Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

72 5 0
Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

... sinh dƣỡng vi khuẩn B subtilis mà không sử dụng chất cảm ứng Chính vậy, chúng tơi thực đề tài nghiên cứu: ? ?Biểu β- galactosidase vi khuẩn B subtilis? ?? nhằm mở rộng phạm vi ứng dụng vi sinh vật... nghiên cứu cơng bố vi? ??c biểu gen tế bào sinh dƣỡng B subtilis mà không cần sử dụng chất cảm ứng Do đó, chúng tơi thực đề tài: ? ?Biểu β- galactosidase vi khuẩn B subtilis? ?? với mục đích biểu gen tế bào... phản ứng enzyme β- galactosidase với X-gal Nguyên lý: Hoạt tính enzyme β- galactosidase đƣợc định tính dựa vào khả β- galactosidase thuỷ phân X-gal Nếu vi khuẩn mang gen lacZ, enzyme βgalactosidase

Ngày đăng: 05/07/2021, 09:05

Hình ảnh liên quan

Hình 1.1. Hình ảnh  B. subtilis  [41, 68]  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 1.1..

Hình ảnh B. subtilis [41, 68] Xem tại trang 10 của tài liệu.
Hình 1.2. Hình ảnh bào tử  B. subtilis  với các độ phóng đại khác nhau [69, 76, 77]  Sự hình thành bào tử xảy ra trong nhiều giai đoạn, tổng cộng gần 8 giờ để  hoàn  tất - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 1.2..

Hình ảnh bào tử B. subtilis với các độ phóng đại khác nhau [69, 76, 77] Sự hình thành bào tử xảy ra trong nhiều giai đoạn, tổng cộng gần 8 giờ để hoàn tất Xem tại trang 11 của tài liệu.
Hình 1.3. Cơ chế thủy phân của enzyme β- galactosidase  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 1.3..

Cơ chế thủy phân của enzyme β- galactosidase Xem tại trang 17 của tài liệu.
Hình 1.5. Cơ chế điều hòa của operon  lac - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 1.5..

Cơ chế điều hòa của operon lac Xem tại trang 19 của tài liệu.
Hình 1.6. Cấu trúc của β-galactosidase ở  E. coli  [66, 67]  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 1.6..

Cấu trúc của β-galactosidase ở E. coli [66, 67] Xem tại trang 20 của tài liệu.
Hình 1.7. Cơ chế thủy phân X-gal của enzyme β-galactosidase [71]  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 1.7..

Cơ chế thủy phân X-gal của enzyme β-galactosidase [71] Xem tại trang 21 của tài liệu.
Bảng 1.1. Một số vi sinh vật có khả năng tổng hợp enzyme β-galactosidase [50]  NẤM  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 1.1..

Một số vi sinh vật có khả năng tổng hợp enzyme β-galactosidase [50] NẤM Xem tại trang 22 của tài liệu.
Bảng 1.2. Một số vector thƣơng mại dùng tách dòng và biểu hiện trong  E. coli  [75]  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 1.2..

Một số vector thƣơng mại dùng tách dòng và biểu hiện trong E. coli [75] Xem tại trang 27 của tài liệu.
Hình 1.9. Mô hình đoạn DNA của vector pHV32 đƣợc chèn vào nhiễm sắc thể của  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 1.9..

Mô hình đoạn DNA của vector pHV32 đƣợc chèn vào nhiễm sắc thể của Xem tại trang 30 của tài liệu.
Hình 1.10. Mô hình trao đổi chéo đơn (single crossover) minh họa việc sử  dụng một vector cài nhập cơ bản để xây dựng một đột biến knockout trong một  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 1.10..

Mô hình trao đổi chéo đơn (single crossover) minh họa việc sử dụng một vector cài nhập cơ bản để xây dựng một đột biến knockout trong một Xem tại trang 31 của tài liệu.
Hình 1.11. Mô hình trao đổi chéo kép (double crossover) minh họa việc sử dụng  một vector cài nhập (ectopic integration vector) để chèn một khung đọc mở (orf A) vào  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 1.11..

Mô hình trao đổi chéo kép (double crossover) minh họa việc sử dụng một vector cài nhập (ectopic integration vector) để chèn một khung đọc mở (orf A) vào Xem tại trang 32 của tài liệu.
Bảng 2.2. Các cặp mồi sử dụng  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 2.2..

Các cặp mồi sử dụng Xem tại trang 34 của tài liệu.
Bảng 2.4. Các thiết bị thí nghiệm  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 2.4..

Các thiết bị thí nghiệm Xem tại trang 36 của tài liệu.
Bảng 2.5. Thành phần phản ứng PCR - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 2.5..

Thành phần phản ứng PCR Xem tại trang 39 của tài liệu.
Bảng 3.1.Thành phần, điều kiện phản ứng PCR P rrnO - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 3.1..

Thành phần, điều kiện phản ứng PCR P rrnO Xem tại trang 45 của tài liệu.
Hình 3.2. Sơ đồ tạo vector pUL1  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 3.2..

Sơ đồ tạo vector pUL1 Xem tại trang 46 của tài liệu.
Hình 3.3. Kết quả PCR colony kiểm tra đoạn chèn P rrnO  các khuẩn lạc thu đƣợc   Giếng (+): sản phẩm PCR đoạn PrrnO đƣợc khuếch đại từ genome của B - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 3.3..

