Định lượng đồng thời lamivudin và zidovudine trong viên nén bằng quang phổ đạo hàm

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO TRUNG ĐẠT ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI LAMIVUDIN VÀ ZIDOVUDINE TRONG VIÊN NÉN BẰNG QUANG PHỔ ĐẠO HÀM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀO TRUNG ĐẠT MÃ SINH VIÊN: 1801102 ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI LAMIVUDIN VÀ ZIDOVUDINE TRONG VIÊN NÉN BẰNG QUANG PHỔ ĐẠO HÀM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Vũ Đặng Hồng ThS Phí Thị Tuyết Nhung Nơi thực hiện: Khoa Hóa phân tích Kiểm nghiệm thuốc Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2023 LỜI CẢM ƠN Khoá luận thực Khoa Hóa phân tích Kiểm nghiệm thuốc trường Đại học Dược Hà Nội Với lịng biết ơn kính trọng sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Vũ Đặng Hồng – Giảng viên Khoa Hóa phân tích Kiểm nghiệm thuốc – Trường Đại học Dược Hà Nội dành nhiều thời gian, cơng sức, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em trình nghiên cứu hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn ThS Phí Thị Tuyết Nhung – Giảng viên Kiểm Nghiệm thuốc Hóa dược – Khoa Dược Đại học Thành Đô dành nhiều thời gian hướng dẫn, tận tình giúp đỡ, động viên em trình thực khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, anh/chị kỹ thuật viên Khoa Hóa phân tích Kiểm nghiệm thuốc – Trường Đại học Dược Hà Nội tận tình bảo tạo điều kiện tốt để em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, phòng ban, thầy tồn thể cán cơng nhân viên Trường Đại học Dược Hà Nội trực tiếp giảng dạy giúp đỡ em suốt trình học tập hoạt động trường Cuối em xin gửi lời cảm ơn tới người thân, bạn bè ln động viên khuyến khích em q trình học tập thời gian em thực đề tài Hà Nội, ngày tháng 06 năm 2023 Sinh viên Đào Trung Đạt MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC CÁC HÌNH v ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương quang phổ đạo hàm 1.2 Ứng dụng quang phổ đạo hàm định lượng hỗn hợp hai thành phần 1.2.1.Phương pháp đạo hàm giao điểm không (zero-crossing derivative spectrophotometry) 1.2.2.Phương pháp đạo hàm phổ tỷ đối (Ratio spectra derivative spectrophotometry 1.3 Một số đặc điểm đối tượng nghiên cứu 1.3.1 Đặc tính lý hóa Lamivudin Zidouvudin 1.3.2 Ứng dụng lamivudin zidovudin điều trị HIV 1.3.3 Phương pháp định lượng đồng thời Lamivudin Zidovudin CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 13 2.1 Đối tượng – nguyên liệu thiết bị 13 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu: 13 2.1.2 Nguyên liệu thiết bị 13 2.2 Phương pháp nghiên cứu 14 2.2.1 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng đồng thời 3TC AZT hỗn hợp phương pháp quang phổ đạo hàm 14 2.2.2 Ứng dụng phương pháp thẩm định để định lượng đồng thời thử độ hòa tan 3TC AZT chế phẩm viên nén 14 2.2.3 Xử lý số liệu 14 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 16 3.1 Kết thực nghiệm 16 3.1.1 Định lượng chế phẩm thành phần chứa Lamivudin Zidovudin 16 3.1.2 Thử độ hòa tan 31 i 3.2 Bàn luận 33 KẾT LUẬN 35 KIẾN NGHỊ 36 ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT A Độ hấp thụ AZT Zidovudin 3TC Lamivudin ARV Thuốc kháng virus (Antiretroviral drug) C Nồng độ (Concentration) CTPT Công thức phân tử KLPT Khối lượng phân tử CTHH Cơng thức hóa học SKĐ Số đăng ký NSX Ngày sản xuất HD Hạn dùng UV Tử ngoại (Ultra Violet) UV-Vis Tử ngoại - Khả kiến (Ultra Violet - Visible) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) SD Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) TLTK Tài liệu tham khảo iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Một số đặc tính lý hóa Lamivudin Zidovudin Bảng 1.2: Một số phương pháp HPLC để định lượng đồng thời lamivudin zidovudin hỗn hợp hai thành phần Bảng 1.3: Một số phương pháp quang phổ đạo hàm để định lượng đồng thời lamivudin zidovudin hỗn hợp hai thành phần 11 Bảng Khối lượng cân nồng độ thực tế chuẩn gốc 16 Bảng 2: Khối lượng cân viên nén Lamzidivir 16 Bảng 3: Kết khảo sát khoảng tuyến tính 24 Bảng 3.4: Khối lượng cân thực tế mẫu thử định lượng 25 Bảng 3.5: Kết định lượng Lamivudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc giao điểm không 26 Bảng 3.6: Kết định lượng Zidovudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc giao điểm không 27 Bảng 3.7: Kết định lượng Lamivudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc tỷ đối 28 Bảng 3.8: Kết định lượng Zidovudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc tỷ đối 28 Bảng 3.9: Khối lượng cân mẫu thẩm định độ 29 Bảng 3.10: Độ phương pháp định lượng 30 Bảng 11: Kết thử độ hòa tan Lamivudin Zidovudin viên nén Lamzidivir phương pháp đạo hàm bậc giao điểm không sau 30 phút 32 iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Tiếp tuyến với đường cong số điểm Hình 1.2: Phổ hấp thụ đạo hàm dải phổ tuân theo định luật phân bố Gauss Hình 1.3: Ảnh hưởng tán xạ ánh sáng lên phổ hấp thụ phổ đạo hàm bậc Hình 1.5: Đạo hàm bậc lamivudin (1) 15µg/ml; (2) 20 µg/ml; (3) 30 µg/ml (đường nét liền) zidovudin (1) 30 µg/ml; (2) 50 µg/ml; (3) 75 µg/ml (đường nét đứt) methanol Mũi tên bước sóng định lượng Hình 1.6: (a) Phổ tỷ đối acetaminophen nồng độ (a) 5,0 µg/ml, (b) 17,5 µg/ml, (c) 25,0 µg/ml, (d) 37,5 µg/ml, (e) 50,0 µg/ml nồng độ số chia (mephenoxalon) 12,5 µg/ml methanol (Δλ = nm) (b) Phổ đạo hàm tỷ đối bậc acetaminophen nồng độ (a) 5,0 µg/ml, (b) 17,5 µg/ml, (c) 25,0 µg/ml, (d) 37,5µg/ml, (e) 50,0 µg/ml nồng độ số chia (mephenoxalon) 12,5 µg/ml methanol (Δλ = nm) Hình 3.1: Phổ hấp thụ dung dịch 3TC 10 mg/L, AZT 20 mg/L, hỗn hợp 3TC10 mg/L AZT 20 mg/L, chế phẩm (3TC 10 mg/L AZT 20 mg/L) phổ cộng 3TC 10 mg/L AZT 20 mg/L 17 Hình 3.2: Phổ đạo hàm bậc dãy dung dịch 3TC (4 – 14 mg/L) AZT (8– 28 mg/L) dung dịch thử 19 Hình 3.3: Phổ đạo hàm tỷ đối hỗn hợp 3TC10 mg/L + AZT 20 mg/L;3TC 10 mg/L với số chia AZT mg/L, AZT 12 mg/L, AZT 16 mg/L , AZT 20 mg/L 20 Hình 3.4: Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn gồm AZT 20 mg/L + 3TC (4 – 14 mg/L) với số chia AZT 20 mg/L chế phẩm 21 Hình 3.5: Phổ đạo hàm tỷ đối hỗn hợp 3TC 10 mg/L + AZT 20 mg/L; AZT 20 mg/L với số chia 3TC mg/L, 3TC mg/L, TC mg/L TC 10 mg/L 22 Hình 3.6: Phổ đạo hàm tỷ đối dãy dung dịch chuẩn gồm 3TC 10 mg/L + AZT (8 – 28 mg/L) với số chia 3TC 10 mg/L chế phẩm 23 v ĐẶT VẤN ĐỀ HIV/AIDS bệnh nguy hiểm có chiều hướng gia tăng nước ta Số ca nhiễm HIV/AIDS Việt Nam từ năm 