KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (dược LIỆU và dược cổ TRUYỀN) tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập một số hợp chất từ phân đoạn n hexan của lá cây xăng sê

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN N-HEXAN CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN NHEXAN CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa: Người hướng dẫn: Hà Nội – 2020 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu Dược học Cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội ThS Bùi Thị Xuân – Giảng viên Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội định hướng, tận tâm bảo tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành Khố luận Các thầy cô không truyền đạt kiến thức học thuật mà trang bị cho em thêm nhiều kĩ cần thiết sống Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Dược liệu Dược học Cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện cho em trình thực hồn thành Khố luận Em xin gửi lời cảm ơn đến Quý thầy cô Ban Chủ nhiệm Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, cán bộ, giảng viên trực thuộc Khoa Y Dược thầy cô sở liên kết đào tạo với Khoa Y Dược nhiệt tình dạy cho em từ điều đến tới tri thức to lớn nhân loại suốt thời gian năm học tập nghiên cứu chuyên ngành Dược học nơi Do kiến thức em cịn hạn hẹp, thời gian nghiên cứu khơng nhiều nên Khố luận em khơng tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận lời nhận xét, góp ý Q thầy để Khố luận tốt nghiệp Dược sĩ em hoàn thiện Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, xin cảm ơn người bạn đồng hành tôi, người theo sát, quan tâm tạo điều kiện giúp tơi hồn thành Khố luận Xin chúc tất người ln mạnh khoẻ hạnh phúc! Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Sinh viên DANH MỤC KÍ HIỆU STT Kí hiệu Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt CFU Colony-forming unit Đơn vị hình thành khuẩn lạc DEPT Distortionless enhancement by polarization transfer Tăng cường biến dạng chuyển phân cực DPPH 2,2′-diphenyl-1picrylhydrazyl ESI−MS FabI Enoyl-acyl carrier protein reductase I IC50 Half maximal inhibitory concentration Nồng độ ức chế 50% mức tối đa LC50 Median lethal concentration Nồng độ gây chết 50% MIC Minimum inhibitory concentration Nồng độ ức chế tối thiểu MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide 10 NMR Nuclear magnetic resonance Quang phổ cộng hưởng từ hạt nhân 11 ORAC Oxygen radical absorbance capacity Khả hấp thụ gốc oxy 12 TLC Thin-layer chromatography Sắc ký mỏng Electrospray ionisation mass spectrometry Quang phổ khối tia điện ion hoá DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Ảnh chụp hoa S nobilis Hình 1.2 Cấu tạo tổng thể S nobilis Hình 1.3 Cơng thức hoa S nobilis Hình 1.4 Thành phần bột cuống S nobilis Hình 1.5 Thành phần bột thân S nobilis Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo hợp chất 1−22 13 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất S nobilis phân đoạn n−hexan 19 Hình 3.2 Cấu trúc hợp chất S3 24 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất S4 26 Hình 3.4 Cấu trúc hợp chất S5 28 DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 3.1 Dữ liệu phổ DEPT, 13C−NMR 1H−NMR hợp chất S3 hợp chất tham khảo 22 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ DEPT, 13C−NMR 1H−NMR hợp chất S4 hợp chất tham khảo 24 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ DEPT, 13C−NMR 1H−NMR hợp chất S5 hợp chất tham khảo 26 Bảng 3.4 Liên quan cấu trúc axit béo với tác dụng kháng khuẩn 29 Bảng 3.5 Tác dụng axit béo lên enoyl reductase vi khuẩn Gram (+) 29 Bảng 3.6 Nồng độ ức chế tối thiểu axit béo 29 Bảng 3.7 Tỷ lệ ức chế axit palmitic so với đối chứng âm 31 Bảng 3.8 Đường kính vùng ức chế vi khuẩn E coli chất 31 Bảng 3.9 Nồng độ ức chế tối thiểu axit béo 33 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Sanchezia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Sanchezia 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Sanchezia 1.1.3 Đặc điểm phân bố chi Sanchezia 1.2 Tổng quan loài Sanchezia nobilis 1.2.1 Đặc điểm đại phẫu loài S nobilis 1.2.2 Đặc điểm bột dược liệu loài S nobilis 1.2.3 Thành phần hố học lồi S nobilis 1.2.4 Tác dụng dược lý 13 1.2.5 Cơng dụng lồi S nobilis theo Y học cổ truyền 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng .16 2.1.1 Nguyên vật liệu 16 2.1.2 Hoá chất, thiết bị 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu .17 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất .17 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất .18 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Kết 19 3.1.1 Kết chiết xuất 19 3.1.2 Kết phân lập 20 3.1.3 Kết xác định cấu trúc hợp chất phân lập 22 3.2 Bàn luận 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .34 MỞ ĐẦU Đất nước Việt Nam sở hữu ranh giới trải dài nhiều vĩ độ, bên biển liên tục thổi gió ẩm, bên núi giữ lại ẩm đó, thời tiết thay đổi liên tục mùa năm khác rõ rệt vùng miền, giúp hệ sinh thái nơi phát triển trù phú với nhiều loài đặc hữu sinh vật q Chính điều tạo nên nguồn nguyên liệu dược liệu (thực vật, động vật, khoáng vật) to lớn, tạo tiền đề để nhân dân Việt Nam từ xưa tới tìm tịi, vận dụng nhiều phương thuốc Nam dược Cùng kiến thức Đông dược, vị Thần y nước Việt cha ông ta xây dựng tích luỹ kho tàng tri thức y dược học quý giá Trong thời điểm tại, y học Tây phương qua thời kì bùng nổ, loại thuốc tổng hợp phát triển chậm chạp tác nhân gây bệnh dần trở nên đề kháng, xu hướng quay với nguồn gốc thiên nhiên lại nhà khoa học ý nhiều Rất nhiều số lồi sinh vật sàng lọc tìm kiếm hoạt chất lại loài cỏ mọc hoang dại mà dân gian Việt Nam thường truyền tay làm thuốc điều trị phòng chống nhiều loại bệnh cấp mạn tính Hiện có nhiều nghiên cứu loài thuộc họ Acanthaceae, số thuộc chi Sanchezia Tuy nhiên nghiên cứu sơ sài thường tập trung vào thành phần hố học [23, 24], nghiên cứu độc tính tác dụng sinh học người Phần lớn nghiên cứu loài Sanchezia speciosa, cịn lồi Sanchezia nobilis nghiên cứu ít, bao gồm số nghiên cứu giới nghiên cứu Việt Nam nghiên cứu TS Vũ Đức Lợi, ThS Bùi Thị Xuân, PGS.TS Bùi Thanh Tùng… [5−7, 48, 49] Trên mạng internet có xuất số báo viết tác dụng điều trị đau dày Khôi đốm hay Xăng sê (một số có nêu tên khoa học lồi S speciosa) cách sắc khơ với nước nhai sống tươi [2], chưa có nghiên cứu chứng minh tác dụng này, mà hoàn toàn lời truyền miệng dân gian Các nghiên cứu trước công bố thành phần dịch chiết S nobilis có chứa glycosid, sterol, flavonoid,… [5, 6, 23, 24] Ngồi có số khố luận tốt nghiệp dược sĩ sử dụng S nobilis làm đề tài nghiên cứu [3] Việc nghiên cứu sâu vào thành phần hoá học tác dụng sinh học giúp chứng minh kinh nghiệm sử dụng dân gian, hướng tới tìm kiếm, tách chiết phân lập hoạt chất nuôi trồng, sản xuất thuốc điều trị từ Năm 2019 có đề tài khố luận tốt nghiệp “Nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n−hexan Khôi đốm” dược sĩ Phạm Thị Hà Vì thế, chúng tơi thực đề tài: “Tiếp tục nghiên cứu chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n−hexan Xăng sê (Sanchezia nobilis Hook.f)” với mục tiêu sau: Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn n−hexan Xăng sê/Khôi đốm Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 2.65 5.373 5.371 5.368 5.360 5.356 5.354 5.348 5.344 5.342 5.337 5.335 5.332 5.328 5.321 5.318 5.316 5.314 5.311 5.307 5 5 S C D C l p p 1.00 2.10 2.784 2.782 2.770 2.756 2.65 5 p p m 5.371 5.360 5.356 5.354 5.348 5.344 5.342 5.337 5.335 2.356 2.341 2.326 2 3.43 2.070 2.056 2.042 2.029 2.017 2.005 1.994 2.16 10.43 7.62 1 3.12 p p m 1.647 1.633 1.618 1.603 1.370 1.357 1.343 1.330 1.321 1.319 1.313 1.302 1.297 1.296 1.289 1.288 1.281 1.270 1.258 0.903 0.893 0.889 0.880 0.875 0.866 S C D C l S5-CDCl3-C13CPD 130.18 129.99 129.70 128.07 77.26 77.00 76.75 Current Data Parameters NAME LOI_S5 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20191106 Time 8.35 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 256 DS SWH 31250.000 Hz FIDRES 0.476837 Hz AQ 1.0485760 sec RG 198.57 DW 16.000 usec DE 6.50 usec TE 304.5 K D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec TD0 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 125.7864591 MHz NUC1 13C P1 10.00 usec PLW1 88.00000000 W ======== CHANNEL f2 ======== SFO2 500.1910008 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltz16 PCPD2 80.00 usec PLW2 22.00000000 W PLW12 0.35764000 W PLW13 0.17989001 W F2 - Processing parameters 220 200 80 ppm 180 60 160 40 140 20 120 100 S5-CDCl3-C13CPD 131.5 131.0 130.5 130.0 129.5 129.0 128.5 128.0 127.5 ppm 34.08 3 31.92 31.90 31.52 29.76 29.67 29.63 29.58 29.52 29.42 29.34 29.31 29.23 29.13 29.06 29.02 27.20 27.17 27.15 25.63 24.65 3 22.67 22.56 2 2 p p m 14.06 14.02 S C D C l - 3 31.92 31.90 31.52 3 9 29.76 29.67 29.63 29.58 29.52 29.42 29.34 29.31 29.23 29.13 29.06 29.02 8 7 p p m 27.20 27.17 27.15 S C D C l - S5-CDCl3-C13CPD &DEPT DEPT90 210 200 120 40 DEPT135 190 110 30 180 100 20 170 90 10 160 80 ppm 150 70 140 60 130 50 130 50 CH&CH3 CH2 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 210 200 120 40 190 110 30 180 100 20 170 90 10 160 80 ppm 150 70 140 60 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm C13CPD 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm S5-CDCl3-C13CPD &DEPT DEPT90 DE PT 13 132 p p m CH&CH3 CH2 132 C1 3C 132.5 132.0 131.5 131.0 130.5 130.0 129.5 129.0 P D 128.5 128.0 127.5 127.0 126.5 ppm p p 132.5 132.0 131.5 131.0 130.5 130.0 129.5 129.0 128.5 128.0 127.5 127.0 126.5 ppm S5-CDCl3-C13CPD &DEPT DEPT90 34 3 33 32 DEPT135 29 28 23 22 27 21 26 20 17 16 12 p p m 15 C H & C 34 33 32 31 30 29 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 ppm H C H 34 31 29 272522 19 17 15 ppm 13 33 30 28 262421 18 16 14 32 2320 34 33 32 31 30 29 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 ppm C13CPD ... HỌC QUỐC GIA HÀ N? ??I KHOA Y DƯỢC TIẾP TỤC NGHI? ?N CỨU CHIẾT XUẤT PH? ?N LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PH? ?N ĐO? ?N NHEXAN CỦA LÁ CÂY XĂNG SÊ (Sanchezia nobilis Hook.f) KHÓA LU? ?N TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC... khoá lu? ?n tốt nghiệp ? ?Nghi? ?n cứu chiết xuất ph? ?n lập số hợp chất từ ph? ?n đo? ?n n? ? ?hexan Khơi đốm” dược sĩ Phạm Thị Hà Vì thế, thực đề tài: ? ?Tiếp tục nghi? ?n cứu chiết xuất ph? ?n lập số hợp chất từ ph? ?n. .. ph? ?n đo? ?n n? ? ?hexan Xăng sê (Sanchezia nobilis Hook.f)” với mục tiêu sau: Chiết xuất ph? ?n lập số hợp chất từ ph? ?n đo? ?n n? ? ?hexan Xăng sê/ Khôi đốm Xác định cấu trúc hợp chất ph? ?n lập CHƯƠNG TỔNG