Kết quả PCR colony kiểm tra đoạn chèn P rrnO các khuẩn lạc thu đƣợc Giếng (+): sản phẩm PCR đoạn PrrnO đƣợc khuếch đại từ genome của B Xem tại trang 47 của tài liệu.
Bảng 3.2. Thành phần và điều kiện phản ứng PCR  lacZ - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 3.2..

Thành phần và điều kiện phản ứng PCR lacZ Xem tại trang 48 của tài liệu.
Hình 3.4. Kết quả khuếch đại đoạn  lacZ  từ vector pDG268  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 3.4..

Kết quả khuếch đại đoạn lacZ từ vector pDG268 Xem tại trang 49 của tài liệu.
Bảng 3.3. Thành phần phản ứng cắt  lacZ  và pUL1  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 3.3..

Thành phần phản ứng cắt lacZ và pUL1 Xem tại trang 49 của tài liệu.
Hình 3.5. Kết quả điện di sản phẩm PCR colony kiểm tra đoạn  lacZ  chèn trong  plasmid pUL1 của 5 khuẩn lạc  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 3.5..

Kết quả điện di sản phẩm PCR colony kiểm tra đoạn lacZ chèn trong plasmid pUL1 của 5 khuẩn lạc Xem tại trang 50 của tài liệu.
Bảng 3.4. Thành phần phản ứng nối  lacZ  vào pUL1  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 3.4..

Thành phần phản ứng nối lacZ vào pUL1 Xem tại trang 50 của tài liệu.
Hình 3.8. Sơ đồ tạo vector pUL2  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 3.8..

Sơ đồ tạo vector pUL2 Xem tại trang 53 của tài liệu.
promoter P rrnO -RBS của gen  spoVG - lacZ  chèn thêm đƣợc thể hiện trong hình 3.9  dƣới đây - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

promoter.

P rrnO -RBS của gen spoVG - lacZ chèn thêm đƣợc thể hiện trong hình 3.9 dƣới đây Xem tại trang 54 của tài liệu.
3.4  Cài  nhập  đoạn  P rrnO -RBS (spoVG)-lacZ   trong  vector  pDG364  vào  genome của B - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

3.4.

Cài nhập đoạn P rrnO -RBS (spoVG)-lacZ trong vector pDG364 vào genome của B Xem tại trang 55 của tài liệu.
Bảng 3.6. Thành phần và điều kiện cắt pDG364  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Bảng 3.6..

Thành phần và điều kiện cắt pDG364 Xem tại trang 55 của tài liệu.
Hình 3.10. Sơ đồ cài nhập đoạn P rrnO - RBS  (spoVG)-lacZ  từ vector pUL2  vào genome của B - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 3.10..

Sơ đồ cài nhập đoạn P rrnO - RBS (spoVG)-lacZ từ vector pUL2 vào genome của B Xem tại trang 56 của tài liệu.
Hình 3.11. Kết quả thử hoạt tính amylase trên môi trƣờng tinh bột (0,1%) của  thể biến nạp  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 3.11..

Kết quả thử hoạt tính amylase trên môi trƣờng tinh bột (0,1%) của thể biến nạp Xem tại trang 57 của tài liệu.
Hình 3.14. Biểu đồ hoạt độ β-galactosidase của các thể tái tổ hợp tại các thời  điểm khác nhau  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 3.14..

Biểu đồ hoạt độ β-galactosidase của các thể tái tổ hợp tại các thời điểm khác nhau Xem tại trang 59 của tài liệu.
Hình 3.13. Xác định hoạt độ β-galactosidase trong các chủng 2, 4 và 7 tại  thời điểm 12h  - Biểu hiện β galactosidase trong vi khuẩn bacillus subtilis

Hình 3.13..

Xác định hoạt độ β-galactosidase trong các chủng 2, 4 và 7 tại thời điểm 12h Xem tại trang 59 của tài liệu.

Mục lục

  • MỤC LỤC

  • DANH MỤC HÌNH

  • DANH MỤC BẢNG

  • CÁC TỪ VIẾT TẮT

  • MỞ ĐẦU

  • CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

  • 1. Sơ lược về vi khuẩn B. subtilis

  • 1.2. Bào tử và khả năng tạo bào tử của vi khuẩn B. subtilis

  • 1.3. Cấu trúc genome

  • 1.4. Tính an toàn và ứng dụng của B. subtilis

  • 2. Cấu trúc operon lac, gen lacZ và β- galactosidase

  • 2.1. Cấu trúc operon lac

  • 2.2. Gen lacZ và β-galactosidase

  • 3. Vector biểu hiện gen trong vi khuẩn

  • 3.1. Đặc điểm của plasmid

  • 3.2. Những vector tách dòng và vector biểu hiện trong E. coli

  • 3.3. Vector biểu hiện trong B. subtilis

  • 3.3.1. Hệ thống vector biểu hiện pHT

  • 3.3.2. Hệ thống vector biểu hiện pAL

  • 3.4 Cài nhập vector biểu hiện vào B. subtilis

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan