Nghiên cứu khả năng ức chế tế bào ung thư của nano bạc tổng hợp từ dịch chiết cây đu đủ rừng trevesia palmata (luận văn thạc sĩ)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG NGỌC TRUYỀN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ CỦA NANO BẠC TỔNG HỢP TỪ DỊCH CHIẾT CÂY ĐU ĐỦ RỪNG TREVESIA PALMATA LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC ỨNG DỤNG THÁI NGUYÊN – 2020 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG NGỌC TRUYỀN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ CỦA NANO BẠC TỔNG HỢP TỪ DỊCH CHIẾT CÂY ĐU ĐỦ RỪNG TREVESIA PALMATA Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 84 20 201 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Thanh Hương THÁI NGUYÊN – 2020 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình Mọi kết thu không chỉnh sửa chép từ nghiên cứu khác Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả Hoàng Ngọc Truyền ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập thực đề tài luận văn thạc sĩ chuyên ngành Công nghệ Sinh học - Trường Đại học Khoa học Thái Nguyên, em nhận ủng hộ, giúp đỡ thầy cô giáo, bạn bè gia đình! Trước tiên, em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Cơ giáo - TS Lê Thị Thanh Hương - người tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu để em hồn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Phú Hùng, Trưởng khoa Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học Thái Nguyên hướng dẫn, bảo cho em thực thí nghiệm đánh giá mức độ biểu gen phức hệ nano bạc dòng tế bào ung thư dày MKN45 Em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Văn Hảo, Giảng viên khoa Vật lý Công nghệ, trường Đại học Khoa học Thái Nguyên giúp đỡ em công việc điều chế phức hệ nano bạc - dịch chiết Đu đủ rừng Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến thầy, cô giáo khoa Công nghệ Sinh học, trường Đại học Khoa học phận đào tạo Sau Đại học - Đại học Khoa học Thái Nguyên, Phịng Thí nghiệm Y sinh - Khoa Cơng nghệ Sinh học trường Đại học Khoa học Thái Nguyên giúp đỡ em suốt trình học tập nghiên cứu Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn tới tồn thể gia đình, bạn bè đồng nghiệp cổ vũ, động viên em suốt thời gian qua! Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2020 Tác giả Hoàng Ngọc Truyền iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC BẢNG vii MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái quát Đu đủ rừng 1.1.1 Đặc điểm phân loại 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Công dụng Đu đủ rừng 1.2 Nano bạc, phương pháp tổng hợp ứng dụng 1.2.1 Khái quát nano bạc 1.2.2 Các phương pháp tổng hợp nano bạc 1.2.3 Vai trò nano bạc tạo phương pháp tổng hợp xanh y học 1.3 Khái quát ung thư ung thư dày 10 1.3.1 Khái quát ung thư 10 1.3.2 Ung thư dày 10 1.4 Apoptosis 14 1.4.1 Giới thiệu 14 1.4.2 Apoptosis ung thư 15 1.4.3 Trị liệu apoptosis ung thư 17 1.5 Gốc oxy hóa tự ROS 17 1.5.1 Giới thiệu 17 1.5.2 Hệ thống oxy hóa thể 18 1.5.3 Trạng thái stress oxy hóa 19 1.5.4 AgNP gây ROS ung thư 19 iv 1.6 Realtime PCR 21 1.6.1 Giới thiệu 21 1.6.2 Realtime RT-PCR 23 1.6.3 Định lượng tương đối nghiên cứu biểu gen 24 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 26 2.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 26 2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 26 2.4 Phương pháp nghiên cứu 27 2.4.1 Phương pháp thu thập định loại 27 2.4.2 Phương pháp xử lý thu dịch chiết Đu đủ rừng 27 2.4.3 Phương pháp tổng hợp phức hệ AgNPs-TrP 27 2.4.4 Xác định tính chất lý hóa AgNPs-TrP 28 2.4.5 Các phương pháp phân tích đặc tính sinh học chống ung thư phức hệ AgNPs-TrP 29 2.4.6 Phân tích thống kê 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Kết thu thập, xử lý mẫu 32 3.1.1 Thu thập mẫu xác định tên khoa học Đu đủ rừng 32 3.1.2 Kết thu dịch chiết 32 3.2 Tổng hợp xác định tính chất lý hóa phức hệ AgNPs-TrP 32 3.2.1 Tổng hợp phức hệ AgNPs-TrP 32 3.2.2 Phân tích phổ UV-Vis 33 3.2.3 Phân tích nhiễu xạ tia X (XRD) phổ hồng ngoại biến đổi chuỗi Fourier FT-IR 35 3.2.4 Phân tích hình dạng, kích thước kính hiển vi điện tử truyền qua TEM 37 3.3 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên tăng sinh tế bào ung thư dày MKN45 38 3.4 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên sản sinh gốc oxy hóa tự (ROS) tế bào ung thư 39 v 3.5 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen liên quan tới sản sinh gốc tự (ROS) 41 3.6 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen liên quan tới chết tế bào theo chương trình apoptosis 44 3.6.1 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen Caspase 8, Caspase khởi động apoptosis 44 3.6.2 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen Caspase 3, Caspase thực thi apoptosis 45 3.6.3 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen ức chế apoptosis BCL2 47 3.7 Ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen liên quan tới khả chống oxy hóa tế bào 52 3.7.1 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu enzyme xúc tác loại bỏ gốc tự superoxyde 48 3.7.2 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu enzyme giải độc aldehyd 50 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 KẾT LUẬN 51 KIẾN NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 vi CHỮ VIẾT TẮT AgNPs Silver nanoparticles – Các hạt nano bạc AgNPs-TrP Silver nanoparticles-Trevesia palmata: Phức hệ nano bạc dịch chiết Đu đủ rừng ALDH Aldehyde dehydrogenase APL Alkylphospholipid CSC Cancer stem cell - Tế bào gốc ung thư cDNA Complementary DNA NCDs Noncommunicable diseases - Bệnh không lây nhiễm DNA Deoxyribonucleic acid FACS Fluorescence activated cell sorting IARC International Agency for Research on Cancer - Cơ quan Quốc tế Nghiên cứu Ung thư GC Gastric cancer - Ung thư dày mRNA RNA thông tin H pylori Helicobacter pylori ROS Reactive oxygen species - Các dạng oxy hóa tự RA Retinoic acid RNA Ribonucleic acid SCCHN Squamous cell carcinoma of the head and neck - Ung thư biểu mô tế bào vảy đầu cổ XRD X-ray difractometry - Nhiễu xạ tia X TEM Transmission Electron Microscopy - Kính hiển vi điện tử truyền qua FT-IR Fourier-transform infrared spectroscopy - Quang phổ hồng ngoại biến đổi chuỗi Fourier vii DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Cấu trúc aglycon saponin phân lập từ hai loài Trevesia palmata (Roxb & Lindl) Vis Trevesia sundaica Miq Hình 1.2 Các phương pháp tổng hợp AgNPs Hình 1.3 Biểu đồ khuếch đại đặc trưng Realtime PCR 22 Hình 3.1 Cây Đu đủ rừng Trevesia palmata (Roxb & Lindl.) Vis (Cây lá) thu thập huyện Chợ Đồn, tỉnh Bắc Kạn 33 Hình 3.2 Phản ứng tổng hợp AgNPs-TrP 34 Hình 3.3 Phổ hấp phụ UV-vis phức hệ AgNPs-TrP 36 Hình 3.4 Hình ảnh nhiễu xạ tia X (XRD) phức hệ AgNPs-TrP phổ hấp thụ hồng ngoại biến đổi Fourier 38 Hình 3.5 Hình dạng hạt nano chụp kính hiển vi điện tử truyền qua biểu đồ phân bố kích thước hạt 40 Hình 3.6 Hình ảnh ức chế tăng sinh tế bào ung thư dày MKN45 phức hệ AgNPs-TrP 42 Hình 3.7 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên sản sinh gốc oxy hóa tự (ROS) 43 Hình 3.8 Mức độ biểu gen NOX4 46 Hình 3.9 Mức độ biểu gen DUOX2 47 Hình 3.10 Mức độ biểu gen Caspase 49 Hình 3.11 Mức độ biểu gen Caspase 51 Hình 3.12 Mức độ biểu gen BCL2 52 Hình 3.13 Mức độ biểu SOD1 54 Hình 3.14 Mức độ biểu SOD2 55 Hình 3.15 Mức độ biểu ALDH 56 DANH MỤC BẢNG Bảng Bảng 2.1 Tên bảng Trình tự mồi dùng xác định biểu gen Trang 31 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Theo thống kê tổ chức Cơ quan Quốc tế Nghiên cứu Ung thư (IARC) năm 2018, bệnh ung thư cướp sinh mạng khoảng 9,6 triệu người giới 18,1 triệu ca mắc Gần nửa số ca mắc (48,4%) nửa (57,3%) số ca tử vong ung thư giới xảy châu Á, phần gần 60% dân số tồn cầu tập chung Châu Âu chiếm 23,4% tổng số trường hợp ung thư 20,3% ca tử vong ung thư, đại diện cho 9% dân số toàn cầu Tiếp theo châu Mỹ với 21% số ca mắc 14,4% số ca tử vong, châu Phi tỷ lệ 5,8% 7,3%; thấp châu Đại dương với tỷ lệ 1,4 0,7% cho tỷ lệ mắc tỷ lệ chết ung thư gây [17] Cây Đu đủ rừng có tên khoa học Trevesia palmata thuộc họ Nhân sâm (Araliaceae), nhà khoa học giới quan tâm thể hoạt tính hạ đường huyết kháng viêm mạnh [30], kháng loại nấm gây bệnh Magnaporthe oryzae Botrytis cinerea [53] Các nghiên cứu loài T palmata cho thấy có mặt nhiều hợp chất triterpen saponin [30], [31], [53] Đây hợp chất mang lại tác dụng sinh học loài Các nghiên cứu hợp chất saponin có tiềm gây độc với nhiều dòng tế bào ung thư người Các hạt nano bạc (AgNPs) nghiên cứu rộng rãi đặc tính vật lý, hóa học, sinh học vượt trội chúng Kích thước, hình dạng, thành phần, độ kết tinh cấu trúc AgNPs ưu việt hẳn so với dạng khối chúng [56], [92] Khả chống ung thư chúng chứng minh qua nghiên cứu khác [86], [87] Phương pháp tổng hợp xanh (Green sylthesis) sử dụng thực vật để tổng hợp nên hạt nano bạc hướng nghiên cứu quan tâm rộng rãi Phương pháp chứng tỏ điểm ưu việt so với phương 49 Dựa tốc độ hô hấp ty thể, SOD1 kiểm sốt mức độ H2O2, từ đặt ngưỡng cho tín hiệu mitogen tín hiệu tyrosine kinase (RTK) để xác định tốc độ tăng sinh tế bào SOD1 tham gia vào trình trao đổi chất để đáp ứng với diện glucose oxy SOD1 ức chế hô hấp với diện glucose oxy để thúc đẩy trình đường phân SOD1 liên kết điều chỉnh ổn định hai kinase casein liên quan đến ức chế hô hấp qua trung gian glucose thông qua sản xuất H2O2 cục [26] Trong nghiên cứu Courtney J Banks cộng năm 2017 sử dụng proteomics để xác định chế điều hòa hậu biến protein tín hiệu sống sót tế bào Cu-Zn superoxyde effutase (SOD1) giúp bảo vệ tế bào khỏi stress oxy hóa Nghiên cứu việc acyl hóa K122 SOD1 ngăn chức SOD1 để ức chế chuyển hóa ty lạp thể phức hợp hô hấp [14] Trong nghiên cứu này, kết xác định biểu mRNA cho thấy, tế bào MKN45 xử lý với AgNPs-TrP có mức độ biểu dường không thay đổi so với tế bào đối chứng Chứng tỏ AgNPs-TrP không tạo enzyme xúc tác chuyển hóa superoxyde SOD2, thành viên họ SODs gọi mangan MnSOD, chứa vị trí hoạt động có mangan kim loại chuyển tiếp để trao đổi điện tử nằm ty thể [50] Hình 3.14 Mức độ biểu gen SOD2 tế bào MKN45 DC (không xử lý AgNPs-TrP) NPs (xử lý AgNPs-TrP) Đường màu xanh tương ứng với biểu DC, đường màu đỏ tương ứng với biểu tế bào xử lý AgNPs-TrP Mức độ ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP đến biểu gen SOD2 thể hình 3.14 khơng cho thấy có thay đổi tế bào xử lý tế bào đối chứng Hart PC cộng năm 2015 chứng minh điều hòa MnSOD tế bào ung thư tạo H2O2 ổn định có nguồn gốc từ ty thể 50 trì hoạt hóa AMP-kinase (AMPK) chuyển hóa thành glycolysis Hạn chế biểu MnSOD ức chế AMPK ngăn chặn trao đổi chất làm giảm khả sống tế bào biến đổi cho thấy MnSOD/AMPK có vai trị quan trọng sinh học tế bào ung thư [43] Tuy nhiên nghiên cứu này, chúng tơi khơng nhận thấy có thay đổi biểu gen SOD2 so sánh tế bào MKN45 xử lý với AgNPs với tế bào khơng xử lý AgNPs-TrP khơng kích hoạt đường hoạt hóa AMPK nên không dẫn đến thay đổi biểu SOD2 3.7.2 Tác động phức hệ AgNPs-TrP lên biểu enzyme giải độc aldehyd Aldehyd dehydrogenase (ALDH) siêu họ enzyme giải độc nhiều loại aldehyd nội sinh ngoại sinh, cần thiết cho trình sinh tổng hợp axit retinoic (RA) chất điều hòa phân tử khác chức tế bào Chúng enzyme chống oxy hóa thể [73] Hình 3.15 cho thấy tế bào ung thư dày MKN45 xử lý với phức hệ AgNPs-TrP giảm biểu ALDH hai lần từ xuống 0,5 so với đối chứng tế bào khơng xử lý với phức hệ AgNPs-TrP Hình 3.15 Mức độ biểu ALDH tế bào MKN45 DC (không xử lý AgNPs-TrP) NPs (xử lý AgNPs-TrP) Đường màu xanh tương ứng với biểu DC, đường màu đỏ tương ứng với biểu tế bào xử lý AgNPs-TrP Nghiên cứu Nguyễn Phú Hùng cộng năm 2018 xác định ALDH marker đặc trưng tế bào gốc ung thư dày [4] Năm 2012, Qing An Jia cộng nghiên cứu tác dụng hợp chất thảo dược Trung Quốc, Song you Yin dòng tế bào MHC97H Hep3B Kết cho thấy tế bào xử lý với Song you Yin nhạy cảm hóa học với oxaliplatin điều hịa 51 dấu hiệu liên quan đến CSC, phân tích hóa mơ miễn dịch cho thấy điều trị kết hợp axaliplatin Song you Yin làm giảm biểu CD90, ALDH, ABCG2, CD44, EPCAM, vimetin MMP9 tăng biểu E-cadherin tế bào ung thư biểu mô gan [49] Năm 2013, Xiaodong Mu cộng nghiên cứu ảnh hưởng Rapamycin hai dòng tế bào K7M2 K12 ung thư ác tính nguyên phát xương Osteosarcoma Kết cho thấy, điều trị Rapamycin làm giảm biểu ALDH tế bào K7M2 [73] Năm 2018, Junseong Park cộng cho thấy biểu ALDH bị giảm sử dụng kết hợp gossypol phenformin điều trị u nguyên bào thần kinh đệm GMB [77] Trong nghiên cứu phức hệ AgNPs-TrP làm giảm mức độ biểu gen chống oxy hóa ALDH, góp phần làm cho tế bào ung thư giảm khả đào thải ROS dẫn tới chết tế bào KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Đã thu thập, chiết dịch chiết tổng hợp thành công phức hệ AgNPs-TrP từ Đu đủ rừng thuộc chi Trevesia họ Nhân sâm (Araliaceae) phân bố xã Đồng Thắng, huyện Chợ Đồn, tỉnh Bắc Kạn Đã phân tích đặc điểm hóa lý phức hệ nano bạc: phổ UV-Vis nằm khoảng 428-445 nm, phổ XRD cho thấy hạt nano có hình lập phương tâm diện, phổ hồng ngoại FT-IR hình thành hạt kính hiển vi - TEM có kích thước 7,8 nm Phức hệ AgNPs-TrP có tác dụng ức chế tăng sinh tế bào dòng tế bào ung thư dày MKN45 với IC50= 0,2 µg/ml Tế bào MKN45 xử lý phức hệ AgNPs-TrP tạo ROS phụ thuộc vào nồng độ Ở nồng độ 0,2 µg/ml tỉ lệ 52%, tỷ lệ tăng lên tương ứng với nồng độ 0,2, 0,5, đến 1,5 µg/ml đạt 82% 52 Phức hệ AgNPs-TrP tăng cường biểu NOX4 (tăng lần) DUOX (tăng lần) phản ứng ROS Phức hệ AgNPs-TrP ức chế mạnh biểu gen BCL2 (giảm 24 lần) tế bào xử lý so với đối chứng, tăng cường biểu gen Caspase (2,5 lần) Caspase (1,6 lần) đường tín hiệu apoptosis Phức hệ AgNPs-TrP làm giảm lần biểu gen chống oxy hóa ALDH Kết luận chung: Phức hệ AgNPs-TrP tổng hợp phương pháp sinh học từ dịch chiết Đu đủ rừng ức chế tăng sinh tế bào chết tế bào thông qua chế tăng cường sản sinh gốc oxy hố tự (ROS), điều hồ biểu gen chủ chốt đường tín hiệu apoptosis gen chống oxy hố tế bào KIẾN NGHỊ Cần có nghiên cứu sâu ảnh hưởng phức hệ AgNPs-TrP lên biểu gen đường tín hiệu apoptosis mức độ protein Thử nghiệm tác động chống ung thư phức hệ AgNPs-TrP mơ hình động vật thí nghiệm 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Võ Văn Chi, (2004), Từ điển thực vật thông dụng, Tập 2, Nhà xuất Khoa học & Kỹ thuật, tr 2477 Võ Văn Chi, (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Phạm Hoàng Hộ, (2003), Cây cỏ Việt Nam, Nhà xuất Trẻ, tr 504 Nguyễn Phú Hùng; Lê Thị Thanh Hương, (2018), "Xác định tế bào gốc ung thư dày liệu pháp trúng đích", Tạp chí Y học Việt Nam, tr 116-125 Đỗ Tất Lợi, (2001), Những thuốc & vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học Nguyễn Nghĩa Thìn, (2007), Các phương pháp nghiên cứu thực vật, Nhà xuất Đại học Quốc gia, Hà Nội Viện dược liệu, (2016), Danh lục thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học & Kỹ thuật, tr 379 Viện Sinh thái & Tài nguyên sinh vật, (2003), Danh lục loài thực vật Việt Nam, Tập 2, Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp, tr 1092 TIẾNG ANH Ahmed, M J et al (2019), "Eco-friendly green synthesis of silver nanoparticles and their potential applications as antioxidant and anticancer agents", Drug Dev Ind Pharm 45(10), pp 1682-1694 10 Arya, Manit et al (2005), "Basic principles of real-time quantitative PCR", Expert Review of Molecular Diagnostics 5(2), pp 209-219 11 Baharara, Javad et al (2015), "Silver nanoparticles biosynthesized using Achillea biebersteinii flower extract: apoptosis induction in MCF-7 cells via caspase activation and regulation of BAX and BCL2 gene expression", Molecules (Basel, Switzerland) 20(2), pp 2693-2706 12 Baj, J et al (2020), "Immunological Aspects of the Tumor Microenvironment and Epithelial-Mesenchymal Transition in Gastric Carcinogenesis", Int J Mol Sci 21(7) 54 13 Balakrishnan, Maya et al (2017), "Changing Trends in Stomach Cancer Throughout the World", Current gastroenterology reports 19(8), pp 36-36 14 Banks, C J et al (2017), "Acylation of Superoxide Dismutase (SOD1) at K122 Governs SOD1-Mediated Inhibition of Mitochondrial Respiration", Mol Cell Biol 37(20) 15 Banerjee, Prajna Paramita et al (2017), "Mentha arvensis (Linn.)-mediated green silver nanoparticles trigger caspase 9-dependent cell death in MCF7 and MDA-MB-231 cells" 9, pp 265 16/ Bhalla, Prerna et al (2019), "Silver nanoparticle induced oxidative stress augments anticancer gut bacterial metabolites production", pp 658609 17 Bray, F et al (2018), "Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries", CA Cancer J Clin 68(6), pp 394-424 18 Bin-Jumah, M et al (2020), "Effects of Green Silver Nanoparticles on Apoptosis and Oxidative Stress in Normal and Cancerous Human Hepatic Cells in vitro", Int J Nanomedicine 15, pp 1537-1548 19 Bucur, O et al (2015), "A novel Caspase selective small molecule potentiates TRAIL-induced cell death", Sci Rep 5, pp 9893 20 Burlacu, E et al (2019), "A Review of Bark-Extract-Mediated Green Synthesis of Metallic Nanoparticles and Their Applications", Molecules 24(23) 21 Carlson, C et al (2008), "Unique cellular interaction of silver nanoparticles: size-dependent generation of reactive oxygen species", J Phys Chem B 112(43), pp 13608-19 22 Castro-Aceituno, V et al (2016), "Anticancer activity of silver nanoparticles from Panax ginseng fresh leaves in human cancer cells", Biomed Pharmacother 84, pp 158-165 23 Chang, W L., Yeh, Y C & Sheu, B S (2018), "The impacts of H pylori virulence factors on the development of gastroduodenal diseases", J Biomed Sci 25(1), pp 68 55 24 Che, Meixia et al (2016), "Expanding roles of superoxide dismutases in cell regulation and cancer", Drug discovery today 21(1), pp 143-149 25 Chugh, H et al (2018), "Role of gold and silver nanoparticles in cancer nanomedicine", Artif Cells Nanomed Biotechnol 46(sup1), pp 1210-1220 26 Crosas-Molist, E et al (2017), "The NADPH oxidase NOX4 represses epithelial to amoeboid transition and efficient tumour dissemination", Oncogene 36(21), pp 3002-3014 27 Czabotar, Peter E et al (2014), "Control of apoptosis by the BCL-2 protein family: implications for physiology and therapy", Nature Reviews Molecular Cell Biology 15(1), pp 49-63 28 Das, S et al (2013), "Biosynthesized silver nanoparticles by ethanolic extracts of Phytolacca decandra, Gelsemium sempervirens, Hydrastis canadensis and Thuja occidentalis induce differential cytotoxicity through G2/M arrest in A375 cells", Colloids Surf B Biointerfaces 101, pp 325-36 29 De Blasio, A et al (2016), "Unusual roles of caspase-8 in triple-negative breast cancer cell line MDA-MB-231", Int J Oncol 48(6), pp 2339-48 30 De Tommasi, N et al (2000), "Antiproliferative triterpene saponins from Trevesia palmata", J Nat Prod 63(3), pp 308-14 31 De Tommasi, N et al (1997), "Triterpenoid saponins from Trevesia sundaica", J Nat Prod 60(11), pp 1070-4 32 Devasagayam, T P et al (2004), "Free radicals and antioxidants in human health: current status and future prospects", J Assoc Physicians India 52, pp 794-804 33 Du, Shangce et al (2018), "NADPH oxidase regulates anoikis resistance of gastric cancer cells through the generation of reactive oxygen species and the induction of EGFR", Cell Death & Disease 9(10), pp 948 34 Dröge, W (2002), "Free radicals in the physiological control of cell function", Physiol Rev 82(1), pp 47-95 35 Ferre, F (1992), "Quantitative or semi-quantitative PCR: reality versus myth", PCR Methods Appl 2(1), pp 1-9 56 36 Fiandalo, Michael V., Schwarze, Steven R & Kyprianou, Natasha (2013), "Proteasomal regulation of caspase in cancer cell apoptosis", Apoptosis 18(6), pp 766-776 37 Fulda, Simone (2009), "Caspase in cancer biology and therapy", Cancer letters 281(2), pp 128-133 38 Gliga, A R et al (2014), "Size-dependent cytotoxicity of silver nanoparticles in human lung cells: the role of cellular uptake, agglomeration and Ag release", Part Fibre Toxicol 11, pp 11 39 Gurunathan, S et al (2013), "Cytotoxicity of biologically synthesized silver nanoparticles in MDA-MB-231 human breast cancer cells", Biomed Res Int 2013, pp 535796 40 Han, Ming et al (2016), "Association between NADPH oxidase (NOX) and lung cancer: a systematic review and meta-analysis", Journal of thoracic disease 8(7), pp 1704-1711 41 Hassan, M et al (2014), "Apoptosis and molecular targeting therapy in cancer", Biomed Res Int 2014, pp 150845 42 Hanahan, Douglas & Weinberg, Robert A (2011), "Hallmarks of Cancer: The Next Generation", Cell 144(5), pp 646-674 43 Hart, Peter C et al (2015), "MnSOD upregulation sustains the Warburg effect via mitochondrial ROS and AMPK-dependent signalling in cancer", Nature Communications 6(1), pp 6053 44 Hembram, Krushna C et al (2018), "Therapeutic prospective of plantinduced silver nanoparticles: application as antimicrobial and anticancer agent", Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 46(sup3), pp S38S51 45 Holland, P M et al (1991), "Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5' 3' exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase", Proc Natl Acad Sci U S A 88(16), pp 7276-80 46 Iizasa, H et al (2012), "Epstein-Barr Virus (EBV)-associated