Nghiên cứu xây dựng phương pháp phát hiện methamphetamine trong mẫu tóc bằng phương pháp sắc kí khí khối phổ kép (GC MS MS)

TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự MỞ ĐẦU Tệ nạn ma túy hiểm họa quốc gia, dân tộc toàn giới; nguyên nhân chủ yếu làm phát sinh tội phạm, tệ nạn xã hội lây nhiễm HIV/AIDS Những hậu tệ nạn ma túy gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến phát triển kinh tế - xã hội an ninh trật tự đất nước Hàng năm, chất ma túy tổng hợp vận chuyển trái phép vào Việt Nam với số lượng lớn, chất sử dụng nhiều vũ trường, quán bar, karoke…Các chất ma túy tổng hợp phổ biến phải kể đến amphetamine (AM), methamphetamine (MA), 3,4-methylenedioxyamphetamine (MDA), 3,4-Methylendioxymethamphetamin (MDMA), ketamine Những loại ma túy lưu thông thị trường cách bất hợp pháp dạng viên nén, tinh thể, dạng lỏng với tên gọi Adam, Eva, Love, VW, Ice, Tên lửa, Thiên thần, viên lắc, thuốc lắc, viên chúa, viên hoàng hậu, ecstasy, mercedes, đá, nước vui…Sự thay ma túy tổng hợp cho ma túy truyền thống xu hướng tất yếu giới Việt Nam Khoảng năm trở lại Việt Nam chứng kiến bùng phát ma túy tổng hợp ATS đặc biệt Ecstasy ma túy đá [1] Đối tượng sử dụng chất ma túy tổng hợp tập trung chủ yếu tầng lớp niên, trung niên sống Thành phố, thị xã Số người sử dụng ma túy tăng cao có ảnh hưởng xấu tới trật tự an ninh xã hội Sử dụng ma túy tổng hợp thường tụ tập theo nhóm đơng người vũ trường, qn bar hay nhà nghỉ, nhà riêng… Việc chứng minh người sử dụng ma túy tổng hợp khó khăn chất ma túy dạng thuốc phiện chúng kích thích thần kinh trung ương tạo cảm giác sảng khoái, tỉnh táo, phấn chấn, tinh thần nhanh nhẹn, tăng tính động tự tin, tăng vận động, nói năng, giảm mệt mỏi, dịu đau Các trạng thái khó phát người nghiện so với ma túy dạng thuốc phiện làm co đồng tử, ức chế hơ hấp Phân tích, giám định mẫu máu, nước tiểu phổ biến có số bất lợi lượng ma túy bị đào thải chuyển hóa nhanh, lấy mẫu khơng thuận tiện, khơng giữ yếu tố bí mật đặc biệt với mẫu máu khó lấy mẫu Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự khơng có chun mơn gây ảnh hưởng đến sức khỏe Để khắc phục nhược điểm phương pháp tối ưu phân tích ma túy mẫu tóc Ma túy lưu giữ tóc lâu với lượng nhỏ phải sử dụng kỹ thuật xử lý mẫu kết hợp với phương pháp phân tích có độ nhạy cao Xuất phát từ lý tiến hành đề tài “Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp phát Methamphetamine mẫu tóc phƣơng pháp Sắc ký khí khối phổ kép (GC/MS/MS)” Nội dung nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu ứng dụng phương pháp GC/MS/MS để phân tích chất ma túy tổng hợp MA cho kết xác nhờ vào việc so sánh thời gian lưu khối phổ chất phân tích với chất chuẩn [8,13] Nghiên cứu ứng dụng phương pháp SPE sử dụng chất hấp phụ C8 dùng để chiết, làm MA từ mẫu tóc Tạo dẫn xuất HFBA vào nhóm amin chất MA làm tăng khả bay chất phân tích, giúp phù hợp q trình phân tích sắc ký, tăng độ nhạy cho thiết bị phân tích sắc ký [1] Quy trình sử dụng chất nội chuẩn đánh dấu Amphetamin-D5 (AMd5) cho vào mẫu tóc từ đầu trước tiến hành bước xử lý mẫu giúp loại ảnh hưởng sai số thao tác phân tích, tăng độ xác kết đo Thẩm định phương pháp xây dựng ứng dụng phân tích số mẫu thực tế Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan ma túy  Định nghĩa phân loại [6,9] *Định nghĩa: Các chất ma túy chất có nguồn gốc tự nhiên hay tổng hợp, xâm nhập vào thể làm thay đổi trạng thái ý thức, trí tuệ Nếu dùng lặp lại nhiều lần làm cho người dùng lệ thuộc vào nó, gây nguy hại cho cá nhân cho cộng đồng *Phân loại chất ma túy: Các chất ma túy phân loại theo cách sau đây: - Phân loại theo nguồn gốc - Phân loại theo tác dụng dược lý - Phân loại theo cấu trúc hóa học - Phân loại theo cách thức sử dụng Tuy nhiên giới, cách phân loại ma túy theo nguồn gốc tác dụng dược lý phổ biến *Phân loại dựa theo nguồn gốc Các chất ma túy phân loại theo nguồn gốc gồm có nhóm chính: Nguồn gốc tự nhiên:gồm chất ma túy chiết xuất từ nguyên liệu có nguồn gốc tự nhiên, canabionls cần sa, morphine thuốc phiện,… Nguồn gốc bán tổng hợp:là chất ma túy có nguồn gốc tự nhiên tổng hợp thêm vài nhóm chức heroine tổng hợp từ morphine Nguồn gốc tổng hợp:gồm chất ma túy có nguồn gốc tổng hợp amphetamine (AM), methamphetamine (MA), MDA, MDMA, diazepam,… Các chất ma túy có nguồn gốc tổng hợp phân loại theo dược lý gồm nhóm chất khác như: Nhóm kích thích thần kinh trung ương AM, MA, MDA, MDMA,…nhóm an thần gây ngủ diazepam, dẫn xuất phenothiazin,… Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự 1.2 Tổng quan nhóm ATS ATSlàtừviếttắtcủaamphetaminetypestimulants– cácchấtkíchthíchthầnkinhdạngamphetamin– baogồmnhiềuchấtcócấutrúctươngtựnhau,trongđóamphetaminlàchấtđượcpháthiệnvà tổnghợpđầutiênnăm1887tạiĐức.Sausựrađờicủaamphetamin,methamphetaminđượct ổnghợpnăm1989tạiNhật.Ngồihaichấtchínhtrên,cịncómộtsốchấtkháctrongnhómnh ưMDMA,MDA,DMA,,…vv[1][2][4][6][33][38] Việcsửdụngamphetamintrongytếbắtđầuvàocuốinhữngnăm1920vớivaitrịmột thuốcthơngmũivàgiãnphếquảnđểthaythếchoephedrin.Sauđóvàonhữngnăm1930,thu ốcđượcmởrộngtrênlâmsàngvớitácdụngkíchthíchthầnkinhtrungương,chốngtrầmcảm, ủrũ.AmphetaminvàmethamphetaminđượcdùngrộngrãitrongqnđộiởthếchiếnthứIIđ ểtăngcườngsứcchịuđựng,sự tỉnhtáo,tránhmệtmỏi…Đồng thờivớiviệc sử dụng, thuốcATS bịlạm dụngnhiềuhơn,nhấtlàởngườitrẻtuổi.Càngngày,táchạicủacácthuốcnàycàngthểhiệnng hiêmtrọng:dễgâynghiện,dùngliềucaogâyloạnthần,hoangtưởng,dễkíchđộng,bạolựcvì thếchúngcịnđượcgọilà“cácchấtloạnthần”,“ma túyđiên”,“matúybạolực”[5][17][41] HiệnnaycácchấtnhómATSđượctổnghợpvàbnbántráiphépvớisốlượngngàyc àngnhiều.