Nguyễn thành việt xây dựng phương pháp định lượng đồng thời acid azelaic và acid benzoic bằng hplc trong gel azelaic 15% khóa luận tốt nghiệp dược sĩ hà nội – 2023

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THÀNH VIỆT XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI ACID AZELAIC VÀ ACID BENZOIC BẰNG HPLC TRONG GEL AZELAIC 15% KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2023 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THÀNH VIỆT MÃ SINH VIÊN: 1801767 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI ACID AZELAIC VÀ ACID BENZOIC BẰNG HPLC TRONG GEL AZELAIC 15% KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn 1.TS Nguyễn Lâm Hồng 2.TS Lê Quang Thảo Nơi thực 1.Khoa Hóa phân tích kiểm nghiệm thuốc 2.Viện Kiểm nghiệm thuốc TW HÀ NỘI – 2023 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo TS Nguyễn Lâm Hồng TS Lê Quang Thảo, người theo sát hướng dẫn, giúp đỡ động viên em trình học tập, nghiên cứu hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô, anh chị kỹ thuật viên Khoa Hóa phân tích & Kiểm nghiệm thuốc tạo điều kiện cho em nghiên cứu giúp đỡ em trình làm thực nghiệm môn Em xin cảm ơn thầy cô anh chị công tác khoa Nghiên cứu phát triển thuộc Viện Kiểm Nghiệm Thuốc TW tạo điều kiện cho em sử dụng thiết bị, hướng dẫn giúp đỡ em trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, thầy cô truyền đạt cho em tri thức quý báu trình học tập trường Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, anh, chị, em nhóm nghiên cứu ln bên cạnh quan tâm, động viên, giúp đỡ em vượt qua khó khăn sống học tập, động lực để em học tập, nghiên cứu rèn luyện Trường Đại học Dược Hà Nội Hà Nội, ngày 26 tháng năm 2023 Sinh viên Nguyễn Thành Việt MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHẤT NGHIÊN CỨU 1.1.1 Tổng quan acid azelaic 1.1.2 Tổng quan acid benzoic 1.1.3 Một số phương pháp định lượng acid azelaic acid benzoic 1.2 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Nguyên tắc trình sắc ký 1.2.3 Sắc ký cột pha đảo hiệu cao 1.2.4 Ứng dụng sắc ký lỏng hiệu cao 1.3 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 1.3.1 Độ thích hợp hệ thống 1.3.2 Độ đặc hiệu 1.3.3 Khoảng tuyến tính 1.3.4 Độ 1.3.5 Độ lặp lại 11 1.3.6 Độ xác trung gian 11 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU DÙNG TRONG NGHIÊN CỨU 12 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 12 2.1.2 Hóa chất thiết bị 12 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 13 2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời acid azelaic acid benzoic sắc kí lỏng hiệu cao 13 2.2.2 Thẩm định phương pháp định lượng 13 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.3.1 Xử lý chuẩn bị mẫu thử 14 2.3.2 Chuẩn bị dung dịch đối chiếu 14 2.3.3 Khảo sát xác định điều kiện sắc ký 15 2.3.4 Thẩm định phương pháp 15 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 22 3.1 KHẢO SÁT VÀ XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ 22 3.1.1 Lựa chọn cột sắc ký 22 3.1.2 Lựa chọn pha động 22 3.1.3 Lựa chọn bước sóng phát 25 3.1.4 Lựa chọn tốc độ dòng 26 3.2 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 28 3.2.1 Độ thích hợp hệ thống 28 3.2.2 Độ đặc hiệu 29 3.2.3 Khoảng tuyến tính 30 3.2.4 Độ 33 3.2.5 Độ xác 35 3.2.5.1 Độ lặp lại 35 3.2.5.2 Độ xác trung gian 35 3.3 BÀN LUẬN 39 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 40 KẾT LUẬN 41 ĐỀ XUẤT 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ CÁI VIẾT TẮT DC DĐVN V USP EP ACN CHH SKĐ kl/kl tt/tt TCCS M1 M2 Dược chất Dược điển Việt Nam V Dược điển Hoa Kỳ Dược điển châu Âu Acetonitril Chuẩn hỗn hợp Sắc kí đồ Khối lượng/khối lượng Thể tích/thể tích Tiêu chuẩn sở Mẫu placebo (2) Mẫu placebo (3) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Một số phương pháp đinh lượng acid azelaic acid benzoic Bảng 2.1: Công thức bào chế cho 15 g gel Bảng 2.2: Công thức bào chế cho mẫu placebo Bảng 2.3: Chuẩn bị dung dịch đo khoảng tuyến tính Bảng 3.1: Các hệ pha động tiến hành khảo sát Bảng 3.2: Các tốc độ dòng tiến hành khảo sát Bảng 3.3: Kết độ thích hợp hệ thống Bảng 3.4: Kết khảo sát độ đặc hiệu dung dịch placebo, chuẩn, thử Bảng 3.5: Kết khảo sát tuyến