Curdion và germacron là 2 hoạt chất đã được công bố có tác dụng kháng khối u của dược liệu Ngải trắng (Curcuma aromatica). Hiện nay, Dược Điển Việt Nam V chưa quy định tiêu chuẩn cho dược liệu này và chưa có công trình nghiên cứu công bố về quy trình định lượng đồng thời curdion và germacron trong dược liệu Ngải trắng. Vì vậy, đề tài được thực hiện nhằm mục tiêu xây dựng quy trình định lượng đồng thời curdion và germacron trong thân rễ Ngải trắng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CURDION VÀ GERMACRON TRONG THÂN RỄ NGẢI TRẮNG (RHIZOMA CURCUMAE AROMATICAE) Võ Thanh Hóa*, Lê Nữ Huỳnh Như*, Huỳnh Thanh Tuấn**, Đỗ Đức Minh**, Huỳnh Trường Huê***, Lê Kiều Minh**, Nguyễn Đức Hạnh* TÓMTẮT Mở đầu – mục tiêu: Curdion germacron hoạt chất cơng bố có tác dụng kháng khối u dược liệu Ngải trắng (Curcuma aromatica) Hiện nay, Dược Điển Việt Nam V chưa quy định tiêu chuẩn cho dược liệu chưa có cơng trình nghiên cứu cơng bố quy trình định lượng đồng thời curdion germacron dược liệu Ngải trắng Vì vậy, đề tài thực nhằm mục tiêu xây dựng quy trình định lượng đồng thời curdion germacron thân rễ Ngải trắng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Quy trình xử lý mẫu quy trình sắc ký HPLC định lượng đồng thời curdion germacron từ dược liệu Ngải trắng sàng lọc chọn lựa Tính đặc hiệu, tính tương thích hệ thống, tính tuyến tính, độ lặp lại độ quy trình định lượng thẩm định theo hướng dẫn ICH Kết bàn luận: Trong giai đoạn chuẩn bị mẫu, ethanol 96% acetonitril chọn dung môi chiết dược liệu Ngải trắng Soxhlet chiết lại cắn để loại tạp Điều kiện sắc ký HPLC tối ưu bao gồm cột Hypersil gold C18 (250 x 4,6 mm, µm), bước sóng phát 214 nm, nhiệt độ cột 30oC, tốc độ dòng ml/phút Hỗn hợp acetonitril - nước chọn làm dung môi pha động với tỷ lệ acetonitril 35%, 38%, 68% 75% 0, 5, 24-27 32-50 phút Quy trình đạt tính đặc hiệu, tính tương thích hệ thống, tính tuyến tính (19 – 585,2 µg/ml, R2 = curdion 0,96 – 28,83 µg/ml, R2 = 0,9999 germacron), độ lặp lại (RSD curdion, germacron 1,51% 6,97 %), độ với tỷ lệ hồi phục curdion germacron khoảng 91,26% - 102,78% 82,54% - 102,42% Kết luận: Đây nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng đồng thời curdion germacron từ thân rễ Ngải trắng phương pháp HPLC Quy trình định lượng đạt yêu cầu thẩm định theo hướng dẫn ICH ứng dụng để kiểm sốt chất lượng dược liệu thân rễ Ngải trắng Từ khóa: Rhizoma Curcumae aromaticae, curdion, germacron, định lượng, HPLC ABSTRACT SIMULTANEOUS DETERMINATION OF CURDIONE AND GERMACRONE FROM RHIZOMA CURCUMAE AROMATICAE BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Vo Thanh Hoa, Le Nu Huynh Nhu, Huynh Thanh Tuan, Do Duc Minh, Huynh Truong Hue Le Kieu Minh, Nguyen Duc Hanh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2019: 256-264 Background - Objectives: Curdione and germacrone are the two well-known anti-tumor components of C aromatica Until now there has been no monograph in Vietnamese Pharmacopoeia and no study has *Khoa Dược, Đại Học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh Trung Tâm Y Sinh Học Phân Tử, Đại Học Y Dược Thành Phố Hồ Chí Minh *** Khoa Nông Nghiệp Và Tài Nguyên Thiên Nhiên, Trường Đại Học An Giang Tác giả liên lạc: TS Nguyễn Đức Hạnh ĐT: 0913576748 Email: duchanh@ump.edu.vn ** 256 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học been reported on curdione and germacrone determination from C aromatica Therefore, this study was conducted to develop an analytical procedure for simultaneous determination of curdione and germacrone from rhizoma Curcumae aromaticae using the high performance liquid chromatography (HPLC) method Methods: The sample preparation methods and the HPLC conditions for simultanious determination of curdione and germacrone were screened and selected The specificity, suitability, linearity, precision and accuracy of the analytical method was validated according to the ICH guidelines Results: For sample preparation, ethanol 96% and acetonitril were chosen as the two solvents for Soxhlet extraction and residue extraction, respectively The optimized HPLC condition employed Hypersil Gold C18 column (250 x 4.6 mm; µm), a detection wavelength of 214 nm, a column temperature of 30oC, a flow rate of ml/min and a mixture of acetonitrile and water as a mobile phase The ratios of acetonitrile were 35%, 38%, 68% and 75% at min, min, 24-27 and 32-50 min, respectively The specificity and suitability were found to meet the requirements There are good correlations between peak areas and curdione concentrations (19 – 585.2 µg/ml, R2 = 1) and germacrone concentrations (0.96 – 28.83 µg/ml, R2 = 0.9999) The RSD values of precision were found to be at 1.51% (for curdione) and 6.97 % (for germacrone) The analytical method accuracy was high with recovery percentages of 91.26% - 102.78% and 82.54% - 102.42% for curdione and germacrone, respectively Conclusions: The analytical procedure for simultaneous determination of curdione and germacrone from rhizoma Curcumae aromaticae using HPLC method has been reported for the first time The quantitation method meets the ICH requirements of validation and could be applied for quality control of rhizoma Curcumae aromaticae Keywords: Rhizoma Curumae aromaticae, curdione, germacrone, quantitation, HPLC lượng đồng thời curdion germacron ĐẶTVẤNĐỀ dược liệu thân rễ Ngải trắng (Rhizoma Dược liệu Ngải trắng (Curcuma aromatica curcumae aromaticae) phương pháp Salisb., Zingiberaceae) sử dụng từ lâu HPLC, hướng tới việc kiểm soát chất lượng dân gian vị thuốc nam Trên thị dược liệu Ngải trắng trường nay, đặc biệt tỉnh miền Tây Nam Bộ, dược liệu bày bán nhiều với chất lượng khác chí giả mạo Ngải trắng biết đến thuốc chữa bệnh kinh nguyệt không đều, băng huyết, đau bụng kinh, viêm gan mạn tính, ho gà, sỏi tắc mật, bệnh mạch vành(2) (a) Curdion germacron (Hình 1) sesquiterpen phân lập từ thân rễ Ngải O trắng có nhiều tác dụng dược lý quan tâm nghiên cứu kháng ung thư khối u(1,5,6,10), chống đông máu(3), kháng androgen(8), hạ lipid máu(9)… Tuy nhiên, chưa có cơng bố quy trình định lượng (b) đồng thời curdion germacron dược liệu Vì vậy, nghiên cứu tiến Hình 1: Cơng thức cấu tạo (a) curdion (b) hành nhằm mục tiêu xây dựng qui trình định germacron Chuyên Đề Dược 257 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU ethylacetat (80:20) phát UV 254 Đối tượng, nguyên liệu, hóa chất, thiết bị nm, 365 nm thuốc thử H2SO4 10% Thân rễ Ngải trắng (C aromatica) thu hái Núi Cấm, tỉnh An Giang định danh phương pháp giải trình tự gen Sanger Trung tâm Y Sinh học phân tử, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Chất chuẩn làm việc curdion (hàm lượng nguyên trạng 95,0%) germacron (hàm lượng nguyên trạng 96,10%) cung cấp khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Acetonitril (Labscan, Ireland) nước cất đạt yêu cầu HPLC Methanol, ethanol 96% (Labscan, Ireland) đạt u cầu phân tích methanol (nung nóng 105oC) Chọn dung Khảo sát quy trình xử lí mẫu Chọn loại dung môi chiết xuất đồng thời curdion germacron thiết bị Soxhlet Bột thân rễ Ngải trắng (cân xác khoảng g) chiết xuất thiết bị Soxhlet, sử dụng methanol 100% ethanol 96% điều kiện nhiệt độ 100oC thời gian chiết xuất Dịch chiết cô áp suất giảm tới cắn khơ Hòa cắn với acetonitril cho vào bình định mức 25 ml, bổ sung thể tích vừa đủ, lọc qua màng lọc 0,22 μm định lượng phương pháp HPLC Chọn dung môi chiết tối đa đồng thời curdion germacron tạp Chọn loại dung mơi chiết lại cắn để loại tạp Bột thân rễ Ngải trắng (cân xác khoảng g) chiết xuất thiết bị Soxhlet, sử dụng dung môi chọn nhiệt độ 100oC thời gian chiết xuất Dịch chiết cô áp suất giảm tới cắn khơ Hòa cắn dung mơi khác (methanol 100%, ethanol 96% acetonitril) cho vào bình định mức 25 ml, bổ sung thể tích vừa đủ, lọc qua màng lọc 0,22 μm So sánh môi chiết 258 đồng thời curdion germacron tạp chất dịch chiết Khảo sát điều kiện HPLC định lượng đồng thời curdion germacron Khảo sát điều kiện HPLC đồng thời curdion germacron sử dụng máy HPLC Ultimate 3000 Autosamplers, đầu dò PDA, cột sắc ký Hypersil gold C18 (250 mm × 4,6 mm, μm) tiền cột HQ 105 C18 (10 ×4,6 mm; μm) (Thermo Scientific, Mỹ), nhiệt độ cột 30oC, bước sóng phát 214 nm, tốc độ dòng ml/phút thể tích tiêm mẫu 20 μl Thăm dò chương trình gradient pha động sử dụng hỗn hợp acetonitril - nước làm dung môi rửa giải Chọn điều kiện HPLC cho thông số pic curdion germacron đạt yêu cầu Thẩm định quy trình định lượng đồng thời curdion germacron thân rễ Ngải trắng Quy trình định lượng đồng thời curdion germacron thân rễ Ngải trắng thẩm định theo hướng dẫn ICH(4) tính tương thích hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ xác độ KẾTQUẢ Khảo sát điều kiện HPLC định lượng đồng thời curdion germacron Khảo sát chương trình pha động với tỷ lệ dung mơi acetonitril – nước khác trình bày Bảng Bảng 1: Các chương trình pha động HPLC định lượng đồng thời curdion germacron Chương trình pha động I II kết chiết xuất phương pháp sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi triển khai hexan – xuất III Thời gian tỉ lệ dung môi nước: acetonitril phút (80:20); phút (54:46), 10 phút (52:48), 12 phút (46:54), 27 - 60 phút (10:90) phút (90:10); 10 phút (52:48), 12 phút (46:54), 27 -60 phút (10:90) phút (65:35); phút (62:38), 24 - 27 phút (32:68), 32 - 50 phút (25:75) Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Kết khảo sát chương trình pha động trình bày Hình Bảng Chương trình I Germacron Curdion Nghiên cứu Y học 30 phút Tuy nhiên, pic curdion germacron có thơng số pic As >1,5 (Bảng 2) Chương trình III cho pic curdion germacron 30 phút có thơng số pic đạt yêu cầu Vậy, chương trình III chọn để tiến hành thẩm định quy trình định lượng đồng thời curdion germacron thân rễ Ngải trắng Khảo sát quy trình xử lí mẫu Chọn loại dung mơi chiết xuất đồng thời curdion germacron thiết bị Soxhlet Kết sắc ký HPLC khảo sát thành phần Chương trình II dịch chiết thân rễ Ngải trắng Soxhlet với dung môi methanol 100% ethanol 96% Curdion Germacron trình bày Bảng Bảng 3: Kết khảo sát dung môi chiết đồng thời curdion germacron (n=3) Trung bình diện tích pic (mAU.min) STT Chương trình III Curdion Germacron 7,426 3,492 10,198 4,366 Methanol 100% ethanol 96% chiết Germacron Currdion Dung môi chiết Methanol 100% Ethanol 96% đồng thời curdion germacron thiết bị Soxhlet Tuy nhiên, ethanol 96% chiết đồng thời nhiều curdion germacron methanol 100% Vì vậy, ethanol 96% chọn làm dung mơi chiết Hình 2: Sắc ký đồ HPLC phân tích mẫu thử với chương trình pha động khác xuất đồng thời curdion germacron từ Bảng 2: Các thông số sắc ký pic curdion germacron ứng với chương trình pha động Chọn loại dung môi chiết lại cắn để loại tạp Chương trình I II III Rt N As Rs (phút) Curdion 22,117 80624 1,82 2,75 Germacron 28,067 129840 2,20 1,87 Curdion 22,900 104588 1,58 2,57 Germacron 28,400 111709 1,90 3,10 Curdion 20,303 14332 1,00 2,00 Germacron 28,330 21618 1,05 2,05 Thời gian lưu pic curdion germacron chương trình I II Chuyên Đề Dược thân rễ Ngải trắng Kết SKLM (Hình 3) cho thấy dung môi ethanol 96%, methanol 100% acetonitril chiết đồng thời curdion germacron Trong đó, dịch chiết acetonitril chiết nhiều curdion germacron tạp chất Vì vậy, acetonitril chọn làm dung môi chiết chiết lại cắn để loại tạp 259 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Hình 3: Kết SKLM dịch chiết (a) UV 365 nm, (b) UV 254 nm, (c) thuốc thử H2SO4/methanol HH chuẩn: Hỗn hợp chuẩn curdion germacron, MeOH: Dịch chiết methanol, EtOH: Dịch chiết ethanol, ACN: Dịch chiết acetonitrile, Cur: Curdion chuẩn, Ger: Germacron chuẩn Quy trình định lượng đồng thời curdion germacron thân rễ Ngải trắng X: % hoạt chất (curdion germacron) dược liệu Mẫu thử: St, Sc: diện tích pic (curdion germacron) dung dịch thử dung dịch chuẩn đối chiếu Cân xác g bột thân rễ Ngải trắng cho vào bình chiết Soxhlet Tiến hành chiết với Cc: nồng độ curdion germacron dung dịch đối chiếu (µg/ml) ethanol 96% 100oC Dịch chiết V: thể tích dung dịch thử (ml) cô áp suất giảm tới thu cắn khơ m: khối lượng cân dược liệu (g) Hòa tan cắn với acetonitril cho vào bình định h: độ ẩm dược liệu mức 25 ml, bổ sung thể tích vừa đủ, lọc qua k: độ tinh khiết chuẩn màng lọc 0,22 μm Thẩm định quy trình định lượng đồng thời curdion germacron thân rễ Ngải trắng Mẫu đối chiếu Dung dịch chuẩn đối chiếu curdion nồng độ 600 μg/ml germacron nồng độ 200 μg/ml methanol Điều kiện sắc ký HPLC: Điều kiện III Hàm lượng curdion germacron thân rễ Ngải trắng đươc tính theo cơng thức sau: S V X t CC k SC m1 h 10000 260 Tính tương thích hệ thống Kết khảo sát tính tương thích hệ thống trình bày Bảng Các thông số thời gian lưu, diện tích pic có RSD% ≤ 2% Hệ số bất đối, độ phân giải, số đĩa lý thuyết đạt yêu cầu phân tích Vậy, phương pháp xây dựng đạt tính tương thích hệ thống Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Bảng 4: Kết khảo sát tính tương thích hệ thống Rt S N As Rs (phút) (mAU.m) 20,306 7,36 14536 1,00 2,01 0,03 0,07 195 0,01 0,01 TB SD Curdion RSD 0,15 (%) TB 28,325 Germacro SD 0,0397 n RSD 0,14 (%) 0,89 3,248 0,04 1,34 1,34 1,17 0,51 21638 1,05 2,01 304 0,01 0,02 1,40 Nghiên cứu Y học Tính đặc hiệu Hình cho thấy sắc ký đồ mẫu trắng (dung môi acetonitril) khơng có pic xuất khoảng thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu pic curdion (Rt ≈ 20 phút) germacron (Rt ≈ 28 phút) mẫu chuẩn 0,93 1,06 Mẫu chuẩn Mẫu trắng Curdion Germacron Mẫu thử Mẫu thử thêm chuẩn Curdion Germacron Curdion Germacron Hình 5: Kết HPLC khảo sát độ đặc hiệu (Rt pic curdion pic germacron 20 28 phút) Sắc ký đồ mẫu thử có pic có thời gian lưu tương ứng với pic curdion germacron hỗn hợp chuẩn Khi thêm hỗn hợp chuẩn vào mẫu thử chiều cao diện tích pic curdion germacron mẫu thử tăng lên Độ tinh khiết pic curdion germacron đạt yêu cầu Vậy, quy trình phân tích đạt u cầu độ đặc hiệu Chuyên Đề Dược Khoảng tuyến tính Kết khảo sát mối tương quan diện tích pic nồng độ curdion germacron trình bày Hình Kết xử lý thống kê cho thấy có tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ curdion khoảng nồng độ 19 - 585,2 μg/ml (R2=1) germacron khoảng nồng độ 0,96 - 28,83 μg/ml (R2=0,9999) 261 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học (a) (b) Hình 6: Tương quan nồng độ diện tích pic (a) curdion (b) germacron Độ lặp lại Kết khảo sát độ lặp lại quy trình định lượng trình bày bảng Bảng 5: Kết độ lặp lại STT Rt (phút) Diện tích pic (mAU.m) Rt (phút) Germacron Diện tích pic (mAU.m) Curdion 20,32 10,20 28,37 4,37 20,30 10,00 28,36 3,58 20,25 10,11 28,24 3,97 20,26 10,45 28,26 4,05 20,27 10,12 28,26 4,28 20,36 10,09 28,43 4,19 Trung bình 20,29 10,16 28,32 4,07 RSD (%) 0,23 1,51 0,27 6,97 Độ Bảng 6: Kết khảo sát độ Mức nồng độ thêm vào 80% 100% 120% STT 3 Curdion Tỷ lệ Số liệu phục hồi (%) thống kê 99,15 TB = 99,78 97,41 SD = 2,74 RSD = 2,74% 102,78 95,71 TB = 95,08 91,90 SD = 2,87 RSD = 3,02% 95,58 TB = 93,89 91,26 SD = 2,58 RSD = 2,74% Độ tiến hành cách thêm hỗn hợp chuẩn curdion germacron vào mẫu dược liệu mức 80%, 100% 120% so với nồng độ định lượng curdion germacron Mỗi mức chuẩn bị mẫu Kết 262 Germacron Tỷ lệ Số liệu phục hồi (%) thống kê 91,69 TB = 95,59 93,85 SD = 5,02 RSD = 5,25% 101,25 82,55 TB = 86,29 90,42 SD = 3,95 RSD = 4,57% 85,90 TB = 97,60 102,42 SD = 4,22 RSD = 4,00% đánh giá dựa vào tỷ lệ phục hồi Kết khảo sát độ trình bày Bảng Ở ba mức tỉ lệ 80%, 100% 120%, tỉ lệ hồi phục nằm khoảng cho phép 90 - 107% curdion 80 - 110% đối Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học với germacron % RSD tỉ lệ phục hồi curdion nhỏ 5,3% % RSD tỉ lệ phục hồi germacron nhỏ 7,3% Vậy quy trình xây dựng đạt yêu cầu độ lần Ứng dụng quy trình định lượng để khảo sát hàm lượng curdion germacron dược liệu thân rễ Ngải trắng A Kết trình bày Bảng xác định dựa nồng độ curdion Bảng 7: Hàm lượng curdion germacron dược liệu thân rễ Ngải trắng A thấp vậy, khoảng cho phép ứng với TT Hàm lượng curdion (%) Hàm lượng germacron (%) 0,115 0,011 0,113 0,009 0,114 0,011 TB = 0,115 TB = 0,011 0,118 0,011 0,114 0.011 0,114 0.011 BÀNLUẬN lượt tương ứng với curdion germacron % RSD tỉ lệ phục hồi curdion nhỏ 5,3% % RSD tỉ lệ phục hồi germacron nhỏ 7,3% Các khoảng cho phép nêu germacron mẫu định lượng Vì mẫu dược liệu thân rễ Ngải trắng nên hàm lượng curdion (0,115%) germacron (0,011%) nồng độ tương đối rộng so với quy trình định lượng thơng thường(7) Như vậy, quy trình định định lượng đồng thời curdion germacron dược liệu thân rễ Ngải trắng đạt yêu cầu thẩm định quy trình định lượng KẾTLUẬN Đây nghiên cứu cơng bố Quy trình định lượng đồng thời curdion việc xây dựng thẩm định quy trình định germacron dược liệu thân rễ Ngải lượng đồng thời curdion germacron trắng xây dựng thẩm định Kết thân rễ Ngải trắng nuôi trồng thẩm định đạt yêu cầu tính tương tỉnh An Giang Quy trình xử lý mẫu thích hệ thống, tính tuyến tính, độ đặc hiệu, sàng lọc chọn lựa dựa nguyên tắc độ xác (RSD% độ lặp lại curdion chiết đồng thời tối đa hoạt chất curdion germacron 1,51% 6,97%), độ germacron tạp chất Dung môi ethanol với độ phục hồi khoảng 91,26% - 96% chọn làm dung môi chiết xuất 102,78% 82,54% - 102,42% tương ứng với phương pháp Soxhlet chiết curdion germacron Quy trình đồng thời nhiều curdion germacron ứng dụng việc định lượng xây dung môi methanol 100% dựng tiêu chuẩn dược liệu thân rễ Ngải trắng điều kiện chiết xuất Acetonitril chọn làm dung môi chiết lại cắn để loại tạp khả chiết đồng thời curdion germacron nhiều dung môi methanol 100% ethanol 96% tạp chất kéo theo Lời cảm ơn: Cơng trình nghiên cứu tài trợ theo đề tài mã số 373.2017.04 cấp Sở Khoa học Công nghệ tỉnh An Giang TÀILIỆUTHAMKHẢO Tỷ lệ phục hồi quy trinh định lượng khoảng 91,26% - 102,78% (thuộc khoảng cho phép 90 - 107 %) 82,54% 102,42% (thuộc khoảng cho phép 80 - 110%) Chuyên Đề Dược Bo L, Yue QG, Xiao MW (2014), “Germacron inhibits the proliferation of glioma cells by promoting apoptosis and inducing cell cycle arrest”, Mol Med Rep, 10, pp 1046-50 Đỗ Huy Bích (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, tr 391-2 Dongling Z, Wenhao Q, Yingli Z (2017), “Curdion attenuates thrombin-induced human platelet activation: β1-tubulin as a potential therapeutic target”, Fitoterapia, 116, pp 106-115 263 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 ICH (2005), Validation of analytical procedures Text and methodology Q2R1 Jin JL, Yuan YD, Min H (2012), “Anti-cancer properties of terpenoids isolated from Rhizoma Curcumae”, J Ethnopharmacol, 143, pp 406-11 Juan L, Wei HB, Juan W (2014), “Curdion Inhibits Proliferation of MCF-7 Cells by Inducing Apoptosis”, Asian Pac J Cancer Prev, 15 (22), pp 9997-10001 Ludwig Huber (2007), Validation and Qualification in Analytical Laboratories,Informa Healthcare, pp 144-146 Nungruthai S, Ganniga P, Nantaka K (2012), “Antiandrogenic effect of sesquiterpenes isolated from the rhizomes of Curcuma aeruginosa Roxb.”, Fitoterapia, 83, pp 864-871 264 Yuan RG, Se YC (2017), “Germacron attenuates hyperlipidemia and improves lipid metabolism in high-fat diet-induced obese C57BL/6J mice”, J Med Food, 20 (1), pp 4655 10 Zhangfeng Z, Xiuping C, Wen T (2011), “Germacron inhibits the proliferation of breast cancer cell lines by inducing cell cycle arrest and promoting apoptosis”, Eur J Pharmacol, 667, pp 50-5 Ngày nhận báo: 18/10/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2018 Ngày báo đăng: 15/03/2019 Chuyên Đề Dược ... bố Quy trình định lượng đồng thời curdion việc xây dựng thẩm định quy trình định germacron dược liệu thân rễ Ngải lượng đồng thời curdion germacron trắng xây dựng thẩm định Kết thân rễ Ngải trắng. .. so với quy trình định lượng thơng thường(7) Như vậy, quy trình định định lượng đồng thời curdion germacron dược liệu thân rễ Ngải trắng đạt yêu cầu thẩm định quy trình định lượng KẾTLUẬN Đây... định quy trình định lượng đồng thời curdion germacron thân rễ Ngải trắng Quy trình định lượng đồng thời curdion germacron thân rễ Ngải trắng thẩm định theo hướng dẫn ICH(4) tính tương thích hệ