2020 có xu hướng gia tăng, với 13.000 trường hợp nhiễm HIV năm, tăng 3.000 trường hợp/năm so với giai đoạn 2017-2019.Tại Việt Nam, theo Cục Phòng, chống HIV/AIDS, số người nhiễm HIV sống báo cáo đến thời điểm 30/9/2021 212.769 trường hợp [4] Hiện nay, thuốc ức chế enzyme chép ngược nucleotid (NRTIs - Nucleotide Reverse Transcriptase Inhibitors) sử dụng phổ biến để điều trị HIV, ví dụ: abacavir, didanosin, emtricitabin, lamivudin, stavudin tenofovir [18] Theo hướng dẫn điều trị HIV/AIDS ban hành năm 2002, tổ chức y tế giới (WHO) khuyến cáo sử dụng phác đồ phồi hợp sử dụng phác đồ phồi hợp có thuốc thuộc nhóm NRTIs Lamivudin (3-TC) Zidovudin (AZT) thuốc thuộc nhóm NRTIs sử dụng hàng đầu điều trị HIV/AIDS (phác đồ phác đồ thay thế) [2] Viên nén kết hợp 3TC AZT được sử dụng kể từ lần duyệt Hoa Kỳ [21] Theo quy định Dược điển Việt Nam V, định lượng thử độ hòa tan viên nén 3TC - AZT tiến hành phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) [3].Tuy nhiên, phương pháp tốn dung môi hữu thời gian số lượng mẫu phân tích nhiều (ví dụ:giám sát chất lượng sản phẩm trình sản xuất) Với mong muốn đề xuất phương pháp quang phổ tử ngoại có tính khả thi kiểm tra chất lượng viên nén 3TC - AZT, đặc biệt sở chưa có điều kiện sử dụng máy sắc ký, tiến hành đề tài: “Định lượng đồng thời lamivudin zidovudin viên nén quang phổ đạo hàm” với hai mục tiêu chính: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng đồng thời thời lamivudin zidovudin hỗn hợp quang phổ đạo hàm Áp dụng phương pháp thẩm định để định lượng thử độ hòa tan lamivudin zidovudin số chế phẩm viên nén lưu hành thị trường CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương quang phổ đạo hàm Quang phổ đạo hàm kỹ thuật phân tích Giese French giới thiệu lần vào năm 1955 [9] Kỹ thuật dựa nguyên tắc sử dụng thuật toán lấy đạo hàm phổ hấp thụ nhằm thu nhiều thông tin định tính, định lượng dải phổ khơng phân tách hoàn toàn Phép lấy đạo hàm đường cong hay hàm toán học đường cong chất ước lượng độ dốc điểm đường cong khảo sát (Hình 1.1) [8] Hình 1.1: Tiếp tuyến với đường cong số điểm Trong phương pháp quang phổ UV-Vis, mối quan hệ khả hấp thụ ánh sáng nồng độ dung dịch miêu tả qua biểu thức toán học định luật Bouguer – Lambert – Beer: 𝐼𝜆 = 𝑒 ─𝐶𝑙𝜀𝜆 = 𝑇𝜆 𝐼0,𝜆 C: nồng độ chất hấp thụ (mol/l) l : độ dài quang học (cm) 𝜀𝜆 : hệ số hấp thụ phân tử chất hấp thụ bước sóng 𝜆 Iλ : cường độ ánh sáng sau qua chất hấp thụ I0,λ : cường độ ánh sáng tới (I0,λ không đổi) (1*) dung dịch HCl 0,1M, siêu âm 15 phút, thêm dung dịch HCl 0,1M đến vạch trộn Lọc, bỏ 10mL dịch lọc đầu Lấy xác mL dịch lọc cho vào bình định mức 50mL, thêm dung dịch HCl 0,1M đến vạch lắc Khối lượng cân mẫu thử mẫu chuẩn trình bày bảng 3.4 Bảng 3.4: Khối lượng cân thực tế mẫu thử định lượng Khối lượng cân thực tế Khối lượng trung bình viên 0,6779 g Khối lượng cân lý thuyết 0.2260 g Khối lượng bột (Thử 1) 0.2250 g Khối lượng bột (Thử 2) 0.2251 g Khối lượng bột (Thử 3) 0.2277 g Khối lượng bột (Thử 4) 0.2253 g Khối lượng bột (Thử 5) 0.2256 g Khối lượng bột (Thử 6) 0.2269 g Tiến hành đo phổ hấp thụ tử ngoại vùng bước sóng khảo sát 200 – 300 nm dãy dung dịch thử (1 – 6) Làm trơn phổ hấp thụ dung dịch khảo sát chức transformation (Order: Smoothing; Delta lamda: nm) Xử lý phổ hấp thụ với điều kiện tương tự phần lựa chọn bước sóng định lượng để lấy phổ đạo bậc giao điểm không phổ đạo hàm bậc tỷ đối dãy dung thử (1 – 6)  Kết Tại bước sóng 266,6 224,5 nm để định lượng Lamivudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc giao điểm không, kết định lượng trình bày bảng 3.5 25 Bảng 3.5: Kết định lượng Lamivudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc giao điểm khơng Bước sóng STT Khối lượng cân (nm) Tín hiệu phổ đạo hàm Hàm Lượng Hàm Lượng Trung Bình (%) (%) Thử 0,2250 0.062 90,2 Thử 0,2251 0.061 89,5 Thử 0,2277 0.061 89,0 234,5 Thử 0,2253 0.059 88,2 Thử 0,2256 0.058 88,8 Thử 0,2269 0,057 82,3 Thử 0,2250 0,160 95,6 Thử 0,2251 0.160 95,5 Thử 0,2277 0,160 94,4 266,6 Thử 0,2253 0,157 93,6 Thử 0,2256 0,158 94,1 Thử 0,2269 0,155 91,8 SD (%) RSD (%) 88,00 3,63 3,81 94,17 1,39 1,48 Tại bước sóng 240,4 279,3 nm để định lượng Zidovudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc giao điểm không, kết định lượng trình bày bảng 3.6 26 Bảng 3.6: Kết định lượng Zidovudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc giao điểm khơng Bước STT sóng Khối lượng Tín hiệu Hàm Hàm Lượng SD RSD cân phổ đạo hàm Lượng Trung Bình (%) (%) (%) (%) 93,88 1,46 1,55 95,45 1,68 1,76 (nm) Thử 0,2250 0,112 93,3 Thử 0,2251 0,115 95,8 Thử 0,2277 0,116 95,5 240,4 Thử 0,2253 0,111 92,3 Thử 0,2256 0,113 93,9 Thử 0,2269 0,112 92,5 Thử 0,2250 -0,280 97,5 Thử 0,2251 -0,277 96,4 Thử 0,2277 -0,268 96,0 279,3 Thử 0,2253 -0,276 93,2 Thử 0,2256 -0,271 93,6 Thử 0,2269 0,155 91,8 Tại bước sóng 279 nm để định lượng Lamivudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc tỷ đối, kết định lượng trình bày bảng 27 Bảng 3.7: Kết định lượng Lamivudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc tỷ đối Bước STT sóng Khối lượng Tín hiệu Hàm Hàm Lượng SD RSD cân phổ đạo hàm Lượng Trung Bình (%) (%) (%) (%) 2,49 2,63 (nm) Thử 0,2250 0,610 96,0 Thử 0,2251 0,576 90,5 Thử 0,2277 0,611 94,9 272 94,49 Thử 0,2253 0,623 97,8 Thử 0,2256 0,603 94,6 Thử 0,2269 0,597 93,0 Tại bước sóng 272 nm để định lượng Zidovudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc tỷ đối, kết định lượng trình bày bảng 3.8 Bảng 3.8: Kết định lượng Zidovudin viên nén Lamzidivir quang phổ đạo hàm bậc tỷ đối Bước sóng STT Khối lượng cân (nm) Tín hiệu phổ đạo hàm Hàm Lượng Hàm Lượng Trung Bình (%) (%) Thử 0,2250 -0,691 96,2 Thử 0,2251 -0,682 95,3 Thử 0,2277 -0,688 95,0 272 94,56 Thử 0,2253 -0,666 93,0 Thử 0,2256 -0,679 94,7 Thử 0,2269 -0,669 92,8 28 SD (%) RSD (%) 1,47 1,56 Tại bước sóng 234,5 có RSD = 3, 81 > 2,8 % nên phép thử không đạt yêu cầu độ lặp, bước sóng định lượng lựa chọn lại cho độ lặp đạt yêu cầu (RSD < 2,8 %) [6] 3.1.1.4 Kết độ phương pháp  Cách tiến hành: Chuẩn bị dung dịch  Dung dịch thử không thêm chuẩn tương tự chuẩn bị dung dịch thử phép thử định lượng  Dung dịch thử thêm chuẩn 20% o Pha loãng chuẩn gốc Lamivudin Zidovudin 10 lần ( ml chuẩn gốc vào bình định mức 50 ml, định mức HCl 0.1M) dung dịch A (Lamivudin 100 mg/L) dung dịch B ( Zidovudin 200 mg/L) o Cân xác khoảng lượng bột viên tương ứng với lượng bột phép thử định lượng Thêm 80mL dung dịch HCl 0,1M, siêu âm 15 phút, thêm dung dịch HCl 0,1M đến vạch trộn Lọc, bỏ 10mL dịch lọc đầu o Lấy xác mL dịch lọc cho vào bình định mức 50mL, thêm 1ml B ml A định mức vừa đủ 50 ml HCl 0,1 M Khối lượng cân mẫu thẩm định độ trình bày bảng 3.9 Bảng 3.9: Khối lượng cân mẫu thẩm định độ Khối lượng cân thực tế Khối lượng bột không thêm chuẩn 0.2259 Khối lượng bột thêm chuẩn 0.2255 g Khối lượng bột thêm chuẩn 0.2264 g Khối lượng bột thêm chuẩn 0.2255 g Khối lượng bột thêm chuẩn 0.2264 g Khối lượng bột thêm chuẩn 0.2262 g Khối lượng bột thêm chuẩn 0.2264 g 29 Tiến hành đo phổ hấp thụ tử ngoại vùng bước sóng khảo sát 200 – 300 nm dãy dung dịch thử thêm chuẩn 20 % (1 – 6) dung dịch thử không thêm chuẩn Làm trơn phổ hấp thụ dung dịch khảo sát chức transformation (Order: Smoothing; Delta lamda: nm) Xử lý phổ hấp thụ với điều kiện tương tự phần lựa chọn bước sóng định lượng để lấy phổ đạo bậc giao điểm không phổ đạo hàm bậc tỷ đối dãy dung thử thêm chuẩn 20 % (1 – 6) dung dịch thử không thêm chuẩn  Kết Độ phương pháp xác định thơng qua % tìm lại lượng chất chuẩn 3TC AZT (20% so với hàm lượng 3TC, AZT ghi nhãn) đồng thời thêm xác vào khối lượng bột viên Lamzidivir (Stada để định lượng 3TC AZT theo qui trình) Kết độ trình bày bảng 3.10 Bảng 3.10: Độ phương pháp định lượng % tìm lại Phổ đạo hàm bậc Phổ đạo hàm tỷ đối STT 3TC AZT 3TC AZT 266,6 nm 240,4 nm 279,3 nm 279 nm 272 nm 100,5 100,4 98,7 104,1 106,1 99,2 97,1 109,8 101,7 97,2 99,5 98,2 105,6 99,2 93,5 99,2 101,4 97,4 99,9 98,3 99,0 98,8 99,3 99,0 104,2 102,7 96,2 100,9 108,9 116,8 TB 100,0 98,7 102,8 102,1 102,7 SD 1,4 1,9 4,5 2,8 8,3 RSD 1,4 1,9 4,5 2,7 8,1 30 Tại bước sóng 266,6 240,4 phương pháp đạo hàm bậc cho cao (100 ± 1,4% với lamivudin; 98,7 ± 1,9% với zidovudin) so với phương pháp phổ đạo hàm tỷ đối phương pháp đạo hàm bậc bước sóng 279,3 nm 3.1.2 Thử độ hòa tan 3.1.2.1 Phương pháp thử  Thiết bị kiểu cánh khuấy  Mơi trường hịa tan: 900 ml HCl 0,1M  Tốc độ quay: 75 vòng/ phút  Nhiệt độ: 37 ± 0,5oC  Thời gian: 60 phút Tại thời điểm: 5, 10, 15, 20, 30 60 phút, lấy xác mL mơi trường hịa tan vùng bề mặt mơi trường hịa tan cánh khuấy, cách thành bình 10 mm cho vào bình định mức 50 mL, thêm HCl 0,1M đến vạch, trộn đều, lọc thu lấy dịch lọc đem đo phổ khoảng bước sóng 200 - 300nm Làm trơn phổ hấp thụ dung dịch khảo sát chức transformation (Order: Smoothing; Delta lamda: nm) Xử lý phổ hấp thụ bước sóng định lượng lựa chọn với điều kiện xây dựng để lấy phổ đạo bậc giao điểm không 3.1.2.2 Kết Ứng dụng phương pháp đạo hàm bậc giao điểm không cho phép thử độ hòa tan chế phẩm Lamzidivir (Stada) theo phương pháp phổ đạo hàm bậc trình bày bảng 3.11 31 Bảng 3.11: Kết thử độ hòa tan Lamivudin Zidovudin viên nén Lamzidivir phương pháp đạo hàm bậc giao điểm không sau 30 phút STT 3TC (% so với hàm lượng nhãn) AZT (% so với hàm lượng nhãn) 95,5 95,2 92,5 93,5 96,1 95,2 97,3 96,9 96,7 97,8 96,1 97,8 TB 95,7 96,1 SD 1,7 1,7 RSD 1,8 1,8 Sau 30 phút thử theo quy định DĐVN V, viên có hàm lượng hoạt chất hịa tan so với hàm lượng ghi nhãn đạt 90 % Do vậy, chế phẩm đạt yêu cầu độ hịa tan (khơng 70% lượng 3TC AZT so với hàm lượng ghi nhãn ) 32 3.2 Bàn luận Lamivudin Zidovudin có khả hấp thu tốt tia tử ngoại phân