tính acid azelaic Bảng 3.6: Kết khảo sát tuyến tính acid benzoic Bảng 3.7: Kết khảo sát độ acid azelaic Bảng 3.8: Kết khảo sát độ acid benzoic Bảng 3.9: Kết khảo sát độ lặp lại Bảng 3.10: Kết độ xác trung gian acid azelaic Bảng 3.11: Kết độ xác trung gian acid benzoic Bảng 3.12: Tóm tắt kết thẩm định Bảng (a) Kết độ thích hợp hệ thống ngày Bảng (b): Độ thu hồi chấp nhận nồng độ khác (theo AOAC) DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1: Cơng thức cấu tạo acid azelaic Hình 1.2: Cơng thức cấu tạo acid benzoic Hình 3.1: Sắc ký đồ dung dịch thử hệ pha động Hình 3.2: Sắc ký đồ dung dịch thử hệ pha động Hình 3.3: Sắc ký đồ dung dịch thử hệ pha động Hình 3.4: Sắc ký đồ dung dịch thử hệ pha động Hình 3.5: Hình ảnh qt phổ theo bước sóng dung dịch chuẩn acid azelaic (trái) acid benzoic (phải) Hình 3.6: Sắc ký đồ mẫu chuẩn hỗn hợp bước sóng 220nm Hình 3.7: Sắc ký đồ mẫu chuẩn hỗn hợp bước sóng 230nm Hình 3.8: Sắc ký đồ mẫu chuẩn hỗn hợp với tốc độ dịng 1,5 ml/phút Hình 3.9: Sắc ký đồ mẫu chuẩn hỗn hợp với tốc độ dịng 1,0 ml/phút Hình 3.10: Sắc ký đồ mẫu chuẩn hỗn hợp với tốc độ dịng 1,0 ml/phút Hình 3.11: Chồng phổ định tính acid azelaic acid benzoic Hình 3.12: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic acid azelaic Hình 3.13: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic acid benzoic ĐẶT VẤN ĐỀ Acid azelaic acid carbocylic thơm thường sử dụng phổ biến điều trị mụn trứng cá mụn viêm loại mụn khác, rối loạn tăng sắc tố [6] Trên thị trường, acid azelaic bào chế dạng kem gel bơi da Phải có phương pháp kiểm nghiệm nguyên liệu điều cần thiết tất yếu Tuy nhiên, Dược điển Việt Nam số dược điển quốc tế (Mỹ, Châu Âu) chưa có chuyên luận riêng nguyên liệu acid azelaic dạng chế phẩm chứa acid azelaic [3,9,19] Trên thị trường nay, dạng gel thân nước acid azelaic phổ biến với ưu điểm giải phóng dược chất nhanh, thể chất tương đối ổn định, không trơn nhờn không cản trở hoạt động sinh lý bình thường da Tuy nhiên dạng bào chế lại có nhược điểm dễ bị nấm mốc nên bắt buộc phải có thêm chất bảo quản Acid benzoic chất bảo quản phổ biến dùng cho chế phẩm chứa acid azelaic Acid benzoic có sẵn tự nhiên (trái mận, xồi, ) phát có khả kháng nấm từ năm 1875 Acid benzoic thường sử dụng với nồng độ từ 0,02% đến 2,5% tùy thuộc vào pH chế phẩm [20] Hàm lượng chất bảo quản chế phẩm cần kiểm soát để đạt nồng độ diệt nấm phù hợp với khuyến nghị giới hạn chất bảo quản, qua đảm bảo chất lượng sản phẩm bảo vệ người tiêu dùng Qua tổng quan tài liệu nước số tài liệu nước ngồi, chưa có nghiên cứu, tài liệu định lượng đồng thời hai chất Vì vậy, cần thiết xây dựng phương pháp định lượng đồng thời chất cho phù hợp với điều kiện có Từ sở trên, khố luận tốt nghiệp dược sĩ đại học: “ Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời acid azelaic acid benzoic HPLC Gel Azelaic 15%” tiến hành với hai mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời acid azelaic acid benzoic sắc ký lỏng hiệu cao Thẩm định phương pháp phân tích xây dựng CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHẤT NGHIÊN CỨU 1.1.1 Tổng quan acid azelaic 1.1.1.1 Tính chất a Cơng thức cấu tạo: Hình 1.1: Cơng thức cấu tạo acid azelaic [17] Công thức phân tử: C9H16O4 Phân tử lượng: 188,22 g/mol Tên khoa học: nonanedioic acid [17] b Tính chất vật lý: Độ hòa tan nước: 2400 mg/L (ở 20 °C) Log P: 1,57 pKa: 4,55 [17] 1.1.1.2 Tác dụng dược lý Acid azelaic acid dicarboxylic bão hịa tự nhiên, bơi ngồi da, chứng minh có hiệu điều trị mụn trứng cá mụn viêm, loại mụn khác rối loạn tăng sắc tố Ngồi ra, acid azelaic có tác dụng chống tăng sinh gây độc tế bào tế bào hắc tố ác tính người, phát cho thấy ngăn chặn tiến triển khối u ác tính da Với đường dùng chỗ, acid azelaic dung nạp tốt, với tác dụng phụ rõ ràng giới hạn kích ứng da cục nhẹ thống qua Do đó, acid azelaic chỗ, sử dụng đơn trị liệu kết hợp với phương pháp điều trị khác, có khả kiểm soát mụn trứng cá số rối loạn tăng sắc tố, đáng ý nám [6] Với đường bơi ngồi da, hấp thu qua da acid azelaic thấp, khoảng 3,6% hoạt chất sử dụng hấp thụ toàn thân Khoảng 2% khơng bị chuyển hóa đào thải qua nước tiểu khoảng thời gian 72 Phần lại acid azelaic Độ xác trung gian