Mục tiêu: Nghiên cứu phương pháp định lượng chế phẩm DIOSFLON có chứa diosmin 450 mg và hesperidin 50 mg. Nghiên cứu tiến hành dùng dimethyl sulfosid (DMSO) chiết diosmin và hesperidin ra khỏi chế phẩm và dùng phương pháp HPLC để định lượng hai hoạt chất này.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI HESPERIDIN VÀ DIOSMIN TRONG VIÊN NÉN BAO PHIM DIOSFLON Nguyễn Hà Mỹ Thùy*, Nguyễn Minh Đức* TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu phương pháp định lượng chế phẩm DIOSFLON có chứa diosmin 450 mg hesperidin 50 mg Phương pháp: Dùng dimethyl sulfosid (DMSO) chiết diosmin hesperidin khỏi chế phẩm dùng phương pháp HPLC để định lượng hai họat chất Kết quả: Quy trình định lượng HPLC xây dựng thẩm định cho phép định lượng đồng thời hesperidin diosmin với hệ số R2hesperidin= 0,9998, R2diosmin =0,9999, độ xác với RSD hesperidin=0,54%; RSD diosmin=0,08%; độ với tỷ lệ phục hồi 99,02 % với diosmin 102,21 % với hesperidin Kết luận: Quy trình định lượng đồng thời diosmin hesperidin phương pháp HPLC đáng tin cậy khả thi, ứng dụng vào kiểm nghiệm Từ khóa: diosmin, hesperidin, HPLC, DIOSFLON ABSTRACT SIMULTANEOUS QUANTITATIVE DETERMINATION OF DISOMINE AND HESPERIDINE IN DIOSFLON FILM-COATED TABLETS Nguyen Ha My Thuy, Nguyen Minh Duc * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 570 - 573 Objectives: Study of a simultaneous quantititative method for DIOSFLON film-coated tablets containing diosmine 450 mg and hesperidine 50 mg Method: Extraction of disomine and hesperidine by using dimethyl sulfoxyd (DMSO) prior to application to HPLC Results: The validated HPLC procedure allowed to analyze quantitatively hesperidine diosmine in the product Conclusions: The established HPLC method is reliable and applicable for simultaneous quantitative determination of disomine and hesperidine in ratio 9:1 Key words: Diosmine, hesperidine, HPLC, DIOSFLON mạch mạn tính Hiện nhu cầu việc điều trị ĐẶT VẤN ĐỀ bệnh ngày tăng, thuốc Bệnh suy tĩnh mạch bệnh phổ ngọai nhập giá đắt Vì việc nghiên cứu biến nay, thể qua chứng vỡ mao chế phẩm có chứa hai họat chất mạch, trĩ số triệu chứng tim mạch khác(3) nhiều công ty dược Việt Nam quan tâm DAFLON® sản phẩm phổ biếncủa Tuy nhiên, việc kiểm nghiệm đồng thời hai họat hãng dược phẩm Servier chứa hai họat chất chất gặp nhiều khó khăn diosmin 450 mg hesperidin 50 mg với tỷ lệ Đề tài nhằm mục đích xây dựng quy 9: có tác dụng diều trị suy tĩnh * Khoa Dược – Đại Học Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: GS TS Nguyễn Minh Đức 570 ĐT: 0908989865 Email: ducng@hcm.vnn.vn Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 trình kiểm nghiệm đồng thời diosmin hesperidin viên DIOSFLON chứa flanonoid nói với tỷ lệ 9:1 ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Viên nén bao phim DIOSFLON 500, sản phẩm nghiên cứu Ban NCKH-TV, sản xuất Cty dược Roussel Việt Nam Chất đối chiếu, hóa chất, dung mơi Chất đối chiếu: diosmin hàm lượng tính theo khan 95%, độ ẩm 6,41 % (Mekophar), hesperidin hàm lượng ngun trạng 80% (Merck) Dung mơi, hóa chất: methanol HPLC (Merck), acid acetic, DMSO PA, nước cất Thiết bị Máy HPLC Shimadzu 20-AD, Eurosphere LC 18 (150 x 4,6 mm, 5μm) cột Nghiên cứu Y học Phương pháp nghiên cứu Qua nhiều khảo sát tỷ lệ dung môi khác chọn pha động với tỷ lệ sau acicid acetic: methanol:nước (30:32:65), Detector-UV 275 nm, thể tích bơm 20 μl, nhiệt độ cột 25 0C, tốc độ dòng 1,2 ml Với điều kiện trên, píc hesperidin diosmin tách rõ đẹp sắc đồ HPLC Chiết hai họat chất khỏi chế phẩm DMSO, tiến hành pha loãng cho hàm lượng mẫu chế phẩm mẫu đối chiếu có hàm lượng diosmin chuẩn 450 μg/ml, hesperidin chuẩn 50 μg/ml Tiến hành xác định đường hồi quy tuyến tính, độ độ xác(1) KẾT QUẢ Sắc ký đồ HPLC thể phân lập đồng thời hesperidin diosmin Hình Sắc ký đồ HPLC mẫu chế phẩm(trên) mẫu đối chiếu (dưới) Chuyên Đề Dược Khoa 571 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Tính tương thích hệ thống 3000000 Tiến hành tiêm mẫu dung dịch thử lần, thu kết tính sau 2500000 Bảng Kết khảo sát tính tương thích hệ thống hỗn hợp diosmin-hesperidin 9:1 Tên tR Nồng độ / l y = 19396x - 26707 R2 = 0.9998 2000000 1500000 1000000 S N AF hesperidin 7,940 883605 8944 0,802 500000 hesperidin 7,891 888244 9052 0,799 hesperidin 7,862 883745 9090 0,790 hesperidin 7,839 885908 9134 0,812 hesperidin 7,845 880872 9128 0,821 hesperidin 7,822 884077 9075 0,806 Trung bình 7,866 884408 9070 0,812 50 100 150 Diện tích đỉnh Hình Sự tương quan tuyến tính nồng độ diện tích đỉnh hesperidin diosmin 17,379 7165011 11039 0,791 1,189 7,331 Nhận xét: có tương quan tuyến tính nồng độ diện tích đỉnh phương trính hồi quy có dạng y=19396x-26707, với R2 = 0,9998, P=0,07>α=0,05 diosmin 17,211 7172023 11051 0,792 1,181 7,317 Bảng Kết khảo sát tính tuyến tính diosmin diosmin 17,141 7145204 10992 0,800 1,180 7,306 diosmin 17,064 7168565 11012 0,805 1,177 7,302 diosmin 17,077 7158432 11039 0,809 1,177 7,308 diosmin 17,018 7148269 11091 0,810 1,176 7,308 Trung bình 17,148 7159584 11037 0,801 1,180 7,312 RSD % 0,54 0,28 0,77 1,390 Tên tR S N AF RSD % 0,77 0,15 0,31 K’ Rs 1,038 0,416 0,143 Nhật xét: RSD lần tiêm lập lại < 2% nên quy trình định lương hesperidin diosmin đạt tốt tính tương thích hệ thống Khảo sát tính tuyến tính Khảo sát dung dịch chuẩn với tương ứng nồng độ hesperdin khác ta thu kết Diện tích đỉnh 1483571 3482268 6979013 8919336 17943958 20000000 y = 16196x - 255365 18000000 R2 = 0.9999 16000000 14000000 Nồng oä 12000000 độ µg/ml l) 10000000 8000000 6000000 4000000 2000000 0 500 1000 1500 Diện tích đỉnh sau Bảng Kết khảo sát tính tuyến tính hesperidin 572 Nồng độ (µg/ml) 112.5 225 450 562.5 1125 Nồng độ (µg/ml) Diện tích đỉnh 12,5 200738 25 465534 50 944875 62,5 1198620 125 2390525 Hình Sự tương quan tuyến tính nồng độ diện tích đỉnh diosmin Nhận xét: có tương quan tuyến tính nồng độ diện tích đỉnh phương trính hồi quy có dạng y=16196x-255365, với R2 = 0,9999, P=0,03