Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời paracetamol và cefein trong viên nén bằng điện di mao quản

BỘ Y TẾ TRƯ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC C HÀ N NỘI -  NGUYỄN CẢNH NH QUANG MÃ SINH VIÊN: 1201480 XÂY DỰNG D NG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH NH LƯỢNG LƯ ĐỒNG NG TH THỜI PARACETAMOL VÀ CAFEIN TRONG VIÊN NÉN BẰNG NG ĐIỆN ĐI DI MAO QU QUẢN KHÓA LUẬN LU TỐT NGHIỆP DƯỢ ỢC SĨ HÀ NỘI - 2017 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI -  NGUYỄN CẢNH QUANG MÃ SINH VIÊN: 1201480 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ CAFEIN TRONG VIÊN NÉN BẰNG ĐIỆN DI MAO QUẢN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Lê Đình Chi Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa phân tích độc chất HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Tác giả khóa luận muốn dành lời đầu tiênđể bày tỏ lòng cảm ơn chân thành đếnTS.Lê Đình Chi - Bộ môn Hóa phân tích Độc chất - Trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy tận tình bảo, đưa hướng dẫn xác kịp thời gặp khó khăn, mà ân cần động viên, chia sẻ với vấn đề sống Xin trân trọng gửi lời tri ân đến thầy cô giáo anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Hóa phân tích độc chất - Trường Đại học Dược Hà Nội, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho thực khóa luận tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến bố mẹ, người thân bạn bè quan tâm, động viên khích lệ suốt trình học tập nghiên cứu Tình cảm người đem lại cho niềm an ủi lớn lao động lực tinh thần to lớn giúp hoàn thành khóa luận Tác giả khóa luận xin bày tỏ lời cảm ơn tới thành viên Hội đồng đánh giá khóa luận ý kiến đóng góp Hội đồng giúp thấy hạn chế để tiến nhanh đường học tập nghiên cứu Dù người viết cố gắng hoàn thành khóa luận với khả có thể, hẳn tránh khỏi thiếu sót bất cập, mong thầy cô giáo Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Sinh viên Nguyễn Cảnh Quang MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Paracetamol 1.1.1 Công thức cấu tạo, số tính chất tác dụng dược lý 1.1.2 Dược động học 1.2 Cafein 1.2.1 Công thức cấu tạo, số tính chất tác dụng dược lý 1.2.2 Dược động học 1.3 Một số phương pháp phân tích đồng thời paracetamol cafein 1.4 Điện di mao quản (CE: Capillary Electrophoresis) 1.4.1 Nguyên tắc 1.4.2 Phân loại 14 1.4.3 Ưu nhược điểm 16 Chương 2: NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 18 18 2.1.1 Hóa chất 18 2.1.2.Thiết bị, dụng cụ 18 2.2.Nội dung nghiên cứu 18 2.3.Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1.Chuẩn bị dung dịch chuẩn, dung dịch chế phẩm dung dịch làm việc khác 19 2.3.2 Điều kiện điện di 19 2.3.3 Phương pháp xử lý số liệu: Chương 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1.Khảo sát lựa chọn điều kiện điện di 19 20 20 3.1.1 Khảo sát dung dịch điện ly 22 3.1.2 Khảo sát lựa chọn nồng độ đệm phosphat 24 3.1.3 Khảo sát lựa chọn pH đệm 25 3.1.4 Khảo sát lựa chọn bước sóng phát 26 3.1.4 Tổng kết điều kiện tối ưu 28 3.1.5 Vị trí chất điện di đồ 29 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 29 3.2.1 Độ đặc hiệu 29 3.2.2 Độ phù hợp hệ thống 31 3.2.3 Khoảng nồng độ tuyến tính 32 3.2.4 Độ lặp lại 34 3.2.5.Độ xác trung gian 35 3.2.6 Độ 36 3.3 Ứng dụng Chương 4:KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 41 46 4.1 Kết luận 46 4.2 Kiến nghị 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt HPLC MEEKC MEKC Viết đầy đủ Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) Sắc ký điện động vi nhũ tương (Microemulsion electrokinetic chromatography) Sắc ký điện động micell (Micellar electrokinetic chromatography) CEC Sắc ký điện di mao quản (Capillary electrochromatography) CSE Điện di rây mao quản (Capillary sieving electrophoresis) CGE Điện di gel mao quản (Capillary gel electrophoresis) IEF Điện di hội tụ đẳng điện (Isoelectric focusing) ITP Điện di đẳng tốc (Isotachophoresis) CE Điện di mao quản (Capillary electrophoresis) CZE Điện di mao quản vùng (Capillary zone electrophoresis) EOF Dòng điện thẩm (Electroosmotic flow) UV-VIS Bước sóng tử ngoại –khả kiến pK Hằng số phân ly C Nồng độ t Thời gian S Diện tích SD Độ lệch chuẩn RSD Độ lệch chuẩn tương đối DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số phương pháp phân tích đồng thời cafein paracetamol Bảng 1.2 Các chất thường dùng làm pha động CE giá trị pK chúng 11 Bảng 3.1 Độ phù hợp hệ thống paracetamol cafein 32 Bảng 3.2 Quan hệ tuyến tính nồng độ diện tích pic paracetamol 33 Bảng 3.3 Quan hệ tuyến tính nồng độ diện tích pic cafein 33 Bảng 3.4 Kết đánh giá độ lặp lại mẫu paracetamol 34 Bảng 3.5 Kết đánh giá độ lặp lại mẫu cafein 35 Bảng 3.6 Kết đánh giá độ lặp lại khác ngày mẫu paracetamol 35 Bảng 3.7 Kết đánh giá độ lặp lại khác ngày mẫu cafein 36 Bảng 3.8 Kết đánh giá độ thu hồi 80% cafein 38 Bảng 3.9 Kết đánh giá độ thu hồi 80% paracetamol 38 Bảng 3.10 Kết đánh giá độ thu hồi 100% cafein 39 Bảng 3.11 Kết đánh giá độ thu hồi 100% paracetamol 39 Bảng 3.12 Kết đánh giá độ thu hồi 120% cafein 40 Bảng 3.13 Kết đánh giá độ thu hồi 120% paracetamol 40 Bảng 3.14 Kết định lượng cafein hapacol extra 41 Bảng 3.15 Kết định lượng paracetamol hapacol extra 42 Bảng 3.16 Kết định lượng cafein panadol extra 43 Bảng 3.17 Kết định lượng paracetamol panadol extra 43 Bảng 3.18 Tổng hợp hàm lượng chất chế phẩm 44 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Trang Hình 1.1 Cấu trúc phân tử paracetamol Hình 1.2 Cấu trúc phân tử cafein Hình 1.3 Sơ đồ phân tích hệ điện di mao quản Hình 1.4 Mặt cắt ngang mao quản 10 Hình 1.5 Lớp điện tích kép bề mặt mao quản 11 Hình 1.6 Ảnh hưởng dòng EOF đến tốc độ ion trình điện di 11 Hình 1.7 Các kĩ thuật bơm mẫu phương pháp điện di mao quản 14 Hình 2.1 Máy điện di mao quản P/ACE MDQ plus hãng Sciex 17 Hình 3.1 Điện di đồ sử dụng dung dịch đệm khác 23 Hình 3.2 Sắc ký điện di nồng độ đệm 25mM; 30 mM; 35mM; 40mM 25 Hình 3.3 Điện di đồ với dung dịch đệm phosphat 25mM pH khác 26 Hình 3.4 Phổ hấp phụ cafein paracetamol 27 Hình 3.5 Điện di đồ điều kiện xác định 29 Hình 3.6 Điện di đồ paracetamol chuẩn cafein chuẩn 29 Hình 3.7 Điện di đồ chất 30 Hình 3.8 Điện di đồ mẫu 31 Hình 3.9 Đường hồi quy tuyến tính paracetamol 33 Hình 3.10 Đường hồi quy tuyến tính cafein 34 Hình 3.11 Điện di đồ định lượng chế phẩm hapacol extra 43 Hình 3.12.Điện di đồ định lượng chế phẩm panadol extra 44 ĐẶT VẤN ĐỀ Paracetamol hoạt chất hạ nhiệt giảm đau sử dụng phổ biến từ lâu nhiều dạng bào chế khác nhau, đơn độc kết hợp với hoạt chất khác.Trong số có dạng bào chế sử dụng kết hợp paracetamol cafein (Panadol Extra (GSK), Hapacol Extra (DHG), Pancelxim Extra (CTCPDP Đông Nam)…) nhằm tăng cường tác dụng giảm đau Cho tới nay, sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) kỹ thuật dùng phổ biến để phân tích Paracetamol Cafein: Paracetamol Cafein định lượng đồng thời cột C18 [7] Bên cạnh HPLC, Paracetamol Cafein định lượng đồng thời kỹ thuật sắc ký mixen điện động (micellar kinetic chromatography – MEKC) [11] Trong nghiên cứu này, nhóm nghiên cứu hướng tới xây dựng phương pháp CZE đơn giản cho phép định lượng đồng thời Paracetamol, Cafein chế phẩm dạng viên nén nang cứng, cho phép thay phương pháp phân tích khác cần thiết trước phương pháp tiện lợi cho áp dụng thực tế.Vì định chọn đề tài “Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời Paracetamol Cafein viên nén điện di mao quản” với hai mục tiêu: Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời Paracetamol Cafein điện di mao quản Ứng dụng phương pháp để định lượng hai thành phần chế phẩm lưu hành thị trường Chương 1:TỔNG QUAN 1.1 Paracetamol: 1.1.1 Công thức cấu tạo, số tính chất tác dụng dược lý: 1.1.1.1 Danh pháp công thức cấu tạo: - Tên khoa học: N-(4-hydroxyphenyl) acetamid hay phydroxyacetanilid hay 4-hydroxyacetanilid - Tên khác: Acetaminophen - Biệt dược: Panadol, pradol, pandol… - Công thức phân tử: Hình 1.1 Cấu trúc phân tử paracetamol C8H9NO2 Khối lượng mol: 151,2g/mol 0,1067 0,1009 0,1031 4,857 3410571 4,846 3226773 4,822 3312561 Trung bình SD RSD(%) 517,0 517,3 519,7 103,4 103,5 103,9 103,4 0,5 0,4 Bảng 3.7 Kết đánh giá độ lặp lại khác ngàyvới cafein STT Khối lượng mẫu (g) 0,1087 0,1103 0,1076 0,1067 0,1009 0,1031 Cafein Thời gian di chuyển Diện tích (mV.s) (phút) 4,569 275891 4,571 281754 4,574 278533 4,542 276756 4,511 254057 4,504 264821 Trung bình SD RSD(%) % so với Hàm lượng hàm (mg/viên) lượng ghi nhãn 62,4 96,0 62,8 96,6 63,6 97,9 63,7 98,1 61,9 95,2 63,1 97,1 96,8 1,1 1,1 Nhận xét:Với điều kiện điện di lựa chọn, kết định lượng chất paracetamol cafein có RSD