Xây dựng quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat trong viên sủi bọt bằng phương pháp hplc với đầu dò pda

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL, DEXTROMETHORPHAN HYDROBROMID, LORATADIN, PHENYLEPHRIN BITARTRAT TRONG VIÊN SỦI BỌT BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI ĐẦU DÒ PDA Mã số: Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS Phan Thanh Dũng Tp Hồ Chí Minh, 09/2018 BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL, DEXTROMETHORPHAN HYDROBROMID, LORATADIN, PHENYLEPHRIN BITARTRAT TRONG VIÊN SỦI BỌT BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI ĐẦU DÒ PDA Mã số: Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) Tp Hồ Chí Minh, 09/2018 DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA PGS.TS Võ Thị Bạch Huệ Ds.  Nguyễn Thị Như Ngọc MỤC LỤC CHƯƠNG I MỞ ĐẦU TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGỒI NƯỚC MỤC TIÊU ĐỀ TÀI TÓM TẮT NỘI DUNG ĐỀ TÀI CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU – HÓA CHẤT – TRANG THIẾT BỊ 2.2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA CHƯƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 14 3.1 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL, DEXTROMETHORPHAN HYDROBROMID, LORATADIN, PHENYLEPHRIN BITARTRAT BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI ĐẦU DÒ PDA 14 3.1.1 Xử lý mẫu 14 3.1.2 Điều kiện sắc ký 14 3.1.3 Thẩm định quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA 24 CHƯƠNG IV BÀN LUẬN 42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Chữ nguyên Nghĩa tiếng Việt ACN Acetonitril Acetonitril ASEAN Association of Southeast Asian Nations Hiệp hội quốc gia Đông Nam Á BP The British Pharmacopoeia DĐVN DEX Dược điển Anh Dược điển Việt Nam Dextromethorphan hydrobromid Dextromethorphan hydrobromid EP The European Pharmacopoeia Dược điển châu Âu HPLC High-performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao LOR Loratadin Loratadin MeOH Methanol Methanol PAR Paracetamol Paracetamol PDA Photodiod Array Detector Đầu dò dãy diod quang PHE Phenylephrin bitartrat Phenylephrin bitartrat RP Reversed-phase Pha đảo RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối S SD Diện tích pic Standard Deviation TCNSX Độ lệch chuẩn Tiêu chuẩn nhà sản xuất TEA Triethylamin Triethylamin TFA Trifloroacetic acid Acid trifloroacetic THF Tetrahydrofuran Tetrahydrofuran TNHH Trách nhiệm hữu hạn USP United States Pharmacopeia Dược điển Mỹ UV-Vis Ultra Violet - Visible Tử ngoại – khả kiến i DANH MỤC HÌNH ẢNH Trang Hình 3.1 Biểu đồ hàm lượng hoạt chất thời gian siêu âm mẫu … 15 Hình 3.2 Lựa chọn bước sóng phát 16 Hình 3.3 Sắc ký đồ dung dịch thử chương trình gradient khảo sát 17 Hình 3.4 Sắc ký đồ dung dịch thử chương trình gradient khảo sát (tiếp) 18 Hình 3.5 Sắc ký đồ với pha động ACN - TEA 0,01% điều chỉnh pH 3,0/pH 2,/ pH 2,1 TFA 19 Hình 3.6 Sắc ký đồ với pha động ACN – dung dịch TFA pH 2,1 20 Hình 3.7 Sắc ký đồ với pha động ACN – dung dịch acid phosphoric pH 2,1 20 Hình 3.8 Sắc ký đồ khảo sát lựa chọn cột sắc ký 22 Hình 3.9 Sắc ký đồ thẩm định tính đặc hiệu 24 Hình 3.10 Sắc ký đồ thẩm định tính đặc hiệu (tiếp) 25 Hình 3.11 Phổ UV-Vis pic thời gian lưu mẫu chuẩn mẫu thử 26 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu thử điều kiện khắc nghiệt 26 Hình 3.13 Sắc ký đồ mẫu thử điều kiện khắc nghiệt (tiếp) 27 Hình 3.14 Sắc ký đồ mẫu thử điều kiện khắc nghiệt (tiếp) 28 Hình 3.15 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ 32 DANH MỤC BẢNG BIỂU – SƠ ĐỒ Trang Bảng 2.1 Thành phần công thức viên sủi bọt nghiên cứu Bảng 2.2 Thông tin chất chuẩn Bảng 2.3 Danh mục trang thiết bị sử dụng Bảng 2.4 Các chương trình gradient khảo sát định lượng hoạt chất Bảng 2.5 Cách pha dãy chuẩn khảo sát tính tuyến tính quy trình định lượng 11 Bảng 2.6 Cách chuẩn bị mẫu tự tạo thẩm định độ hoạt chất 12 Bảng 2.7 Chương trình gradient (-1%) độ thơ 13 Bảng 2.8 Chương trình gradient (+1%) độ thô 13 Bảng 3.1 Kết khảo sát lựa chọn dung môi pha mẫu 14 Bảng 3.2 Hàm lượng hoạt chất thời gian siêu âm mẫu 14 Bảng 3.3 So sánh độ phân giải thay đổi pH dung dịch B 21 Bảng 3.4 So sánh hệ số bất đối As với dung dịch B TFA pH 2,1 TEA 0,01% chỉnh pH 2,1 TFA 21 Bảng 3.5 So sánh cột Inersustain C8 Inersustain C18 23 Bảng 3.6 Chương trình gradient tối ưu lựa chọn 23 Bảng 3.7 Kết tính thích hợp hệ thống quy trình định lượng 29 Bảng 3.8 Kết thẩm định độ lặp lại 30 Bảng 3.9 Kết thẩm định độ xác trung gian 30 Bảng 3.10 Kết khảo sát diện tích pic hoạt chất theo nồng độ 31 Bảng 3.11 Kết thống kê hồi quy tuyến tính hoạt chất 31 Bảng 3.12 Kết thẩm định độ paracetamol 32 Bảng 3.13 Kết thẩm định độ phenylephrin bitartrat 33 Bảng 3.14 Kết thẩm định độ dextromethorphan HBr 33 Bảng 3.15 Kết thẩm định độ loratadin 34 Bảng 3.16 Khoảng xác định hoạt chất 34 Bảng 3.17 Kết thẩm định độ thơ - tốc độ dịng 0,9 ml/phút 35 Bảng 3.18 Kết thẩm định độ thô - tốc độ dòng 1,1 ml/phút 35 Bảng 3.19 Kết thẩm định độ thô - nhiệt độ cột 23 oC 36 Bảng 3.20 Kết thẩm định độ thô - nhiệt độ cột 27 oC 36 Bảng 3.21 Kết thẩm định độ thô - pH 2,0 37 Bảng 3.22 Kết thẩm định độ thô - pH 2,2 37 Bảng 3.23 Kết thẩm định độ thô - chương trình gradient (-1%) 38 Bảng 3.24 Kết thẩm định độ thơ - chương trình gradient (+1%) 38 Bảng 3.25 Kết thẩm định độ thô - cột Inertsil C8 (150 mm; 4,6 mm; μm) 39 Bảng 3.26 Kết thẩm định độ thơ - vị trí đặt lọ chứa mẫu hệ thống tiêm mẫu tự động 39 Bảng 3.27 Kết thẩm định độ thô - độ ổn định dung dịch phân tích 40 CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC - Paracetamol (acetaminophen hay N - acetyl - p - aminophenol) chất chuyển hóa có hoạt tính phenacetin, thuốc giảm đau - hạ sốt hữu hiệu Tác động lên vùng đồi gây hạ nhiệt, tỏa nhiệt tăng giãn mạch tăng lưu lượng máu ngoại biên Khả ức chế enzym cyclo oxygenase yếu nên khơng có tác dụng kháng viêm Dextromethorphan thuốc giảm ho tác dụng lên trung tâm ho hành não dùng để điều trị triệu chứng do họng phế quản bị kích thích cảm lạnh thơng thường hít phải chất kích thích Phenylephrin thuốc chủ vận chọn lọc receptor, gây co mạch tăng huyết áp, có tác dụng kéo dài Epinephrin bị enzym COMT thủy phân làm giảm nghẹt mũi chảy mũi có tác dụng chống sung huyết mũi, giảm sưng mạch máu mũi Loratadin làm giảm nhẹ triệu chứng viêm mũi dị ứng mày đay, chống ngứa, khơng có tác dụng an thần [3] Sự kết hợp đồng thời paracetamol, dextromethorphan, loratadin, phenylephrin chế phẩm làm nâng cao hiệu quả, giảm chi phí mà cịn mang lại thuận tiện cho bệnh nhân trình điều trị cho bác sỹ kê đơn - Hiện nay, công ty TNHH HASAN - DERMAPHARM nghiên cứu sản xuất viên sủi bọt chứa đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat chưa xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm Vì vậy, chúng tơi thực đề tài “Xây dựng quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin phenylephrin bitartrat viên sủi bọt phương pháp HPLC” Để xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cho chế phẩm MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Xây dựng quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin phenylephrin bitartrat viên sủi bọt phương pháp HPLC Tiến hành thăm dò điều kiện phân tích như: - Lựa chọn pha động - pH pha động - Tỉ lệ pha động, thăm dò chương trình gradient hóa dung mơi - Tốc độ dịng - Bước sóng phát Đưa qui trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin phenylephrin bitartrat TÓM TẮT NỘI DUNG ĐỀ TÀI - Xây dựng quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin phenylephrin bitartrat viên sủi bọt phương pháp HPLC Thăm dị qui trình tốt để định lượng hoạt chất - Thẩm định qui trình phân tích để ứng dụng vào việc định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin phenylephrin bitartrat viên sủi bọt phương pháp HPLC       Tính đặc hiệu Tính tuyến tính Độ xác Độ Khoảng xác định phương pháp Độ thô Bảng 3.12 Kết thẩm định độ paracetamol Lượng Chuẩn Mẫu tự tạo placebo thêm vào (mg) (mg) Chuẩn - - 2668,5 2668,9 2668,3 2668,8 2668,5 2668,6 2668,1 2668,5 2668,5 349,9 349,9 349,9 499,7 499,7 499,7 649,5 648,5 649,5 70% 100% 130% Diện tích pic (mAU*s) 39822958,33 28285412 28208836 28302136 40261523 40157461 40358535 51723423 51728834 51021226 Trung Lượng tìm lại (mg) % phục hồi 354,9 353,9 355,1 505,2 503,8 506,4 649,0 649,0 640,2 101,44 101,16 101,50 101,08 100,82 101,32 99,91 100,07 98,55 Trung bình RSD bình RSD (%) 101,37 0,18 101,08 0,25 99,51 0,84 100,65 0,97 Bảng 3.13 Kết thẩm định độ phenylephrin bitartrat Mẫu tự tạo Lượng placebo (mg) Chuẩn thêm vào (mg) Chuẩn - - 2668,5 2668,9 2668,3 2668,8 2668,5 2668,6 2668,1 2668,5 2668,5 8,1 8,1 8,1 11,6 11,6 11,6 15,1 15,1 15,1 70% 100% 130% Diện tích pic (mAU*s) Lượng tìm lại (mg) % phục hồi Trung bình RSD (%) 295742,67 - - - 210959 209545 208345 299587 299857 301259 383394 391956 390971 8,3 8,2 8,2 11,8 11,8 11,9 15,1 15,4 15,4 101,90 101,22 100,64 101,30 101,39 101,87 99,72 101,95 101,69 Trung bình RSD 101,25 0,62 101,52 0,30 101,12 1,21 101,30 0,72 Bảng 3.14 Kết thẩm định độ dextromethorphan HBr Mẫu tự tạo Lượng placebo (mg) Chuẩn thêm vào (mg) Chuẩn - - 2668,5 2668,9 2668,3 2668,8 2668,5 2668,6 2668,1 2668,5 2668,5 10,5 10,5 10,5 15,0 15,0 15,0 19,5 19,5 19,5 70% 100% 130% Diện tích pic (mAU*s) Lượng tìm lại (mg) % phục hồi Trung bình RSD (%) 300043,33 - - - 208169 213708 207008 300576 295074 299126 394985 389384 388071 10,4 10,7 10,3 15,0 14,8 15,0 19,7 19,5 19,4 99,11 101,75 98,56 100,18 98,34 99,69 101,26 99,83 99,49 Trung bình RSD 99,81 1,71 99,41 0,96 100,82 1,18 100,19 0,94 Bảng 3.15 Kết thẩm định độ loratadin Mẫu tự tạo Lượng placebo (mg) Chuẩn thêm vào (mg) Chuẩn - - 2668,5 2668,9 2668,3 2668,8 2668,5 2668,6 2668,1 2668,5 2668,5 3,5 3,5 3,5 5,0 5,0 5,0 6,5 6,5 6,5 70% 100% 130% Diện tích pic (mAU*s) Lượng tìm lại (mg) % phục hồi Trung bình RSD (%) 612005,00 - - - 423784 437399 437399 606294 603624 603728 783968 782506 788964 3,5 3,6 3,6 4,9 4,9 4,9 6,4 6,4 6,4 98,72 101,89 101,89 98,87 98,43 98,45 98,34 98,16 98,97 Trung bình RSD 100,84 1,82 98,58 0,25 98,49 0,43 99,30 1,50 