Đâylàloạimatúytổnghợpxuấthiệnphổbiếnhiệnnayvớinhiềuhìnhthứcđadạng :matúyđá,hồngphiến,thuốclắc,…vànhiềunhấtlàmethamphetamindạngtinhthể(matúy đá)[7][17] CơngthứcchungcủanhómATS: R R Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Hình1.1.MộtsốdạngmatúytổnghợpATStrênthịtrƣờngmatúyViệtNam (nguồn: Trung tâm giám định ma túy – Viện Khoa học hình sự) Bảng1.1.CơngthứcmộtsốATSđiểnhình Dẫnchấtamphetamin Amphetamin Methamphetamin 3,4methylendioxyamphetamin(MDA) 3,4methylendioxymethamphetamin(MD 3,4-methylendioxy-Nethylamphetamin 4-methoxyamphetamin 2,5-dimethoxyamphetamin(DMA) 3,4,5-trimethoxyamphetamin 4-methyl-2,5-dimethoxyamphetamin 4-ethyl-2,5-dimethoxyamphetamin 4-Bromo-2,5-dimethoxyamphetamin Ghichú:kíhiệu*làgiữaC3vàC4củanhânthơmcóliênkết–OCH2-O- Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự 1.3 Tổngquanvềmethamphetamin 1.3.1 Cơngthứccấutạovàtínhchấtlýhóa[5][6][21] MAthườnggặpdưới2dạnglàbasevàmuốihydroclorid  Methamphetaminbase: - Tênkhoahọc:(+)-N,α-dimethylphenethylamine Tên hóa học theo (IUPAC) lµ (S)-N-Methyl-1-phenyl-propan-2amin - CTPT:C10H15N - KLPT:149,2 - pKa:9,9 - Tínhchấtlýhóa: + + MA chất hữu có nhóm chức amin bậc 2, tồn hai dạng base muối acid khác HCl, H2SO4,… + MA có nhóm chức amin bậc nên dễ dàng tham gia phản ứng acyl hóa với anhydride acid để tạo amide, phản ứng thực điều kiện bình thường mà khơng cần xúc tác, xảy nhanh Methamphetaminhydroclorid: - CTPT:C10H15N.HCl - KLPT:185,5 pKa:10,1 - Tínhchấtlýhóa:bộtkếttinhtrắnghoặctinhthểkhơngmàu,tan1/2trongnước,1/4 trongethanol,1/5trongcloroform,khơngtantrongether 1.3.2 Tácdụngdượclý TácdụngkíchthíchthầnkinhcủaMAlàrấtnhanh,thậmchícóngaytrongkhitiêm.T hờigiantácdụngcóthểkéodài4-8giờởngườichưanghiệnvà2- Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự 3giờởngườinghiện.Sựkhácbiệtvềhiệuquảgiữanamvànữ,giữacáclứatuổilàkhơngđáng kể Tácdụng kíchthíchthầnkinhcủa MA tăng lênkhi kếthợpvớimộtsốthuốckhácnhưephedrin,cocain,cácchấtgiảmđaunhómopiat,cácthuốc ngủ[4][6][22].SauđâylàmộtsốtácdụngdượclývàcơchếcủaMA:  Tácdụngkíchthíchhệthầnkinhtrungương: MAtácdụngchủyếulênnão,vỏnão,ngồiracịntácdụnglênhệthốnglướihoạthóac ủahệthầnkinhtrungương.Cáctácdụngnàygâyranhữngthay đổitrạngtháitinhthầnnhưcảmgiácsảngkhối,tỉnhtáo,phấnchấn,tinhthầnnhanhnhẹn,tă ngtínhnăngđộng,tựtin,tăngvậnđộng,nóinăng,giảmmệtmỏi,dịuđau.Cáctrạngtháinàyc óthểgiúpchoconngườicảithiệnđượcnhữngcơngviệcđơngiản,thậmchílàmđượcnhiềuvi ệchơn,nhấtlànhữngvậnđộngthểchấtnhưđiềnkinh,nhảymúa,…tuynhiênvớicáccơngvi ệcphứctạpthìhiệuquảgiảmvàkhảnăngsaisóttrongcơngviệctăngdothiếukhả năngtậptrung.Docáctácđộnglênthầnkinhnhưtrên,ngườisửdụngMAcóxuhướngtiếptụ csửdụnghếtlầnnàyđếnlầnkhácđểthỏamãnkíchthíchbảnthânvàdầnlệthuộcvàonó,đólàs ựnghiệnMA.ViệcdùngMAkéodàihoặcliềucaothườnggâychánchường,mệtmỏi,ảogiá c,hoangtưởng,hoảngloạn,đauđầu,chóngmặt,rốiloạnvậnmạch,lẫnlộn,suynhượctinhth ần,suygiảmkhảnăngtìnhdục[4][6][22]  Tácdụngkíchthíchhệthầnkinhgiaocảm[6][9][22]:MAcótácdụngkiểuαvàβnhư cácchấtcườnggiaocảm: - Tácdụnglêntimmạch:kíchthíchtrựctiếplàmtăngnhịptim,gâycomạch,làmtăngh uyếtápcảtâmthulẫntâmtrương.Dùngliềulớncóthểgâyloạnnhịptim,cothắtmạchvànhgâ yđauthắtngực - Tácdụnglêncáccơtrơnkhác:làmgiảmcothắtcơtrơndạdày,ruột,giảmchuyểndịch thứcăn - Tácdụnggiảmđau:tácdụnggiảmđaunhẹ, tuynhiênchưađủđểđiềutrịhiệuquả.Mặcdùvậytheomộtsốbáocáo,nócóthểtănghiệuquả giảmđaucủacácopiat - Kíchthíchtrungtâmhơhấp:đốivớitìnhtrạngbìnhthường,tácdụngnàylàkhơngđá ngkểnhưngkhiđãbịứcchếhơhấpbởicácchấttácdụngtrênhệthầnkinhtrungươngthìMAc Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự ótácdụngkíchthíchhơhấprõrệt - Gâychánăn:MAtácdụngvàovịtrítrungtâmnoởdướiđồibên  Độctính: Khidùngqliềuthìgâyracáctriệuchứngngộđộcdẫnđếntửvongnhưhơnmê,cogi ật,chảymáunão.Liềuđộctốithiểugâychếtngườiởngườibìnhthườnglà1g[6][22]  Cơchếtácdụng: TácdụnglênthầnkinhtrungươngcủaMAlàdolàmtănggiảiphóngcácchấttrunggi anthầnkinhlàdopamin,serotoninvànoradrenalin.Sựthayđổitrongvậnđộngvàhànhvicư xửliênquannhiềunhấtbởidopamin[6][9][17] Hình 1.2 Cơ chế tác dụng lên thần kinh trung ƣơng MA 1.3.3 Dượcđộnghọcvàphânbốtrongtóc Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự MAdễdànghấpthuquađườnguốngvàđườngtrựctràng,phânbốnhanhchóng vàomáu, dễ dàng qua hàng ràomáu não để gâyratác dụng.MA đạt nồng độđỉnhkhoảng36giờsaukhiuống.Nócũngđượchấpthutốtsaukhihítbằngmũihoặctiêm.MAvàocơthểsẽđ ượcchuyểnhóavàthảitrừphầnlớnquanướctiểu,mộtphầnnhỏMAphânbốvàotóc[4][16][ 22][32] Hình1.3.SơđồchuyểnhóacủaMA Trong24giờđầu,MAđượcđàothảiquađườngnướctiểukhoảng43%ởdạngkhơng biếnđổi,khoảng15%ởdạng4hydroxymethamphetamin,khoảng5%ởdạngamphetaminvàmộtsốchấtchuyểnhóakhá cởdạngbiếnđổihoặckếthợp[5][39] Vềsựphânbốtrongtóc,cơchếcủanórấtphứctạpvàhiệnnayvẫnchưarõràng,nhiều giảthuyếtchorằngMAđãkhuếchtán(thụđộnghaychủđộng)từcácmạchmáunidưỡngn angtócvàonangtóc,nằmchủyếuởtủytóc.MAtồntạitrongtóctrongvàithángđếnthậmchíh àngnăm[16][22][31] Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Hình1.4 GiảthuyếtcơchếMA đivàotrongtóc 1.4 Tổngquanvềchiếtmethamphetaminetrongtóc 1.4.1 Cấutrúccủatóc Sợitócgồm2phầnlànangtócvàthântóc