Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC

Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC Định lượng đồng thời paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên nén decolgen bằng phương pháp HPLC

, . ^ Bộ Y Tê TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI PHAN THỊ NGHĨA Ẩéióv U-f4t- ' - ĐỊNH LƯỢNG ĐÔNG THỜI PARACETAMOL, CLORPHENIRAMIN MALEAT VÀ PHENYLPROPANOLAMIN HYDROCLORID TRONG VIÊN NÉN DECOLGEN BANG PHƯƠNG PHÁP HPLC (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHOÁ 2000-2005) Người hướng dẫn : TS. Thái Duy Thìn ThS. Võ Thị Nhị Hà Nơi thực hiện : Bộ môn Hoá dược Trường đại học Dược Hà Nội Thời gian thực hiện : Tháng 8/2004 - tháng 5/2005 vi'' ' y , i HÀ NỘI, tháng 5/2005 -j V, ■ -V ,. / r' V ■I-V ffii LỜI CẢM ƠN Khoá luận này được thực hiện và hoàn thành tại bộ môn Hoá dược - Trường đại học Dược Hà Nội. Trong quá trình thực hiện khoá luận, tôi đã nhận được sự hướng dẫn tận tình của các thầy cô hướng dẫn, thầy cô giáo, cán bộ kỹ thuật viên trong bộ môn Hóa dược. Lời đầu tiên tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Thái Duy Thìn, ThS. Võ Thị Nhị Hà đã trực tiếp hướng dẫn tôi thực hiện khoá luận này. Đồng thời tôi cũng xin cảm ơn sự giúp đỡ của các thầy cô giáo, cán bộ kỹ thuật viên trong bộ môn Hoá dược đã giúp tôi hoàn thành khoá luận. Tôi cũng xin cảm ơn thư viện trường đại học Dược Hà Nội đã cung cấp những tài liệu có liên quan. Cuối cùng tồi xin cảm ơn gia đình và bạn bè đã luôn động viên khích lệ, giúp đỡ tôi tận tình. Hà Nội, tháng 5/2005 Phan Thị Nghĩa MỤC LỤC Trang Đặt vấn đề 1 Phần 1: Tổng quan 3 1.1. Paracetamol 3 1.2. Phenylpropanolamin hydroclorid 5 1.3. Cloq^heniramin maleat 7 1.4. Phương pháp HPLC 8 1.4.1. Khái quát phưcmg pháp HPLC 8 1.4.2. Các đại lượng đặc trưng 9 1.4.3. Nguyên tắc cấu tạo của hệ thống máy HPLC 12 1.4.4. Pha tĩnh trong HPLC 14 1.4.5. Pha động trong HPLC 15 1.4.6. Nguyên tắc lựa chọn pha tĩnh và pha động 16 1.4.7. Cách đánh giá p ic 16 1.4.8. Cách tính kết q uả 17 Phần 2: Thực nghiệm và kết quả 18 2.1. Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 18 2.1.1. Hoá chất - Dụng c ụ 18 2.1.2. Đối tượng - Nội dung - Phương pháp nghiên cứu 18 2.2. Kết quả thực nghiệm và nhận xét 20 2.2.1. Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc k ý 20 2.2.2. Khảo sát tính thích hợp của hệ thống sắc k ý 25 2.2.3. Khảo sát độ tuyến tính của phương pháp 27 2.2.4. Khảo sát độ chính xác của phương pháp 30 2.2.5. Khảo sát độ dúng của phương pháp 33 2 .2 .6 . ứng dụng chương trình sắc ký đã xây dựng để định tính và định lượng đồng thời PA, PH và CM trong viên nén Decolgen 35 2.3. Bàn luận 37 Phần 3: Kết luận và đề xuất 39 3.1. Kết luận 39 3.2. Đề xuất . 40 Tài liệu tham khảo CHỨ GIẢI CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT CM Clorpheniramin maleat COX Cyclooxygenase HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao PA Paracetamol PH Phenylpropanolamin hydroclorid SKS Số kiểm soát STT Số thứ tự TB Trung bình USP Dược điển Mỹ ĐẶT VẤN ĐỂ Ngày nay, nhu cầu chăm sóc và bảo vệ sức khoẻ của nhân dân ta ngày một tăng. Cùng với sự phát triển nhanh chóng của khoa học kỹ thuật, đặc biệt là trong lĩnh vực dược, các thuốc đa thành phần ngày càng phổ biến nhằm kết hợp tác dụng điều trị và thuận tiện cho người sử dụng. Trong các thuốc đa thành phần thì thuốc hỗn hợp hạ nhiệt giảm đau là một trong những nhóm thuốc điển hình, đang được sản xuất, lưu hành và sử dụng ngày càng rộng rãi, trong đó phần lớn là paracetamol phối hợp với một hoặc nhiều dược chất khác như: phenylpropanolamin hydroclorid, clorpheniramin maleat, dextromethorphan hydrobromid, pseudoephedrin, codein, với nhiều biệt dược khác nhau như viên nén Partamol, viên nén DeAucold, viên nén Rhumenol NF 500, viên nang Coldacmin, viên nén Decolsil, [14]. Trên thị trường hiện nay có nhiều dạng phối hợp 3 thành phần, trong đó có viên nén Decolgen của United pharma có tác dụng chữa cảm cúm đã được sản xuất với công thức: Paracetamol : 500 mg Phenylpropanolamin hydroclorid : 25 mg Clorpheniramin maleat : 2 mg Trong các dược điển thông dụng hiện hành [3, 15, 19, 21 ] chủ yếu chỉ có các chuyên luận cho thuốc chứa một thành phần. Vì vậy, các phương pháp định lượng các dạng bào chế đa thành phần nói trên hầu hết phải tiến hành qua nhiều công đoạn, tốn kém hóa chất và thời gian. Hiện có một chuyên luận trong ƯSP 27 và tiêu chuẩn cơ sở của viên nén Decolgen [13] sử dụng phương pháp HPLC để định lượng các hoạt chất trong hỗn hợp trên, nhưng mỗi chất phân tích sử dụng một chương trình sắc ký khác nhau. Hiện nay, do nhu cầu sử dụng và sản xuất các thuốc đa thành phần ngày càng tăng, việc đảm bảo chất lượng và hiệu quả điều trị là một yêu cầu tất yếu. Với mục đích tìm một phương pháp chung, đơn giản và nhanh, phù hợp với điều kiện trang thiết bị hiện nay của đa số phòng và trung tâm kiểm nghiệm, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Định lượng đồng thòi paracetamol, clorpheniramin maleat và phenylpropanolamin hydroclorid trong viên Decolgen bằng phương pháp HPLC” với mục tiêu: - Xây dựng chương trình sắc ký thích hợp để có thể định tính và định lượng đồng thời paracetamol, phenylpropanolamin hydroclorid và clorpheniramin maleat. - Áp dụng chương trình sắc ký đã xây dựng để định lượng các hoạt chất nói trên trong viên nén Decolgen có trên thị trường. Phầni: TỔNG QUAN l.l.PARACETAMOL [1, 3, 4, 6, 15, 16, 18, 19, 21, 22] 1.1.1. Công thức cấu tạo: HO— — NH—CO—CH3 CgHgNOs (M=151,16) Tên khoa học: N-acetyl-p-aminophenol hoặc: p-hydroxy acetanilid Tên khác: Acetaminophen 1.1.2. Tính chất: - Bột kết tinh trắng, hình lăng trụ đơn lớn, không mùi, vị hơi đắng. - Nhiệt độ nóng chảy: 169-170,5®c. - Độ tan: ít tan trong nước lạnh (1/70), tan nhiều hơn trong nước nóng. Tan trong methanol, ethanol. Rất ít tan trong cloroíonn, ít tan trong ether. Tan trong dung dịch hydroxyd kim loại kiềm do tạo muối phenolat. - Có khả năng hấp thụ quang phổ vùng tử ngoại, cực đại hấp thụ trong môi trường acid là 245 nm, trong môi trường kiềm là 257 nm. 1.1.3. Tác dụng dược lý [4, 6 - Paracetamol thuộc nhóm thuốc NSAIDs. Có tác dụng hạ nhiệt, giảm đau. - Cơ chế: Paracetamol ức chế enzym c o x là một enzym xúc tác việc tổng hợp prostaglandin, nên làm giảm tính cảm thụ của ngọn dây thần kinh cảm giác với các chất gây đau, có tác dụng giảm đau. Giảm tổng hợp prostaglandin E| và E2 do đó ức chế quá trình sinh nhiệt, tăng cường quá trình thải nhiệt và lập lại cân bằng cho trung tâm điều nhiệt, vì vậy có tác dụng hạ sốt. Paracetamol không có tác dụng chống viêm và chống ngưng kết tiểu cầu. - Chỉ định: Hạ sốt do mọi nguyên nhân gây sốt. Giảm các cofn đau ngoại vi từ đau nhẹ đến trung bình. - Thận trọng: Nói chung thuốc dung nạp tốt, ít tác dụng không mong muốn. Khi dùng liều