gastric carcinoma", Viruses 4(12), pp 3420-39 57 47 Iravani, S et al (2014), "Synthesis of silver nanoparticles: chemical, physical and biological methods", Res Pharm Sci 9(6), pp 385-406 48 Ji, X et al (2017), "Trametes robiniophila may induce apoptosis and inhibit MMPs expression in the human gastric carcinoma cell line MKN-45", Oncol Lett 13(2), pp 841-846 49 Jia, Q A et al (2012), "Herbal Compound "Songyou Yin" Renders Hepatocellular Carcinoma Sensitive to Oxaliplatin through Inhibition of Stemness", Evid Based Complement Alternat Med 2012, pp 908601 50 Kang, Sang Wook (2015), "Superoxide dismutase gene and cancer risk: evidence from an updated meta-analysis", International journal of clinical and experimental medicine 8(9), pp 14647-14655 51 Kelkawi, A H A., Abbasi Kajani, A & Bordbar, A K (2017), "Green synthesis of silver nanoparticles using Mentha pulegium and investigation of their antibacterial, antifungal and anticancer activity", IET Nanobiotechnol 11(4), pp 370-376 52 Keshari, A K et al (2020), "Antioxidant and antibacterial activity of silver nanoparticles synthesized by Cestrum nocturnum", J Ayurveda Integr Med 11(1), pp 37-44 53 Kim, B et al (2018), "Identification of novel compounds, oleanane- and ursane-type triterpene glycosides, from Trevesia palmata: their biocontrol activity against phytopathogenic fungi", Sci Rep 8(1), pp 14522 54 Kim, C G et al (2018), "Caspase 3/MAPK pathways as main regulators of the apoptotic effect of the phyto-mediated synthesized silver nanoparticle from dried stem of Eleutherococcus senticosus in human cancer cells", Biomed Pharmacother 99, pp 128-133 55 Kinnear, C et al (2017), "Form Follows Function: Nanoparticle Shape and Its Implications for Nanomedicine", Chem Rev 117(17), pp 11476-11521 56 Kumar, A et al (2008), "Silver-nanoparticle-embedded antimicrobial paints based on vegetable oil", Nat Mater 7(3), pp 236-41 58 57 Kwon, Chan Ho et al (1999), "Temperature Dependence and Annealing Effects in Surface-Enhanced Raman Scattering on Chemically Prepared Silver Island Films", The Journal of Physical Chemistry B 103(44), pp 9610-9615 58 Lee, Sang Hun & Jun, Bong-Hyun (2019), "Silver Nanoparticles: Synthesis and Application for Nanomedicine", International journal of molecular sciences 20(4), pp 865 59 Li, J et al (2019), "Evaluation and Monitoring of Superoxide Dismutase (SOD) Activity and its Clinical Significance in Gastric Cancer: A Systematic Review and Meta-Analysis", Med Sci Monit 25, pp 2032-2042 60 Lin, Xiao-Lu et al (2017), "Overexpression of NOX4 predicts poor prognosis and promotes tumor progression in human colorectal cancer", Oncotarget 8(20) 61 Lim, S H et al (2013), "Prevalence and risk factors of Helicobacter pylori infection in Korea: nationwide multicenter study over 13 years", BMC Gastroenterol 13, pp 104 62 Lin, Ping-Chang et al (2014), "Techniques for physicochemical characterization of nanomaterials", Biotechnology advances 32(4), pp 711-726 63 Liu, W et al (2010), "Impact of silver nanoparticles on human cells: effect of particle size", Nanotoxicology 4(3), pp 319-30 64 Livak, K J & Schmittgen, T D (2001), "Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method", Methods 25(4), pp 402-8 65 Lobo, V et al (2010), "Free radicals, antioxidants and functional foods: Impact on human health", Pharmacognosy reviews 4(8), pp 118-126 66 Lopez, J & Tait, S W (2015), "Mitochondrial apoptosis: killing cancer using the enemy within", Br J Cancer 112(6), pp 957-62 67 Manikandan, R et al (2015), "Biosynthesis of silver nanoparticles using ethanolic petals extract of Rosa indica and characterization of its antibacterial, anticancer and anti-inflammatory activities", Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc 138, pp 120-9 59 68 McIlwain, David R., Berger, Thorsten & Mak, Tak W (2013), "Caspase functions in cell death and disease", Cold Spring Harbor perspectives in biology 5(4), pp a008656-a008656 69 Morand, S et al (2009), "DUOX maturation factors form cell surface complexes with DUOX affecting the specificity of reactive oxygen species generation", Faseb j 23(4), pp 1205-18 70 Mousavi, Bita, Tafvizi, Farzaneh & Zaker