydrochlorit and Dextromethorphan hydrobromide in syrup formulation by Reverse phase high performance liquid chromatography, Novus International Journal of Analytical Innovations 2012, Vol 1, No 28 P.G Bhortake (2014), Simultaneous Determination of Acetaminophen, Phenylephrine Hydrochlorit and Dextromethorphan Hydrobromide in Liquicap Dosage form by RP-HPLC, International Journal of Pharma Research & Review, Sept 2014; (9), pp 9-14 29 P.L Sateesh (2013), Method Development and Validation of Ambroxol Hydrochlorit and Loratadine by RP-HPLC in Tablet Dosage Form, International Journal of Pharma Sciences Vol 3, No (2013), pp 370-374 30 Siladitya Behera (2012), UV-Visible Spectrophotometric Method Development and Validation of Assay of Paracetamol Tablet Formulation, Analytical & Bioanalytical Techniques Behera, J Anal Bioanal Techniques 2012, pp 3-6 83 ... THU HẰNG ĐINH LƯỢNG ĐỒNG THỜI VITAMIN B1, B6 VÀ B12 ̣ TRONG THUỐC NEUROBION, SCANNEURON BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VÀ QUANG PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã... xác định số chất theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao phổ hấp thụ phân tử 27 1.4.1 Kết xác định số chất theo phương pháp HPLC 27 1.4.2 Kết xác định số chất theo phương pháp quang phổ. .. thuốc Neurobion, Scanneuron phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao quang phổ hấp thụ phân tử Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan vitamin B1, B6 B12 1.1.1 Vitamin B1 1.1.1.1 Giới thiệu chung - Tên