Nangtóccịngọilàchântóc,nằmphíadướibềmặtdasâutừ35mm.Nóđượcbaoquanhbởihệthốngmaomạchmáunidưỡngtóc.Nangtóclàphần“sốn g”duynhấtcủatóc,giúptócmọcdàira.Thântóclànhững“sợitóc”màtanhìnthấyhằngngày ,làphầntócđã“chết”[33][36] Thântócgồm3lớp:lớpbiểubì(cuticle),lớpgiữa(cortex)vàlớptủy(medulla).Lớpb iểubìlàphầnngồicùng,gồmcáclớpkeratintrongsuốtxếpchồnglênnhaunhưvảycá,cótác dụngbảovệsợitóckhỏihóachấtvànhữngảnhhưởngbênngồi.Lớpbiểubìcịnđượcphủm ộtmànglipidmỏngđểtóckhơngthấmnước.Lớpgiữabaogồmnhiềubósợinhỏhợpthànhvà chứacácsắctốcủatóc.Lớptủylàphầntrongcùngcủasợitóc,chứacáchạtchấtbéovàkhơng khí[11][33][36] 10 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự hàm lượng khảo sát từ 5ng đến 200ng, lượng chất nội chuẩn cố định 100ng Tiến hành phân tích điểm chuẩn khoảng khảo sát Mỗi điểm nồng độ có chứa hỗn hợp chất chuẩn MA, AM-d5, sau xử lýmâũ theo quy trinh̀ đị nh mức 100µl ethylacetate, điểm nồng ̣thí nghiệm dẫn xuất lặp lại lần, phân tích GC /MS/MS theo đung điều kiêṇ đa nêu chếđơ M ̣ tích lấy giá trị trung bình ́́ Kết khảo sát khoảng tuyến tính đưa đồ thị biểu diễn mối tương quan tuyến tính tỷ lệ diện tích chất phân tích (MA) chia cho chất nội chuẩn (AM-d5) tỷ lệ lượng chất phân tích chia cho chất nội chuẩn Từ xác định phương trình hồi quy chất sở để định lượng chất phân tích Bảng 3.4đưa kết quảkhảo sát khoảng tuyến tinh́ MA mâũ tóc Bảng 3.4 Kết khảo sát khoảng tuyến tính MA mẫu tóc Lượng chất (ng) MA Am-d5 100 10 100 20 100 50 100 100 100 200 100 Phương trình hồi quy tuyến tính Y = 0,7162X – 0,0035, R = 0,9998 43 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học Tỷ lệ diện tích píc TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Hình 3.12 Đồ thị tƣơng quan tuyến tính tỷ lệ diện tích pics tỷ lệ lƣợng chất MA/AM-d5 mẫu tóc Kết quảkhảo sát cho thấy cósư ̣ tương quan tuyến tinh ́ chă ̣ t che h̃ tỷlê ̣ lượng chất tỷ lệ diện tích píc MAvớ i IS khoảng nồng ̣khảo sát từ5ng đến 200ng mẫu tóc Giới haṇ phát hiêṇ (LOD) giới haṇ định lương ̣ (LOQ): Khảo sát LOD MA mâũ tóc đươc ̣ tiến hành cách pha lỗng mâũ (mâũ cónồng ̣ thấp dưng ̣ đường chuẩn nôị) gấp lần sau đa h̃xử lý mẫu xong Điểm nồng đô ̣thấp dưng ̣ đường chuẩn MA tóc là0.5ng Kết quảtinh ́ tốn taịgiá trị nồng độ mà tín hiệu gấp lần nhiêũ đường làLOD , từ tính LOQ MA mẫu tóc 1,5ng 3.1.5 Kết khảo sát độ đặc hiệu phương pháp Do phân tić h MA mâũ tóc có mẫu phứ c tap ̣ , chếđô ̣phân tich́ MRM dưạ vào mảnh phổ m /z Nên đô đ ̣ ăc ̣ hiêụ đươ c ̣ khảo sát để phân biêṭgiữa mâũ trắng không cóma túy vàmâũ cóma túy Độ đặc hiệu tiến hành 02 loại mẫu (Mơṭlà tóc khơng có chất ma túy , hai làmẫu tóc có cho thêm chất MA 50ng, AM-d5 100ng), trình xử lý mẫu phân tích theo điều kiện nêu mục 2.2.3 3.1.1 44 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Kết cho thấy sắc ký đồ phân tich ́ tóc (hình 3.12) khơng có chất ma túy, khơng xuất pic thời gian lưu mà pic ma túy xuất mẫu tóc (phụ lục 1) thêm chất ma túy (tR MA -HFBA 7,427 phút ; tR A M-d5HFBA là6,893 phút) với hàm lượng 40ng, 45ng, 55ng Hình 3.13: Sắc ký đồ phân tích mẫu tóc khơng có chất ma túy Hình 3.14: Sắc ký đồ phân tích mẫu tóc đƣợc thêm 50ng MA 45 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Hình 3.15: Sắc kí đồ MRM chạy mẫu có ma túy 3.1.6 Kết khảo sát độ xác quy trình phân tích Độ chinh́ xác hay cịn goị ̣ lặp laịcủa quy trình phân tích thực mẫu tóc thêm chuẩn, mẫu tócđược thêm hỗn hợp chuẩn MA, AM-d5 điểm nồng đô ̣lần lượt là(Mâũ 1: 50ng; mâũ 2: 100ng mẫu 3: 200ng) Thí nghiệm mẫu lặp lại, trình xử lý mẫu phân tích theo điều kiện nêu mục 2.2.3 3.1.1 Kết tính tốn độ lặp lại quy trình thơng qua đánh giá ̣lêcḥ chuẩn tỷlê d ̣ iêṇ tich́ pic lần môṭmâũ thể bảng 3.5 46 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Bảng 3.5: Kết khảo sát độ xác quy trình phân tích mẫu tóc Tên Mẫu 50ng Mẫu M1 Mẫu M1 Mẫu M1 Mẫu M1 Mẫu M1 Trung bình SD RSD (%) Mẫu M2 (200ng) Mẫu M2 Mẫu M2 Mẫu M2 Mẫu M2 Trung bình SD RSD (%) Mẫu M3 (100ng) Mẫu M3 Mẫu M3 Mẫu M3 Mẫu M3 Trung bình SD RSD (%) 47 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Nhận xét: Bảng 3.5 cho thấy độ lặp lại quy trình phân tich ́ MA mâũ tóc tốt, kết có RSD < 8%, kết RSD nhỏ chứng tỏquy trinh ̀ có ̣lặp laị cao lần phân tich ́ , kết có ̣chụm tốt Ngồi lý thao tác tiến hành phải tuân thủ theo điều kiện quy trình, có lặp laịtốt cịn có lý đề tài sử dụng AM-d5 chất nội chuẩn cho tóc từ đầu trước xử lý, việc làm loại sai số mẫu qúa trình xử lý, lượng chất bao nhiều tỷ lệ chất phân tích MA chia cho AM-d5 tiệm cần số ban đầu cho vào mẫu tóc 3.1.7 Kết khảo sát độ thu hồi quy trình phân tích Độ thu hồi (R %) quy trình phân tích thực cách thêm mẫu chuẩn hỗn hợp MA, AM-d5 vào mẫu tóc khơng nhiễm ma túy Độ thu hồi thực hiêṇ điểm nồng đô ̣ khoảng nghiên c ứu Mỗi điểm nồng đô ̣ tiến hành thực nghiêṃ lặp laị5 lần phân tich ́ theo quy trình điều kiêṇ GC/MS/MS, lấy giá trị trung bình Lượng MA thêm vào mâũ tócở điểm là50ng; 100ng; 200ng, lượng nôịchuẩn mâũ là100ng Lượng thêm vào (ng) 50 100 200 Bảng 3.6: Kết khảo sát độ thu hồi quy trình phân tích MA mẫu tóc 48 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Nhâṇ xét: Qua kết quảthống kê bảng 3.6 cho thấy đô t ̣ hu hồi MA mâũ tóc nằm khoảng sai số < 15% Độ thu hồi nhỏ 86,7% Độ thu hồi lớn 93,3% Kết quảcho thấy t ̣ hu hồi mẫu tóc cao, đáp ứng yêu cầu phân tích lượng vết 3.2 Kết phân tích mẫu thực tế giám định Đềtai đa xây dưng ̣ quy trinh phân tich MA tóc co phan ưng taọ dâñ ́̀ xuất vơi HFBA ́́ dụng quy trình tiến hành phân tích học hình sự, mẫu tiến hành song song với phân tích ma túy nước tiểu Hình 3.15 Mẫu tóc thu Trung tâm giám định ma túy 49 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Bảng 3.7 Kết phân tích MA mẫu tóc TT 10 11 12 13 Ghi chú: 50 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Hình 3.16 Sắc ký đồ phân tích mẫu tóc Vũ Văn V có MA-HFBA (t R = 7,425’) Hình 3.17 Sắc ký đồ phân tích mẫu tóc Đinh Văn H có MA-HFBA (tR = 7,424’) 51 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Hình 3.18 Sắc ký đồ phân tích mẫu tóc Lê Ngọc C có MA-HFBA (tR = 7,424’) Hình 3.19 Sắc ký đồ phân tích mẫu tóc Mai Ngọc P có MA-HFBA (tR = 7,425’) 52 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự Hình 3.20 Sắc ký đồ phân tích mẫu tóc Trần Đức T có MA-HFBA (tR = 7,422’) 3.3 Thảo Luận 3.3.1 Quy trình chiết mẫu MA làchất h ữu có nhóm amin , đề tài sử dụng cột chiết pha r ắn C8 để chiết vàlàm sacḥ MA mâũ tóc có mẫu ph ức tap ̣ Quy trinh ̀ s dụng SPE lượng dung mơi dùng làit́ , khơng tốn , đôc ̣ haịnh phương pháp chiết lỏng lỏng hay dùng tr ước Quy trinh̀ s dụng chất nội chuẩn AM-d5 đưa vào mẫu tóc trước tiến hành x lý mẫu cho đô c ̣ hính xác cao , dê kh̃ iểm sốt tồn bơ ̣q trình x lý mẫu thiết bị phân tích Và thể tích hịa tan mẫu cuối trước phân tich́ không cần chinh́ xác , dễ điều chinh̉ vềthểtich́ Lượng mâũ tóc lấy phân tich́ làit́ (10mg) lấy dễ dàng, không mĩ qua không gây đau đớn, phù hợp cho đối tượng khác khám bệnh, giám định 3.3.2 Phản ứng tạo dẫn xuất MA làchất hữu cónhóm amin , khả bay , sư ̣phùhơp ̣ với sắc ký khí phân tích trực tiếp GC cho độ nhạy thấp Trong đóthưc ̣ hiêṇ phản ứng acyl hóa MA với tác nhân dâñ xuất làHFBA xảy nhanh 53 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự hồn tồn , nhiêṭđô p ̣ han ưng thấp Sau phan ưng taọ dâñ x MA taọ amide lam tăng kha bay cua chất phân tich , tăng sư ́̀ phù hợp hệ thống GC, làm tăng độ nhạy lên nhiều 3.3.3 Phương pháp phân tích GC/MS/MS Phương phap phân tich s ́́ phương phap phân tich hiêṇ ́́ quad cho thông tin dạng sắc ký đồvà phổ khối Chếđô p ̣ hân tich́ MRM cho đô ̣ nhạy cao Sắc kýkhís dụng cột mao quản có chiều dài l ớn từ 30 đến 100m, đường kinh́ nhỏt 0,1mm đến 0,32mm khả n ăng tách đươc ̣ hỗn h ợp nhiều chất môṭmâũ , thích hợp cho phân tich́ đồng thời nhiều chất mơṭmâũ v mẫu có ph ức tap ̣ GC/MS/MS cho kết quảphân tich́ có l ̣ ặp laị cao thiết bi ̣̉nô định Đềtài sử dụng chất nội chuẩn AM-d5 thể tích tiêm mâũ không cần chinh́ xác , điều làm triêṭtiêu sai sốdo th ể tích tiêm mâũ khơng Đềtài tiến hành xác định khoảng tuyến tính giới haṇ LOD, LOQ 3.3.4 Phân