TRẦN HUYỀN TRANG CHIẾT XUẤT, PHÂN lập một số hợp CHẤT từ dược LIỆU CHÈ VẰNG (jasminum subtriplinerve blume) KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN HUYỀN TRANG 1701616 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ DƯỢC LIỆU CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hà Vân Oanh ThS Hoàng Thị Diệu Hương Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn - Viện Dược liệu HÀ NỘI – 2022 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu thực khóa luận Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn - Viện Dược liệu Bộ môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội, em nhận nhiều quan tâm, hỗ trợ giúp đỡ quý báu từ Thầy Cơ, gia đình bạn bè Lời đầu tiên, tất lòng chân thành, em xin bày tỏ biết ơn sâu sắc tới: TS Hà Vân Oanh, người nhà giáo đáng kính, người dẫn dắt định hướng em đến với nghiên cứu khoa học, cô tạo điều kiện, quan tâm hỗ trợ em nhiều suốt q trình thực khóa luận ThS Hồng Thị Diệu Hương, người ln tận tình hướng dẫn, quan tâm, bảo, truyền động lực cho em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS TS Đỗ Thị Hà, ThS Nguyễn Thị Thu, ThS Vũ Thị Diệp, Dược sĩ Nguyễn Trà My nhà khoa học Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn - Viện Dược liệu tạo điều kiện sở vật chất nhiệt tình giúp đỡ em mặt từ ngày đầu thực khóa luận hoàn thành Những tháng ngày nghiên cứu Viện Dược liệu giúp em trưởng thành hoàn thiện thân kiến thức lẫn kỹ sống Em xin cảm ơn đề tài "Nghiên cứu phân lập phát triển phương pháp định lượng chất đánh dấu HPLC dược liệu chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume)" - Đề tài nghiên cứu cấp sở Viện Dược liệu, Bộ Y tế tạo điều kiện hỗ trợ kinh phí để em thực đề tài Em xin gửi biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè ln sát cánh, động viên, giúp đỡ để em hồn thành đề tài khóa luận Cuối cùng, em xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu toàn thể Thầy Cô giáo, cán Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện dạy dỗ em suốt khoảng thời gian học tập trường Em xin kính chúc Thầy Cơ ln mạnh khỏe công tác tốt Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Trần Huyền Trang MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Jasminum 1.1.1 Vị trí, phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Sinh thái phân bố 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng sinh học 1.1.6 Công dụng 1.2 Tổng quan Chè vằng 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân bố 1.2.2 Thành phần hóa học 10 1.2.3 Tác dụng sinh học 11 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Đối tượng nghiên cứu 13 2.2 Hóa chất, dung mơi 13 2.3 Máy móc, trang thiết bị nghiên cứu 14 2.4 Nội dung nghiên cứu 14 2.5 Phương pháp nghiên cứu 14 2.5.1 Phương pháp định tính nhóm chất thường gặp mẫu dược liệu 14 2.5.2 Phương pháp chiết xuất 17 2.5.3 Phương pháp phân lập hợp chất 18 2.5.4 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 20 CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu thường gặp có dược liệu 21 3.2 Kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 21 3.2.1 Kết chiết xuất phân lập 21 3.2.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 25 3.3 Bàn luận 29 3.3.1 Về kết định tính 29 3.3.2 Về kết chiết xuất 29 3.3.3 Về kết phân lập hợp chất 30 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 33 Kết luận 33 Kiến nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC 43 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Ký hiệu, chữ viết tắt 13 C-NMR Tiếng Anh Tiếng Việt Carbon 13 Nuclear Phổ cộng hưởng từ hạt Magnetic Resonance nhân cacbon 13 Spectroscopy H-NMR Proton Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt Resonance Spectroscopy nhân proton br s Broad singlet br d Broad doublet d Doublet dd Doublet of doublets m Multiplet J Hằng số tương tác (đơn vị Hz) δ Độ dịch chuyển hóa học (đơn vị ppm) 10 CTCT Công thức cấu tạo 11 DCM Dicloromethan 12 DEPT Distortionless Phổ DEPT Enhancement by Polarization Transfer 13 DL Dược liệu 14 DM Dung môi 15 DPPH 2,2-Diphenyl-1picrylhydrazyl 16 ESI-MS Electronspray Ionization Phổ khối ion hóa phun mù Mass Spectrum điện tử 17 EtOH Ethanol 18 EtOAc Ethyl acetat 19 IC50 Inhibitory Concentration at 50% Nồng độ ức chế 50% 20 GAE Gallic acid equivalent Đương lượng acid gallic chuẩn 21 HMBC Heteronuclear Multiple Phổ tương tác dị hạt nhân Bond Correlation 22 MeOH Methanol 23 MIC Minimum Inhibitory qua nhiều liên kết Nồng độ ức chế tối thiểu Concentration Khối lượng/điện tích 24 m/z 25 PCA Acid protocatechuic 26 QE Quercetin equivalent Đương lượng quercetin chuẩn 27 SKLM Sắc ký lớp mỏng 28 SKC Sắc ký cột 29 STT Số thứ tự 30 SC50 31 TLC Scavenging Concentration Nồng độ trung hòa at 50% 50% gốc tự DPPH Thin Layer Sắc ký lớp mỏng Chromatography 32 TLTK Tài liệu tham khảo 33 TT Thuốc thử 34 v/v Thể tích/thể tích 35 v/v/v Thể tích/thể tích/thể tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số hợp chất iridoid glycosid phân lập từ chi Jasminum Bảng 1.2 Một số hợp chất nhóm flavonoid có chi Jasminum Bảng 1.3 Một số hợp chất phenol có chi Jasminum Bảng 1.4 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm chi Jasminum Bảng 1.5 Một số hợp chất phân lập từ Chè vằng 10 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất thường gặp Chè vằng 21 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất JS1 acid protocatechuic 26 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ JS2 verbascosid 27 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Cấu trúc hóa học số hợp chất nhóm sesquiterpenoid có chi Jasminum Hình 1.2 Cấu trúc hóa học số hợp chất nhóm phenylethanoid glycosid có chi Jasminum Hình 1.3 Cấu trúc hóa học số hợp chất có tinh dầu loài thuộc chi Jasminum Hình 2.1 Thân Chè vằng 13 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ thân Chè vằng 23 Hình 3.2 Sắc ký đồ hợp chất phân lập 24 Hình 3.3 Sơ đồ quy trình phân lập hai hợp chất JS1 JS2 25 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất JS1 26 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC (→) hợp chất JS2 29 ĐẶT VẤN ĐỀ Với lợi điều kiện tự nhiên khí hậu, Việt Nam có nguồn tài nguyên thực vật phong phú đa dạng, bao gồm nhiều loại dùng làm thuốc chữa bệnh cho người Theo "Danh lục thuốc Việt Nam", tính đến cuối năm 2015, tổng số loài thuốc biết Việt Nam đạt tới số 5117 loài loài, thuộc 1823 chi, 360 họ ngành thực vật bậc cao có mạch, với số taxon thuộc nhóm Rêu, Tảo Nấm lớn [12] Tuy vậy, loài làm thuốc sử dụng chủ yếu theo kinh nghiệm dân gian theo y học cổ truyền mà chưa nghiên cứu cách đầy đủ Hiện nay, xu hướng sử dụng dược phẩm có nguồn gốc tự nhiên ngày tăng, điều cho thấy việc nghiên cứu phát triển sản phẩm thuốc từ dược liệu hướng đầy hứa hẹn ngành y dược Việt Nam Chè vằng có tên khoa học Jasminum subtriplinerve Blume, họ Nhài (Oleaceae) thuốc quen thuộc với người dân Việt Nam Chè vằng sử dụng từ lâu dân gian với tác dụng bật chống nhiễm trùng, lợi sữa phụ nữ sau sinh, trị mụn nhọt, mẩn ngứa,… Ở số địa phương, nhân dân dùng nước nấu từ Chè vằng để uống ngày thay cho trà xanh Tuy nhiên, sử dụng rộng rãi tới nay, số lượng nghiên cứu nước thành phần hóa học hoạt tính sinh học Chè vằng cịn hạn chế Do đó, để góp phần bổ sung vào sở liệu thành phần hóa học Chè vằng, đề tài "Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ dược liệu chè vằng (Jasminum subtriplinerve Blume)" thực với mục tiêu: Định tính nhóm chất thường gặp có thân Chè vằng phản ứng hóa học đặc trưng Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc  hợp chất từ thân Chè vằng CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Jasminum L 1.1.1 Vị trí, phân loại Theo hệ thống phân loại thực vật Takhtajian (2009), chi Jasminum L thuộc: Phân giới thực vật bậc cao Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Bộ Nhài (Oleales) Họ Nhài (Oleaceae) Chi Nhài (Jasminum L.) [74] 1.1.2 Đặc điểm thực vật Cây gỗ mọc thẳng bụi rậm rạp, thường xanh rụng Cành nhỏ có góc cạnh có rãnh Lá đối so le, có lơng, đơn, kép có chét, kép lơng chim lẻ; cuống thường có khớp Cụm hoa thường cụm hoa xim, cụm hoa kép, cụm hoa vô hạn dạng ngù, tán, đầu; bắc hình dùi thon dài, đơi có dạng Hoa lưỡng tính, thường có mùi thơm Đài hoa hình chng, hình chén hình phễu,  16 thùy Tràng hoa màu trắng vàng, có màu đỏ tím, hình đinh hình phễu,  16 thùy Nhị 2, đính vào khoảng ống tràng hoa; nhị ngắn; bao phấn đính lưng, hướng Nỗn  vị trí, núm nhụy hình đầu chia thùy Quả mọng, mọc kép (2 phân quả) nửa khơng phát triển Hạt khơng có nội nhũ; rễ mầm hướng xuống [85] 1.1.3 Sinh thái phân bố Chi Jasminum L có 197 lồi, phân bố rộng khắp giới Phạm vi địa chi Jasminum L bao gồm vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới giới cũ đến miền trung Trung Quốc khu vực Thái Bình Dương Ngày nay, chúng du nhập vào Châu Âu, khu vực Caribe, Nam Mỹ, Trung Mỹ, Hoa Kỳ [41] Ở Việt Nam, họ Oleaceae có khoảng gần 74 lồi, phân lồi thứ thuộc chi, số loài nhiều thuộc chi Jasminum L với 37 loài, lồi thứ Trong đó, có lồi đặc hữu Việt Nam: Nhài Hạ Long (Jasminum alongense Gagnep.), Nhài eberhardt (Jasminum eberhardtii Gagnep.), Nhài hoa thưa (Jasminum laxiflorum Gagnep.), Nhài cọng (Jasminum pedunculatum Gagnep.), Nhài Việt Nam (Jasminum vietnamense B H Quang & Joongku Lee) [3] Phụ lục 4.3 Phổ HMBC hợp chất JS2 Phụ lục 4.4 Phổ DEPT hợp chất JS2 Phụ lục 4.5 Phổ ESI-MI hợp chất JS2 PHỤ LỤC 5: PHIẾU KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH MẪU CHÈ VẰNG BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN HUYỀN TRANG CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ DƯỢC LIỆU CHÈ VẰNG (Jasminum subtriplinerve Blume) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2022 ... acid phenolic,… (Bảng 1.5) Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập từ Chè vằng trình bày Phụ lục 1.3 Bảng 1.5 Một số hợp chất phân lập từ Chè vằng Nhóm Tên hợp chất TLTK Anatoliosid A (64) 6′′′-Epi-anatoliosid... hai hợp chất acid protocatechuic verbascosid mà khóa luận phân lập từ dược liệu Chè vằng hợp chất có tiềm y học 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau thời gian tiến hành nghiên cứu, khóa luận. .. Bảng 1.5 Một số hợp chất phân lập từ Chè vằng 10 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất thường gặp Chè vằng 21 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất JS1 acid protocatechuic 26 Bảng 3.3 Dữ liệu