ĐỖ THỊ HƢỜNG PHÂN lập một số hợp CHẤT từ DỊCH CHIẾT cây bọ mắm (POUZOLZIA ZEYLANICA) KHOÁ LUẬN tốt NGHIỆP dƣợc sĩ

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ HƢỜNG PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ DỊCH CHIẾT CÂY BỌ MẮM (POUZOLZIA ZEYLANICA) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2019 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ HƢỜNG Mã sinh viên: 1401312 PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ DỊCH CHIẾT CÂY BỌ MẮM (POUZOLZIA ZEYLANICA) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn TS Bùi Thị Thuý Luyện Nơi thực Bộ môn Công nghiệp Dƣợc HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Bùi Thị Thúy Luyện trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ, bảo tận tình để em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn tới PGS.TS.Nguyễn Văn Hân, DS.Trần Trọng Biên tập thể cán bộ, giảng viên Bộ môn Công nghiệp dược tạo điều kiện sở vật chất nhiệt tình giúp đỡ em q trình hồn thành đề tài Em xin cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, phòng ban, thầy cô giáo cán nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội dạy bảo trao cho em kiến thức khoa học tảng suốt thời gian học tập mái trường Em xin gửi lời cảm ơn đến bạn Nguyễn Thu Hà, bạn làm nghiên cứu tổ Chiết xuất Bộ môn Công nghiệp dược bạn sinh viên khác tạo điều kiện, giúp đỡ hỗ trợ em trình làm đề tài Và cuối em xin gửi lời cảm ơn thân thương đến gia đình, bạn bè, anh chị ln bên đồng hành giúp đỡ em trình học tập hồn thành khóa luận Dù có nhiều cố gắng, song đề tài cịn có thiếu sót Kính mong nhận chia sẻ nhận ý kiến đóng góp q báu thầy giáo Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2019 Sinh viên Đỗ Thị Hƣờng MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Bọ mắm (Pouzolzia zeylanica) 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Sinh thái phân bố 1.1.4 Bộ phận dùng 1.1.5 Công dụng 1.1.6 Một số thuốc Bọ mắm 1.2 Một số nghiên cứu thành phần hoá học tác dụng sinh học Bọ mắm 1.2.1 Một số nghiên cứu giới a Thành phần hoá học b Tác dụng sinh học 10 1.2.2 Các nghiên cứu Việt Nam 12 a Thành phần hoá học 12 b Tác dụng sinh học 13 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 14 2.2 Nguyên liệu 15 2.2.1 Hóa chất 15 2.2.2 Dụng cụ 15 2.2.3 Thiết bị 15 2.3 Nội dung nghiên cứu 16 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 2.4.1 Phương pháp chiết xuất 16 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu thành phần hóa học 16 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 18 3.1 Kết thực nghiệm 18 3.1.1 Chiết xuất dịch chiết ethanol toàn phần, dịch chiết phân đoạn 18 3.1.2 Phân lập hợp chất từ phân đoạn 19 3.1.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 21 3.2 Bàn luận 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VIẾT TẮT Kí hiệu Tiếng anh Tiếng việt MeOH Methanol Metanol SKLM Thin Layer chromatography Sắc kí lớp mỏng NMR Nuclear Magnetic Resonance phổ cộng hưởng từ hạt nhân Carbon 13 Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance carbon 13 Proton Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Proton δ Chemical shift Độ chuyển dịch hóa học S Singlet Mũi đơn D Doublet Mũi đôi J Coupling constant Hằng số tương tác spin EtOAc Ethyl acetat Etyl acetat CH2Cl2 Dichloromethane Diclometan TLTK Referecens Tài liệu tham khảo LC50 Lethal Concentration 50 Nồng độ gây chết 50% 13 C-NMR H-NMR DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ Bảng Nội dung Trang Bảng 1.1 Thành phần hoá học Bọ mắm Bảng 2.1 Các hoá chất sử dụng 15 Bảng 3.1 Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất Pz 22 Bảng 3.2 Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất Pz 25 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Nội Dung Trang Hình 1.1 Một số hợp chất phân lập từ Bọ 12 mắm Việt Nam Hình 2.1 Hình ảnh Bọ mắm 14 Hình 3.1 Quy trình chiết xuất Bọ mắm 18 Hình 3.2 Phân lập hợp chất Pz 19 Hình 3.3 Phân lập hợp chất Pz 20 Hình 3.4 Cấu trúc hợp chất Pz 22 Hình 3.5 Các tương tác xa HMBC hợp chất Pz 23 Hình 3.6 Phổ HSQC hợp chất Pz 23 Hình 3.7 Phổ HMBC hợp chất Pz 23 Hình 3.8 Cấu trúc hợp chất Pz 26 Hình 3.9 Các tương tác xa HMBC hợp chất Pz 26 Hình 3.10 Phổ HSQC hợp chất Pz 27 Hình 3.11 Phổ HMBC hợp chất Pz 27 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam với khí hậu nhiệt đới gió mùa nên có nguồn tài ngun dược liệu vơ phong phú đa dạng Từ ngàn đời dân tộc ta biết dùng dược liệu để phòng chữa bệnh có nhiều thuốc cịn lưu truyền đến ngày Ngày với phát triển khoa học kĩ thuật đại, nhiều chất tổng hợp hóa dược ứng dụng y học đại phủ nhận vai trị dược liệu cơng nghiệp dược phẩm.Thực tế cho thấy thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên độc, rẻ tiền, dễ kiếm, hiệu cao đặc biệt số bệnh nan y bệnh ung thư, thối hóa đốt sống Ngồi hoạt chất tự nhiên từ dược liệu sở để từ tổng hợp hợp chất dẫn xuất có tác dụng tương tự, ví dụ morphin chiết xuất từ thuốc phiện, vinblastine vincristine từ dừa cạn Các nhà nghiên cứu giới phân lập nhiều hợp chất từ Bọ mắm chủ yếu thuốc nhóm flavonoid, triterpenoid, sterol, lignan Trong có số hợp chất chứng minh có tác dụng sinh học 14,16hentriacontanedione, 3,4-dihydro-5,7-dihydroxy-4-(4-hydroxyphenyl) coumarin có tác dụng số bệnh mạn tính đái tháo đường tuyp 2, bệnh tim mạch, béo phì; quercetin, kaemferol có tác dụng chống oxy hóa Bọ mắm loại thân thảo lâu năm, thuộc họ Urticaceae Trong y học cổ truyền Việt Nam Bọ mắm sử dụng phương thuốc chữa tiêu chảy, khó tiêu, suy dinh dưỡng trẻ sơ sinh đặc biệt hữu ích điều trị viêm vú cấp tính nhiễm trùng mủ [6] Ngồi cịn nấu thành cao để chữa ho lâu năm, ho lao [2] Lá dùng để chữa giun sán, làm lành vết thương, đặc biệt dùng chất đặc trị cho loét bệnh giang mai lậu [7] Nước ép Bọ mắm sử dụng thuốc lợi sữa [23] Hiện nghiên cứu giới chứng minh hoạt tính chống oxy hóa [8], hoạt tính kháng khuẩn [9], hoạt tính chống ung thư [6] từ dịch chiết Bọ mắm Tuy nhiên Việt Nam số lượng cơng trình nghiên cứu hạn chế Nhận thấy nguồn tài nguyên dồi có tiềm lớn cơng nghệ dược phẩm, làm sở cho việc tổng hợp hóa dược Việt Nam, vậy, thực đề tài‘‘Phân lập số hợp chất từ dịch chiết Bọ mắm (Pouzolzia zeylanica)’’ để góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học Đề tài thực với mục tiêu: - Chiết xuất dịch chiết toàn phần dịch chiết phân đoạn Bọ mắm - Phân lập số hợp chất từ dịch chiết phân đoạn Bọ mắm - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Võ Văn Chi,(1997),Từ điển thuốc Việt Nam,Nhà Xuất Bản Y học,Hà Nội, pp 98-99 Đỗ Thị Nhung,(2018),Nghiên cứu thành phần hoá học tác dụng sinh học dịch chiết Bọ Mắm (POUZOLZIASP.) thu hái Thái Nguyên,Đại học dược Hà Nội, Hà Nội Đỗ Tất Lợi,(1997),Những thuốc vị thuốc Việt Nam,NXB khoa học kĩ thuật Hà Nội.,Hà Nội.pp724- 725 Viện dược liệu - Bộ Y Tế,(2009),Cây thuốc Nghệ AnNghệ An.pp 87-88 Lê Thanh Thuỷ,(2007),Khảo sát thành phần hoá học bọ mắm Pouzolzia Zeylanica (L),Luận văn thạc sĩ dược học, Khoa hoá, Trường Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học quốc gia TP Hồ CHí Minh TIẾNG ANH Sarkar Brazendranath, Raihan SM Abu, Sultana Nasim(2014), "Phytochemical and Biological Activity Studies on Pouzolzia Zeylanica (Linn.) Benn", National University J of Science,1 (1), pp2014 Hossain MS, Rahman MS, Imon AHMR, et al Ethnopharmacological investigations of methanolic extract of Pouzolzia zeylanica (L.) benn Clin Phytoscience 2016; (1): 10 Li Peiyuan, Huo Lini, Su Wei, et al.(2011), "Free radical- scavenging capacity, antioxidant activity and phenolic content of Pouzolzia zeylanica", Journal of the Serbian Chemical Society,76 (5), pp709-717 Saha Dibyajyoti, Paul Swati, Chowdhury Srikanta(2012), "Antibacterial activity of ethanol extract of Pouzolzia Zeylanica (L.) Benn", International Journal of Pharmaceutical Innovations,2 (1),pp1-5 10 Takhtajan Armen,(2009),Flowering plants,Springer Science & Business Media, pp281 11 Wang Lujun, Gao Die, Fu Qifeng, et al.(2018), "Bioactivity-guided isolation of antioxidant compounds from Pouzolzia zeylanica (L.) benn", Pharmacognosy Magazine,14 (56), pp444 12 Fu Ming, Niu YY, Yu Juan, et al.(2012), "Study on the chemical constituents in Pouzolzia zeylanica", ZhongyaocaiJournal of Chinese medicinal materials, 35 (11), pp1778-1781 13 Wang Lujun, Gao Die, Xu Zhelong, et al.(2015), "Chemical Constituents of Pouzolzia zeylanica with PPARγ and PPARβ Activities", Chemistry of Natural Compounds,51 (6), pp1157-1159 14 Sarma Indrajit Sil, Dinda Biswanath(2013), "A new friedelane triterpene ester from Pouzolzia indica" 15 Chen Z-H, Zhang H, Tao S-H, et al.(2015), "Norlignans from Pouzolzia zeylanica var microphylla and their nitric oxide inhibitory activity", Journal of Asian natural products research,17 (10), pp959-966 16 Huan Cen(2010), "EFFECTS OF POUZOLZIA ZEYLANICA ON BLOOD SUGAR IN DIABETES MELLITUS MICE [J]", Journal of Mudanjiang Medical University 17 NGOC BAO CHAU NGUYEN, THI MINH HIEN LE, THI TINH DANG, et al.("Bioefficacy of leaf extracts from pouzolzia zeylanica (L.) Benn Against diamondback moth plutella xylostella in Viet Nam", Journal of Science (2), pp44 18 Eleni A, Ahmed Raheel, Siddiqui Hina, et al.(2017), "High resolution NMR spectroscopy as a structural and analytical tool for unsaturated lipids in solution", Molecules,22 (10), pp1663 19 Gunstone FD(1990), "The 13C-NMR spectra of oils containing γ- linolenic acid", Chemistry and physics of lipids,56 (2-3), pp201-207 20 Hamerski Lidilhone, Bomm Mauro Dionei, Silva Dulce Helena Siqueira, et al.(2005), "Phenylpropanoid glucosides from leaves of Coussarea hydrangeifolia (Rubiaceae)", Phytochemistry,66 (16), pp1927-1932 21 Pariza MW(1999), "The biological activities of conjugated linoleic acid", Advances in conjugated linoleic acid research, pp12-20 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phổ khối lượng HR-ESI-MS hợp chất Pz Phụ lục 2: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H- NMR Pz Phụ lục 3: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C- NMR Pz Phụ lục 4: Phổ hai chiều HSQC hợp chất Pz Phụ lục 5: Phổ hai chiều HMBC của hợp chất Pz Phụ lục 6: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H- NMR Pz Phụ lục 7: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C- NMR Pz Phụ lục 8: Phổ hai chiều HSQC hợp chất Pz Phụ lục 9: Phổ hai chiều HMBC của hợp chất Pz Phụ lục 1: Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS hợp chất Intens x105 +MS, 0.1-0.3min #(4-20) 337.1438 1.5 1.0 383.1476 0.5 315.1597 355.1508 369.1344 297.1487 0.0 280 300 320 340 360 380 m/z Phụ lục 2: Phổ 1H-NMR hợp chất Phụ lục 3: Phổ 13C-NMR hợp chất Phụ lục 4: Phổ HSQC hợp chất Phụ lục 5: Phổ HMBC hợp chất Phụ lục 6: Phổ 1H-NMR hợp chất Pz Phụ lục 7: Phổ 13C-NMR hợp chất Pz Phụ lục 8: Phổ HSQC hợp chất Pz Phụ lục 9: Phổ HMBC hợp chất Pz Page 41 ... TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ HƢỜNG Mã sinh viên: 1401312 PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ DỊCH CHIẾT CÂY BỌ MẮM (POUZOLZIA ZEYLANICA) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn TS Bùi Thị Thuý Luyện... dung nghiên cứu: - Chiết xuất dịch chiết toàn phần dịch chiết phân đoạn Bọ mắm - Phân lập số hợp chất từ dịch chiết phân đoạn Bọ mắm - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 2.4 Phƣơng pháp... đoạn Bọ mắm - Phân lập số hợp chất từ dịch chiết phân đoạn Bọ mắm - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Bọ mắm ( Pouzolzia zeylanica) 1.1.1 Vị trí phân