Bài viết này trình bày kết quả xây dựng quy trình phân tích đồng thời aceclofenac và diclofenac bằng phương pháp hấp thụ tử ngoại (UV). Dựa trên kết quả phân tích đó đã tìm hiểu các quy luật động học của quá trình chuyển hóa aceclofenac, từ đó xác định được tuổi thọ của thuốc viên nén chứa aceclofenac trong các điều kiện bảo quản thông thường.
9 TẠP CHÍ KHOA HỌC SỐ 16 * 2017 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI ACECLOFENAC VÀ DICLOFENAC TRONG THUỐC VIÊN NÉN BẰNG PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ TỬ NGOẠI (UV) VÀ ỨNG DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TUỔI THỌ CỦA THUỐC VIÊN CHỨA ACECLOFENAC Trần Vĩnh Thiện* Nguyễn Huỳnh Định, Đặng Thị Phúc** Nguyễn Huy Hồi*** TĨM TẮT Aceclofenac hoạt chất sử dụng rộng rãi làm thuốc kháng viêm giảm đau Tuy nhiên thời gian lưu hành phần aceclofenac bị chuyển hóa thành diclofenac Điều đặt u cầu cần có quy trình phân tích xác đơn giản xác định hai hoạt chất Bài báo trình bày kết xây dựng quy trình phân tích đồng thời aceclofenac diclofenac phương pháp hấp thụ tử ngoại (UV) Dựa kết phân tích tìm hiểu quy luật động học q trình chuyển hóa aceclofenac, từ xác định tuổi thọ thuốc viên nén chứa aceclofenac điều kiện bảo quản thơng thường Từ khóa: Aceclofenac, Diclofenac, UV, Chuyển hóa ABSTRACT Development of a process for the simultaneous analysis of aceclofenac and diclofenac in tablet drug by uv spectrophotometric and its application in the estimation of the useful life of aceclofenac tablets Aceclofenac is an active ingredient widely used as anti-inflammatory and analgesic However, during storage, a portion of aceclofenac is degraded and converted into diclofenac This requires the needs for an accurate and simple analytical procedure to identify the two active substances This paper presents the findings of a process development for the simultaneous analysis of aceclofenac and diclofenac by UV spectrophotometric Based on such results, we investigated the kinetics of the degradation of aceclofenac and from that, estimated the useful life of aceclofenac tablets under certain storage conditions Keywords: Aceclofenac, Diclofenac, UV, Degradaion Giới thiệu Trên thị trường xuất số chế phẩm có chứa aceclofenac dùng với mục đích kháng viêm giảm đau [1] *TS, Trường Đại học Phú Yên **CN ***ThS, Công ty CP PYMEPHARCO TRƯỜNG ĐẠI HỌC PHÚ YÊN 10 Tuy nhiên trình sử dụng, tác dụng yếu tố môi trường phần aceclofenac bị chuyển hóa thành diclofenac làm giảm hiệu điều trị an tồn thuốc [2] Cơng thức cấu tạo aceclofenac diclofenac đươc trình bày hình (a) (b) Hình Cơng thức cấu tạo aceclofenac (a), diclofenac (b) Ở Việt Nam không thấy tài liệu nước Dược điển Việt Nam đề cập đến phương pháp định lượng chất Một số báo quốc tế công bố phương pháp định lượng đồng thời hai hoạt chất phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), sắc ký lỏng siêu hiệu (UPLC, MS), điện di mao quản [2] Mục đích nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng đồng thời aceclofenac diclofenac phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại (UV) xen phủ, ứng dụng quy trình để phân tích đồng thời aceclofenac diclofenac loại thuốc viên nén chứa aceclofenac, tìm hiểu quy luật động học chuyển hóa aceclofenac làm giảm chất lượng thuốc điều kiện bảo quản thông thường để sở đề xuất điều kiện bảo quản cần thiết làm chậm q trình chuyển hóa dược chất, kéo dài tuổi thọ thuốc Thực nghiệm 2.1 Hóa chất, dụng cụ Mẫu thuốc viên nén có chứa aceclofenac 100 mg sản xuất quy mô pilot – Lab R&D cung cấp Các hóa chất sử dụng bao gồm: Ethanol tinh