Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời paracetamol và tramadol trong một số chế phẩ rắn bằng điện di mao quản

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHƯƠNG THANH HOA 1201213 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ TRAMADOL TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM RẮN BẰNG ĐIỆN DI MAO QUẢN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2017 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHƯƠNG THANH HOA 1201213 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ TRAMADOL TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM RẮN BẰNG ĐIỆN DI MAO QUẢN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Lê Đình Chi Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa phân tích – Độc chất HÀ NỘI - 2017 Lời cảm ơn Với kính trọng lòng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy Tiến sĩ Lê Đình Chi – người trực tiếp hướng dẫn, bảo, truyền đạt kinh nghiệm quý báu động viên, hỗ trợ mặt từ bước hoàn thiện khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn cô Nguyễn Thị Thùy Linh toàn thể thầy cô giáo anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Hóa phân tích – Độc chất, Trường Đại học Dược Hà Nội tận tình giúp đỡ hỗ trợ kịp thời, tạo điều kiện cho trình học tập, nghiên cứu môn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu toàn thể thầy cô giáo Trường Đại học Dược Hà Nội dạy dỗ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian năm năm học tập trường Cuối xin cảm ơn gia đình bạn bè thân thiết động viên, khích lệ, sát cánh bên tôi vượt qua khó khăn Do thời gian làm thực nghiệm kiến thức thân có hạn nên khóa luận có nhiều thiếu sót Tôi mong nhận góp ý thầy cô, bạn bè để khóa luận hoàn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2017 Tác giả khóa luận Phương Thanh Hoa MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung thuốc giảm đau 1.2 Thông tin chung paracetamol tramadol hydroclorid 1.2.1 Paracetamol 1.2.2 Tramadol hydroclorid 1.3 Lợi ích ứng dụng việc phối hợp paracetamol tramadol hydroclorid 1.4 Các phương pháp xác định đồng thời paracetamol tramadol hydroclorid 1.4.1 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) .5 1.4.2 Phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu cao (HPTLC) 1.4.3 Phương pháp phân tích khối phổ (MS) .6 1.4.4 Phương pháp điện di mao quản vùng (CZE) 1.5 Phương pháp điện di mao quản 1.5.1 Nguyên tắc hoạt động điện di mao quản 1.5.2 Điện di mao quản vùng (CZE) 1.5.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình tách CZE .10 1.5.4 Thiết bị điện di mao quản 11 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 14 2.1.1 Nguyên vật liệu .14 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ .14 2.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 15 2.2.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện điện di 15 2.2.2 Thẩm định phương pháp phân tích .16 2.2.3 Ứng dụng phương pháp định lượng đồng thời paracetamol tramadol HCl chế phẩm 17 2.2.4 Xử lý số liệu 17 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Chuẩn bị dung dịch 19 3.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện điện di 20 3.2.1 Lựa chọn dung dịch điện ly 20 3.2.2 Lựa chọn nồng độ, pH dung dịch điện ly 21 3.2.3 Lựa chọn điện 22 3.2.4 Khảo sát lựa chọn bước sóng phát .22 3.3 Thẩm định phương pháp 24 3.3.1 Độ đặc hiệu .24 3.3.2 Độ phù hợp hệ thống 26 3.3.3 Độ tuyến tính đường chuẩn 26 3.3.4 Độ lặp lại 28 3.3.5 Độ .31 3.4 Ứng dụng phương pháp định lượng đồng thời paracetamol tramadol HCl chế phẩm 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT BGE Background electrolyte (Điện ly nền) CE Capillary electrophoresis (Điện di mao quản) CZE Capillary zone electrophoresis (Điện di mao quản vùng) ĐDĐ Điện di đồ EF Electrophoresis flow (Dòng điện di) EOF Electroosmotic flow (Dòng diện thẩm) HLGTN Hàm lượng ghi nhãn HPLC High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) HSD Hạn sử dụng ICH International Conference on Harmonization (Hội đồng hòa hợp quốc tế) MeOH Methanol NSAID Non-steroidal anti-inflammatory drug (Thuốc chống viên không steroid) P Paracetamol PDA Photo diode array (Mảng diod) RSD Relative standard deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) STT Số thứ tự T Tramadol HCl TB Trung bình cộng USFDA United States Food and Drug Administration (Cơ quan quản lý Thực phẩm Dược phẩm Mỹ) USP United States Pharmacopoeia (Dược điển Mỹ) v/v Volume/volume (Thể tích/ thể tích) WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Các kiểu điện di chế tách 10 Bảng 2.1: Thông tin chế phẩm thuốc dùng nghiên cứu 14 Bảng 3.1: Kết độ phù hợp hệ thống 26 Bảng 3.2: Kết khảo sát độ tuyến tính tramadol HCl 27 Bảng 3.3: Kết khảo sát độ tuyến tính paracetamol .27 Bảng 3.4: Kết độ lặp lại ngày 29 Bảng 3.5: Kết đánh giá độ lặp lại khác ngày tramadol HCl 30 Bảng 3.6: Kết đánh giá độ lặp lại khác ngày paracetamol 30 Bảng 3.7: Kết xác định độ phương pháp tramadol HCl 32 Bảng 3.8: Kết xác định độ phương pháp paracetamol 33 Bảng 3.9: Kết định lượng chế phẩm Ultracet 34 Bảng 3.10: Kết định lượng chế phẩm Gramadol .35 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1: Công thức cấu tạo paracetamol Hình 1.2: Công thức cấu tạo tramadol HCl .4 Hình 1.3: Mô hình hệ thống điện di đơn giản 11 Hình 3.1: Điện di đồ sử dụng dung dịch điện ly khác 21 Hình 3.2: Điện di đồ với dung dịch điện ly dikali hydrophosphat 25 mM pH khác 22 Hình 3.3: Phổ hấp thụ tramadol HCl paracetamol .23 Hình 3.4: Kết đánh giá độ đặc hiệu 25 Hình 3.5: Đường chuẩn tramadol HCl theo diện tích pic 27 Hình 3.6: Đường chuẩn paracetamol theo diện tích pic 28 Hình 3.7: Kết định lượng mẫu chế phẩm Ultracet 34 Hình 3.8: Kết định lượng mẫu chế phẩm Gramadol 35 ĐẶT VẤN ĐỀ Paracetamol thuốc không kê đơn, dùng rộng rãi điều trị chứng đau sốt từ nhẹ đến trung bình [5], [11] Paracetamol coi thuốc giảm đau sở, sử dụng ưu tiên cho người lớn trẻ em có cân lợi ích/nguy tốt Tramadol thuốc giảm đau trung ương loại opioid dùng trường hợp đau trung bình đến nặng [5], [11] Trên thị trường có nhiều biệt dược chứa đồng thời hai chất bào chế dạng viên nang cứng viên nén, hàm lượng paracetamol tramadol hydroclorid viên 325 mg 37,5 mg Ultracet (Hàn Quốc), Gramadol (Ấn Độ), Trapadol (Việt Nam) Trong Dược điển Việt Nam IV chưa có chuyên luận riêng để định lượng đồng thời hai chất thực tế có nhiều phương pháp xây dựng sử dụng như: Sắc ký lỏng hiệu cao [13], [21], [24], [27], [28]; sắc ký lớp mỏng [21]; phân tích khối phổ [24], [25] điện di mao quản [9] Nhằm hướng đến phương pháp đơn giản mà hiệu quả, lựa chọn phương pháp điện di mao quản để thực nghiên cứu với đề tài “Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời paracetamol tramadol số chế phẩm rắn điện di mao quản” với mục tiêu: - Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời paracetamol tramadol hydroclorid chế phẩm rắn điện di mao quản - Ứng dụng phương pháp để định lượng paracetamol tramadol hydroclorid số chế phẩm rắn CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung thuốc giảm đau Theo Hiệp hội nghiên cứu đau quốc tế (International Association for the Study of Pain - IASP), đau cảm giác khó chịu, có tính chất cảm tính, kèm theo tổn thương có thật hay tiềm tàng tổ chức mô tả tổn thương tổ chức [23] Tuy nhiên, có trường hợp đau xúc cảm, tự kỷ ám thị bệnh nhân (đau tâm lý) [6] Các xung động truyền cảm giác đau theo hai loại sợi cảm giác: sợi A (truyền cảm giác đau với tốc độ nhanh), sợi C (truyền cảm giác đau với tốc độ chậm) [6] Thuốc giảm đau chia làm nhóm theo vị trí tác dụng thần kinh cảm giác: giảm đau trung ương giảm đau ngoại vi [6] Thuốc giảm đau trung ương ức chế trung tâm đau não ngăn cản đường dẫn truyền cảm giác đau từ tủy sống lên não Nhóm chia làm phân nhóm theo mức độ giảm đau: giảm đau mạnh (morphin, fentanyl…) giảm đau yếu (codein, tramadol) Thuốc giảm đau ngoại vi ức chế tạo thành PG (prostaglandin) – chất trung gian hóa học khởi phát nhiều trình sinh lý bệnh lý thể PG khơi mào cho việc tạo chất trung gian hóa học khác serotonin, histamin sợi cảm giác (ngoại vi) Một số thuốc giảm đau ngoại vi paracetamol NSAID: aspirin, ibuprofen… 1.2 Thông tin chung paracetamol tramadol hydroclorid 1.2.1 Paracetamol  Công thức cấu tạo, tính chất o Tên khác: Acetaminophen o Tên khoa học: N-(4-hydroxyphenyl)acetamid hay p-hydroxyacetanilid hay 4-hydroxyacetanilid o Công thức phân tử: C8H9NO2 HOC6H4NHCOCH3 o Công thức cấu tạo: 3.3.2 Độ phù hợp hệ thống Để đánh giá độ phù hợp hệ thống, dung dịch chuẩn hỗn hợp paracetamol tramadol HCl phân tích lặp lại lần điều kiện phân tích phương pháp xây dựng Độ phù hợp hệ thống đánh giá qua dao động thời gian di chuyển đáp ứng diện tích pic paracetamol tramadol HCl dựa RSD (%) Kết thực nghiệm tập hợp bảng 3.1 Bảng 3.1: Kết độ phù hợp hệ thống Tramadol HCl Paracetamol Thời gian Diện tích pic Thời gian Diện tích pic phút mV.s phút mV.s 3,483 176483 4,842 3124459 3,475 174140 4,825 3175416 3,546 170875 5,008 3071224 3,529 173815 4,975 3198950 3,579 177932 5,067 3095903 3,521 171551 4,963 3198121 TB 3,522 174133 4,947 3144012 RSD (%) 1,1 1,6 1,9 1,7 STT Từ kết bảng 3.1 cho thấy, giá trị RSD thời gian di chuyển diện tích pic tramadol HCl paracetamol nằm khoảng cho phép (RSD ≤ 3,0 % - theo Phụ lục 5.7 Dược điển Việt Nam IV) Như hệ thống điện di phù hợp với việc định lượng đồng thời hai chất 3.3.3 Độ tuyến tính đường chuẩn Độ tuyến tính phương pháp đánh giá khoảng nồng độ paracetamol từ 498 – 996 g/mL khoảng nồng độ tramadol HCl từ 57,2 – 114 g/mL Dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp pha từ dung dịch chuẩn gốc 26 Kết thực nghiệm (bảng 3.2, 3.3; hình 3.5, 3.6) cho thấy khoảng nồng độ kể có tương quan tuyến tính chặt chẽ nồng độ diện tích pic paracetamol tramadol HCl với đường chuẩn có R2 > 0,99 Bảng 3.2: Kết khảo sát độ tuyến tính tramadol HCl Nồng độ 57,2 68,6 80,1 91,5 103 114 (µg/mL) Diện tích 178506 198453 215486 245187 260776 288585 (mV.s) 310000 y = 1923,7x + 66238 R² = 0,9930 Diện tích (mV.s) 290000 270000 250000 230000 210000 190000 170000 150000 40 60 80 Nồng độ (µg/mL) 100 120 Hình 3.5: Đường chuẩn tramadol HCl theo diện tích pic Bảng 3.3: Kết khảo sát độ tuyến tính paracetamol Nồng độ (µg/mL) Diện tích (mV.s) 498 598 697 797 897 996 2256248 2696763 2937473 3325201 3646458 4169163 27 4500000 y = 3671,1x + 428957 R² = 0,9910 Diện tích (mV.s) 4000000 3500000 3000000 2500000 2000000 1500000 400 500 600 700 800 900 Nồng độ (µg/mL) 1000 1100 Hình 3.6: Đường chuẩn paracetamol theo diện tích pic 3.3.4 Độ lặp lại Để đánh giá độ lặp lại ngày, tiến hành phân tích độc lập lần hàm lượng paracetamol tramadol HCl chế phẩm Ultracet ngày Để đánh giá độ lặp lại khác ngày, tiến hành phân tích độc lập lần hàm lượng paracetamol tramadol HCl chế phẩm Ultracet ngày khác Độ lặp lại ngày khác ngày phương pháp đánh giá qua độ phân tán kết định lượng paracetamol tramadol HCl lần phân tích độc lập thể giá trị RSD Chuẩn bị mẫu thử: Cân xác lượng bột viên tương ứng khoảng 75 mg paracetamol vào bình định mức 10,0 mL, thêm khoảng mL MeOH, lắc nhẹ phút thêm mL nước siêu lọc, lắc siêu âm phút, thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc Lọc bỏ mL dịch lọc đầu Dịch lọc thu đem lọc qua màng 0,2 µm tiếp tục pha loãng 10 lần nước siêu lọc dung dịch có nồng độ paracetamol xấp xỉ 750 µg/mL nồng độ tramadol HCl xấp xỉ 87 µg/mL 28 Kết đánh giá độ lặp lại ngày (bảng 3.4) khác ngày (bảng 3.5 bảng 3.6) cho thấy với paracetamol tramadol HCl, phương pháp cho độ lặp lại tốt với RSD % Bảng 3.4: Kết độ lặp lại ngày Lượng Tramadol HCl Paracetamol cân Diện tích Hàm lượng Diện tích Hàm lượng g mV.s mg/viên mV.s g/viên 0,0990 150715 36,88 2872681 345,10 0,0990 157220 38,47 2755094 330,98 0,1010 161030 38,62 2836644 334,02 0,1011 160998 38,57 2839466 334,02 0,1001 158925 38,46 2818435 334,86 0,1000 158024 38,28 2911722 345,29 STT TB RSD (%) Nồng độ chất chuẩn (µg/mL) Diện tích chất chuẩn (mV.s) 38,21 337,55 1,7 1,9 87,56 747,30 158112 2748397 29 Bảng 3.5: Kết đánh giá độ lặp lại khác ngày tramadol HCl Ngày Lượng Diện tích Nồng độ chất Diện tích chất Hàm cân chất thử chuẩn chuẩn lượng g mV.s µg/mL mV.s mg/viên 0,0983 164625 87,56 162813 38,30 0,0984 160526 87,56 162813 37,31 0,0994 168815 87,56 162813 38,84 0,0956 188056 87,56 189098 39,47 0,0956 179145 87,56 189098 38,48 0,0983 198516 87,56 194487 38,67 TB 38,51 RSD 1,8 (%) Bảng 3.6: Kết đánh giá độ lặp lại khác ngày paracetamol Ngày Lượng Diện tích Nồng độ chất Diện tích chất Hàm cân chất thử chuẩn chuẩn lượng g mV.s µg/mL mV.s mg/viên 0,0983 2906875 747,30 2914050 322,53 0,0984 2916083 747,30 2914050 323,22 0,0994 3016508 747,30 2914050 330,99 0,0956 3214970 747,30 3316110 328,38 0,0956 3119252 747,30 3316110 326,10 0,0983 3022948 747,30 3067198 318,66 TB 324,98 RSD 1,4 (%) 30 3.3.5 Độ Để đánh giá độ phương pháp, chuẩn paracetamol tramadol HCl thêm vào chế phẩm Ultracet để có dung dịch chứa nồng độ tổng cộng paracetamol tramadol HCl tương ứng 80%, 100% 120% nồng độ thường quy định lượng (750 g/mL với paracetamol 87 g/mL với tramadol HCl) sau : o Mức 80% : Cân lượng bột viên tương ứng khoảng 15 mg paracetamol vào bình định mức 10,0 ml, thêm 0,6 ml dung dịch A1, 0,6 ml dung dịch B1 tiến hành tiếp với Dung dịch chế phẩm để định lượng Nồng độ chuẩn thêm vào mức khoảng 450 g/ml với paracetamol 52 g/ml với tramadol HCl o Mức 100% : Cân lượng bột viên tương ứng 15 mg paracetamol vào bình định mức 10,0 ml, thêm 0,8 ml dung dịch A1, 0,8 ml dung dịch B1 tiến hành tiếp với Dung dịch chế phẩm để định lượng Nồng độ chuẩn thêm vào mức khoảng 600 g/ml với paracetamol 70 g/ml với tramadol HCl o Mức 120% : Cân lượng bột viên tương ứng 15 mg paracetamol vào bình định mức 10,0 ml, thêm 1,0 ml dung dịch A1, 1,0 ml dung dịch B1 tiến hành tiếp với Dung dịch chế phẩm để định lượng Nồng độ chuẩn thêm vào mức khoảng 750 g/ml với paracetamol 87 g/ml với tramadol HCl Ở mức thêm chuẩn, mẫu khác chuẩn bị độc lập để tiến hành phân tích Do chênh lệch nồng độ thực dung dịch chuẩn so với lý thuyết, thực tế, nồng độ chuẩn thêm vào đánh giá độ mức 54,92; 73,23 91,54 g/mL với tramadol HCl 448,38; 597,84 747,30 g/mL với paracetamol Kết thực nghiệm với tramadol HCl paracetamol tổng hợp bảng 3.7 bảng 3.8 31 Bảng 3.7: Kết xác định độ phương pháp tramadol HCl STT Nồng Lượng Diện Lượng Độ độ mẫu chuẩn tích chuẩn thu thử thêm chuẩn thu hồi hồi µg/mL µg/mL mV.s mV.s µg/mL % 218415 168788 55,01 100,2 218415 167937 54,66 99,5 Diện tích pic 15,73 15,73 15,73 218415 166607 54,10 98,5 15,73 218415 213239 73,64 100,6 15,73 218415 214267 74,07 101,2 15,73 218415 213810 73,88 100,9 16,15 206628 243044 91,52 100,0 16,15 206628 243712 91,81 100,3 16,15 206628 240907 90,57 98,9 54,92 73,23 91,54 TB 100,1 Nồng độ chuẩn tramadol HCl: 91,54 µg/mL 32 R TB S D % % 99,4 0,8 100,9 0,3 99,7 0,7 Bảng 3.8: Kết xác định độ phương pháp paracetamol Nồng độ STT mẫu thử µg/mL Lượng Diện Lượng Tỉ lệ chuẩn tích chuẩn thu thêm chuẩn thu hồi hồi µg/mL mV.s µg/mL % 3661688 2723513 447,10 99,7 3661688 2766205 455,81 101,6 Diện tích pic mV.s 108,73 108,73 108,73 3661688 2759098 454,36 101,3 154,01 3599378 3667421 607,42 101,5 154,01 3599378 3585904 590,49 98,7 154,01 3599378 3667139 607,36 101,5 154,01 3810864 4643529 744,49 99,6 154,01 3810864 4629566 741,75 99,3 154,01 3810864 4648590 745,48 99,8 448,38 597,84 747,30 TB R TB S D % % 100,9 1,0 100,6 1,6 99,5 0,3 100,4 Nồng độ chuẩn paracetamol: 747,30 µg/mL Từ số liệu thu cho thấy, ba mức thêm chuẩn, độ thu hồi với paracetamol tramadol HCl nằm khoảng 98 – 102%, với hoạt chất, mức thêm chuẩn, tỷ lệ thu hồi ổn định với RSD < 2% Như vậy, phương pháp xây đựng đáp ứng yêu cầu độ để định lượng đồng thời paracetamol tramadol HCl chế phẩm dạng viên 3.4 Ứng dụng phương pháp định lượng đồng thời paracetamol tramadol HCl chế phẩm Sử dụng phương pháp xây dựng, định lượng paracetamol tramadol HCl mẫu chế phẩm Ultracet Gramadol Kết thực nghiệm tập hợp bảng 3.9 3.10, hình 3.7 3.8 33 Bảng 3.9: Kết định lượng chế phẩm Ultracet Tramadol HCl Khối lượng trung bình Paracetamol Hàm Lượng cân Diện Hàm tích lượng viên lượng so với HL Hàm Diện Hàm tích lượng GTN lượng so với HL GTN g mV.s mg/viên % mV.s mg/viên % 0,0990 157220 38,47 102,6 2755094 330,98 101,8 0,1011 160998 38,57 102,9 2839466 334,02 102,8 0,1001 158925 38,46 102,6 2818435 334,86 103,0 TB 38,50 102,7 333,29 102,6 SD 0,06 0,2 2,04 0,6 g 0,4374 Nồng độ chất chuẩn (µg/mL) Diện tích chất chuẩn (mV.s) 87,56 747,30 158112 2748397 Hình 3.7: Kết định lượng mẫu chế phẩm Ultracet 34 Bảng 3.10: Kết định lượng chế phẩm Gramadol Tramadol HCl Khối lượng trung bình Paracetamol Hàm Lượng cân Diện Hàm tích lượng viên Hàm lượng so với Diện tích HL Hàm lượng GTN lượng so với HL GTN g mV.s mg/viên % mV.s mg/viên % 0,0944 237147 39,74 106,0 4145652 317,89 97,8 0,4017 0,0917 223377 38,54 102,8 4148328 327,46 100,8 0,0939 225688 38,02 101,4 4257537 328,21 101,0 TB 38,77 103,4 324,52 99,9 SD 0,88 2,4 5,75 1,8 g Nồng độ chất chuẩn (µg/mL) Diện tích chất chuẩn (mV.s) 87,56 747,30 222427 4147008 Hình 3.8: Kết định lượng mẫu chế phẩm Gramadol Nhận xét: Tất mẫu chế phẩm có hàm