tử chất có nhóm mang màu như: carbonyl, vịng pyrimidin, vòng 1,3 oxathiolan (3TC), vòng oxolan (AZT), azido (AZT) nhóm trợ màu như: hydroxyl, amino (3TC) Do vậy, phổ UV 3TC AZT có cực đại hấp thụ 279,5 nm 266,7 nm (hình 3.1) tương ứng với trình chuyển điện tử * n* Do đan xen dải phổ thành phần 3TC AZT, quang phổ UV truyền thống sử dụng để định lượng đồng thời 3TC AZT hỗn hợp hai thành phần Trong khóa luận này, phép biến đổi đạo hàm áp dụng để định lượng trực tiếp 3TC AZT chế phẩm mà không cần qua giai đoạn tách chiết thành phần Dung môi sử dụng để hòa tan dược chất mẫu đo HCl 0,1M (đây dung môi sử dụng cho phép thử độ hòa tan viên nén khảo sát) Dung môi thân thiện với môi trường so với công bố trước Nachname, Vorname (2004) [11] Uslu Bengi, Özkan, et al (2002) [16] có sử dụng methanol dung mơi đo quang Phương pháp tiến hành với thông số lựa chọn là: + Phép làm trơn phổ: Delta lambda: nm, Scaling factor: + Phép lấy đạo hàm: Delta lambda: nm, Scaling factor: 10 Với phương pháp đạo hàm giao điểm khơng, bước sóng lựa chọn điểm mà phổ đạo hàm dãy dung dịch chuẩn hai chất đồng giao (Hình 3.2).Qua khảo sát, bước sóng lựa chọn là: Đạo hàm bậc 1: Định lượng 3TC 266,6 nm, AZT 240,4 nm Phương pháp phổ đạo hàm bậc để định lượng 3TC 234,5 nm không khuyến cáo sử dụng độ lặp khơng đạt yêu cầu (RSD > 2,0% theo qui định AOAC [6] Tương tự vậy, phương pháp phổ đạo hàm tỉ đối không sử dụng để định lượng 3TC AZT RSD phép thử độ > 2,0% Kết ảnh hưởng tá dược thành phần viên nén khảo sát Sự khác biệt bước sóng định lượng phổ đạo hàm bậc nghiên cứu so với tài liệu tham khảo [5] (nghiên cứu sử dụng HCl 0.1M làm dung mơi) khác cách xử lý phổ lấy đạo hàm với loại máy đo quang sử dụng Với phương pháp đạo hàm bậc phổ tỷ đối, cường độ tín hiệu phổ đạo hàm thu phụ thuộc vào nồng độ số chia lựa chọn (Hình 3.3 – 3.7) Bước sóng lựa chọn điểm mà đó: (i) giá trị tín hiệu đạo hàm bậc phổ tỷ đối có trùng lặp hỗn hợp (3TC + AZT) 3TC AZT nồng độ làm việc; (ii) giá trị tín hiệu đạo 33 hàm bậc phổ tỷ đối hỗn hợp (3TC + AZT) có phụ thuộc tuyến tính với nồng độ (R2 > 0,990) Qua khảo sát, cách bước sóng số chia lựa chọn là: Định lượng 3TC tại: 279 nm, số chia AZT 20 mg/L Định lượng AZT tại: 272 nm, số chia 3TC 10 mg/L Tại bước sóng lựa chọn, tín hiệu đạo hàm bậc phổ tử ngoại phổ tử ngoại tỷ đối có mối quan hệ tuyến tính chặt chẽ (R2 > 0,990) với nồng độ 3TC AZT khoảng nồng độ: - 14 mg/L mg/L - 28 mg/L (hình 3.4 3.6, bảng 3.1) So với nghiên cứu Mohite, Pandhare, et al (2012) [5] sử dụng HCl 0,1M dung môi pha mẫu, độ nhạy phép định lượng phổ đạo hàm bậc phổ tử ngoại nghiên cứu cải thiện rõ rệt: tăng khoảng lần (định lượng 3TC) 30 lần (định lượng AZT) Kết định lượng cho thấy chế phẩm có hàm lượng 3TC AZT đạt yêu cầu khoảng 90 - 110% (so với nhãn) theo quy định DĐVN V [3] phép định lượng có độ lặp với RSD < 2% Kết thẩm định phương pháp cho thấy phương pháp phổ đạo hàm bậc có độ lặp lại (RSD = 1,5% với lamivudin; RSD = 1,6% với zidovudin) độ (100 ± 1,4% với lamivudin; 98,7 ± 1,9% với zidovudin) cao so với phương pháp phổ đạo hàm tỷ đối Kết thẩm định độ cải thiện thay đổi điều kiện lấy phổ để đạt yêu cầu độ tìm lại 98 - 102% Nhìn chung, phương pháp có ưu điểm bật tiết kiệm dung môi hữu thời gian chạy máy (nếu so với HPLC theo qui định DĐVN V) Trong phép thử độ hòa tan, sau 30 phút thử theo quy định DĐVN V, chế phẩm đạt u cầu độ hịa tan: khơng 70% lượng 3TC AZT so với hàm lượng ghi nhãn [3] 34 KẾT LUẬN Đề tài thực mục tiêu đề ra:  Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng đồng thời thời lamivudin zidovudin hỗn hợp quang phổ đạo hàm  Áp dụng phương pháp thẩm định để định lượng thử độ hòa tan lamivudin zidovudin số chế phẩm viên nén lưu hành thị trường Với kết thu sau: Đã xây dựng thẩm định phương pháp định lượng đồng thời thời lamivudin zidovudin hỗn hợp quang phổ đạo hàm Phương pháp phương pháp đạo hàm bậc tiến hành với thông số lựa chọn là:  Phép làm trơn phổ: Delta lambda: nm, Scaling factor:1  Phép lấy đạo hàm: Delta lambda: nm, Scaling factor: 10  Bước sóng lựa chọn để định lượng 3TC AZT 266,6 240,4 nm Phương pháp định lượng đồng thời 3TC AZT viên nén hỗn hợp Lamzidivir (Công ty TNHH Liên doanh Stada Việt Nam) cách trực tiếp sử dụng HCl 0,1M làm dung môi pha mẫu (không qua trình chiết tách) phương pháp đạo hàm bậc phổ hấp thụ tử ngoại có độ (% tìm lại 100 ± 1,4% với lamivudin 98,7 ± 1,9% với zidovudin) độ lặp (RSD < 2%) Nhìn chung, phương pháp quang phổ đạo hàm có u cầu kỹ thuật đơn giản, sử dụng dung mơi, hóa chất thơng thường tiết kiệm chi phí nên có khả ứng dụng vào cơng tác kiểm nghiệm viên nén Stada (đặc biệt số lượng mẫu phân tích lớn sở khơng trang bị máy HPLC) Đã áp dụng phương pháp dụng phương pháp đạo hàm bậc phổ hấp thụ tử ngoại thẩm định để định lượng thử độ hòa tan lamivudin zidovudin chế phẩm viên nén lưu hành thị trường  Kết định lượng mẫu viên nén Lamzidivir (Stada) nghiên đạt yêu cầu qui định: 90 - 110 % với hàm lượng ghi nhãn  Kết thử độ hoà tan chế phẩm đạt yêu cầu qui định: > 70% so với nhãn sau thử 30 phút 35 KIẾN NGHỊ Trên sở kết đạt được, chúng tơi có số kiến nghị sau: Ứng dụng phương pháp đạo hàm giao điểm không cho phép định lượng thử độ hòa tan chế phẩm nghiên cứu sở kiểm nghiệm có trang bị máy đo quang UV-Vis đại Tiếp tục nghiên cứu ứng dụng phương pháp quang phổ đạo hàm vào kiểm nghiệm dạng bào chế đa thành phần có chứa thuốc kháng virus khác 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt : Bùi Đức Dương, Đào Thị Vui (2016), Cẩm nang hướng dẫn sử dụng thuốc điều trị HIV/AIDS, NXB Thanh niên Hà Nội, pp 18-19,21-24 Bộ Y Tế (2021), "Hướng dẫn điều trị chăm sóc HIV/AIDS thành lập theo định số 5300/QĐ-BYT ngày 16/11/2021 Bộ Y tế", pp 20 Bộ Y Tế (2017), "Dược điển Việt Nam V", 1, pp 547-552, 983-986 Phan Thị Thu Hương, Lê Thị Hương, et al (2022), "Thực trạng trầm cảm số yếu tố liên quan người nhiễm HIV/AIDS việt nam, giai đoạn 2012 – 2022", Tạp chí y học dự phịng, Số đặc biệt, pp 12-13, Tiếng Anh: Mohite, Pandhare, et al (2012), "Derivative spectrophotometric method for estimation of antiretroviral drugs in fixed dose combinations", Advanced Pharmaceutical Bulletin, 2(1), pp 115-118 AOAC International, Appendix F: guidelines for standard method performance requirements, Analysis AOAC Official Method of, Editor 2016, AOAC International Washington, DC, USA Erk, Nevin (1999), "Application of derivative-differential UV spectrophotometry and ratio derivative spectrophotometric determination of mephenoxalone and acetaminophen in combined tablet preparation", Journal of pharmaceutical biomedical analysis, 21(2), pp 429-437 G Talsky (1994), "Derivative spectrophotometry Low and high order", VCH Verlagsgesellschaft mbH, pp 45–95, 113–129 Giese, French (1995), "The analysis of overlapping spectral absorption bands by derivative spectrophotometry", Applied Spectroscopy 9, pp 78-89 10 Grangeiro, Severino Albuquerque, et al (2011), "Simultaneous spectrophotometric determination of lamivudine and zidovudine in fixed dose combinations using multivariate calibration", Quimica Nova, 34, pp 859-863 11 Nachname, Vorname (2004), "Derivative-differential UV spectrophotometry and compensation technique for the simultaneous determination of zidovudine and lamivudine in human serum", Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 59(2), pp 106-111 12 Owen, Agilent Technologies, et al (1995), "Uses of derivative spectroscopy Application note", pp 2-7 13 Palled, Rajesh, et al (2005), "Reverse Phase High Performance Liquid Chromatographic Determination Of Zidovudine And Lamivudine In Tablet Dosage Form", Indian journal of pharmaceutical sciences, 67(1), pp 110 14 Rekha Yadavalli, Haribabu, et al (2013), "Method Development and Validation for the Simultaneous Estimation of Efavirenz, Lamivudine and Zidovudine through Stability indicating RP-HPLC Method", Research Journal of Pharmaceutical Sciences, 2319, pp 555X 15 Sahu, Gupta (2004), "Simultaneous Assay of Lamivudine and Zidovudine in Combination Tablets by Derivative Spectrophotometry", Journal of Pharmaceutical Research, 3(4), pp 64-66 16 Uslu, Bengi, et al (2002), "Determination of lamivudine and zidovudine in binary mixtures using first derivative spectrophotometric, first derivative of the ratiospectra and high-performance liquid chromatography–UV methods", Analytica Chimica Acta, 466(1), pp 175-185 17 Vaikosen, Edebi, et al (2020), "Simple thin layer chromatography–ultraviolet spectrophotometric method for quality assessment of binary fixed‐dose‐ combinations of lamivudine/tenofovir disoproxil fumarate and lamivudine/zidovudine in tablet formulations", Journal of Separation Science, 43(11), pp 2228-2239 Trang web: 18 , "Thuốc ức chế enzyme phiên mã ngược nucleoside/nucleotide (NRTI) điều trị HIV", Retrieved MAY 29, 2023, from https://suckhoe123.vn/suc-khoe/thuocuc-che-enzyme-phien-ma-nguoc-nucleoside-nucleotide-nrti-trong-dieu-tri-hiv2581.html 19 National Center for Biotechnology Information (2023), "PubChem Compound Summary for CID 35370, Zidovudine ", Retrieved May 29, 2023, from https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/35370 20 National Center for Biotechnology Information (2023), "PubChem Compound Summary for CID 73339, 2',3'-Dideoxy-3'-thiacytidine", Retrieved May 29, 2023, from https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/73339 21 National library of medicine (1997), "Lamivudine and Zidovudine Tablets USP", Retrieved MAY 29, 2023, from https://dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/fda/fdaDrugXsl.cfm?setid=77eccfa0-c03c49a3-bfa7-f31888d77161&type=display