Khảo sát hiệu quả của probiotic đến các điều kiện môi trường và sức khỏe tôm trong ao nuôi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Phạm Thị Huyền Diệu KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA PROBIOTIC ĐẾN CÁC ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG VÀ SỨC KHỎE TÔM TRONG AO NUÔI LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Phạm Thị Huyền Diệu KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA PROBIOTIC ĐẾN CÁC ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG VÀ SỨC KHỎE TÔM TRONG AO NUÔI Chuyên : Sinh thái học ngành Mã số : 8420120 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHẠM CỬ THIỆN Thành phố Hồ Chí Minh - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công bố luận văn trung thực phần đề tài khoa học công nghệ cấp quốc gia ThS Võ Hồng Phượng làm chủ nhiệm với đề tài “Nghiên cứu tạo chế phẩm vi sinh đối kháng Vibrio spp gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tôm sú tôm thẻ chân trắng” Những số liệu luận văn phép công bố với đồng ý chủ nhiệm đề tài Những thông tin thu thập để sử dụng làm tài liệu tham khảo ghi rõ danh mục tài liệu tham khảo TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2019 TÁC GIẢ LUẬN VĂN Phạm Thị Huyền Diệu LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài luận văn ngồi nỗ lực tơi, tơi xin chân thành cảm ơn TS Phạm Cử Thiện – người giúp đỡ hướng dẫn trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Võ Hồng Phượng – Phó giám đốc Trung tâm quan trắc mơi trường bệnh thủy sản Nam bộ, Viện nghiên cứu ni trồng thủy sản II, người tận tình giúp đỡ, hướng dẫn, tạo điều kiện cho lời khuyên kinh nghiệm quý báu với nhiều kiến thức thời gian vừa qua để hoàn thành đề tài luận văn Qua đây, xin cảm ơn anh Nguyễn Công Thành – Trung tâm tập huấn chuyển giao công nghệ nông nghiệp vùng đồng sơng Cửu Long, tỉnh Sóc Trăng, anh Trần Minh Thiện, chị Nguyễn Thanh Trúc – Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản II chia sẻ kinh nghiệm, khích lệ, hướng dẫn giúp đỡ Tôi xin chân thành cảm ơn q thầy Trường, Phịng Sau đại học, Khoa Sinh học, môn Sinh thái học tạo điều kiện thuận lợi cho thực đề tài luận văn Xin cảm ơn anh Thái Thanh Trung, bạn Trần Minh Trung, bạn sinh viên Cao Vĩnh Nguyên, Nguyễn Thị Minh Hiền, Lê Thị Thùy Trang nhiệt tình giúp đỡ tơi thời gian thực đề tài Sau cùng, xin cảm ơn gia đình, người thân u tơi TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2019 TÁC GIẢ LUẬN VĂN Phạm Thị Huyền Diệu MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN .4 1.1 Tổng quan tôm thẻ tôm sú 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Một số kỹ thuật nuôi tôm 1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Vibrio gây tơm 1.2.1 Bệnh Vibriosis .9 1.2.2 Bệnh hoại tử gan tụy cấp AHPND 10 1.3 Một số biện pháp hạn chế dịch bệnh gan tụy cấp tôm 16 1.4 Chế phẩm vi sinh (probiotic) 17 1.4.1 Khái niệm probiotic 17 1.4.2 Nghiên cứu ứng dụng probiotic 19 Chương 2.PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Thời gian, địa điểm, vật liệu nghiên cứu 24 2.1.1 Thời gian nghiên cứu 24 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 24 2.1.3 Các thiết bị, vật liệu dùng thí nghiệm 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 25 2.2.1 Phương pháp xác định liều gây chết trung bình (LD50) vi khuẩn V parahaemolyticus tôm thử nghiệm 25 2.2.2 Phương pháp thử nghiệm sử dụng probiotic hiệu 27 2.2.3 Phương pháp phân tích số liệu 33 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Hiệu ức chế AHPND tôm sú tôm thẻ chế phẩm probiotic điều kiện phịng thí nghiệm 34 3.1.1 Đánh giá khả gây độc gây bệnh hoại tử gan tụy vi khuẩn V parahaemolyticus 34 3.1.2 Đánh giá hiệu sử dụng probiotic phương pháp cho ăn xử lý nước 37 3.1.3 Tần suất sử dụng hiệu probiotic phương pháp xử lý nước 44 3.2 Bước đầu ứng dụng chế phẩm probiotic mơ hình ao ni tôm sú, tôm thẻ 48 3.2.1 Diễn biến mật độ Vibrio sp tổng số nước ao nuôi thử nghiệm 48 3.2.2 Diễn biến mật độ Vibrio parahaemolyticus ao nuôi thử nghiệm 51 3.2.3 Các tiêu môi trường 56 3.2.4 Thông tin thu hoạch ao thử nghiệm 63 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 PHỤ LỤC Kí hiệu AHPND ANOVA B1 BTNMT CFU CPVS DBSCL ĐC EHP EMS MBV NB NCNTTS NN & PTNT NTTS PCR QC QCCT S5 TCBS TCTS TCVN TN VP WSSV X285 YHD DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm xác định LD50 V parahaemolyticus tôm 26 Bảng 2.2 Thí nghiệm sử dụng chế phẩm probiotic phương pháp cho ăn phương pháp xử lý nước 28 Bảng 2.3 Bố trí thí nghiệm tần suất sử dụng probiotic 29 Bảng 2.4 Bố trí thử nghiệm hiệu sử dụng probiotic mơ hình ao nuôi tôm thẻ thương phẩm 31 Bảng 2.5 Bố trí thử nghiệm hiệu sử dụng probiotic mơ hình ao nuôi tôm sú thương phẩm 31 Bảng 2.6 Phương pháp phân tích mơi trường 32 Bảng 3.1 Kết xác định liều LD50 vi khuẩn V parahaemolyticus tôm thẻ 34 Bảng 3.2 Kết xác định liều LD50 vi khuẩn V parahaemolyticus tôm sú 35 Bảng 3.3 Kết thu hoạch tôm 63 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Tơm thẻ Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) bệnh AHPND có gan tụy nhạt, teo nhỏ, trống ruột 12 Hình 1.2 Tơm sú Penaeus monodon (Fabricius, 1798) bệnh AHPND có khối gan tụy nhạt, teo nhỏ ruột khơng có thức ăn 12 Hình 2.1 Kết đối kháng khuếch tán đĩa chủng Bacillus B1, Bacillus S5 Streptomyces X285 với VP tuyển chọn Hình 3.1 25 Tỷ lệ chết cộng dồn tơm thẻ thí nghiệm xác định liều LD50 vi khuẩn V parahaemolyticus 34 Hình 3.2 Tỷ lệ chết cộng dồn tơm sú thí nghiệm xác định liều LD50 vi khuẩn V parahaemolyticus 36 Hình 3.3 Tỷ lệ chết cộng dồn (%) tôm thẻ phương pháp cho ăn liên tục 14 ngày trước gây cảm nhiểm V parahaemolyticus Hình 3.4 38 Tỷ lệ chết cộng dồn (%) tôm sú cho ăn probiotic liên tục 14 ngày trước gây cảm nhiễm V parahaemolyticus 39 Hình 3.5 Tỷ lệ chết cộng dồn (%) tôm thẻ phương pháp xử lý nước lần/tuần trước công V parahaemolyticus Hình 3.6 Tỷ lệ chết cộng dồn (%) tơm sú phương pháp xử lý nước 2lần/tuần trước công V parahaemolyticus Hình 3.7 41 43 Tỷ lệ chết cộng dồn tôm thẻ chân trắng sau 10 ngày gây cảm nhiễm V parahaemolyticus 45 Hình 3.8 Tỷ lệ chết cộng dồn tôm sú sau 10 ngày gây cảm nhiễm V parahaemolyticus 47 Hình 3.9 Diễn biến Vibrio tổng số nước ao nuôi thử nghiệm tôm thẻ 49 Hình 3.10 Diễn biến Vibrio tổng số nước ao ni thử nghiệm tơm sú 50 Hình 3.11 Diễn biến Vibrio parahaemolyticus nước ao nuôi thử nghiệm tơm thẻ 52 Hình 3.12 Diễn biến Vibrio parahaemolyticus nước ao nuôi thử nghiệm tôm sú 53 Hình 3.13 Diễn biến tổng đạm amon ao ni thử nghiệm tơm thẻ 57 Hình 3.14 Diễn biến tổng đạm amon ao nuôi thử nghiệm tôm sú .58 Hình 3.15 Diễn biến nitrite ao ni thử nghiệm tơm thẻ .59 Hình 3.16 Diễn biến nitrite ao nuôi thử nghiệm tôm sú .60 Hình 3.17 Diễn biến COD ao nuôi thử nghiệm tôm thẻ 61 Hình 3.18 Diễn biến COD ao ni thử nghiệm tôm sú 62 PL 12 Tuần 18 Tuần 19 Vibrio Vibrio xanh vàng Vibri 3900 1000 400 1200 Mật độ Vibrio parahaemolyticus T1 T2 TN3 TN4 ĐC3 120 T 12 T13 T14 300 30 600 1600 PL 13 Các tiêu môi trường tôm thẻ TAN Tuần Ao T1 TN1 0.091 TN2 0.035 ĐC1 0.036 ĐC2 0.057 Nitrite Tuần Ao T1 TN1 0.005 TN2 0.003 ĐC1 0.004 ĐC2 0.002 COD Tuần Ao T1 T2 TN1 14.7 21 TN2 17.4 17 ĐC1 21.1 20 ĐC2 9.3 10 Các tiêu môi trường tôm sú PL 14 TAN Tuần Ao T1 T2 T3 TN3 0.104 0.051 0.133 0.161 TN4 0.225 0.228 0.222 0.448 ĐC3 0.196 0.634 T4 0.117 0.04 Nitrite Tuần Ao T1 T2 T3 T4 TN3 0.003 0.005 0.02 0.002 TN4 0.002 0.004 0.011 0.009 ĐC3 0.034 0.005 COD 0.003 0.005 Tuần Ao T1 T2 T3 T4 TN3 23 12.5 12.6 TN4 18.5 9.8 ĐC3 10.3 8.5 8.6 16 8.6 12.8 PL 15 MỐI QUAN HỆ TƯƠNG QUAN GIỮA MẬT ĐỘ VI KHUẨN PL16 PHỤ LỤC XỬ LÝ SPSS Phương pháp cho ăn tôm thẻ PL17 Phương pháp cho ăn tôm sú PL18 Phương pháp xử lý nước tôm thẻ PL19 Phương pháp xử lý nước tôm sú PL20 Tần suất xử lý nước tôm thẻ PL21 PL22 Tần suất xử lý nước tôm sú PL23 PL24 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG LAB VÀ WETLAB Dụng cụ, vật liệu lab Phịng mơi trường Thí nghiệm wetlab PL25 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH VỀ ỨNG DỤNG Ở AO NI SĨC TRĂNG Ao nuôi tôm thẻ xử lý vi sinh Bể ủ men vi sinh Xem vó tơm Ao ni tơm sú xử lý vi sinh Hệ thống ương tôm sử dụng men vi sinh Xem vó tơm PL26 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH KHÁC Tham dự hội nghị Khoa học trẻ toàn quốc ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Phạm Thị Huyền Diệu KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA PROBIOTIC ĐẾN CÁC ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG VÀ SỨC KHỎE TÔM TRONG AO NUÔI Chuyên : Sinh... để sử dụng probiotic việc phòng trị AHPND hai đối tượng tôm sú tôm thẻ cách hiệu an tồn đến mơi trường người, đề tài ? ?Khảo sát hiệu probiotic đến điều kiện môi trường sức khỏe tôm ao nuôi? ?? thực... 10 tôm thịt [10] 1.1.2.3 Ương tôm trước thả vào ao nuôi Ương tôm trước thả nuôi hay nuôi tôm giai đoạn (giai đoạn ương nhà kín từ 2-3 tuần giai đoạn ni ngồi ao) quan tâm trường hợp người nuôi