cao (lớn hơn lOg/ngày), kéo dài có thể gây tổn thương gan. 1.1.4. Liều dùng: Người lớn: 500 mg/lần X 2-4 lần/ngày Trẻ em: 80-325 mg/lần X 3-4 lần/ngày. 1.1.5. Các dạng bào chế: Viên nén, viên bao phim, hỗn dịch uống, dung dịch uống, viên nén sủi bọt, viên đạn, các dạng bào chế phối hợp 1.1.6. Các phương pháp đã được áp dụng để định lượng paracetamol - Phương pháp chuẩn độ nitrit [1] Nguyên tắc: Thuỷ phân paracetamol trong môi trường acid HCl 10% và nhiệt độ tạo thành amin thơm bậc một. Chuẩn độ bằng dung dịch natrinitrit (NaNƠ2) trong môi trường acid tạo ra hợp chất diazoni (phản ứng diazo hoá), chỉ thị là tropeolin-00 hoặc dùng điện thế kế. - PhưoTig pháp Kieldahỉ [1] Nguyên tắc: Dựa trên sự vô cơ hoá các hợp chất có chứa nitơ khi đun với acid H2SO4 đặc với sự có mặt của kali hay natri sulphat. Khi đó nitơ chuyển thành NH3 kết hợp với H2SO4 tạo thành (NH4)2S04 Thêm NaOH vào hỗn hợp phản ứng rồi cất kéo NH3 giải phóng ra bằng hơi nước vào dung dịch chuẩn H2SO4 0,1N dư. Chuẩn độ acid H2SO4 dư bằng dung dịch NaOH 0,1N. - Phương pháp đo quang [1, 3, 15,19, 21] Nguyên tắc: Dựa vào khả năng hấp thụ tử ngoại của phân tử paracetamol, cực đại hấp thụ của paracetamol trong dung môi methanol là 245 nm, trong môi trường kiềm là 257 nm. Tính kết quả dựa vào giá trị độ hấp thụ quang đo được và độ hấp thụ riêng hoặc so sánh với chuẩn. - Phương pháp đo ceri [1, 3, 15] Nguyên tắc: Trong dung dịch acid, paracetamol sau khi thuỷ phân là một chất khử, ceri IV là một chất oxy hoá sẽ nhận thêm 1 electron để chuyển thành ceri III, phát hiện điểm kết thúc bằng íeưoin (phức chất sắt của 0- phenatrolin). sắt ở trong phức này có thể là sắt II hoặc sắt III, phức chất sắt II có màu đỏ, phức chất sắt III có màu xanh. Tại điểm tương đương, khi bắt đầu thừa ceri IV, phức sắt II chuyển thành sắt III, làm dung dịch đổi màu từ đỏ sang xanh. [(C,2H8N2)jFe]^" - e ^ [(C,2HsN2)3Fe]=" - Phương pháp HPLC [12,22] Theo USP 27 [22], định lượng paracetamol sử dụng cột L7, 150mm X 4.6 mm, pha động: nước- methanol- acid acetic băng (79:20:1), tốc độ dòng 1 ml/phút, detector u v 280 nm, thể tích tiêm 5 |_il. 1.2. PHENYLPROPANOLAMIN HYDROCLORID [15, 16, 17, 18, 20, 22] 1.2.1. Công thức cấu tạo: OH NH, .HCl CgHigNO.HCL (M= 187,6) Tên khoa học: (lRS,2SR)-2-amino-l-phenyl-1-propanol hydroclorid Tên khác: (±)-Norephedrin hydroclorid 1.2.2. Tính chất: - Bột kết tinh trắng. - Nhiệt độ nóng chảy: 190-194°c. - pKa = 9,44±0,04 - Độ tan: Dễ tan trong nước và ethanol, thực tế không tan trong ether và cloroform. - Có khả năng hấp thụ quang phổ vùng tử ngoại, cực đại hấp thụ trong môi [...]... bào chế: Viên nén, viên ngậm, dung dịch uống, siro phương pháp đã được áp dụng để định lượng phenylpropanolamin hydroclorid - Phưong pháp định lượng trong môi trưòỉng khan [22] Phenylpropanolamin hydroclorid được hoà tan trong acid acetic, thêm vào đó một lượng dư thuỷ ngân (II) acetat, chuẩn độ bằng acid perchloric 0,1N với chỉ thị tím tinh thể - Phưoiig pháp định lượng acid-base [15] Hoà tan phenylpropanolamin. .. dạng bào chế: Viên nén, viên nhộng chậm, viên bọc chậm, thuốc tiêm, thuốc nước, siro 1.3.6 Các phương pháp đã được áp dụng để định lượng clorpheniramin maleat - Phương pháp định lưọTig trong môi trưòỉng khan [1, 3, 15,19, 21, 22] Nguyên tắc: Clorpheniramin maleat hoà tan trong acid acetic, định lượng bằng dung dịch acid percloric 0,1N với chỉ thị tím tinh thể hoặc dùng điện thế kế - Phưoiig pháp đo quang... giữa nồng độ và diện tích pic của các chất Khảo sát độ chính xác của phương pháp Khảo sát độ đúng bằng phương pháp thêm chuẩn Thông qua việc xử lý thống kê các kết quả thực nghiệm để đánh giá chương trình sắc ký đã xây dựng ứng dụng chương trình sắc ký đã xây dựng, định tính và định lượng đồng thời PA, PH và CM trong viên nén Decolgen bằng phương pháp ngoại chuẩn c Một sô công thức tính toán trong xử... Để định tính và định lượng riêng lẻ từng từng hoạt chất nêu trên có thể sử dụng nhiều phương pháp Tuy nhiên ở dạng công thức phối hợp, việc định lượng các thành phần bằng các phương pháp cổ điển sẽ gặp nhiều khó khăn do phải chiết tách phức tạp Chính vì vậy phương pháp HPLC được lựa chọn là giải pháp tốt trong việc phân tích thuốc hỗn hợp nhiều thành phần bởi nhũng ưu điểm như có thể phân tích đồng thời, ... điển USP 27 và tiêu chuẩn cơ sở viên nén Decolgen đều sử dụng hai chương trình sắc ký để định lượng nên tốn kém hoá chất, thời gian Vì vậy, chúng tôi nghiên cứu để đưa ra được một chương trình sắc ký có thể định lượng đồng thời 3 thành phần trong viên nén Decolgen 2.2.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký • Qua tham khảo tài liệu và nghiên cứu tính chất hoá lý của các chất phân tích PH và CM là các... -'- X Trong đó: X là kết quả của lần xác định thứ i j n là số lần xác định ta là biến ngẫu nhiên tuân theo phân bố student ứng với giả thiết số bậc tự do f (f=n-l) và mức ý nghĩa a 2.2 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ NHẬN XÉT Trong viên nén Decolgen, hàm lượng của PA lớn hơn hàm lượng của hai thành phần còn lại PH và CM rất nhiều Trong phân tích định lượng PA gây trở ngại rất lớn đến việc phân tích PH và CM... Phưoiig pháp định lượng acid-base [15] Hoà tan phenylpropanolamin hydroclorid trong hỗn hợp dung môi acid HCl và alcohol, sau đó chuẩn độ bằng dung dịch NaOH 0,1M, xác định điểm tương đương bằng phương pháp đo điện thế và đọc thể tích thêm vào giữa hai điểm uốn - Phưoìig pháp HPLC [12, 22] Theo USP 27 [22], định lượng phenylpropanolamin hydroclorid sử dụng cột Ll l , 150mm X 4.6 mm, pha động; methanol... trong cùng điều kiện Kết quả mẫu thử được tính toán so với mẫu chuẩn đã biết trước nồng độ hoặc suy ra từ đường chuẩn • Phưcỉng pháp nội chuẩn: Là phương pháp cho thêm vào mẫu chuẩn và mẫu thử một lượng chất không đổi mà trong cùng điều kiện sắc ký, chất chuẩn nội phải được tách hoàn toàn và có thời gian lưu gần với thời gian lưu của chất cần phân tích trong mẫu thử • Phương pháp thêm chuẩn: Thêm vào... thế kế - Phưoiig pháp đo quang [3, 15, 19, 21, 22] Nguyên tắc: Dựa vào khả năng hấp thụ tử ngoại của clorpheniramin maleat, cực đại hấp thụ của clorpheniramin maleat trong môi trường acid là 265 nm Tính kết quả dựa vào giá trị độ hấp thụ đo được và độ hấp thụ riêng - PhưoTig pháp HPLC [12, 22] Theo USP 27 [22], định lượng clorpheniramin maleat, sử dụng cột L l l , 150mm X 4.6 mm, pha động: methanol -... thử và dung dịch chuẩn trong cùng điều kiện Hàm lượng có trong mẫu thử của PA được tính toán theo công thức: _ , X(mg /viên) = ¿’tx C^.x IOOx SOx M - - (1) của PH và CM theo công thức: (2) Trong đó: X: Là lượng hoạt chất (mg) có trong một viên Sq Là diện tích pic của dung dịch mẫu thử và mẫu chuẩn Q : Là nồng độ của dung dịch mẫu chuẩn (mg/ml) M ; Là khối lượng trung bình viên (g) m: Là khối lượng