lượng nằm giới hạn cho phép theo tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam IV USP 35 – NF 30 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đề tài hoàn thành mục tiêu đề ra, cụ thể sau:  Xây dựng phương pháp điện di mao quản để định lượng đồng thời paracetamol tramadol HCl chế phẩm lưu hành thị trường Phương pháp tiến hành đơn giản, thời gian phân tích nhanh, tốn dung môi, hóa chất, độc hại Chuẩn bị mẫu cách hòa tan trực tiếp nên tiến hành nhanh chóng gây sai số Phương pháp CZE tiến hành điều kiện: - Mao quản: tổng chiều dài 62,5 cm; chiều dài hiệu dụng 50 cm; đường kính 75 µm - Detector PDA, phát bước sóng 210 nm - Điện đặt vào mao quản: 20 kV - Dung dịch điện ly nền: Dung dịch Dikali hydrophosphat 25 mM pH 9,2 - Nhiệt độ mao quản: 25oC - Nhiệt độ bảo quản mẫu: 25oC - Chế độ tiêm mẫu: 0,5 psi 10 giây - Trước lần phân tích, mao quản rửa theo thứ tự: Nước phút, NaOH 0,1M phút, nước phút dung dịch điện ly phút  Thẩm định phương pháp vừa xây dựng với tiêu chí: độ phù hợp hệ thống, độ đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại Các kết cho thấy hệ thống điện di phù hợp với việc định lượng đồng thời hai chất vàphương pháp có độ đặc hiệu, độ đúng, độ lặp lại tốt tuyến tính khoảng khảo sát  Đã ứng dụng phương pháp xây dựng để định lượng đồng thời paracetamol tramadol HCl chế phẩm Gramadol, Ultracet lưu hành thị trường cho kết đạt yêu cầu hàm lượng theo Dược điển Việt Nam IV 36 Kiến nghị Là phương pháp có nhiều ưu điểm độ nhạy tiến hành đơn giản, điện di mao quản nên tiếp tục đầu tư, nghiên cứu phát triển công cụ hỗ trợ cho HPLC Do phương pháp định lượng đồng thời paracetamol tramadol chưa có Dược điển Việt Nam IV nên cần tiếp tục thẩm định lại quy trình trên, so sánh với phương pháp HPLC USP, đồng thời nghiên cứu thêm phương pháp khác để tìm phương pháp phân tích hiệu mà thuận lợi 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Trần Tử An (2006), Hóa phân tích II: Phân tích dụng cụ, Nhà xuất Y học, Hà Nội tr 215-235 Bộ Y tế (2007), Dược lý học tập 1, Nhà xuất Y học, Hà Nội tr 114 Bộ Y tế (2007), Hóa dược tập 1, Nhà xuất Y học, Hà Nội tr 101-102 Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội tr 462, PL-465, PL-220 Bộ Y tế (2009), Dược thư Quốc Gia Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội tr 904-905, 1114-1115 Bộ Y tế (2011), Dược lâm sàng, Nhà xuất Y học, Hà Nội tr 220-234 Thái Nguyễn Hồng Thu , Phạm Gia Huệ (2015), Điện di mao quản, Nhà xuất Y học, Hà Nội tr 11-75 Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vinh vật, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội tr 16-57 Tiếng Anh Adriana Ciurba, Gabriel Hancu, Livia-Maria Cojocea, Emese Sipos , Nicoleta Todoran (2014), "Development of new formulation and its evaluation by capillary electrophoresis of tablets containing tramadol hydrochloride and paracetamol", Pharmaceutical Development and Technology, 19 (7), pp 833-838 10 Barbara G Wells, Joseph T DiPiro, Terry L Schwinghammer , Cecily V DiPiro (2015), Pharmacotherapy Handbook, 9th, McGraw-Hill Education, Europe pp 566 11 British National Formulary (2007), BNF 68, BMJ Group and Pharmaceutical Press, UK pp 276, 280, 290 12 British Pharmacopoeia (2013), BP 2013 Electronic version 13 Devalaraju Ravisankar, Vishnumolakala Sridevi , Putta Geetha Kumar (2015), "Development and validation of hplc method for the simultaneous quantification of acetaminophen and tramadol in combined pharmaceutical dosage forms with UV detection", International Journal of Applied Biology and Pharmaceutical Technology, (2), pp 174-181 14 European Pharmacopoeia (2008), European Pharmacopoeia, 6th, Vol 2, European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare, France pp 2611, 3104 15 H Shintani , J Polonský (1997), Handbook of Capillary Electrophoresis Applications, Blackie Academic and Professional, UK pp 1-18 16 Harry G Brittain (2013), Profiles of Drug Substances, Excipients and Related Methodology, Vol 38, Academic Press, UK pp 464-466 17 International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (2005), Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology (ICH Q2(R1) 18 Jaime N Delgado , William A Remers (1998), Wilson and Gisvold's Textbook of Organic Medicinal and Pharmaceutical Chemistry, 10th, Lippincott-Raven, US pp 704, 915 19 Kevin D Altria (1996), Capillary Electrophoresis Guidebook: Principles, Operation, and Applications, Humana Press, US pp 73 20 Kevin D Altria (1998), Analysis of Pharmaceuticals by Capillary Electrophoresis, Vieweg+Teubner Verlag pp 1-6 21 M Gandhimathi , T.K Ravi (2008), "RP-HPLC and HPTLC Estimation of Tramadol Hydrochloride and Paracetamol in Combination", Asian Journal of Chemistry, 20 (6), pp 4940-4942 22 Maha A Sultan, Hadir M Maher, Nora Z Alzoman, Mona M Alshehri, Rizk Mohamed S., Mona S Elshahed , Ileana V Olah (2013), "Capillary Electrophoretic Determination of Antimigraine Formulations Containing Caffeine, Ergotamine, Paracetamol and Domperidone or Metoclopramide", Journal of chromatographic science, 51 (6), pp 502-510 23 Roger Walker , Cate Whittlesea (2012), Clinical Pharmacy and Therapeutics, 5th, Churchill Livingstone Elsevier, Netherlands pp 519-523 24 Tarek Belal, Tamer Awad , C Randall Clark (2009), "Determination of Paracetamol and Tramadol Hydrochloride in Pharmaceutical Mixture Using HPLC and GC-MS", Journal of chromatographic science, 47, pp 849-854 25 Tian Zhu, Li Ding, Xiaofeng Guo, Lin Yang , Aidong Wen (2007), "Simultaneous Determination of Tramadol and Acetaminophen in Human Plasma by LC-ESI-MS", Chromatographia 2007, 66, pp 171-178 26 The United States - Food and Drug Administration (2015), Guidance for Industry: Analytical Procedures and Methods Validation for Drugs and Biologics 27 U.S.Pharmacopoeia National Formulary (2012), USP35-NF30 pp 2030-2034, 2060-2062, 4904-4906 28 V.V.Vaidya, K.V.Mangoakar, Shikha M.N.Roy, P.S.Barde , A.Y.Desai (2008), "Simultaneous RP-HPLC determination of aceclofenac, paracetamol and tramadol HCl in pharmaceutical preparations", Analytical CHEMISTRY An Indian Journal, (9), pp 710-713 ... phương pháp đơn giản mà hiệu quả, lựa chọn phương pháp điện di mao quản để thực nghiên cứu với đề tài Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời paracetamol tramadol số chế phẩm rắn điện di mao. .. di mao quản với mục tiêu: - Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời paracetamol tramadol hydroclorid chế phẩm rắn điện di mao quản - Ứng dụng phương pháp để định lượng paracetamol tramadol. .. TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHƯƠNG THANH HOA 1201213 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI PARACETAMOL VÀ TRAMADOL TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM RẮN BẰNG ĐIỆN DI MAO QUẢN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC