luận án tiến sĩ nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của dịch tiêu chảy cấp trên lợn (porcine epidemic diarrhea – PED) tại tỉnh thanh hóa và giải pháp phòng trị

LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận án cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Tác giả luận án Hoàng Văn Sơn i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án này, ngồi cố gắng thân, tơi nhận quan tâm giúp đỡ tổ chức, quan, nhà khoa học, thầy hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp người thân gia đình Trước hết, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc hướng dẫn, giúp đỡ chân tình đầy trách nhiệm hết lịng khoa học PGS.TS Phạm Ngọc Thạch GS.TS Nguyễn Thị Lan Nhân dịp này, xin cảm ơn giúp đỡ Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ sinh học Thú y Bộ môn Nội - Chẩn - Dược - Độc chất, Khoa Thú y, Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi suốt thời gian học tập hoàn thành luận án Học viện Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Q thầy cơ, quan, nhà khoa học, bạn bè đồng nghiệp công tác khoa Nông Lâm Ngư nghiệp, Trường Đại học Hồng Đức tạo điều kiện giúp đỡ suốt thời gian qua Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới tập thể Lãnh đạo nhân viên Công ty RTD, Công ty CP Nông sản thực phẩm Việt Hưng, Công ty CP đầu tư phát triển chăn ni Hoằng Hóa, Cơng ty CP chăn nuôi chuyển giao công nghệ Yên Định trang trại lợn tỉnh Thanh Hoá Xin chân thành cảm ơn người thân gia đình, ln quan tâm tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận án Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Nghiên cứu sinh Hoàng Văn Sơn ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vii Danh mục bảng viii Danh mục hình ix Danh mục ảnh x Trích yếu luận án xi Thesis abstract xiii Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu chung 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Đối tượng địa điểm nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu 1.3.2 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp đề tài 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án 1.5.1 Ý nghĩa khoa học luận án 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn luận án Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Sơ lược địa bàn nghiên cứu 2.1.1 Vị trí địa lý 2.1.2 Đặc điểm địa hình 2.1.3 Đặc điểm khí hậu 2.1.4 Tình hình phát triển chăn nuôi lợn 2.2 Những nghiên cứu hội chứng tiêu chảy 2.2.1 Khái niệm tiêu chảy 2.2.2 Nguyên nhân gây Hội chứng tiêu chảy gia súc iii 2.2.3 Cơ chế hậu tiêu chảy 2.2.4 Bệnh lý lâm sàng hội chứng tiêu chảy 11 2.3 Tình hình nghiên cứu dịch tiêu chảy cấp lợn (Porcine epidemic diarrhea - PED) 11 2.3.1 Lịch sử bệnh 11 2.3.2 Tình hình nghiên cứu dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) giới 12 2.3.3 Tình hình nghiên cứu dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) Việt Nam 13 2.4 Một số đặc điểm virus PED 16 2.4.1 Phân loại 16 2.4.2 Hình thái cấu trúc 17 2.4.3 Đặc tính sinh học PEDV 19 2.4.4 Tính chất ni cấy 20 2.5 Hiểu biết dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) 20 2.5.1 Dịch tễ học 20 2.5.2 Cơ chế sinh bệnh 21 2.5.3 Triệu chứng 22 2.5.4 Bệnh tích 23 2.5.5 Hậu dịch tiêu chảy cấp lợn 25 2.5.6 Chẩn đoán 27 2.5.7 Phòng điều trị 30 2.5.8 Cơ sở khoa học thuốc dùng điều trị 32 2.6 Máu chức máu 33 2.6.1 Huyết tương 34 2.6.2 Thành phần có hình máu 34 Phần Nội dung phƣơng pháp nghiên cứu 37 3.1 Đối tượng nghiên cứu 37 3.2 Địa điểm nghiên cứu 37 3.3 Thời gian nghiên cứu 37 3.4 Trang thiết bị, dụng cụ vật liệu nghiên cứu 37 3.4.1 Trang thiết bị dụng cụ nghiên cứu 37 3.4.2 Vật liệu nghiên cứu 37 3.4.3 Hóa chất 38 iv 3.5 Nội dung nghiên cứu 38 3.5.1 Tình hình dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) Thanh Hoá 38 3.5.2 Một số đặc điểm bệnh lý lợn mắc dịch tiêu chảy cấp Thanh Hoá 39 3.5.3 Thử nghiệm biện pháp phòngtrị dịch tiêu chảy cấp lợn(PED) 39 3.6 Phương pháp nghiên cứu 39 3.6.1 Phương pháp xác định tình hình dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) 39 3.6.2 Phương pháp mổ khám bệnh tích đại thể 42 3.6.3 Phương pháp làm tiêu vi thể 43 3.6.4 Phương pháp xác định tiêu huyết học 45 3.6.5 Phương pháp kiểm tra tính mẫn cảm E coli phân lập từ phân lợn mắc bệnh tiêu chảy với số thuốc kháng sinh 46 3.6.6 Phương pháp chế chế phẩm ―Gut feedback‖ 47 3.6.7 Quy trình sử dụng chế phẩm ―Gut feedback‖ phòng dịch tiêu chảy cấp 47 3.6.8 Xác định kháng thể PED huyết sau sử dụng chế phẩm ―Gut feedback‖ 48 3.6.9 Điều trị thử nghiệm lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) 49 3.6.10 Phương pháp xử lý số liệu 50 Phần Kết thảo luận 51 4.1 Tình hình dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) Thanh Hoá 51 4.1.1 Tình hình chăn ni lợn Thanh Hoá giai đoạn từ năm 2016 đến 2019 51 4.1.2 Tình hình mắc PED đàn lợn huyện tỉnh Thanh Hoá 52 4.1.3 Tình hình dịch tiêu chảy cấp theo đối tượng lợn ni Thanh Hố 54 4.1.4 Tình hình lợn mắc dịch tiêu chảy cấp theo mùa năm Thanh Hố .56 4.1.5 Tình hình lợn mắc dịch tiêu chảy cấp theo quy mô đàn Thanh Hoá 59 4.2 Đặc điểm bệnh lý lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) Thanh Hoá 61 4.2.1 Triệu chứng lâm sàng lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) 61 4.2.2 Chỉ tiêu lâm sàng lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) 64 4.2.3 Bệnh tích lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) 66 4.2.4 Các tiêu sinh lý máu lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) 77 4.2.5 Các tiêu sinh hoá máu lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) .88 4.3 Thử nghiệm biện pháp phòng trị dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) 95 4.3.1 Phòng dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) phương pháp ―Gut feedback‖ 95 v 4.3.2 Điều trị thử nghiệm lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) 99 Phần Kết luận kiến nghị 107 5.1 Kết luận 107 5.2 Kiến nghị 108 Danh mục cơng trình cơng bố liên quan đến luận án 109 Tài liệu tham khảo 110 Phụ lục 126 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Viết đầy đủ CFR Case Fatality Rate EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay EM Electron microscope Epidemic viral EVD diarhea Immunoglobulin A IgA Immunoglobulin G Immunoglobulin IgG M Yolk Immunoglobulin In situ IgM hybridization IgY ISH MR Mortality Rate PED Porcine epidemic diarrhea PEDV Porcine epidemic diarrhea virus RNA Axit ribonucleic RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction TGE Transmissible gastroenteritis TGEV Transmissible gastroenteritis virus UTR Untranslated region vii DANH MỤC BẢNG TT Tên bảng Trang 2.1 Các loại vacxin PED cấp phép thương mại 31 3.1 Hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động gồm 12 bình 43 3.2 Đánh giá đường kính vịng vơ khuẩn theo hãng Oxiod 46 4.1 Tình hình chăn ni lợn Thanh Hoá giai đoạn 2016 - 2019 51 4.2 Tình hình mắc dịch tiêu chảy cấp đối tượng lợn Thanh Hoá 55 4.3 Tình hình lợn mắc dịch tiêu chảy cấp theo quy mơ đàn Thanh Hố 60 4.4 Thân nhiệt, tần số hô hấp tim đập lợn khoẻ lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) đàn lợn thuộc tỉnh Thanh Hoá 65 4.5 Bệnh tích đại thể lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) ni Thanh Hố 67 4.6 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể ruột lợn mắc tiêu chảy cấp (PED) đàn lợn tỉnh Thanh Hoá 72 4.7 Số lượng, tỷ khối thể tích bình quân hồng cầu lợn khoẻ lợn mắc PED ni