Tuyển chọn vi khuẩn bacillus SP có khả năng đối kháng nấm mốc sinh aflatoxin trên hạt nông sản

Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ,ĐỒ THỊ, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH vi MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Tình hình nghiên cứu Mục đích Mục tiêu đồ án Phương pháp nghiên cứu a) Phương pháp luận b) Phương pháp xử lý số liệu Nội dung đồ án Kết cấu đồ án CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nấm Aspergillus flavus 1.1.1 Hình thái 1.1.2 Sinh thái 1.1.3 Thành tế bào 1.2 Độc tố aflatoxin 11 1.2.1 Lịch sử phát aflatoxin 11 1.2.2 Các lồi có khả sinh độc tố 12 1.2.3 Cơ chất môi trường 14 1.2.4 Cấu trúc tính chất aflatoxin 18 1.2.5 Cơ chế gây độc aflatoxin 20 1.2.6 Độc tính aflatoxin 21 1.2.7 Giới hạn mức cho phép độc tố aflatoxin 24 1.2.8 Tình hình nhiễm độc aflatoxin 26 1.3 Các phương pháp phát Aflatoxin 27 1.3.1 Phương pháp phát quang sinh học (Hamed K.Abass cộng sự, 2004) 27 1.3.2 Phát đường lý - hoá học 32 i Đồ án tốt nghiệp 1.3.3 Các phương pháp định lượng 35 1.4 Phương pháp khử nhiễm aflatoxin 37 1.4.1 Phương pháp vật lý học 37 1.4.2 Phương pháp hóa học 38 1.4.3 Phương pháp sinh học: 39 CHƯƠNG II: MỤC TIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 41 2.1 Vật liệu – thiết bị – hóa chất 41 2.1.1 Vật liệu 41 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 41 2.1.3 Mơi trường - Hóa chất 41 2.2 Phương pháp nghiên cứu 43 2.2.1 Mục tiêu 43 2.2.2 Mục đích nghiên cứu 43 2.2.3 Nội dung 43 2.2.4 Phương pháp nghiên cứu 43 2.2.5 Bố trí thí nghiệm 44 3.1 Phân lập nấm sinh aflatoxin từ sản phẩm nông nghiệp 55 3.1.1 Phân lập nấm từ sản phẩm nông nghiệp khảo sát đặc điểm hình thái 55 3.1.2 Khảo sát hình thái nấm phân lập mơi trường phân biệt AFPA 57 3.1.3 Khảo sát khả sinh aflatoxin chủng nấm phân lập 58 3.1.4 Định tính aflatoxin phương pháp HPLC 60 3.2 Danh sách chủng vi khuẩn Bacillus spp có sẵn từ nguồn nông sản dễ nhiễm mốc đất trồng 61 3.3 Tuyển chọn vi khuẩn tổng hợp hợp chất kháng nấm sinh aflatoxin 62 3.3.1 Khảo sát vi khuẩn có khả kháng nấm đồng nuôi cấy với nấm sinh aflatoxin 62 3.3.2 Chọn lọc chủng có khả tổng hợp chất kháng nấm mạnh 65 3.3.3 Phương pháp đối kháng sử dụng dịch ni cấy có tơ nấm làm chất cảm ứng 65 3.4 Khảo sát đặc điểm VK chọn lọc xác định sản phẩm trao đổi chất kháng nấm 68 3.4.1 Khảo sát hình thái, sinh lý, sinh hóa khả sinh enzyme ngoại bào chủng VK chọn lọc 68 3.4.2 Xác định tác nhân đối kháng nấm mốc 71 ii Đồ án tốt nghiệp 3.5 Khảo sát khả sử dụng sản phẩm trao đổi chất chủng CS1b bảo quản hạt phương pháp tạo màng bao 77 KẾT LUẬN, KIẾN NGHỊ 82 Kết luận 82 Kiến nghị 83 TÀI LIỆU THAM KHẢO 84 PHỤ LỤC iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC VIẾT TẮT AFPA: Aspergillus flavus and parasiticus agar EA: ethyl acetate NA: Nutrient agar NB: Nutrient broth MT: Môi trường PDA: Potato dextrose agar HPLC: High pressure liquid chromatography TLC: Thin layer chromatography UV: Ultraviolet VK: vi khuẩn iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Các thành phần thành tế bào số nấm Bảng 1.2 : Thành phần màng nguyên sinh chất Bảng 1.3: Một số lồi nấm mốc có khả sinh Aflatoxin 13 Bảng 1.4: Ảnh hưởng chủng Asp flavus điều kiện nuôi cấy để sản sinh Aflatoxin 16 Bảng 1.5: Ảnh hưởng đường hexose khác lên lượng Aflatoxin sinh 17 Bảng 1.6:Tính chất hóa lý số aflatoxin 20 Bảng 1.7: Ảnh hưởng Aflatoxin có mặt thức ăn đến biểu bệnh lý vật nuôi 22 Bảng 1.8: Giới hạn aflatoxin số nuớc theo tiêu chuẩn FDA 24 Bảng 1.9: Những quy định tạm thời cho phép thức ăn chăn nuôi nguyên liệu làm thức ăn chăn nuôi Việt Nam 25 Bảng 1.10: Các phương pháp khử nhiễm aflatoxin đường sinh học 39 Bảng 2.1: Thành phần dung dịch sử dụng để làm màng bao đậu phộng 53 Bảng 3.1: Khả sinh aflatoxin nấm mốc phân lập sản phẩm nông nghiệp 59 Bảng 3.2: Danh sách chủng vi khuẩn phân lập 62 Bảng 3.3: Tỉ lệ đối kháng trực tiếp chủng vi khuẩn với chủng nấm 63 Bảng 3.4: Tỉ lệ đối kháng (%) chủng VK tuyển chọn chủng nấm CĐP1 theo phương pháp 66 Bảng 3.5: Đặc điểm nuôi cấy vi khuẩn CS1b 68 Bảng 3.6: Đường kính vịng phân giải chất dịch ni cấy CS1b 70 Bảng 3.7: Kết phân tích định tính chất có dung dịch trích ly 71 Bảng 3.8: Đường kính vịng phân giải chất dịch kết tủa protein từ dịch nuôi cấy CS1b 75 Bảng 3.9: Khả ức chế nấm mốc vi khuẩn phát triển hạt đậu phộng bao màng chitosan sản phẩm trao đổi chất CS1b 95 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ,ĐỒ THỊ, SƠ ĐỒ, HÌNH ẢNH Hình 1.1: Hình thái nấm mốc Asp.flavus Hình 1.2: Nấm mốc Asp.flavus hạt đậu phộng Hình 1.3: Cấu tạo Aflatoxin 19 Hình 1.4: Cơ chế tác dụng aflatoxin B1 mức tế bào gan 21 Hình 2.1: Sơ đồ chi tiết phân lập vi nấm sinh aflatoxin từ hạt đậu phộng, đậu nành, cà phê hư hỏng, khảo sát khả sinh aflatoxin chúng 44 Hình 2.2: Sơ đồ bố trí thí nghiệm khảo sát đặc điểm vi khuẩn chọn lọc xác định sản phẩm trao đổi chất có hoạt tính kháng nấm 47 Hình 2.3: Sơ đồ bố trí thí nghiệm khảo sát đặc điểm VK chọn lọc xác định sản phẩm trao đổi chất có hoạt tính kháng nấm 50 Hình 2.4: Sơ đồ thí nghiệm ứng dụng bảo quản hạt đậu phộng màng bao kháng nấm 54 Hình 3.1: Mẫu hạt ni cấy môi trường WA 56 Hình 3.2: Các chủng nấm phân lập PDA 57 Hình 3.3: Kết chạy sắc ký mỏng (TLC) chủng vi nấm phân lập phát phát huỳnh quang chiếu tia UV 254 nm 60 Hình 3.4: Kết định tính aflatoxin phương pháp HPLC 61 Hình 3.5: Kết khẳng định khả sinh tính aflatoxin phương pháp tái nhiễm 62 Hình 3.6: Đồ thị biểu diễn khả đối kháng chủng VK Bacillus spp nấm sinh aflatoxin 65 Hình 3.7: Đồ thị biểu diễn khả đối kháng chủng VK tuyển chọn chủng nấm CĐP1 67 Hình 3.8 : Kết đối kháng vi khuẩn CS1b với nấm mốc CĐP1 sau 72 68 Hình 3.9: Hình thái vi khuẩn CS1b 70 Hình 3.10: Khả tiết enzyme ngoại bào chủng CS1b sau 48 ủ 71 vi Đồ án tốt nghiệp Hình 3.11: Khảo sát khả đối kháng nấm mốc dịch protein kết tủa từ canh trường nuôi cấy vi khuẩn CS1b 74 Hình 3.12: Phát enzyme thu hồi phương pháp kết tủa sử dụng ethanol phương pháp đĩa thạch 75 Hình 3.13: Khảo sát đối kháng cao ethyl acetate phát triển nấm mốc 77 Hình 3.14: Đồ thị biểu diễn khả đối kháng nấm mốc CĐP1 78 Hình 3.15: Theo dõi trình phát triển nấm mốc vi khuẩn hạt đậu phộng bao gói chitosan kết hợp sản phẩm trao đổi chất vi sinh vật Kết coating đậu phộng ngày thứ 10 82 vii Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Trên giới nay, việc nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc độc tố nấm lương thực, thực phẩm vấn đề quan trọng nhằm bảo vệ sức khoẻ người vật nuôi Độc tố aflatoxin chủ yếu loài vi nấm Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus tạo ra, độc tố nguy hiểm thường nhiễm nông sản, gây độc cho người gia súc, gây tác dụng cấp tính, gây tổn thương gan (ung thư gan…), gây quái thai, gây đột biến,…thậm chí với liều lượng cao dẫn tới tử vong Trong nhiều loại aflatoxin tự nhiên aflatoxin B1 coi chất độc nguy hiểm Mặc dù diện Aspergillus flavus lúc gắn liền với việc tồn aflatoxin với hàm lượng gây độc, thể nguy lớn việc nhiễm aflatoxin Ở nước ta, với đặc điểm khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, độ ẩm khơng khí thường cao, thời vụ canh tác, thu hoạch thường rơi vào mùa mưa phương tiện thu hoạch, phơi sấy nông sản kém, kho chứa khơng đảm bảo khơ thống mát điều kiện thuận lợi cho nấm mốc phát triển gây nhiễm độc tố cho thực phẩm thức ăn chăn ni Do việc kiểm sốt dư lượng aflatoxin cần thiết quan trọng Giới hạn mức nhiễm aflatoxin tiêu chuẩn an tồn vệ sinh thực phẩm Để có nhìn tổng quan aflatoxin, ảnh hưởng độc tố lên thể người loài động vật biện pháp phòng tránh việc nhiễm aflatoxin, nhó chúng tơi chọn đề tài: “Tuyển chọn VK Bacillus sp có khả đối kháng nấm mốc sinh aflatoxin hạt nơng sản” Tình hình nghiên cứu Ðã từ lâu độc tố nấm nhà khoa học quan tâm nghiên cứu, kể nước tiên tiến có đời sống cao Tuy nhiên năm 1920-1930 Anh Nga thấy xuất nhiều trường hợp ngộ độc ankaloic người gà mà chất có lúa mạch, lúa mì Năm 1924 Shofield cộng tác phát loại độc tố Đồ án tốt nghiệp sản sinh từ nấm mốc gây dịch bệnh cho gia súc Cũng thời gian Nga tìm bệnh Aleukemic số người ăn phải ngũ cốc bị mốc Ðến năm 1960 nhân vụ dịch làm chết hàng ngàn gà tây quần đảo nước Anh ăn phải lạc thối mốc, nhà khoa học Tây âu tiến hành nghiên cứu phát độc tố Aflatoxin, độc tố tiết từ nấm Aspergillus flavus, parasiticus fumigatus Năm 1961 Anh, người ta tiến hành thực nghiệm chuột cống trong, cho ăn thức ăn nhiễm mốc 20% bột lạc thối, sau tháng thấy xuất ung thư gan Theo thống kê số tác giả nước có đời sống cao châu Âu, với điều kiện khí hậu lạnh khơ tỉ lệ ung thư gan Aflatoxin thấp nhiều so với nước có đời sống thấp khí hậu nóng ẩm châu Phi Robinson nghiên cứu trẻ em Ấn Độ bị xơ gan, phương pháp sấc kí lớp mỏng, ơng tìm thấy Aflatoxin nước tiểu trẻ bị xơ gan sữa bà mẹ có bị xơ gan Như vậy, theo ông xơ gan Aflatoxin có mối quan hệ chặt chẽ với Ở Thái Lan, năm 1967 nhóm nghiên cứu Shank cho thấy mẫu lương thực thực phẩm bị mốc 50-60% số mẫu có Aflatoxin Ðồng thời nhóm tác giả tiến hành thức ăn gia đình (lấy mẫu lương thực thực phẩm gia đình) thấy có 30-50% số mẫu có độc tố aflatoxin Ở Việt Nam có cơng thành cơng bố vế vấn đế Theo kết Viện Vệ Sinh Dịch Tễ nghiên cứu 29381 mẫu lương thực thực phẩm thấy có 30 loại men mốc khác nhau, mốc Aspergillus chiếm tỉ lệ cao (5,2-80,39%) bao gồm 12 chủng loại Aspergillus khác Trong số có 11 chủng có khả sinh độc tố Năm 1984 theo tài liệu Viện dinh dưỡng quốc gia nghiên cứu 200 mẫu gạo bán Hà Nội thấy mẫu có nhiều nấm Aspergillus Flavus loại nấm có khả tạo Aflatoxin Năm 1988, Viện dinh dưỡng thơng báo kết thăm dị Aflatoxin B1 lạc sản phẩm từ lạc sau: Có 7/55 số mẫu lạc nhân có Aflatoxin B1 (13%) 2/6 mẫu xì dầu có Aflatoxin (33%).Theo kết nghiên cứu bước đầu Bộ môn Dinh dưỡng Đồ án tốt nghiệp An toàn thực phẩm (Trường Đại Học Y Hà Nội) kết nghiên cứu 30 mẫu tương ăn 60 mẫu sữa mẹ Hà Nội, kết cho thấy xấp xỉ 30% số mẫu tương có độc tố Aflatoxin; cịn sữa mẹ chưa phát thấy Mục đích - Phân lập VK có khả đối kháng nấm sinh aflatoxin Mục tiêu đồ án - Phân lập vi nấm sinh aflatoxin từ hạt đậu phộng, hạt đậu nành hạt cà phê - Sàng lọc tuyển chọn VK đối kháng nấm sinh aflatoxin Phương pháp nghiên cứu a) Phương pháp luận Có nhiều phương pháp khảo sát khả đối kháng chủng VK với vi nấm sinh afltoxin Trong đó, phương pháp tối ưu sử dụng phương pháp đồng nuôi cấy không ly tâm, phương pháp đồng ni cấy có ly tâm phương pháp sử dụng tơ nấm làm chất cảm ứng Từ kết đối kháng tìm tác nhân đối kháng mà sử dụng trực tiếp tế bào VK b) Phương pháp xử lý số liệu - Sử dụng phần mềm Excel để vẽ đồ thị - Sử dụng phần mềm Statgraphics để xử lý số liệu Nội dung đồ án Nghiên cứu thực sinh viên ( Đỗ Tuyết Mai, Nguyễn Vân Hương) Riêng đồ án tốt nghiệp trình bày Đỗ Tuyết Mai với nội dung sau: - Phân lập vi nấm từ hạt đậu phộng, hạt đậu nành hạt cà phê - Sàng lọc vi nấm sinh aflatoxin - Khẳng định khả sinh aflatoxin vi nấm - Sàng lọc, tuyển chọn định danh sơ VK Bacillus - Khảo sát khả đối kháng VK phân lập với vi nấm sinh aflatoxin mạnh - Khảo sát tác nhân đối kháng từ VK chọn lọc - Khuyến cáo ứng dụng Đồ án tốt nghiệp Within 2201.33 28 78.619 groups Total (Corr.) 14859.6 41 The StatAdvisor Bảng ANOVA chia phương sai liệu thành hai thành phần: thành phần nhóm thành phần nhóm F-Ratio trường hợp 12,3852, tỷ lệ dự tốn nhóm với ước tính nhóm P-value Ftest nhỏ 0,05, có khác biệt đáng kể mặt thống kê phương tiện 14 biến mức độ tin cậy 95,0% Multiple Range Tests Vi khuẩn CS1a 66.0b CS1b 64.0b CS1+ 69.7b VK4 61.0b VK01 20.0a VK02 65.0b VK03 55.0b VK05 64.7b VK06 25.0a VK07 68.0b VK08 32.0a VK09 64.3b VK10 29.7a VK11 62.7b C1.4 Đối với chủng nấm ĐN1 17 Đồ án tốt nghiệp I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% CS CS CS V VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK 1a 1b 1+ K4 01 02 03 05 06 07 08 09 10 11 42 46 47 42 13 16 14 21 13 14 10 31 47 53 40 17 21 17 15 10 15 44 34 47 46 14 36 12 21 12 14 11 11 Summary Statistics Count Average Standard deviation Coeff of Minimum Maximum Range variation CS1a 31.3333 20.232 64.5702% 8.0 44.0 36.0 CS1b 37.0 7.93725 21.452% 31.0 46.0 15.0 CS1 47.0 0.0 0.0% 47.0 47.0 0.0 VK4 47.0 5.56776 11.8463% 42.0 53.0 11.0 VK01 11.6667 3.21455 27.5533% 8.0 14.0 6.0 VK02 25.3333 22.0303 86.9616% 0.0 40.0 40.0 VK03 12.3333 4.50925 36.5615% 8.0 17.0 9.0 VK05 19.3333 2.88675 14.9315% 16.0 21.0 5.0 VK06 14.3333 2.51661 17.5578% 12.0 17.0 5.0 VK07 16.6667 3.78594 22.7156% 14.0 21.0 7.0 VK08 11.3333 1.52753 13.4782% 10.0 13.0 3.0 VK09 10.0 3.4641 34.641% 8.0 14.0 6.0 VK10 12.0 2.64575 22.0479% 10.0 15.0 5.0 VK11 5.0 4.58258 91.6515% 0.0 9.0 9.0 Total 42 21.4524 15.3912 71.7457% 0.0 53.0 53.0 ANOVA Table 18 Đồ án tốt nghiệp Source Sum of Df Mean Squares Between F-Ratio P-Value 7.44 0.0000 Square 7531.07 13 579.313 2181.33 28 77.9048 groups Within groups Total (Corr.) 9712.4 41 The StatAdvisor Bảng ANOVA chia phương sai liệu thành hai thành phần: thành phần nhóm thành phần nhóm F-Ratio trường hợp 7,43617, tỷ lệ dự tốn nhóm với ước tính nhóm P-value Ftest nhỏ 0,05, có khác biệt đáng kể mặt thống kê phương tiện 14 biến mức độ tin cậy 95,0% 19 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests Vi khuẩn CS1a 31.3cd CS1b 37.0de CS1+ 47.0e VK4 47.0e VK01 11.7ab VK02 25.3bcd VK03 12.3ab VK05 19.3abc VK06 14.3ab VK07 16.7abc VK08 11.3ab VK09 10.0a VK10 12.0ab VK11 5.0a C1.5 Đối với chủng nấm ĐN2 I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% CS CS CS V VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK 1a 1b 1+ K4 01 02 03 05 06 07 08 09 10 11 68 45 40 42 12 17 15 0 55 50 57 60 18 16 22 14 14 64 47 50 55 16 17 22 Summary Statistics Count Average Standard deviation CS1a 62.3333 6.65833 Coeff of Minimum Maximum Range variation 10.6818% 20 55.0 68.0 13.0 Đồ án tốt nghiệp CS1b 47.3333 2.51661 5.31678% 45.0 50.0 5.0 CS1 49.0 17.4367% 40.0 57.0 17.0 8.544 VK4 52.3333 9.29157 17.7546% 42.0 60.0 18.0 VK01 5.33333 6.1101 114.564% 0.0 12.0 12.0 VK02 17.0 1.0 5.88235% 16.0 18.0 2.0 VK03 3.0 2.0 66.6667% 1.0 5.0 4.0 VK05 16.0 1.0 6.25% 15.0 17.0 2.0 VK06 14.6667 12.7017 86.6025% 0.0 22.0 22.0 VK07 4.66667 8.0829 173.205% 0.0 14.0 14.0 VK08 7.33333 5.85947 79.9018% 3.0 14.0 11.0 VK09 0.0 0.0 0.0 0.0 VK10 6.66667 3.21455 48.2183% 3.0 9.0 6.0 VK11 1.33333 2.3094 173.205% 0.0 4.0 4.0 Total 42 20.5 107.642% 0.0 68.0 68.0 0.0 22.0667 21 Đồ án tốt nghiệp ANOVA Table Source Sum of Df Mean Squares Between F-Ratio P-Value 38.41 0.0000 Square 18904.5 13 1454.19 1060.0 28 37.8571 groups Within groups Total (Corr.) 19964.5 41 The StatAdvisor Bảng ANOVA chia phương sai liệu thành hai thành phần: thành phần nhóm thành phần nhóm F-Ratio trường hợp 38,4126, tỷ lệ dự toán nhóm với ước tính nhóm P-value Ftest nhỏ 0,05, có khác biệt đáng kể mặt thống kê phương tiện 14 biến mức độ tin cậy 95,0% Multiple Range Tests Vi khuẩn CS1a 62.3f CS1b 47.3e CS1+ 49.0e VK4 52.3ef VK01 5.3ab VK02 17.0d VK03 3.0a VK05 16.0cd VK06 14.7bcd VK07 4.7ab VK08 7.3abcd VK09 0.0a 22 Đồ án tốt nghiệp VK10 6.7abc VK11 1.3a C1.6 Đối với chủng nấm ĐN3 I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% CS CS CS V VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK 1a 1b 1+ K4 01 02 03 05 06 07 08 09 10 11 38 28 29 37 12 27 32 31 21 34 34 27 27 31 41 44 32 31 24 31 32 29 29 38 34 29 32 23 25 28 Summary Statistics Count Average Standard deviation Coeff of Minimum Maximum Range variation CS1A 32.3333 5.50757 17.0337% 27.0 38.0 11.0 CS1B 28.0 3.57143% 27.0 29.0 2.0 CS1 29.6667 1.1547 3.89225% 29.0 31.0 2.0 VK4 38.6667 2.08167 5.38362% 37.0 41.0 4.0 VK1 - 19.5533 -234.64% -27.0 12.0 39.0 1.0 8.33333 VK2 35.0 8.544 24.4114% 27.0 44.0 17.0 VK03 - 5.03322 -14.245% -40.0 -30.0 10.0 35.3333 VK05 31.0 1.73205 5.58726% 29.0 32.0 3.0 VK06 4.33333 4.72582 109.057% -1.0 8.0 9.0 VK07 31.3333 0.57735 1.84261% 31.0 32.0 1.0 VK08 -70.0 -3.77964% -73.0 -68.0 5.0 VK09 22.6667 1.52753 6.73908% 21.0 24.0 3.0 VK10 22.3333 13.2035 59.1203% 8.0 34.0 26.0 2.64575 23 Đồ án tốt nghiệp VK11 31.0 3.0 Total 42 13.7619 31.3383 9.67742% 28.0 34.0 6.0 227.718% -73.0 44.0 117.0 ANOVA Table Source Sum of Df Mean Squares Between F-Ratio P-Value 56.76 0.0000 Square 38793.6 13 2984.12 1472.0 28 52.5714 groups Within groups Total (Corr.) 40265.6 41 Bảng ANOVA chia phương sai liệu thành hai thành phần: thành phần nhóm thành phần nhóm Chiếc F-tỷ lệ, mà trường hợp 56,7632, tỷ lệ dự tốn nhóm với ước tính nhóm Pvalue F-test nhỏ 0,05, có khác biệt đáng kể mặt thống kê phương tiện 14 biến mức độ tin cậy 95,0% Multiple Range Tests Vi khuẩn CS1A 32.3ef CS1B 28.0ef CS1+ 29.6ef VK4 38.6f VK1 0.0c VK2 35.0f VK03 0.0b VK05 31.0ef VK06 4.3d VK07 31.3ef 24 Đồ án tốt nghiệp VK08 0.0a VK09 22.7e VK10 22.3e VK11 31.0ef C1.7 Đối với chủng nấm HCP2 I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% I% CS CS CS V VK VK VK VK VK VK VK VK VK VK 1a 1b 1+ K4 01 02 03 05 06 07 08 09 10 11 64 55 57 59 41 55 36 18 16 21 56 58 60 57 12 61 51 14 39 12 15 21 96 56 59 57 12 54 51 37 12 13 20 Summary Statistics Count Average Standard Coeff of Minimum Maximum Range deviation variation 21.166 29.3972% 56.0 96.0 40.0 CS1a 72.0 CS1b 56.3333 1.52753 2.71158% 55.0 58.0 3.0 CS1 58.6667 1.52753 2.60374% 57.0 60.0 3.0 VK4 57.6667 1.1547 2.00237% 57.0 59.0 2.0 VK01 10.0 3.4641 34.641% 6.0 12.0 6.0 VK02 52.0 10.1489 19.5171% 41.0 61.0 20.0 VK03 1.0 1.73205 173.205% 0.0 3.0 3.0 VK05 52.3333 2.3094 4.41287% 51.0 55.0 4.0 VK06 4.66667 8.0829 173.205% 0.0 14.0 14.0 VK07 37.3333 1.52753 4.09159% 36.0 39.0 3.0 VK08 14.0 24.7436% 12.0 18.0 6.0 VK09 14.6667 1.52753 10.4149% 13.0 16.0 3.0 3.4641 25 Đồ án tốt nghiệp VK10 1.0 1.73205 173.205% 0.0 3.0 3.0 VK11 20.6667 0.57735 2.79363% 20.0 21.0 1.0 Total 42 32.3095 25.3035 78.316% 0.0 96.0 96.0 ANOVA Table Source Sum of Df Mean Squares Between F-Ratio P-Value 40.51 0.0000 Square 24925.6 13 1917.36 1325.33 28 47.3333 groups Within groups Total (Corr.) 26251.0 41 The StatAdvisor Bảng ANOVA chia phương sai liệu thành hai thành phần: thành phần nhóm thành phần nhóm F-Ratio trường hợp 40,5075, tỷ lệ dự tốn nhóm với ước tính nhóm P-value Ftest nhỏ 0,05, có khác biệt đáng kể mặt thống kê phương tiện 14 biến mức độ tin cậy 95,0% 26 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests Vi khuẩn CS1a 72.0f CS1b 56.3e CS1+ 58.7e VK4 57.7e VK01 10.0abc VK02 52.0e VK03 1.0a VK05 52.3e VK06 4.7ab VK07 37.3d VK08 14.0bc VK09 14.7bc VK10 1.0a VK11 20.7c C2 Kết đối kháng chủng vi khuẩn chọn lọc với CDP1 C2.1 Sử dụng dịch ly tâm canh trường đồng nuôi cấy I% I% I% I% CS1a CS1b VK4 CS1+ 68 32 64 65 30 63 68 30 63 Summary Statistics Count Average Standard deviation Coeff variation 27 of Minimum Maximum Range Đồ án tốt nghiệp CS1a 3.66667 0.57735 15.7459% 3.0 4.0 1.0 CS1b 67.0 2.58515% 65.0 68.0 3.0 VK4 30.6667 1.1547 3.76533% 30.0 32.0 2.0 CS1 63.3333 0.57735 0.911606% 63.0 64.0 1.0 Total 12 41.1667 27.028 65.6552% 3.0 68.0 65.0 1.73205 ANOVA Table Source Sum of Df Mean Squares Between F-Ratio P-Value 2140.18 0.0000 Square 8025.67 2675.22 10.0 1.25 groups Within groups Total (Corr.) 8035.67 11 Bảng ANOVA chia phương sai liệu thành hai thành phần: thành phần nhóm thành phần nhóm F-Ratio trường hợp 2140.18, tỷ lệ dự tốn nhóm với ước tính nhóm P-value Ftest nhỏ 0,05, có khác biệt đáng kể mặt thống kê phương tiện biến mức độ tin cậy 95,0% Multiple Range Tests Vi khuẩn CS1a 3.7a CS1b 67.0d VK4 30.7b CS1+ 63.3c C2.2 Sử dụng dịch ni cấy có bổ sung tơ nấm làm chất cảm ứng có ly tâm 28 Đồ án tốt nghiệp I% I% I% I% CS1a CS1b VK4 CS1+ 59 61 57 61 58 61 58 60 58 60 57 57 Summary Statistics Count Average Standard Coeff deviation of Minimum Maximum Range variation CS1a 58.3333 0.57735 0.989743% 58.0 59.0 1.0 CS1b 60.6667 0.57735 0.951676% 60.0 61.0 1.0 VK4 57.3333 0.57735 1.00701% 57.0 58.0 1.0 CS1 59.3333 2.08167 3.50843% 57.0 61.0 4.0 Total 12 58.9167 1.62135 2.75194% 57.0 61.0 4.0 ANOVA Table Source Sum of Df Mean Squares Between F-Ratio P-Value 4.56 0.0382 Square 18.25 6.08333 10.6667 1.33333 groups Within groups Total (Corr.) 28.9167 11 Bảng ANOVA chia phương sai liệu thành hai thành phần: thành phần nhóm thành phần nhóm F-Ratio trường hợp 4.56, tỷ lệ dự tốn nhóm với ước tính nhóm P-value F-test nhỏ 0,05, có khác biệt đáng kể mặt thống kê phương tiện biến mức độ tin cậy 95,0% 29 Đồ án tốt nghiệp Multiple Range Tests Vi khuẩn CS1a 58.3a CS1b 60.7b VK4 57.3a CS1+ 59.3ab Summary Statistics Count Average Standard Coeff deviation of Minimum Maximum Range variation CS1a 58.3333 0.57735 0.989743% 58.0 59.0 1.0 CS1b 60.6667 0.57735 0.951676% 60.0 61.0 1.0 VK4 57.3333 0.57735 1.00701% 57.0 58.0 1.0 CS1 59.3333 2.08167 3.50843% 57.0 61.0 4.0 Total 12 58.9167 1.62135 2.75194% 57.0 61.0 4.0 ANOVA Table Source Sum of Df Mean Squares Between F-Ratio P-Value 4.56 0.0382 Square 18.25 6.08333 10.6667 1.33333 groups Within groups Total (Corr.) 28.9167 11 Bảng ANOVA chia phương sai liệu thành hai thành phần: thành phần nhóm thành phần nhóm F-Ratio trường hợp 4.56, tỷ lệ dự toán nhóm với ước tính nhóm P-value F-test 30 Đồ án tốt nghiệp nhỏ 0,05, có khác biệt đáng kể mặt thống kê phương tiện biến mức độ tin cậy 95,0% Multiple Range Tests Vi khuẩn CS1a 58.3a CS1b 60.7b VK4 57.3a CS1+ 59.3ab 31 ... 61 3.3 Tuyển chọn vi khuẩn tổng hợp hợp chất kháng nấm sinh aflatoxin 62 3.3.1 Khảo sát vi khuẩn có khả kháng nấm đồng nuôi cấy với nấm sinh aflatoxin 62 3.3.2 Chọn lọc chủng có khả tổng... sinh aflatoxin - Khẳng định khả sinh aflatoxin vi nấm - Sàng lọc, tuyển chọn định danh sơ VK Bacillus - Khảo sát khả đối kháng VK phân lập với vi nấm sinh aflatoxin mạnh - Khảo sát tác nhân đối kháng. .. lập ii) Phân lập vi khuân Bacillus spp từ nguồn bị nhiễm nấm mốc iii) Khảo sát khả đối kháng VK Bacillus spp với nấm sinh aflatoxin, chọn lọc chủng VK có khả đối kháng mạnh iv) Khảo sát đặc điểm