Bostanabad, Saied (2018), "Green synthesis of silver nanoparticles using Artemisia turcomanica leaf extract and the study of anti-cancer effect and apoptosis induction on gastric cancer cell line (AGS)", Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 46(sup1), pp 499-510 71 Morrison, T B., Weis, J J & Wittwer, C T (1998), "Quantification of lowcopy transcripts by continuous SYBR Green I monitoring during amplification", BioTechniques 24(6), pp 954-8, 960, 962 72 Moy, K A et al (2010), "Alcohol and tobacco use in relation to gastric cancer: a prospective study of men in Shanghai, China", Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 19(9), pp 2287-97 73 Mu, X et al (2013), "Rapamycin Inhibits ALDH Activity, Resistance to Oxidative Stress, and Metastatic Potential in Murine Osteosarcoma Cells", Sarcoma 2013, pp 480713 74 Norbury, C J & Hickson, I D (2001), "Cellular responses to DNA damage", Annu Rev Pharmacol Toxicol 41, pp 367-401 75 O'Donovan, N et al (2003), "Caspase in breast cancer", Clin Cancer Res 9(2), pp 738-42 76 Okaiyeto, K et al (2019), "Phytofabrication of Silver/Silver Chloride Nanoparticles Using Aqueous Leaf Extract of Oedera genistifolia: Characterization and Antibacterial Potential", Molecules 24(23) 77 Park, Junseong et al (2018), "Regulation of bioenergetics through dual inhibition of aldehyde dehydrogenase and mitochondrial complex I suppresses glioblastoma tumorspheres", Neuro-oncology 20(7), pp 954-965 60 78 Paulkumar, K et al (2014), "Piper nigrum leaf and stem assisted green synthesis of silver nanoparticles and evaluation of its antibacterial activity against agricultural plant pathogens", ScientificWorldJournal 2014, pp 829894 79 Pinheiro, H et al (2014), "Hereditary diffuse gastric cancer - pathophysiology and clinical management", Best Pract Res Clin Gastroenterol 28(6), pp 1055-68 80 Qi, Ran et al (2016), "DUOX2 Expression Is Increased in Barrett Esophagus and Cancerous Tissues of Stomach and Colon", Gastroenterology research and practice 2016, pp 1835684-1835684 81 Rawla, Prashanth & Barsouk, Adam (2019), "Epidemiology of gastric cancer: global trends, risk factors and prevention", Przeglad gastroenterologiczny 14(1), pp 26-38 82 Rahman, K M et al (2014), "Phytochemical screening, antihyperglycemic and analgesic activity studies with methanol extract of trevesia palmata leaves", world journal of pharmacy and pharmaceutical sciences 3, pp 91-101 83 Roesler, B M., Rabelo-Gonỗalves, E M & Zeitune, J M (2014), "Virulence Factors of Helicobacter pylori: A Review", Clin Med Insights Gastroenterol 7, pp 9-17 84 Salehi, S et al (2016), "Phytosynthesis of silver nanoparticles using Artemisia marschalliana Sprengel aerial part extract and assessment of their antioxidant, anticancer, and antibacterial properties", Int J Nanomedicine 11, pp 1835-46 85 Saratale, R G et al (2018), "Bio-fabrication of silver nanoparticles using the leaf extract of an ancient herbal medicine, dandelion (Taraxacum officinale), evaluation of their antioxidant, anticancer potential, and antimicrobial activity against phytopathogens", Environ Sci Pollut Res Int 25(11), pp 1039210406 86 Satapathy, S R et al (2015), "The Apoptotic Effect of Plant Based Nanosilver in Colon Cancer Cells is a p53 Dependent Process Involving ROS and JNK Cascade", Pathol Oncol Res 21(2), pp 405-11 61 87 Satapathy, S R et al (2015), "Enhancement of Cytotoxicity and Inhibition of Angiogenesis in Oral Cancer Stem Cells by a Hybrid Nanoparticle of Bioactive Quinacrine and Silver: Implication of Base Excision Repair Cascade", Mol Pharm 12(11), pp 4011-25 88 Salehi S, Shandiz AS, Ghanbar F, Darvish MR, Shafiee Ardestani M, Mirzaie A, Jafari M (2016), " Phytosynthesis of silver nanoparticles using Artemisia marschalliana Sprengel aerial part extract and assessment of their antioxidant, anticancer, and antibacterial properties", International Journal of Nanomedicine 11, pp 1835-1846 89 Sayeed, Mohammed Aktar et al (2014), "Thrombolytic and Anti-arthritic Activities of Methanolic Extract of Trevesia palmata", e-Journal of Science & Technology 9, pp 119-124 90 Shin, C M et al (2011), "Association between alcohol intake