khiết phân tích (PA), methanol PA, nước cất hai lần cất máy Hamilton WSC hãng Hamilton–Anh Chất chuẩn aceclofenac diclofenac có thơng tin bảng Bảng Thơng tin chất chuẩn Chất chuẩn Nguồn gốc Số lô Phƣơng pháp đánh giá Hàm lƣợng (%) Aceclofenac Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương 110317 Chuẩn độ điện theo EP 10 100,5 Diclofenac Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương 110516 Chuẩn độ điện theo EP10 99,7 Các trang thiết bị sử dung gồm: Máy đo quang phổ UV-VIS Jasco, máy sấy Memmert, máy siêu âm 2.2 Phƣơng pháp 2.2.1 Chuẩn bị mẫu cho phân tích 11 TẠP CHÍ KHOA HỌC SỐ 16 * 2017 - Dung dịch chuẩn gốc aceclofenac: Cân xác 100 mg aceclofenac chuẩn, cho vào bình định mức 100 mL, thêm 50 mL ethanol, lắc định mức ethanol đến vạch - Dung dịch chuẩn gốc diclofenac: Cân xác 100 mg diclofenac chuẩn, cho vào b ình định mức 100 mL, thêm 50 mL ethanol, lắc định mức ethanol đến vạch - Dung dịch chuẩn aceclofenac: Dùng pipet hút mL dung dịch chuẩn aceclofenac gốc cho vào bình định mức 50 mL, định mức ethanol vừa đủ đến vạch, thu dung dịch chuẩn aceclofenac 40 µg/mL - Dung dịch chuẩn diclofenac: Dùng pipet hút mL dung dịch chuẩn diclofenac gốc cho vào bình định mức 50 mL, định mức ethanol vừa đủ đến vạch, thu dung dịch chuẩn diclofenac 40 µg/mL - Dung dich chuẩn hỗn hợp: Dùng pipet hút 10 mL dung dịch chuẩn aceclofenac gốc mL dung dịch chuẩn diclofenac gốc cho vào bình định mức 250 mL, định mức etanol vừa đủ đến vạch, thu dung dịch chuẩn hỗn hợp - Dãy dung dịch aceclofenac chuẩn: Pha dãy chuẩn nồng độ khác từ 15-60 µg/mL từ dung dịch chuẩn aceclofenac gốc - Dãy dung dịch diclofenac chuẩn: Pha dãy chuẩn nồng độ khác từ 1,5-6 µg/mL từ dung dịch chuẩn diclofenac gốc - Dung dịch thử: Cân xác 20 viên thuốc, nghiền mịn, cân xác lượng bột viên tương ứng khoảng 100 mg aceclofenac cho vào bình định mức 100 mL, thêm khảng 50 mL ethanol, siêu âm 15 phút, thêm ethanol đến vạch, Lọc dung dịch qua giấy lọc thu dịch lọc, pha loãng dịch lọc ethanol để dung dịch nồng độ aceclofenac khoảng 40 µg/mL 2.2.2 Phương pháp phân tích Phân tích đồng thời aceclofenac diclofenac mẫu theo phương pháp quang phổ tử ngoại xen phủ - phương pháp Vierordt (áp dụng cho chất) với điều kiện dung mơi bước sóng đo thích hợp [3] Xác định nồng độ aceclofenac diclofenac mẫu cách: Đo độ hấp thụ quang dung dịch chuẩn dung dịch thử 02 bước sóng phù hợp, sau vào phương trình (1), (2) giải hệ phương trình với ẩn số C1 C2 A(λ1) = ε11.b.C1 + ε12.b.C2 (1) A(λ2) = ε21.b.C1 + ε22.b.C2 (2) Trong đó: A(λ1), A(λ2) độ hấp thụ hệ bước sóng chọn λ1= 252 nm, λ2= 283 nm; ε11, ε12: hệ số hấp thụ phân tử aceclofenac diclofenac bước sóng λ1; ε21, ε22: hệ số hấp thụ phân tử aceclofenac diclofenac bước sóng λ2; C1, C2 nồng độ aceclofenac diclofenac mẫu cần định lượng Hàm lượng chất cần phân tích viên tính theo cơng thức (3): a C X tb D m (3) Trong đó: a lượng chất cần phân tích (g); C: nồng độ chất xác định dung dịch mẫu (µg/mL); D: độ pha lỗng; Xtb: khối lượng trung bình viên (g); m: khối lượng bột viên cân để định lượng (g) TRƯỜNG ĐẠI HỌC PHÚ YÊN 12 Các số liệu thí nghiệm xử lý phương pháp thống kê, sử dụng MS Excel 2010 xác định giá trị trung bình, độ lệch chuẩn, phương trình hồi quy tuyến tính 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu độ ổn định Tiến hành nghiên cứu độ ổn định mẫu thuốc viên nén điều kiện lão hoá cấp tốc (accelerated) dùng phương pháp Arrhenius (tăng nhiệt độ để tăng tốc độ phản ứng) nhiệt độ 300C; 400C, 500C, 600C tháng (180 ngày) nhiệt độ 400C tháng (30 ngày) theo hướng dẫn kỹ thuật chung ASEAN [4] để xác định thông số động học bao gồm: Bậc phản ứng n Tiến hành theo dõi độ ổn định mẫu thuốc viên nén chứa aceclofenac tủ sấy phương pháp đẳng nhiệt điều kiện lão hóa cấp tốc (400C, độ ẩm 75%) thời gian 30 ngày, 60 ngày 180 ngày Năng lượng hoạt hóa EA Từ hệ thức Arrhenius ta có phương trình (4) ln k EA ln k R T (4) Trong đó: k: số tốc độ phản ứng EA: lượng hoạt hóa T: Nhiệt độ (0K) Từ kết kết phân tích được, xây dựng đồ thị biến đổi lnk theo T Năng lượng hoạt hóa EA xác định từ hệ số góc đường thẳng nhận Xác định thời gian hàm lượng thuốc lại 90% ( t90) Từ phương trình động học phản ứng, thiết lập cơng thức tính t90 tương ứng với bậc phản ứng sau: 0,105 k Phản ứng bậc 2: t 90 ka Phản ứng bậc 1: t90 = Phản ứng bậc 3: t 90 19 162a k (5) (6) (7) 2.3 Kiểm soát chất lƣợng phƣơng pháp Chất lượng phương pháp phân tích đánh giá tính đặc hiệu, độ lặp lại, độ (bằng cách phân tích mẫu thêm chuẩn – spiked sample), tính tuyến tính, giới hạn phát giới hạn định lượng Các số liệu thí nghiệm xử lý MS Excel 2010 để xác định giá trị trung bình, độ lệch, phương trình hồi quy tuyến tính, hệ số tương quan [5], [6] Kết thảo luận 3.1 Kiểm soát chất lƣợng phƣơng pháp phân tích 3.1.1 Tính đặc hiệu 13 TẠP CHÍ KHOA HỌC SỐ 16 * 2017 Tính đặc hiệu phương pháp phân tích thực quét phổ hấp thụ dung dịch chuẩn aceclofenac, chuẩn diclofenac, mẫu trắng (dung mơi hịa tan mẫu) mẫu thử, bước sóng từ 200- 600 nm để đánh giá ảnh hưởng dung mơi lên chất cần phân tích – aceclofenac, diclofenac (a) (b) (c) (d) Hình Phổ hấp thụ dung dịch chuẩn acelofenac (a), diclofenac (b), mẫu trắng (c), mẫu thử (d) Trên phổ đồ mẫu trắng, mẫu thử, chuẩn aceclofenac chuẩn diclofenac hình 2, nhận thấy: phổ UV mẫu trắng khơng có đỉnh hấp thụ trùng với cực đại hấp thụ mẫu thử cực đại hấp thụ mẫu thử phù hợp với cực đại hấp thụ chuẩn Như vậy, phương pháp phân tích đạt yêu cầu tính đặc hiệu 3.1.2 Độ độ lặp lại Độ phương pháp phân tích đánh giá qua độ thu hồi (Recovery/Rev), cách phân tích mẫu thêm chuẩn: C x100 Re v(%) (8) C1 Trong đó, C0 lượng (mg) chất chuẩn thêm vào mẫu; C1 lượng (mg) xác định mẫu thêm chuẩn Lượng hoạt chất thêm vào tương ứng với 80%, 100%, 120%, 140% lượng hoạt chất viên Để xác định độ lặp lại phương pháp phân tích, tiến hành phân tích lặp lại lần mẫu thử độ tính độ lệch chuẩn tương đối (RSD) : TRƯỜNG ĐẠI HỌC PHÚ YÊN 14 RSD(%) SDx100 Xtb (9) Trong đó, SD độ lệch chuẩn kết phân tích x1, x2, x9 (n = 9); Xtb trung bình số học kết phân tích (n = 9) Kết bảng cho thấy phương pháp định lượng đồng thời aceclofenac diclofenac đạt độ lặp lại tốt ( 0,99) đạt yêu cầu theo hướng dẫn Hiệp hội nhà khoa học phân tích Mỹ (AOAC) [7] Bảng Kết phân tích aceclofenac diclofenac thuốc viên nén (lô NC050110) sau thời gian 30 ngày - phương pháp bất đẳng nhiệt Hàm Lượng a T T aceclofenac Hàm Lượng k ln 1/T ln k 0 a x ( C) ( K) % diclofenac (ngày-1) (a-x) 30 303 0,0033 99,7 0,5 0,0030 0,00010 -9,21 40 313 0,0032 98,9 1,1 0,0111 0,00037 -7,91 50 323 0,0031 96,9 3,5 0,0315 0,00105 -6,86 60 333 0,0030 92,9 7,3 0,0736 0,00245 -6,01 Điều kiện thí nghiệm hình 5; a nồng độ (%) aceclofenac ban đầu; x nồng độ (%) aceclofenac phản ứng (*) Hình Đồ thị biểu diễn mối tương quan lnk 1/T Từ hệ số góc đường thẳng nhận được, tính giá trị lượng hoạt hóa chuyển hóa aceclofenac, EA theo phương trình Arrhenius: EA = -Rtgα = 89475,1 (J/mol) = 89.475 (kJ/mol) Việc tính tốn hệ số tương quan r (sử dụng công cụ Correlation MS Excel) hàm lượng aceclofenac diclofenac (bảng 5) cho kết r = - 0,999 cho thấy có mối tương 19 TẠP CHÍ KHOA HỌC SỐ 16 * 2017 quan tốt (׀r> ׀0,9) theo hướng đối nghịch (r