kháng nguyên hla dr2 trên bệnh nhân lupus đỏ hệ thống

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG KHÁNG NGUYÊN HLA-DR2 TRÊN BỆNH NHÂN LUPUS ĐỎ HỆ THỐNG Mã số: Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS VĂN THẾ TRUNG Tp Hồ Chí Minh, 04/2018 DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI VÀ ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH PGS.TS Văn Thế Trung BS Phạm Thị Uyển Nhi MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BẢNG ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH – VIỆT DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH – SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Mục tiêu tổng quát Mục tiêu chuyên biệt CHƯƠNG 1.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ LUPUS BAN ĐỎ HỆ THỐNG 1.1.1 Đại cương 1.1.2 Dịch tễ 1.1.3 Sinh bệnh học 1.1.4 Dấu hiệu lâm sàng - Cận lâm sàng 10 1.1.5 Tiêu chuẩn chẩn đoán Lupus đỏ hệ thống 16 1.2 HLA-DR2 22 1.2.1 Đại cương 22 1.2.2 Tổ chức gen hệ HLA 22 1.2.3 Cấu trúc - Chức phân tử HLA nhóm II 23 1.2.4 Kháng nguyên HLA-DR2 24 1.2.5 Mối tương quan HLA DR2 lupus đỏ hệ thống 26 1.3 Kỹ thuật định lượng HLA-DR2 PCR-SSP 30 1.3.1 Dòng tế bào 30 1.3.2 Mã hóa HLA-DR huyết 30 1.3.3 Tách chiết DNA 30 1.3.4 Phân tích Southern blot 31 1.3.5 Mã hóa TaqI DRB, DQA DQB RFLP 31 1.3.6 Khuếch đại đoạn mồi 31 1.3.7 Đoạn mồi để khuếch đại allen DRB1 31 1.3.8 Khuếch đại đoạn mồi chứng 32 1.3.9 Khuếch đại PCR nhóm allen đặc hiệu DRB1 32 1.3.10 Hình ảnh khuếch đại điện di agarose gel 33 1.4 Một số nghiên cứu 35 CHƯƠNG 2.ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 37 2.1.1 Dân số mục tiêu 37 2.1.2 Dân số chọn mẫu 37 2.2 TIÊU CHUẨN CHỌN MẪU 37 2.2.1 Tiêu chuẩn nhận vào 37 2.2.2 Tiêu chuẩn loại trừ 37 2.3 CÁCH CHỌN MẪU 38 2.4 ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 38 2.5 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 38 2.6 CỠ MẪU 38 2.7 BIẾN SỐ NGHIÊN CỨU 39 2.8 SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU 47 2.9 QUY TRÌNH KỸ THUẬT LẤY MẪU 48 2.9.1 Quy trình lấy mẫu 48 2.9.2 Kỹ thuật thực 49 2.10 PHƯƠNG PHÁP THU THẬP SỐ LIỆU 49 2.10.1 Vật liệu nghiên cứu 49 2.10.2.Kỹ thuật thu thập số liệu 2.11 49 VẤN ĐỀ Y ĐỨC 50 CHƯƠNG 3.KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 51 3.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA MẪU NGHIÊN CỨU 51 3.2 Một số yếu tố liên quan, lâm sàng, cận lâm sàng bệnh Lupus đỏ hệ thống 52 3.2.1 Đặc điểm dịch tễ 52 3.2.2 Triệu chứng lâm sàng 58 3.2.3 Một số đặc điểm cận lâm sàng: 62 3.3 Tỉ lệ kháng nguyên HLA-DR2 nhóm bệnh nhân lupus đỏ hệ thống 68 3.4 Mối liên quan kháng nguyên HLA-DR2 số đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng - miễn dịch học 68 3.5 HLA-DR2 tổn thương thận lupus 70 CHƯƠNG 4.BÀN LUẬN 71 4.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA MẪU NGHIÊN CỨU 71 4.1.1 Giới tính 71 4.1.2 Tuổi 72 4.1.3 Nơi bệnh nhân 73 4.1.4 Dân tộc 74 4.1.5 Nghề nghiệp 74 4.1.6 Trình độ học vấn: 74 4.2 ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG CỦA BỆNH NHÂN LUPUS ĐỎ HỆ THỐNG TRONG NGHIÊN CỨU NÀY 75 4.2.1 Tuổi khởi phát bệnh 75 4.2.2 Thời gian bệnh 75 4.2.3 Thời gian tiếp xúc ánh nắng hàng ngày năm qua: 76 4.2.4 Chỉ số khối thể BMI 76 4.2.5 Thuốc điều trị 77 4.2.6 Tiền gia đình 77 4.2.7 Bệnh lý nội khoa mạn tính kèm 78 4.2.8 Đặc điểm triệu chứng lâm sàng 78 4.2.9 Sang thương da lupus 80 4.3 ĐẶC ĐIỂM CẬN LÂM SÀNG CỦA BỆNH NHÂN LUPUS ĐỎ HỆ THỐNG TRONG NGHIÊN CỨU NÀY 81 4.3.1 Đặc điểm nước tiểu bệnh nhân lups đỏ hệ thống nghiên cứu 81 4.3.2 Đặc điểm huyết học 82 4.3.3 Đặc điểm bổ thể C3 C4 83 4.3.4 Đặc điểm kháng thể kháng nhân 83 4.3.5 Đặc điểm Anti-dsDNA 84 4.3.6 Đặc điểm xét nghiệm Coomb trực tiếp 85 4.3.7 Đặc điểm tổn thương thận 85 4.4 KHÁNG NGUYÊN HLA-DR2 TRÊN BỆNH NHÂN LUPUS ĐỎ HỆ THỐNG 87 4.4.1 Kháng nguyên HLA-DR2 đặc điểm lâm sàng-cận lâm sàng 87 4.4.2 Kháng nguyên HLA-DR2 bệnh lupus đỏ hệ thống 87 4.4.3 Kháng nguyên HLA-DR2 tổn thương thận lupus 89 KẾT LUẬN 90 KIẾN NGHỊ 92 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC TỜ ĐỒNG Ý THAM GIA NGHIÊN CỨU PHỤ LỤC BẢN THÔNG TIN DÀNH CHO CHO ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU PHỤ LỤC BẢNG THU THẬP SỐ LIỆU PHỤ LỤC 4: DANH SÁCH NGHIÊN CỨU PHỤ LỤC 5: QUY TRÌNH XỬ LÝ MẪU PHỤ LỤC HÌNH ẢNH ĐIỆN DI PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH BỆNH NHÂN LUPUS ĐỎ TRONG NGHIÊN CỨU DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ đầy đủ ACR American College of Rheumatology ANA Antinuclear antibodies Anti-dsDNA Anti-double stranded DNA AP Antiphospholipid syndrome ARA American Rheumatology Association BMI Body Mass Index BN Bệnh nhân ĐHYD Đại học Y dược ECG Electrocardiography ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay HB Hồng ban HGB Hemoglobin HLA Human leucocyte antigen HLA-DR2 Human leucocyte antigen-DR2 HPA Hypothalamo–pituitary–adrenal axis IG Immunoglobulin IL Interleukin ISN/RPS International Society of Nephrology/Renal Pathology Society MCH Major histocompatibility complex NC Nghiên cứu NK Natural killer NST Nhiễm sắc thể RPR Rapid plasma reagin RR Relative risk SLE Systemic lupus erythematosus SLICC The Systemic Lupus International Collaborating Clinics Tb Tế bào TPHCM Thành phố Hồ Chí Minh TNFs Ttumor necrosis factors TT Tổn thương TT SHPT Trung tâm Sinh học phân tử UCMD Ức chế miễn dịch VD Ví dụ XN Xét nghiệm BẢNG ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH – VIỆT TIẾNG ANH Chữ viết tắt ACR TIẾNG VIỆT Thuật ngữ American College of Ủy ban thấp khớp Hoa Kỳ Rheumatology ADA ANA Anti-dsDNA APS ARA American Diabetes Hiệp hội đái tháo đường Hoa Association Kỳ Anti-nucleosome Kháng thể kháng nhân antibody Anti-double stranded Kháng thể kháng DNA sợi đôi DNA Antiphospholipid Hội chứng kháng phospholipid Syndrome American Rheumatology Hội thấp khớp Hoa Kỳ Association BMI Body Mass Index Chỉ số khối thể ECG Electrocardiogram Điện tâm đồ Enzime Linked Điện di miễn dịch liên kết men ELISA Immunosorbent Assay FPG Fasting plasma glucoce Đường huyết lúc đói HCQ Hydroxy Chloroquine Thuốc kháng sốt rét tổng hợp Human Leucocyte Kháng nguyên bạch cầu người HLA HLA-DR2 Antigen Human Leucocyte Kháng nguyên HLA-DR2 antigen DR2 HPA IDF IFG IG IGT IL ISN/RPS Hypothalamus- Pituitary Trục hạ đồi – tuyến yên – – Adrenal cortex tuyến thượng thận International Diabetes Hiệp hội đái tháo đường quốc Federation tế Impaired fasting glucose Rối loạn dung nạp glucose lúc đói Immunoglobulin Immunoglobulin Impaired Glucose Giảm dung nạp glucose Tolerance Interleukin Interleukin International Society of Hiệp hội quốc tế thận học Nephrology Hiệp hội bệnh thận Renal Pathology Society HGB MHC NK OGTT PHC4 Hemoglobin Huyết sắc tố Major Histocompatibility Phức hợp tương thích mơ chủ Complex yếu Natural Killer Natural killer Oral Glucose Tolerance Nghiệm pháp dung nạp glucose Test đường uống Pennsylvania Health Care Hội đồng kiểm sốt chi phí Cost Containment Council chăm sóc y tế Pennsylvania RPG Random Plasma Glucose Đường huyết RPR Rapid Plasma Reagin Reagin huyết nhanh RR Relative Risk Nguy tương đối 45 Võ Thị Thùy L 34 Nữ 2160122652 Nội thận 46 Trần Thị K 25 Nữ 2160122867 Nội thận 47 Nguyễn Thị Thu T 26 Nữ 2160122315 Nội thận 48 Trần Thị Thu T 33 Nữ 1607016006 PKT 49 Phạm Hoàng Anh T 21 Nữ 1311000864 PKCXK 50 Trương Thanh H 20 Nữ 1611002871 PKCXK 51 Hồ Thị H 44 Nữ 1203008012 PKCXK 52 Phạm Thị Tuyết M 35 Nữ 1004014941 PKCXK 53 Nguyễn Thị Bạch Đ 50 Nữ 1003024178 PKCXK 54 Huỳnh Thị N 59 Nữ 1408004792 PKCXK 55 Phạm Thị N 54 Nữ 1611003043 PKCXK 56 Nguyễn Thị Tố N 63 Nữ 1510013404 PKCXK 57 Phạm Thị Bích T 36 Nữ 1212017539 PKCXK 58 Nguyễn Thị Mỹ H 24 Nữ 1607006186 PKCXK 59 Thái Hoàng P 30 Nam 1004019796 PKCXK 60 Phạm Thị Kim T 46 Nữ 1209014862 PKCXK 61 Phạm Thị Ngọc A 18 Nữ 1608012513 PKCXK 62 Nguyễn Thị N 39 Nữ 1004004594 PKCXK 63 Nguyễn Thị H 28 Nữ 1612006630 PKCXK 64 Nguyễn Thị N 38 Nữ 1011025461 PKCXK 65 Tơ Hồng N 57 Nam 1505018447 PKCXK 66 Thân Thị T 33 Nữ 1512021946 PKCXK 67 Nguyễn Hiếu N 21 Nữ 1503002254 PKCXK 68 Trịnh Thị Hương L 26 Nữ 1510000871 PKCXK 69 Đỗ Thị Cẩm V 34 Nữ 1502011543 PKCXK 70 Nguyễn Thị N 52 Nữ 1204019169 PKCXK 71 Hồ Thị Kim P 44 Nữ 1003023558 PKCXK 72 Bùi Thị Ngọc T 38 Nữ 1605019933 PKCXK 73 Nguyễn Thị Hồng C 34 Nữ 1611021430 PKCXK 74 Nguyễn Thị Đ 23 Nữ 1004018692 PKT 75 Nguyễn Thị Diệu T 25 Nữ 1406023865 PKT 76 Nguyễn Trương Mạnh 20 Nữ 1204018736 PKT 49 Nữ 1407005119 PKT G 77 Nguyễn Thị Lệ T 78 Phạm Thị Ngọc A 33 Nữ 1106002685 PKT 79 Nguyễn Phương A 23 Nữ 1602005276 PKT 80 Võ Kim E 43 Nữ 1609011127 PKT DANH SÁCH NHÓM CHỨNG HỌ VÀ TÊN STT TUỔI GIỚI Nguyễn Phan Trâm O 25 Nữ Hàn Cẩm N 43 Nữ Nguyễn Thị Thùy D 25 Nữ Mạch V 28 Nữ Nguyễn Phương Khánh T 41 Nữ Mai T 26 Nữ Văn Bảo N 28 Nữ Tchiu Bích X 30 Nữ Nguyễn Thị Thanh P 32 Nữ 10 Phạm Thu Y 39 Nữ 11 Nguyễn Thị Bích L 54 Nữ 12 Nguyễn Thị Ngọc Q 33 Nữ 13 Nguyễn Thị Ngọc V 34 Nữ 14 Trần Mỹ H 36 Nữ 15 Nguyễn Thị Kiều O 23 Nữ 16 Nguyễn Đào Uyên T 23 Nữ 17 Nguyễn Thị Kim C 42 Nữ 18 Nguyễn Ngọc T 25 Nữ 19 Lê Thị Kim C 21 Nữ 20 Dương Thảo V 21 Nữ 21 Nguyễn Lê Thụy K 21 Nữ 22 Trương Mỹ C 21 Nữ 23 Vũ Thị Như Q 21 Nữ 24 Đỗ Thị T 21 Nữ 25 Đỗ Thị Thanh N 37 Nữ 26 Phan Thị A 43 Nữ 27 Đinh Thị T 38 Nữ 28 Huỳnh Thị H 57 Nữ 29 Trần Thế V 41 Nam 30 Dương Lê T 30 Nam PHỤ LỤC 5: QUY TRÌNH XỬ LÝ MẪU QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA TỪ MÁU (PROMEGA) QUY TRÌNH PCR 10X PCR buffer : 1.5µl 98oC - 3min 2.5µM Dntp : 1.5µl 98oC - 10s Primer F (10µM) : 0.75µl 65oC - 50s Primer R (10µM) : 0.75µl 72oC - 20s Takara Taq HS : 0.1µl 72oC - 2m Nƣớc cất khử ion : 8.4µl gDNA : 2µl Tổng : 15µl x30 Hold 4oC (giữ lạnh) QUY TRÌNH TINH SẠCH SẢN PHẨM Exonuclease : 0.5µl 37oC – 15m Alkaline Phosphatase : 0.5µl 80oC – 15m Nƣớc cất khử ion : 1µl Hold 4oC Sản phẩm PCR : 5µl ĐIỆN DI-ĐỌC KẾT QUẢ PHỤ LỤC HÌNH ẢNH ĐIỆN DI PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH BỆNH NHÂN LUPUS ĐỎ TRONG NGHIÊN CỨU BN Phạm Thị Tuyết M ; nữ, SN 1982 Sang thƣơng da dạng vảy nến/ SLE BN Nguyễn Thị Bạch Đ ; nữ, SN 1967 Hồng ban dạng đĩa lan tỏa + Hồng ban dạng đĩa khu trú niêm mạc miệng BN Trƣơng Thanh H ; nữ, SN 1997 Hồng ban cánh bƣớm + Rụng tóc lan tỏa không sẹo + Hồng ban dạng đĩa khu trú niêm mạc + Loét miệng BN Nguyễn Ngọc Thúy A ; nữ, SN 1999 Hoại tử ngón tay-Hoại tử thƣợng bì/SLE BN Đỗ Thị T ; nữ, SN 1980 Phát ban dát sẩn lupus BN Lê Thị Thúy D ; nữ, SN 1986 Phát ban dát sẩn lupus+Hồng ban dạng đĩa khu trú lan tỏa ... 85 4.4 KHÁNG NGUYÊN HLA- DR2 TRÊN BỆNH NHÂN LUPUS ĐỎ HỆ THỐNG 87 4.4.1 Kháng nguyên HLA- DR2 đặc điểm lâm sàng-cận lâm sàng 87 4.4.2 Kháng nguyên HLA- DR2 bệnh lupus đỏ hệ thống ... với bệnh, có hệ thống kháng nguyên bạch cầu người HLA Từ năm 1970, hệ gen HLA xác định có liên quan đến bệnh lupus ban đỏ hệ thống Bảy allen HLA lớp II liên quan chặt chẽ với bệnh lupus ban đỏ hệ. .. học bệnh nhân lupus đỏ hệ thống - Xác định tỉ lệ mối liên quan kháng nguyên HLA DR2 với đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng miễn dịch học nhóm bệnh nhân lupus đỏ hệ thống - Xác định mối liên quan HLA- DR2