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 36 Nhận xét: Tỷ lệ thu hồi paracetamol, phenylephrin bitartrat, dextromethorphan hydrobromid, loratadin nằm khoảng cho phép 98,0-102,0%; giá trị RSD mẫu nồng độ mẫu 2% Phương pháp đạt yêu cầu độ f Khoảng xác định Các hoạt chất có khoảng tuyến tính từ 40% đến 140% so với nồng độ định lượng, đạt độ thu hồi tốt mức nồng độ 70%, 100%, 130% độ lặp lại mẫu nồng độ %RSD 2% Vậy, chọn khoảng xác định hoạt chất từ 70% đến 130% so với nồng độ định lượng Bảng 3.16 Khoảng xác định hoạt chất Hoạt chất Khoảng xác định (mg/ml) Phenylephrin bitartrat 0,0081-0,0151 Paracetamol 0,3500-0,6500 Dextromethorphan hydrobromid 0,0105-0,0195 Loratadin 0,0035-0,0065 g Độ thơ + Thay đổi tốc độ dịng: Tăng/giảm 0,1 ml/phút so với tốc độ dòng 1,0 ml/phút Bảng 3.17 Kết thẩm định độ thô - tốc độ dịng 0,9 ml/phút Diện tích pic (mAU*s) tốc độ dòng 0,9 ml/phút STT Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan hydrobromid Loratadin 325776 42957675 325876 630768 325785 42976796 327574 630857 325759 42965468 325767 631647 327459 42958794 324435 630479 326561 42965774 324647 631764 325796 42945678 325565 632647 TB 326189,33 42961697,50 325644,000 631360,333 RSD (%) 0,21% 0,02% 0,34% 0,13% Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 37 Bảng 3.18 Kết thẩm định độ thơ - tốc độ dịng 1,1 ml/phút Diện tích pic (mAU*s) tốc độ dịng 1,1 ml/phút STT Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan hydrobromid Loratadin 274563 37878907 274756 565654 275668 37563479 274569 565676 274566 37497578 274564 562344 277575 37874598 274566 563412 275678 37874475 273434 568292 274575 37456758 278879 562343 TB 275437,50 37690965,83 275128,00 564620,17 RSD (%) 0,43% 0,55% 0,69% 0,42% + Thay đổi nhiệt độ cột: Tăng/giảm oC so với nhiệt độ cột 25 oC Bảng 3.19 Kết thẩm định độ thô - nhiệt độ cột 23 oC Diện tích pic (mAU*s) nhiệt độ cột 23 oC STT Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan hydrobromid Loratadin 294563 39677856 294564 606456 294566 39656675 295645 603245 294565 39121039 296751 601234 293656 39345356 291344 603245 291323 39143147 292342 602334 292991 39456568 293454 602646 TB 293610,67 39400106,83 294016,67 603193,33 RSD (%) 0,44% 0,61% 0,69% 0,29% Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 38 Bảng 3.20 Kết thẩm định độ thô - nhiệt độ cột 27 oC Diện tích pic (mAU*s) nhiệt độ cột 27 oC STT Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan hydrobromid Loratadin 295477 3967670 294576 603848 294757 3956690 298575 602342 294575 3912307 294553 603427 293464 3923728 295759 603474 292354 3923554 294755 604357 294575 3946462 295757 603755 TB 294200,33 3938401,83 295662,50 603533,83 RSD (%) 0,38% 0,55% 0,52% 0,11% + Thay đổi pH dung dịch B: Tăng/giảm 0,1 độ pH so với pH 2,1 Bảng 3.21 Kết thẩm định độ thô - pH 2,0 Diện tích pic (mAU*s) với pH 2,0 STT Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan hydrobromid Loratadin 296768 39567673 294536 603246 296767 39563651 292354 603757 294434 39567789 293443 602644 294454 39979007 296775 602314 296788 39577668 297878 602313 296674 39567667 295767 602490 TB 295980,83 39637242,50 295125,50 602794,00 RSD (%) 0,40% 0,42% 0,70% 0,10% Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 39 Bảng 3.22 Kết thẩm định độ thơ - pH 2,2 Diện tích pic (mAU*s) với pH 2,2 STT Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan hydrobromid Loratadin 295767 39765863 294585 603575 294585 39959560 299803 603485 294455 39958696 291239 604775 290980 39558868 296560 603457 291263 39984570 295563 602344 291636 39233588 295666 603489 TB 293114,33 39743524,16 295569,33 603520,83 RSD (%) 0,70% 0,75% 0,94% 0,13% + Thay đổi tỷ lệ pha động chương trình gradient: Tăng/giảm 1% thành phần dung mơi ACN chương trình gradient Bảng 3.23 Kết thẩm định độ thơ - chương trình gradient (-1%) Diện tích pic (mAU*s) với chương trình gradient (-1%) STT Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan hydrobromid Loratadin 294765 40885973 295767 606864 292494 40723444 291244 602567 295757 40645466 293444 604657 293575 40667766 296766 604656 299331 40576767 296712 605223 293455 40572322 295656 603467 TB 294896,167 40678623,000 294931,500 604572,333 RSD (%) 0,83% 0,29% 0,74% 0,24% Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 40 Bảng 3.24 Kết thẩm định độ thô - chương trình gradient (+1%) Diện tích pic (mAU*s) với chương trình gradient (+1%) STT Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan hydrobromid Loratadin 294565 39568754 294570 604452 294533 39676763 299345 606842 292454 39467677 293230 603511 294578 39576776 294545 607996 294565 39568683 295651 602489 294042 39577547 291131 603356 TB 294122,833 39572700,000 294745,333 604774,333 RSD (%) 0,29% 0,17% 0,93% 0,36% + Thay đổi cột Inertsil C8 (150 mm; 4,6 mm; μm) Bảng 3.25 Kết thẩm định độ thô - cột Inertsil C8 (150 mm; 4,6 mm; μm) STT TB RSD (%) Diện tích pic (mAU*s) với cột Inertsil C8 (150 mm; 4,6 mm; μm) Dextromethorphan Phenylephrin Loratadin Paracetamol hydrobromid bitartrat 283850 38475095 298496 612988 283926 38463677 297533 611965 283538 38573319 294554 612279 285818 38549491 295436 613111 287361 38680766 298294 611270 285592 38872748 294260 613697 285014,17 38602516,00 296428,83 612551,67 0,53% 0,40% 0,64% 0,14% + Thay đổi vị trí đặt lọ chứa mẫu hệ thống tiêm mẫu tự động Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 41 Bảng 3.26 Kết thẩm định độ thơ - vị trí đặt lọ chứa mẫu hệ thống tiêm mẫu tự động Vị trí đặt lọ chứa mẫu Diện tích pic (mAU*s) Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan hydrobromid Loratadin 341514 44052690 360433 694322 341526 44107205 359921 695059 10 343074 44104538 359455 696346 51 342466 44079356 358840 695624 55 342245 44049186 359227 695454 60 341838 43886208 357640 692472 101 343454 44174848 360625 696917 105 340187 43784991 356946 689978 110 341699 43783093 356829 690363 TB 342000,33 44002457,22 358879,56 694059,44 RSD (%) 0,28% 0,33% 0,40% 0,37% Nhận xét: Khi thay đổi yếu tố trên, %RSD diện tích pic 2% Phương pháp đạt yêu cầu độ thô + Độ ổn định dung dịch phân tích Bảng 3.27 Kết thẩm định độ ổn định dung dịch phân tích Phenylephrin bitartrat Thời điểm (giờ) Dung dịch chuẩn Paracetamol Dung dịch thử Dung dịch chuẩn Dung dịch thử Diện tích pic (mAU*s) RSD (%) Diện tích pic (mAU*s) RSD (%) Diện tích pic (mAU*s) RSD (%) Diện tích pic (mAU*s) RSD (%) 296978 - 340244 - 39653884 - 44498406 - 296054 0,31 345706 1,61 39945007 0,73 44406888 0,21 297256 0,09 341319 0,32 39916106 0,66 43864709 1,42 299754 0,93 339223 0,30 40072135 1,05 44637208 0,31 12 301227 1,43 338791 0,43 39996199 0,86 43953864 1,22 15 293386 1,21 338795 0,43 40023746 0,93 43874878 1,40 18 300754 1,27 342619 0,70 40210059 1,40 44069655 0,96 21 302643 1,91 342014 0,52 40266055 1,54 44060304 0,98 24 301701 1,59 339202 0,31 40353197 1,76 44016191 1,08 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 42 Dextromethorphan hydrobromid Thời điểm (giờ) Dung dịch chuẩn Dung dịch thử Loratadin Dung dịch chuẩn Dung dịch thử Diện tích pic (mAU*s) RSD (%) Diện tích pic (mAU*s) RSD (%) Diện tích pic (mAU*s) RSD (%) Diện tích pic (mAU*s) RSD (%) 300133 - 363662 - 617617 - 694509 - 302352 0,74 362736 0,25 611485 0,99 698548 0,58 300767 0,21 359643 1,11 610977 1,08 687830 0,96 301769 0,55 360768 0,80 613276 0,70 690206 0,62 12 302194 0,69 359133 1,25 610942 1,08 692118 0,34 15 304461 1,44 359541 1,13 613886 0,60 693170 0,19 18 303439 1,10 360495 0,87 612254 0,87 694753 0,04 21 305075 1,65 360173 0,96 612272 0,87 695263 0,11 24 303972 1,28 359417 1,17 607122 1,70 692626 0,27 Nhận xét: Dung dịch chuẩn hỗn hợp ổn định 24 giờ, dung dịch thử ổn định 24 (RSD 2%) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 43 CHƯƠNG IV BÀN LUẬN Quy trình xử lý mẫu Viên sủi bọt nghiên cứu có chứa phenylephrin bitartrat tan nước, loratadin thực tế không tan nước, paracetamol dextromethorphan hydrobromid tan nước Mục đích bào chế viên sủi bọt phối hợp với tá dược thích hợp để cho vào nước viên phải sủi hoạt chất phải hòa tan hoàn toàn nước tạo thành dung dịch thuốc Tuy nhiên, để đảm bảo định lượng hàm lượng dược chất, khảo sát dung môi pha mẫu nước phối hợp với acetonitril tỷ lệ khác để hòa tan tối đa dược chất Với dung môi pha mẫu gồm nước – ACN (80:20) thời gian siêu âm mẫu 20 phút cho thấy hàm lượng dược chất định lượng tối ưu Vì vậy, lựa chọn điều kiện để xử lý mẫu Điều kiện sắc ký Dựa vào cấu trúc hóa học paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat chất phân cực có nối đơi liên hợp có nhóm mang màu nên sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo với pha tĩnh phân cực, pha động phân cực sử dụng đầu dò PDA để định lượng hoạt chất Pha động Khi chế tạo pha tĩnh pha liên kết, người ta thường cho nhóm silanol bề mặt hạt silica phản ứng với hợp chất clorosilan có chứa gốc alkyl (n-octyl, noctadecyl,…) Do cản trở khơng gian, có số nhóm silanol bị silan hóa Để khắc phục điều này, người ta cho phản ứng tiếp tục với clorotrimethylsilan kích thước phân tử nhỏ liên kết với nhóm silanol tự cịn lại (kỹ thuật end-capped silanol), thực tế hiệu suất end-capped thường khơng hồn tồn hiệu ứng khơng gian nên cịn nhóm silanol tự bề mặt pha tĩnh Khi phân tích hợp chất có ngun tố có độ âm điện lớn cịn đôi điện tử chưa tham gia liên kết (O, N, …) tạo liên kết hydro với nhóm –OH Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 44 silanol tự dẫn đến tượng phân tử chất không rửa giải lúc nên pic thường bị kéo đuôi Để khắc phục tượng này, người ta thường thêm vào pha động chất cải thiện hình dạng pic có khả cạnh tranh tương tác với nhóm silanol tự so với hoạt chất Đối với hợp chất có nhóm chức có tính acid, người ta thường thêm vào acid trifloroacetic Đối với hợp chất có nhóm chức có tính base, người ta thường thêm vào triethylamin Trong nghiên cứu này, paracetamol phenylephrin bitartart có nhóm –OH phenol có tính acid, dextromethorphan HBr loratadin có nitơ cịn đơi điện tử chưa liên kết nên có tính base theo thuyết acid-base Lewis Do đó, đề tài tiến hành khảo sát điều kiện sắc ký ban đầu với pha động gồm dung môi hữu kết hợp với dung dịch nước có chứa acid trifloroacetic triethylamin nồng độ 0,01% (tương ứng với pH 3,0) sau khảo sát với thay đổi nồng độ acid trifloroacetic tương ứng với pH 3,0 đến 2,1 Ở pH 2,1 cho độ phân giải pic tá dược pic dextromethorphan HBr lớn hơn, lựa chọn pH Kết cho thấy sử dụng acid trifloroacetic triethylamin hệ số bất đối (As) tốt so với trường hợp khác Khi không sử dụng triethylamin, kết sắc ký đồ hệ có dung dịch B chứa nước chỉnh pH 2,1 acid trifloroacetic cho thấy hệ số bất đối pic dextromethorphan HBr loratadin so với có sử dụng triethylamin Khi không sử dụng acid trifloroacetic triethylamin, sử dụng acid rẻ tiền acid phosphoric hiệu lực tách cột trở nên ổn định chất phân tích vừa phải tương tác với pha tĩnh vừa tương tác với nhóm silanol tự pha tĩnh Do đó, sắc ký đồ hệ có dung dịch B chứa nước chỉnh pH 2,1 acid phosphoric không xác định pic phenylephrin bitartart pic dextromethorphan chưa tách khỏi pic tá dược Pha tĩnh Kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo với pha tĩnh phân cực, cột C8 C18 thường sử dụng Với cột Inertsustain C8 (150 mm; 4,6 mm; μm) sẵn có, đề tài tiến hành khảo sát cột Pha tĩnh cột C8 có nhóm alkyl carbon Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 45 phân cực so với pha tĩnh cột C18 có nhóm alkyl 18 carbon nên khả tương tác với chất phân tích khác dẫn đến thời gian lưu khác Khi tiến hành khảo sát hai cột với điều kiện sắc ký tương tự thời gian lưu pic thay đổi ít, thống số sắc ký khác đạt Tuy nhiên, cột Inertsustain C18 (150 mm; 4,6 mm; μm) có pic paracetamol bị kéo Do lựa chọn cột Inertsustain C8 (150 mm; 4,6 mm; μm) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Sau thời gian thực đề tài hoàn thành mục tiêu đề luận văn với kết đạt sau: - Xây dựng quy trình định lượng đồng thời hoạt chất paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat viên sủi bọt phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dị dãy diod quang với pha động khơng chứa dung dịch đệm Quy trình thẩm định theo hướng dẫn ASEAN gồm tính đặc hiệu, độ đúng, độ xác, tính tuyến tính, khoảng xác định, độ thô Khoảng xác định phenylephrin bitartrat 0,0081-0,0151 mg/ml, paracetamol 0,3500-0,6500 mg/ml, dextromethorphan hydrobromid 0,0105-0,0195 mg/ml, loratadin 0,0035-0,0065 mg/ml với hệ số tương quan từ 0,9991-0,9999 Độ thu hồi hoạt chất nằm khoảng 98-102% với RSD nhỏ 2% KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu tạp cần kiểm soát viên sủi bọt để hoàn thiện tiêu chuẩn cho sản phẩm - Nghiên cứu khảo sát độ ổn định, xác định tuổi thọ viên sủi bọt Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, NXB Y học, Hà Nội, tr.219-221, tr 462-466 Bộ Y tế (2012), Dược thư quốc gia Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, tr.421422, tr.748-750, tr.904-907 Bộ Y tế (2013), Quyết định số 07/QĐ-QLD ngày 11 tháng 01 năm 2013 việc ban hành Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc, phụ lục Bộ Y tế (2015), Tài liệu tập huấn chuyên gia thẩm định hồ sơ đăng ký thuốc, Hà nội Nguyễn Thị Thu Nguyệt, Võ Thị Bạch Huệ (2014), Xây dựng quy trình định lượng khảo sát độ hòa tan paracetamol, cafein, phenylephrin hydroclorid viên nén bao phim Parin-An phương pháp HPLC, Luận văn tốt nghiệp Dược sỹ chuyên khoa I, Trường ĐH Y Dược Hồ Chí Minh, tr.28 Đoàn Thị Ngọc Yến, Nguyễn Đức Tuấn (2012), Xây dựng quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan loratadin số dược phẩm đa thành phần phương pháp HPLC với đầu dị dãy Diod quang, Khóa luận dược sỹ đại học, Trường ĐH Y Dược Hồ Chí Minh, tr.37 TÀI LIỆU TIẾNG ANH Akraa et al (2013), “New rapid RP-HPLC method for simultaneous determination of some decongestants and cough-sedatives”, Int J Pharm Pharm Sci, Vol 5, Suppl 4, pp 234-241 Anjana M.N et al (2013), “An updated review of cyclodextrins – an enabling technology for challenging pharmaceutical formulations”, Int J Pharm Pharm Sci, (3), pp 54 - 58 Asean (2008), Asean guideline for validation of analytical procedures, pp 117 10 British Pharmacopoeia (2016), pp 131-133 , pp 502-503, pp 785-786 11 European Pharmacopoeia – 8th Edition (2013), pp 2963-2964, pp 20152026, pp 2638-2639 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 12 M Palabıyık, F Onur& (2007), “The Simultaneous Determination of Phenylephrine Hydrochloride, Paracetamol, Chlorpheniramine Maleate and Dextromethorphan Hydrobromide in Pharmaceutical Preparations”, Chromatographia Supplement, Vol 66, pp 93- 96 13 Nitin Dubey et al (2012), “Simultaneous Determination of Paracetamol, Phenylephrine Hydrochloride and Loratadine”, Asian Journal of Chemistry; Vol 24, No 11, pp 5409-5410 14 Palled Mahesh et al (2013), “Analytical Method Development And Validation Of Acetaminophen, Caffeine, Phenylephrine Hydrochloride And Dextromethorphan Hydrobromide In Tablet Dosage Form By Rp-Hplc”, International Journal of Pharmaceutical Science Invention, pp 9-15 15 Phan Thanh Dung, Kieu Xuan Hai (2016), “Simultaneous determination of paracetamol, phenylephrine, clorpheniramine and related compound 4-aminophenol in multi-components pharmaceuticals by high performance liquid chromatography”, Mahidol Univ J Pharm Sci; 43 (1), pp 37-44 16 Ramadevi Bhimavarapu et al (2011), “Forced Degradation Study Of Paracetamol In Tablet Formulation Using RP-HPLC”, Bulletin of Pharmaceutical Research 2011, 1(3), pp 15-16 17 Rouhollah Heydari (2008), “New HPLC Method for the Simultaneous Determination of Acetaminophen, Phenylephrine, Dextromethorphan and Chlorpheniramine in Pharmaceutical Formulations”, Analytical Letters, pp.965-976 18 United States Pharmacopeia, Second Supplement (USP 38-NF 33) (2015), CD-ROM 19 U.S Pharmacopeial Convention (2010), Safety Data Sheet, Material Name: 4-Aminophenol, pp 1-8 20 U.S Pharmacopeial Convention (2013), Safety Data Sheet, Material Name: Phenylephrine Bitartrate, pp 1-6 TÀI LIỆU TRANG WEB 21 https://www.drugbank.ca/drugs/DB00316 (Truy cập ngày 03/08/2017) 22 https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/dextromethorphan#section=De composition (Truy cập ngày 03/08/2017) ... CẤP TRƯỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL, DEXTROMETHORPHAN HYDROBROMID, LORATADIN, PHENYLEPHRIN BITARTRAT TRONG VIÊN SỦI BỌT BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI ĐẦU DÒ PDA Mã số:... ĐỀ TÀI - Xây dựng quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin phenylephrin bitartrat viên sủi bọt phương pháp HPLC Thăm dị qui trình tốt để định lượng hoạt... 3.1 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL, DEXTROMETHORPHAN HYDROBROMID, LORATADIN, PHENYLEPHRIN BITARTRAT BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI ĐẦU DÒ PDA