Xây dựng quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat trong viên sủi bọt bằng phương pháp HPLC với đầu dò PDA

Đề tài được thực hiện nhằm tìm ra một quy trình nhanh chóng, đơn giản, chính xác để định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat trong viên sủi bọt bằng phương pháp hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC - High performance liquid chromatography) với đầu dò PDA.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL, DEXTROMETHORPHAN HYDROBROMID, LORATADIN, PHENYLEPHRIN BITARTRAT TRONG VIÊN SỦI BỌT BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC VỚI ĐẦU DÒ PDA Nguyễn Thị Như Ngọc*, Phan Thanh Dũng* TÓM TẮT Mở đầu: Viên sủi bọt Parahasan Multi Symptoms chứa đồng thời bốn hoạt chất với h|m lượng thành phần đơn vị phân liều khác nhau: paracetamol có h|m lượng cao (500 mg); dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat có h|m lượng thấp (5-15 mg) nên việc định lượng đồng thời hoạt chất gặp nhiều khó khăn việc chuẩn bị mẫu, lựa chọn bước sóng phát hiện, < Trong dược điển USP 38, BP 2016, dược điển Việt Nam IV tài liệu khác đưa quy trình định lượng riêng lẽ định lượng đồng thời hai ba số hoạt chất Vì vậy, đề t|i n|y thực nhằm tìm qui trình nhanh chóng, đơn giản, x{c để định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat viên sủi bọt phương ph{p HPLC với đầu dò PDA Mục tiêu: Xây dựng quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat phương ph{p sắc ký lỏng hiệu cao Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu: Viên sủi bọt Parahasan Multi Symptoms công ty TNHH Hasan – Dermapharm, viên chứa phenylephrin bitartrat 11,7 mg, paracetamol 500 mg, dextromethorphan hydrobromid 15 mg v| loratadin mg Phương ph{p nghiên cứu: Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA Trong trình thực nghiệm, tiến hành khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hiệu t{ch v| độ chọn lọc phương ph{p bước sóng phát hiện, pha động, chương trình gradient, pH pha động, cột sắc ký Kết bàn luận: Điều kiện sắc ký để định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat là: Cột InertSustain C8 (150 4,6 mm; µm); pha động gồm acetonitril v| dung dịch TEA 0,01% điều chỉnh pH 2,1 TFA theo chương trình rửa giải gradient; tốc độ dòng 1,0 ml/phút; thể tích tiêm mẫu 20 l; nhiệt độ cột 25 oC; bước sóng ph{t 273 nm Kết cho thấy ph}n t{ch tốt c{c pic: phenylephrin bitartrat (tR= 4,7 phút), paracetamol (tR= 6,4 phút), dextromethorphan hydrobromid (tR= 11,9 phút), loratadin (tR= 13,6 phút) Quy trình thẩm định theo hướng dẫn ASEAN đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ xác, độ đúng, khoảng x{c định, độ thô Kết luận: Đã x}y dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat viên sủi bọt bằng phương ph{p sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA góp phần xây dựng tiêu chuẩn sở cho thành phẩm Từ khóa: Paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat, HPLC *Khoa Dƣợc, Đại học Y Dƣợc Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: TS Phan Thanh Dũng ĐT: 0943957158 Chuyên Đề Dƣợc Email: dungphan@ump.edu.vn 189 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 ABSTRACT SIMULTANEOUS DETERMINATION OF PARACETAMOL, DEXTROMETHORPHAN theo quy trình phân tích