tỉnh Thanh Hố 79 4.8 Sức kháng hồng cầu lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) tỉnh Thanh Hoá 81 4.9 Hàm lượng huyết sắc tố, nồng độ huyết sắc tố trung bình, lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) nuôi Thanh Hoá 84 4.10 Số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu lợn khoẻ lợn mắc PED ni tỉnh Thanh Hố 87 4.11 Hàm lượng protein tổng số tiểu phần protein huyết lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) ni Thanh Hố 88 4.12 Phản ứng Gros hàm lượng đường huyết lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) tỉnh Thanh Hoá 92 4.13 Độ dự trữ kiềm máu hàm lượng Natri, Kali huyết lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) tỉnh Thanh Hoá 94 4.14 Thời gian sử dụng ―gut feedback‖ lợn nái mang thai tuần thứ 13 (n=60) 96 4.15 Hàm lượng kháng thể PED huyết lợn nái thí nghiệm .97 4.16 Kết kiểm tra tính mẫn cảm chủng E coli phân lập từ phân lợn mắc bệnh tiêu chảy với số loại kháng sinh (n=27) 100 4.17 Kết điều trị thử nghiệm lợn mắc PED đàn lợn tỉnh Thanh Hoá .101 4.18 Một số tiêu hiệu điều trị 106 viii DANH MỤC HÌNH TT Tên hình Trang 2.1 Sơ đồ chế hậu viêm ruột tiêu chảy 10 2.2 Virus PED chủng KPEDV-9 phân lập Hàn Quốc nhuộm với urany acetat 2% Chiều dài nằm ngang tương đương 100nm 16 2.3 Hạt virus PED mẫu phân lợn nhiễm PED trang trại Ohio Hoa Kỳ quan sát qua kính hiển vi điện tử 17 2.4 Cấu trúc phân tử virus PED 18 3.1 Test kit PED Ag 38 3.2 Các bước tiến hành kiểm tra mẫu bệnh Test kit PED Ag 41 3.3 Kết chẩn đoán Test kit PED Ag 41 3.4 Các bước chế sử dụng chế phẩm ―Gut feedback‖ 47 3.5 Các bước tiến hành xác định kháng thể test ELISA 48 4.1 Thực trạngcác phương thức chăn ni lợn Thanh Hố 52 4.2 Thực trạng mắc PED lợn ni huyện tỉnh Thanh Hố 53 4.3 Trình trạng mắc PED theo mùa Thanh Hoá 57 4.4 Tình trạng mắc PED theo quy mơ đàn Thanh Hoá 61 4.5 Triệu chứng lâm sàng lợn mắc PED nuôi tỉnh Thanh Hoá 63 4.6 Lượng kháng thể lợn nái sau sử dụng phương pháp ―Gut feedback‖ .98 4.7 Kết điều trị thử nghiệm lợn mắc PED tỉnh Thanh Hoá 103 ix DANH MỤC ẢNH TT Tên Ảnh Trang 4.1 Phân màu vàng lợn ngày tuổi mắc PED 63 4.2 Phân lợn màu vàng xám lợn ngày tuổi mắc PED 63 4.3 Lợn gầy sút PED ngày tuổi 64 4.4 Lợn gầy sút PED 17 ngày tuổi 64 4.5 Lợn ngày tuổi mắc PED nằm chồng lên 64 4.6 Lợn 12 ngày tuổi mắc PED nằm chồng lên 64 4.7 Xác chết lợn mắc PED ngày tuổi 68 4.8 Hạch lympho màng treo ruột lợn mắc PED ngày tuổi sung huyết, xuất huyết 68 4.9 Phổi lợn mắc PED ngày tuổi tụ huyết 69 4.10 Tim lợn mắc PED ngày tuổi sưng to 69 4.11 Thận lợn mắc PED ngày tuổi sưng nhẹ 69 4.12 Ruột non lợn mắc PED ngày tuổi căng phồng, thành mỏng 69 4.13 Ruột lợn mắc PED ngày tuổi sung huyết 70 4.14 Ruột lợn mắc PED ngày tuổi chứa dịch vàng 70 4.15 Gan lợn mắc PED ngày tuổi màu đất sét 70 4.16 Dạ dày lợn mắc PED ngày tuổi căng phồng chứa sữa chưa tiêu hoá .70 4.17 Sung huyết hạ niêm mạc ruột (HE x 100) 75 4.18 Lông nhung ruột bị tù đầu, ngắn lại (HE x 200) 75 4.19 Sung huyết hạ niêm mạc ruột nhuộm (HE x 200) 76 4.20 Hoại tử tế bào biểu mô ruột (HE x 200) 76 4.21 Thối hóa tế bào đỉnh lông nhung Tá tràng lợn mắc PED (HE x 200) 76 4.22 Các lông nhung Không tràng lợn mắc PED bị ngắn lại (HE x 200) 76 4.23 Lông nhung Hồi tràng lợn mắc PED tù đầu, ngắn lại (HE X200) 76 4.24 Tổn thương lông nhung Kết tràng lợn mắc PED (HE x 200) 76 4.25 Tăng sinh nang Lympho thành ruột Hồi tràng lợn mắc PED (HE x 100) 77 4.26 Tăng sinh nang Lympho thành ruột không tràng lợn mắc PED (HE x 200) 77 4.27 Thâm nhiễm tế bào viêm xung quanh tuyến ruột lợn mắc PED .77 4.28 Sung huyết thâm nhiễm tế bào viêm xung quanh tuyến ruột lợn mắc PED 77 x Observations Pooled Variance Hypothesized Mean Difference Df t Stat P(T