Để phân tích đồng thời paracetamol và tramadol HCl, do hàm lượng hai hoạt chất này trong chế phẩm rất chênh lệch, chúng tôi đã khảo sát phổ hấp thụ UV-Vis
23
của hai hoạt chất này (được đo trực tiếp trong dung môi là dung dịch điện ly nền đã chọn trên thiết bị điện di) để chọn được bước sóng ghi điện di đồ cho cường độ tín hiệu phù hợp. Phổ hấp thụ UV-Vis của tramadol HCl và paracetamol thu được như trên hình 3.3.
Hình 3.3: Phổ hấp thụ của tramadol HCl và paracetamol
Kết quả này cho thấy ở vùng bước sóng dài tramadol HCl có độ hấp thụ rất thấp (do nồng độ tramadol HCl trong dung dịch chuẩn rất thấp), do đó để ghi được tín hiệu pic của tramadol HCl và paracetamol đồng thời, cần sử dụng vùng UV bước sóng thấp. Kết quả xem xét sơ bộ trên điện di đồ cho thấy ở các vùng bước sóng rất thấp như 202 nm (là bước sóng cực đại của cả hai chất) xuất hiện nhiễu đường nền trong khi ở bước sóng 210 nm đường nền ổn định hơn và đáp ứng pic của tramadol HCl và paracetamol có cường độ phù hợp cho phép định lượng đồng thời cả hai hoạt chất này.
Tramadol HCl
24
Như vậy, sau khi khảo sát tối ưu hóa một số điều kiện phân tích, phương pháp định lượng đồng thời paracetamol và tramadol HCl bằng CZE bao gồm các điều kiện như sau:
Mao quản silica nung chảy dài 62,5 cm (chiều dài hiệu dụng 50 cm), đường kính trong 75 µm.
Nhiệt độ mao quản: 25oC Nhiệt độ bảo quản mẫu: 25oC
Dung dịch điện ly nền: dung dịch dikali hydrophosphat 25 mM pH = 9,2.
Detector PDA: Ghi điện di đồ tại bước sóng 210 nm. Điện thế: 20 kV.
Áp suất, thời gian tiêm mẫu: 0,5 psi x 10 giây
Hoạt hóa mao quản lần đầu: Rửa mao quản bằng nước trong 5 phút, NaOH 0,1 M trong 30 phút, nước trong 10 phút và BGE trong 30 phút.
Vào thời điểm đầu ngày rửa bằng nước trong 10 phút.
Để cân bằng mao quản, rửa theo thứ tự: Nước trong 2 phút, NaOH 0,1 M trong 10 phút, nước trong 2 phút và BGE trong 5 phút.
Trước mỗi lần phân tích, mao quản được rửa theo thứ tự: Nước siêu lọc 2 phút, NaOH 0,1 M trong 2 phút, nước trong 1 phút và BGE trong 2 phút.
Thời điểm cuối ngày, mao quản được rửa với dung dịch nước trong 5 phút, NaOH 0,1 M trong 5 phút và nước trong 10 phút.