x}y dựng Tính đặc hiệu (a) (b) (c) (d) Hình 1: Sắc ký đồ mẫu chuẩn hỗn hợp (a), mẫu thử (b), mẫu placebo (c), dung môi pha mẫu (d) Điều kiện sắc ký: Cột: InertSustain C8 Pha động: Acetonitril – Dung dịch TEA 0,01% (150 x 4,6 mm; µm) Tốc độ dòng: chỉnh pH 2,1 TFA theo chế độ rửa giải 1,0 ml/phút Bƣớc sóng phát hiện: 273 nm Thể gradient tích tiêm: 20 µl Nhiệt độ cột: 25 Chun Đề Dƣợc o C 193 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Phenylephrin bitartrat Paracetamol Dextromethorphan HBr Loratadin Thử Chuẩn Hình 2: Phổ UV-Vis pic thời gian lưu mẫu chuẩn mẫu thử Nhận xét: Sắc ký đồ mẫu trắng, mẫu placebo không xuất pic khoảng thời gian lƣu tƣơng ứng với thời gian lƣu pic dung dịch chuẩn Sắc ký đồ mẫu thử có pic có thời gian lƣu tƣơng tự với pic chất chuẩn sắc ký đồ mẫu chuẩn Khi thêm lƣợng chất chuẩn vào mẫu thử, diện tích pic tăng lên so với trƣớc thêm chuẩn Phổ UV-Vis thời gian lƣu pic mẫu thử tƣơng tự phổ UV-Vis thời gian lƣu pic mẫu chuẩn Sử dụng chức kiểm tra độ tinh khiết pic đầu dò PDA cho thấy c{c pic tinh khiết Nhƣ vậy, qui trình có tính đặc hiệu Độ xác Bảng 4: Kết khảo s{t độ xác Hoạt chất Độ lặp lại Độ xác trung gian - Kiểm nghiệm viên - Máy HPLC: Hitachi Chromaster PAD-5430 - Ngày: 08/06/2016 - Kiểm nghiệm viên - Máy HPLC: Hitachi Chromaster PAD-5430 - Ngày: 09/06/2016 TB (%) (n=6) RSD (%) (n=6) TB (%) (n=6) RSD (%) (n=6) TB (%) (n=12) RSD (%) (n=12) Ftn < F0,05=5,05 PHE 105,32 1,27 105,11 0,16 105,21 1,00 2,83 PAR 104,70 1,06 104,59 0,82 104,64 0,90 1,68 DEX 108,51 1,38 108,30 0,94 108,41 1,13 2,16 LOR 107,75 0,75 107,18 0,52 107,47 0,68 2,08 Nhận xét: %RSD h|m lƣợng so với nhãn hoạt chất 2% v| độ sai khác kết định lƣợng hai kiểm 194 nghiệm viên ≤ 2,0% Kiểm tra F-test cho thấy Ftn < F0,05 = 5,05 nên kết hai kiểm Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 nghiệm viên đồng thống kê Quy trình đạt độ lặp lại xác trung gian Tính tuyến tính Bảng 5: Kết thống kê hồi quy tuyến tính hoạt chất Hoạt chất Phương trình Hệ số tương Khoảng tuyến hồi quy quan (r) tính (μg/m ) = 25286,7x 0,9999 4,7 – 16,3 PAR = 76894,2x 0,9991 199,9 – 699,5 DEX =20133,7x 0,9992 6,0 – 21,0 LOR =120188,0x 0,9997 2,0 – 7,0 PHE Nghiên cứu Y học Độ Chuẩn bị loại mẫu tự tạo tƣơng ứng với mức nồng độ 70%, 100% 130% so với mức nồng độ định lƣợng quy trình nằm khoảng tuyến tính phƣơng ph{p Tại mức nồng độ, thực mẫu độc lập ph}n tích theo quy trình x}y dựng Bảng 6: Kết khảo s{t độ PHE Mức nồng độ PAR DEX LOR TB (%) RSD (%) TB (%) RSD (%) TB (%) RSD (%) TB (%) RSD (%) 70% 101,25 0,62 101,37 0,18 99,81 1,71 100,84 1,82 100% 101,52 0,30 101,08 0,25 99,41 0,96 98,58 0,25 130% 101,12 1,21 99,51 0,84 100,82 1,18 98,49 0,43 Nhận xét: Tỷ lệ thu hồi hoạt chất nằm khoảng cho phép 98,0102,0%; giá trị RSD mẫu nồng độ mẫu 2% Quy trình đạt u cầu độ tính phù hợp hệ thống: Tất thơng số có RSD ≤ 2,0%, hệ số bất đối 0,8 ≤ T ≤ 1,5; Rs ≥ 1,5 Quy trình đạt yêu cầu độ thô Khoảng xác định Đƣợc đ{nh gi{ dựa tƣơng quan khoảng tuyến tính, giá trị độ xác v| độ phƣơng ph{p Điều kiện sắc ký thích hợp lựa chọn pha động có chứa TEA, TFA có khả tƣơng tác với nhóm silanol tự pha tĩnh để cải thiện hệ số bất đối phân tích hợp chất có tính acid, base khơng sử dụng hệ đệm muối Cả bốn chất có nối đơi liên hợp có nhóm mang màu, sử dụng đầu dò PDA lựa chọn đƣợc bƣớc sóng 273 nm để phát đồng thời bốn chất ƣu tiên chất có hàm lƣợng thấp cơng thức Với mục tiêu nộp hồ sơ đăng ký thuốc, quy trình sau xây dựng đƣợc thẩm định theo hƣớng dẫn ASEAN đạt tiêu: tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ xác, độ đúng, khoảng xác định, độ thô Bảng 7: Khoảng x{c định hoạt chất Hoạt chất PHE PAR DEX LOR Khoảng xác định (μg/m ) 8,1-15,1 350,0-650,0 10,5-19,5 3,5-6,5 Độ thô Tiến h|nh thay đổi yếu tố so với điều kiện sắc ký x}y dựng: tốc độ dòng: 0,1 ml/phút; nhiệt độ cột: oC; pH dung dịch B: 0,1 độ pH; vị trí đặt mẫu hệ thống HPLC: vị trí khác khay chứa mẫu; cột sắc ký: Inertsil C8 (150 mm; 4,6 mm; µm) C{c kết thu đƣợc từ sắc kí đồ mẫu chuẩn đạt Chuyên Đề Dƣợc BÀNLUẬN 195 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 KẾT LUẬN Đã x}y dựng đƣợc quy trình định lƣợng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat viên sủi bọt phƣơng ph{p sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA Phƣơng ph{p đƣợc thẩm định chứng minh có tính chọn lọc, cho kết v| xác TÀI LIỆU THAM KHẢO Asean (2008), Asean guideline for validation of analytical procedures, pp 1-17 Bộ Y tế (2012), Dƣợc thƣ quốc gia Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, tr.421-422, tr.748-750, tr.904-907 Đo|n Thị Ngọc Yến, Nguyễn Đức Tuấn (2012), Xây dựng quy trình định lƣợng đồng thời paracetamol, dextromethorphan loratadin số dƣợc phẩm đa thành phần phƣơng ph{p HPLC với đầu dò dãy Diod quang, Khóa luận dƣợc sỹ đại học, Trƣờng ĐH Y Dƣợc Hồ Chí Minh, tr.37 Dubey N, Rizwana S and Dinesh KJ (2012), “Simultaneous determination of paracetamol, phenylephrine hydrochloride 196 and loratadine”, Asian Journal of Chemistry; 24 (11), pp 54095410 Palabıyık M, Onur F (2007), “The simultaneous determination of phenylephrine hydrochloride, paracetamol, chlorpheniramine maleate and dextromethorphan hydrobromide in pharmaceutical preparations”, Chromatographia Supplement, Vol 66, pp 93- 96 Palled M, Karagane S, Mane A, Bhat A, Shinde P (2013), “Analytical method development and validation of acetaminophen, caffeine, phenylephrine hydrochloride and dextromethorphan hydrobromide in tablet dosage form by RP-HPLC”, International Journal of Pharmaceutical Science Invention, pp 9-15 Rouhollah H (2008), “New HPLC method for the simultaneous determination of acetaminophen, phenylephrine, dextromethorphan and chlorpheniramine in pharmaceutical formulations”, Analytical Letters, pp.965976 Ngày nhận báo: 18/10/2017 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2017 Ng|y b|i b{o đăng: 15/03/2018 Chuyên Đề Dƣợc ... LUẬN Đã x}y dựng đƣợc quy trình định lƣợng đồng thời paracetamol, dextromethorphan hydrobromid, loratadin, phenylephrin bitartrat viên sủi bọt phƣơng ph{p sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA Phƣơng... Yến, Nguyễn Đức Tuấn (2012), Xây dựng quy trình định lƣợng đồng thời paracetamol, dextromethorphan loratadin số dƣợc phẩm đa thành phần phƣơng ph{p HPLC với đầu dò dãy Diod quang, Khóa luận dƣợc... đƣợc bƣớc sóng 273 nm để phát đồng thời bốn chất ƣu tiên chất có hàm lƣợng thấp công thức Với mục tiêu nộp hồ sơ đăng ký thuốc, quy trình sau xây dựng đƣợc thẩm định theo hƣớng dẫn ASEAN đạt