tích mẫu thực tế Kết quảphân tich́ bảng 3.6 cho thấy có8 ca giám đinḥ khơng phát hiêṇ thấy MA tóc Cịn lại ca giám đinḥ làphát hiêṇ thấy MA, nồng ̣MA mâũ tóc phát thấy có mẫu nằm khoảng tuyến tính khảo sát…t rong tổng số5 ca gư i giam đ ịnh có mẫu ́̉ túy MA nươc tiểu ́́ Kết qua phân tich mâũ thư ̣ c tếđươ c ̣ tinh dư a ̣ ́̉ (mục 2.3.4) Do mâũ tóc thưc ̣ tếgiam đinḥ không luc nao cung co đ lương ̣ chất nơịchuẩn đưa vào mâũ cóthểthay đổi nên phương trinh ̀ hồi quy vâñ thể hiêṇ tương quan tuyến tinh́ làtỷlê ̣ lươ ̣ ng chất chia cho nôịchuẩn Nếu lươ ng ̣ nôị chuẩn đưa vào mâũ giám đinḥ 100ng lươ ̣ ng xây dư ̣ ng đường nơị chuẩn thìtỷsốgiữa nơịchuẩn mâũ vàtrong đường chuẩn là1 Tác giả giám định 01 mẫu tóc phương pháp LC/Tof Kết (phụ lục 7) cho thấy có có MA mẫu dương tính Lê Văn C 54 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học TRUNG TÂM GIÁM ĐịNH MA TÚY – VIệN KHOA HọC HÌNH Sự KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đềtài nghiên u đươ c ̣ thư ̣c hiêṇ theo muc ̣ đươc ̣ sau: Khảo sát hồn thiện điều kiện phân tích định tính định lượ ng MAsử dụng chất nôịchuẩn AM-d5 mâũ tóc GC/MS/MS có tạo dẫn xuất vớ i HFBA Khảo sát khoảng tuyến tín h cua MAva giơ i haṇ LOD , LOQ cua quy trinh Phương pháp GC/MS/MS có độ xác cao độ lăp ̣ laịtốt, có tính đặc hiêụ Khảo sát độ lăp ̣ laịcua phan ưng taọ dâñ xuất Xây dưng chiết pha rắn, có khảo sát độ Đanh gia đ ̣ ăc ̣ hiêụ cua phương phap phân tich MA mẫu tóc ́́ ́́ phân tich ́́ 08người không phat hiêṇ thấy MA Kết qua phân tich co y nghia thư c ̣ tiêñ cao cho ́́ quan điều tra, giám định pháp y, cho cac tổchưc xa hôị KIẾN NGHỊ Ứng dung ̣ quy trinh phân tich vao xet nghiêṃ MA mâũ tóc ́̀ Các kết kết luận dương tính vớ pháp phân tích có detector MS LC/MS, LC/TOf hoăc ̣ GC/MS/MS Cần tiếp tuc ̣ nghiên cư u quy trinh phân tich đồng thơi nhiều chất ma tổng ́́ hơp ̣ cung mơṭ tóc, quy trinh nên sư ́̀ xác cao 55 Phạm Đức Trọng – Luận văn Khoa học Hóa học ... đề tài ? ?Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp phát Methamphetamine mẫu tóc phƣơng pháp Sắc ký khí khối phổ kép (GC/ MS/ MS)? ?? Nội dung nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu ứng dụng phương pháp GC /MS/ MS để phân... với điều kiệnsắcký[15][16][29][35][36][40]  Phươngphápsắckýlỏngkhốiphổ(LC -MS) Phươngphápsắckýlỏngkhốiphổcũnglàmộtphươngphápđãđượcsửdụngnhiềuđ ểpháthiệnMA.Vớimẫutóc,chiếtMAbằngphươngphápthíchhợprồiđưavàohệthốngLC... nhcácchấtvơcơvàhữucơ[2][26] Khối phổ kép (MS/ MS) Sựkếthợphaikỹthuậttrên,GCv? ?MS, đãchorađờikỹthuậtsắckýkhíkhốiphổG CMS.PhươngphápGC-MSsửdụngkĩthuậtGCđểtáchcácchấtvà pháthiệnchúngvớidetectorMSnhờđópháthuyđượcưuđiểmcủacảhaiphươngpháp,phát