and risk for gastric cancer with regard to ALDH2 genotype in the Korean population", Int J Epidemiol 40(4), pp 1047-55 91 Skrabalak, S E et al (2008), "Gold nanocages: synthesis, properties, and applications", Acc Chem Res 41(12), pp 1587-95 92 Syafiuddin, Achmad et al (2017), "A Review of Silver Nanoparticles: Research Trends, Global Consumption, Synthesis, Properties, and Future Challenges", Journal of the Chinese Chemical Society 64, pp 732-756 93 Takatsu, Y et al (2016), "Clinicopathological features of gastric cancer in young patients", Gastric Cancer 19(2), pp 472-478 94 Takhtajan, Armen (2009), "Flowering plants, Springer Science & Business Media." 95 Valdivia, Alejandra, Duran, Charity & San Martin, Alejandra (2015), "The role of Nox-mediated oxidation in the regulation of cytoskeletal dynamics", Current pharmaceutical design 21(41), pp 6009-6022 96 Valko, M et al (2007), "Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease", Int J Biochem Cell Biol 39(1), pp 44-84 62 97 Venkatesan, B et al (2014), "Rapid synthesis of biocompatible silver nanoparticles using aqueous extract of Rosa damascena petals and evaluation of their anticancer activity", Asian Pac J Trop Med 7s1, pp S294-300 98 Wiseman, Martin (2008), "WCRF/AICRFood, Nutrition, Physical Activity, and the Prevention of Cancer: a Global Perspective World Cancer Research Fund/American Institute for Cancer Research: Washington DC", The Proceedings of the Nutrition Society 67, pp 253-6 99 Won Park, Jin et al (2017), "Inhibition of aldehyde dehydrogenase enhances the cytotoxic effect of retinaldehyde on A549 cancer cells", Oncotarget 8(59) 100 Wu, Yonghzong et al (2013), "Functional activity and tumor-specific expression of dual oxidase in pancreatic cancer cells and human malignancies characterized with a novel monoclonal antibody", Int J Oncol 42(4), pp 1229-1238 101 World, Health Organization (2018), Global Health Observatory, Geneva: World Health Organization 102 Wu, Y et al (2013), "Functional activity and tumor-specific expression of dual oxidase in pancreatic cancer cells and human malignancies characterized with a novel monoclonal antibody", Int J Oncol 42(4), pp 1229-38 103 Yen, P H et al (2019), "New lupane-type and ursane-type triterpene saponins from the leaves of Trevesia palmata", Nat Prod Res, pp 1-8 104 Zaman, S., Wang, R & Gandhi, V (2014), "Targeting the apoptosis pathway in hematologic malignancies", Leuk Lymphoma 55(9), pp 1980-92 105 Zhang, T B et al (2015), "Inhibition of glucose-transporter (GLUT-1) expression reversed Warburg effect in gastric cancer cell MKN45", Int J Clin Exp Med 8(2), pp 2423-8 106 Zhang, X Y & Zhang, P Y (2017), "Gastric cancer: somatic genetics as a guide to therapy", J Med Genet 54(5), pp 305-312 63 107 Zhang, Xi-Feng et al (2016), "Silver Nanoparticles: Synthesis, Characterization, Properties, Applications, and Therapeutic Approaches", International journal of molecular sciences 17(9), pp 1534 108 Zhang, Y et al (2012), "Cytotoxic triterpene saponins from the leaves of Aralia elata", Fitoterapia 83(4), pp 806-11 109 Zhang, Z & Zhang, X (2011), "Salt taste preference, sodium intake and gastric cancer in China", Asian Pac J Cancer Prev 12(5), pp 1207-10 110 Zhou, Min et al (2018), "Caspase regulates the migration, invasion and metastasis of colon cancer cells", International journal of cancer 143(4), pp 921-930 111 Zhuang, J et al (2018), "20(S)-Ginsenoside Rh2 Induce the Apoptosis and Autophagy in U937 and K562 Cells", Nutrients 10(3) ... tài luận văn: ? ?Nghiên cứu khả ức chế tế bào ung thư nano bạc tổng hợp từ dịch chiết Đu đủ rừng Trevesia palmata? ?? Mục tiêu đề tài Tổng hợp thành công phức hệ nano bạc dịch chiết Đu đủ rừng AgNPs-TrP... phương pháp tổng hợp khác, điều chế chất có tính diệt khuẩn ức chế tế bào ung thư [20] Nghiên cứu tổng hợp nano bạc từ Đu đủ rừng đánh giá khả ức chế tế bào ung thư cịn chưa nghiên cứu, thực đề... NGỌC TRUYỀN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ CỦA NANO BẠC TỔNG HỢP TỪ DỊCH CHIẾT CÂY ĐU ĐỦ RỪNG TREVESIA PALMATA Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 84 20 201 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH