KLTN- Anthraquinon NGAN

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA HÓA HỌC Đinh Thị Tuyết Ngân XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN ANTHRAQUINON TRONG DƯỢC LIỆU HÀ THỦ Ô ĐỎ BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Khóa luận tốt nghiệp đại học hệ quy Ngành Hóa phân tích (Chương trình đào tạo chuẩn) Hà Nội - 2016 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA HÓA HỌC Đinh Thị Tuyết Ngân XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN ANTHRAQUINON TRONG DƯỢC LIỆU HÀ THỦ Ô ĐỎ BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Khóa luận tốt nghiệp đại học hệ quy Ngành Hóa phân tích Chương trình đào tạo chuẩn Cán hướng dẫn: TS Phương Thiện Thương ThS Nguyễn Thị Hà Ly Hà Nội - 2016 LỜI CẢM ƠN Lời em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Phương Thiện Thương, người tạo điều kiện, hướng dẫn giúp đỡ em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn nhiệt tình giúp đỡ Thạc Sĩ Nguyễn Thị Hà Ly, không dành nhiều thời gian quý báu để tận tình hướng dẫn truyền đạt cho em nhiều kiến thức, kinh nghiệm bổ ích mà cịn ln người động viên, khích lệ trực tiếp chia sẻ em khó khăn gặp phải từ bước hồn thành khóa luận Em xin cảm ơn tạo điều kiện PGS.TS Tạ Thị Thảo, giới thiệu giúp đỡ em có hội đến Viện Dược Liệu để thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn tới ban lãnh đạo Viện Dược liệu anh chị công tác khoa Hố phân tích – Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập nghiên cứu môi trường đại Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo giảng dạy Khoa Hóa Học trường Đại học Khoa học Tự nhiên, thầy cô mơn Hóa Phân Tích, cho em kiến thức vơ q báu, góp phần định hướng nghiên cứu sẵn sàng giải đáp vấn đề em chưa hiểu rõ liên quan đến nội dung đề tài Tôi xin gửi lời cám ơn đặc biệt tới gia đình bạn bè tơi, người ln bên động viên khuyến khích học tập nghiên cứu, quan tâm, chia sẻ tơi khó khăn Một lần xin gửi lời cám ơn chân thành tới giúp đỡ sẻ chia mà nhận thời gian qua, động lực khơng nhỏ giúp tơi hồn thành khóa luận Hà Nội, tháng năm 2016 Sinh viên Đinh Thị Tuyết Ngân MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC CHƯƠNG : THỰC NGHIỆM 16 2.1 Mục tiêu đối tượng nghiên cứu 16 2.2.3.Thiết bị, dụng cụ 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Chuẩn bị dung dịch mẫu chuẩn 18 2.3.2 Phương pháp xử lý mẫu 18 2.4 Phương pháp phân tích 20 2.5 Phân tích mẫu thực tế 21 2.5.1 Công thức tính hàm lượng EM PS cho mẫu thực tế 21 2.6 Đánh giá phương pháp 22 2.6.1 Tính thích hợp hệ thống sắc kí 22 2.6.2 Tính đặc hiệu phương pháp 22 2.6.3 Độ tuyến tính 22 2.6.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 22 2.6.5 Độ xác 23 2.6.6 Độ (hiệu suất thu hồi) 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Xây dựng phương pháp phân tích anthraquinon HTOĐ HPLC-UV 24 3.1.1 Tính thích hợp hệ thống 24 3.1.2 Độ đặc hiệu 25 3.1.3 Kết khảo sát độ tuyến tính 26 3.1.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 28 3.1.5 Độ xác 28 3.1.6 Kết đánh giá độ (hiệu suất thu hồi) .30 3.2 Xây dựng phương pháp phân tích anthraquinon HTOĐ HPLC-FLD 33 3.2.1 Tính thích hợp hệ thống 33 3.2.2 Độ đặc hiệu 34 3.2.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 36 3.2.5 Độ xác 37 3.2.6 Kết đánh giá độ (hiệu suất thu hồi) .39 3.3.2 Đánh giá so sánh kết phân tích thành phần EM, PS HTOĐ phương pháp HPLCUV HPLC-FLD 41 DANH MỤC BẢNG Cán hướng dẫn: TS Phương Thiện Thương LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC CHƯƠNG : THỰC NGHIỆM 16 2.1 Mục tiêu đối tượng nghiên cứu 16 2.2.3.Thiết bị, dụng cụ 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Chuẩn bị dung dịch mẫu chuẩn 18 2.3.2 Phương pháp xử lý mẫu 18 2.4 Phương pháp phân tích 20 2.5 Phân tích mẫu thực tế 21 2.5.1 Cơng thức tính hàm lượng EM PS cho mẫu thực tế 21 2.6 Đánh giá phương pháp 22 2.6.1 Tính thích hợp hệ thống sắc kí 22 2.6.2 Tính đặc hiệu phương pháp 22 2.6.3 Độ tuyến tính 22 2.6.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 22 2.6.5 Độ xác 23 2.6.6 Độ (hiệu suất thu hồi) 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Xây dựng phương pháp phân tích anthraquinon HTOĐ HPLC-UV 24 3.1.1 Tính thích hợp hệ thống 24 3.1.2 Độ đặc hiệu 25 3.1.3 Kết khảo sát độ tuyến tính 26 3.1.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 28 3.1.5 Độ xác 28 3.1.6 Kết đánh giá độ (hiệu suất thu hồi) .30 3.2 Xây dựng phương pháp phân tích anthraquinon HTOĐ HPLC-FLD 33 3.2.1 Tính thích hợp hệ thống 33 3.2.2 Độ đặc hiệu 34 3.2.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 36 3.2.5 Độ xác 37 3.2.6 Kết đánh giá độ (hiệu suất thu hồi) .39 3.3.2 Đánh giá so sánh kết phân tích thành phần EM, PS HTOĐ phương pháp HPLCUV HPLC-FLD 41 Tiếng Việt 44 DANH MỤC HÌNH LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC CHƯƠNG : THỰC NGHIỆM 16 2.1 Mục tiêu đối tượng nghiên cứu 16 2.2.3.Thiết bị, dụng cụ 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Chuẩn bị dung dịch mẫu chuẩn 18 2.3.2 Phương pháp xử lý mẫu 18 2.4 Phương pháp phân tích 20 2.5 Phân tích mẫu thực tế 21 2.5.1 Cơng thức tính hàm lượng EM PS cho mẫu thực tế 21 2.6 Đánh giá phương pháp 22 2.6.1 Tính thích hợp hệ thống sắc kí 22 2.6.2 Tính đặc hiệu phương pháp 22 2.6.3 Độ tuyến tính 22 2.6.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 22 2.6.5 Độ xác 23 2.6.6 Độ (hiệu suất thu hồi) 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Xây dựng phương pháp phân tích anthraquinon HTOĐ HPLC-UV 24 3.1.1 Tính thích hợp hệ thống 24 3.1.2 Độ đặc hiệu 25 3.1.3 Kết khảo sát độ tuyến tính 26 3.1.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 28 3.1.5 Độ xác 28 3.1.6 Kết đánh giá độ (hiệu suất thu hồi) .30 3.2 Xây dựng phương pháp phân tích anthraquinon HTOĐ HPLC-FLD 33 3.2.1 Tính thích hợp hệ thống 33 3.2.2 Độ đặc hiệu 34 3.2.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 36 3.2.5 Độ xác 37 3.2.6 Kết đánh giá độ (hiệu suất thu hồi) .39 3.3.2 Đánh giá so sánh kết phân tích thành phần EM, PS HTOĐ phương pháp HPLCUV HPLC-FLD 41 Tiếng Việt 44 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt CAN DĐVN DĐTQ EM Tên đầy đủ HPLC-MS Acetonitril Dược Điển Việt Nam Dược Điển Trung Quốc Emodin High performance liquid chromatography: Sắc ký lỏng hiệu cao Sắc ký lỏng hiệu cao kết nối detector khối phổ HPLC-UV Sắc ký lỏng hiệu cao kết nối detector tử ngoại HPLC-FLD Sắc ký lỏng hiệu cao kết nối detector huỳnh quang HTO Hà thủ ô HTOĐ LOD LOQ MeOH PS Ppm Ppb RP-HPLC % RSD SD tR THSG UV-VIS VWD Hà thủ ô đỏ Limit of Detection: Giới hạn phát Limit of Quantitation: Giới hạn định lượng Metanol Physcion Parts per million: Phần triệu Parts per billion: Phần tỷ Reverse phase-HPLC: Sắc ký lỏng pha đảo % Relative standard deviation: % Độ lệch chuẩn tương đối Standard deviation: Độ lệch chuẩn Retention time: Thời gian lưu 2,3,5,4′-tetrahydroxystilben-2-O-β-D-Glucosid Ultraviolet-Visible: Tử ngoại khả kiến Variable Wavelength Detector HPLC MỞ ĐẦU Từ xa xưa dân tộc ta biết sử dụng cỏ dùng làm thuốc để phòng điều trị bệnh Xã hội ngày phát triển tiến bộ, y học Ngồi chuẩn đốn điều trị y học tiên tiến đại, người Việt thừa hưởng thêm phương pháp chữa bệnh độc đáo từ thuốc, thuốc dân gian gìn giữ truyền thụ qua nhiều hệ Giá trị góp phần xây dựng nên y học nước ta phát triển giữ nét sắc riêng dân tộc Hà thủ ô đỏ dược liệu quý mà dân gian lưu truyền từ xa xưa , xem loại thần dược cho việc tăng cường sức khỏe kéo dài tuổi thọ Theo y học cổ truyền, hà thủ đỏ có cơng dụng bổ gan thận, ích tinh huyết, nhuận tràng, thơng tiện, làm đen râu tóc Kết nghiên cứu đại cho thấy, tác dụng dược lý hà thủ ô đỏ phong phú điều chỉnh rối loạn lipid máu, giúp ngăn ngừa tình trạng vữa xơ động mạch, bảo vệ gan, thúc đẩy trình sản sinh hồng cầu, tăng khả miễn dịch, cải thiện hoạt động hệ thống tuyến nội tiết, đặc biệt tuyến thượng thận giáp trạng Ngoài ra, hà thủ đỏ cịn có tác dụng kháng khuẩn, nhuận tràng, giải độc, tăng khả chống rét thể, chống lão hóa giúp trẻ hóa da Với nhiều công dụng quý vậy, hà thủ ô đỏ ngày sử dụng rộng rãi thị trường Nguồn nguyên liệu phần trồng Việt Nam, phần lớn nhập từ nước khác (Lào, Trung Quốc,…) với chất lượng chưa kiểm sốt Vì xuất tình trạng dược liệu hà thủ đỏ lưu thông thị trường thường bị giả mạo không đạt yêu cầu chất lượng Điều dẫn tới hậu ảnh hưởng đến sức khỏe người bệnh, ảnh hưởng đến quyền lợi người tiêu dùng, lâu ngày dẫn tới niềm tin người dân vào thuốc y học cổ truyền Vì vậy, công tác kiểm tra, đánh giá chất lượng dược liệu hà thủ ô đỏ quan trọng Ở Việt Nam, việc đánh giá chất lượng dược liệu hà thủ ô đỏ thường thực theo Dược điển Việt Nam IV, nhiên quy định sơ sài, không đáp ứng yêu cầu kiểm tra đánh giá chất lượng hà thủ ô đỏ thị trường Một số nghiên cứu phân tích thành phàn hóa học, đánh giá chất lượng dược liệu hà thủ ô đỏ Việt Nam thực nhằm gợi ý cho việc nâng cấp chuyên luận hà ... dẫn chất anthraquinon tự do, 0,8058% dẫn chất anthraquinon toàn phần Sau chế, 3,82% tanin 0,1127% dẫn chất anthraquinon tự 0,2496% dẫn chất anthraquinon tồn phần [4] Trong đó, stilbenoid anthraquinon. .. chất stilben có dược liệu HTOĐ 1.1.3.3 Thành phần anthraquinon hà thủ ô đỏ Những hợp chất anthraquinon nằm nhóm lớn hydroxyquinon (xem hình 1.5) Anthraquinon tồn dạng glycosid gọi anthraglycosid... anthraglycosid polyoxy anthraquinon Gắn vào nhân thường có nhóm chức -OH, -OCH3, -CH3, -COOH Những dẫn chất anthraquinon có màu từ vàng, vàng cam đến đỏ [13] Một số dẫn xuất anthraquinon phổ biến