NGHIÊN CỨU ÁP DỤNG KỸ THUẬT DI TRUYỂN p h â n t ử ĐỂ CHẨN ĐOÁN BỆNH DI TRUYỂN p h ổ b i ế n ở n g ư ờ i VIỆT NAM NHẰM HẠN CHÊ HIỆU QUẢ GEN BỆNH VÀ ĐỂ XUẤT HƯỚNG ĐIỂU TRỊ

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HOC N G H IÊN CỨU ÁP DỤNG KỸ TH UẬT DI TRU YỂN ĐỂ CH ẨN ĐO ÁN BỆNH DI TRU YỂN phân tử p h ổ b iế n n g i VIỆT NAM NHẰM HẠN CHÊ HIỆU QUẢ GEN BỆNH VÀ ĐỂ XUẤT HƯỚNG ĐIỂU TRỊ Mã số: QG -0 ,- 13 Chủ trì đề tài: TS Võ Thị Thương Lan Các cán tham gia: PGS.TS Trịnh Hồng Thái - Khoa Sinh học, Trường ĐHKHTNĐ H QGH N T h s N go u yJ ễ n T h i T r u n gcr - K h o a S inh h o c , T r n g Đ K H T N - ĐHQGHN Ths Nguyễn Quỳnh Uyển - Truns tâm CNSH, ĐH QGH N Ths Lê Nhật Minh - Viện Vệ sinh Dịch tễ Hà Nội BS T r n Kiêm H a o - Đại học Y H Nội ỉ Nội - 2005 BÁO CÁO TÓ M TẮT Tên đề tài: Nghiên cứu áp dụng kỹ thuật di truyền phân tử để chẩn đoán bệnh di truvền phổ biến người V iệt N am nh ằm hạn c h ế hiệu gen bệnh đề xuất hướng điều trị M ã số: Q G -03-13 Chủ trì đề tài: TS Võ Thị Thương Lan Các cán tham gia: - PGS.TS Trịnh Hồng Thái - Khoa Sinh học, Trường ĐHKHTN-ĐHQGHN - Ths Nguyễn Thị Trung - Khoa Sinh học, Trường ĐKHTN-ĐHQGHN - Ths Lè Nhật Minh - Viện Vệ sinh Dịch tễ Hà Nội - Ths Nguyễn Quỳnh Uyển - Trung tâm CNSH, ĐHQGHN - BS T rần K iêm H ảo - Đại học Y H N ội Mục tiêu nội dung nghiên cứu: 4.1 Mục tiêu: - Sử dụng phương pháp đa hình A D N (P C R -R F L P ) phân tích đột biến intron 18 gen m ã cho yếu tố VIII liên quan đến bệnh di truyền gây khó đỏng m áu H em oph ilia A T ron g điều kiện cho phép, kết áp dụng chẩn đoán trước sinh - Sứ dụng phương pháp nested-PCR kết hợp với PCR-RFLP phân tích kiểu đột biến gen CYP21 liên quan đến bệnh tăng sản thượns thận bẩm sinh gâv nam hoá Kết áp dụng để xét nghiệm chẩn đoán 4.2 N ội dung: - T ách chiết A D N từ bệnh phẩm m áu để dùng cho kỹ thuật P C R -R F L P với cặp mồi đặc hiệu nhằm phân tích đột biến điểm cùa gen m ã cho yếu tố VIII liên quan đến bệnh máu khó đơng - Tách chiết A D N từ tóc bệnh nhi dùng cho kỹ thuật nested -P C R P C R -R F L P nhằm phát đột biến điểm , dột biến m ất đoạn gen CYP21 liên quan 'tốn bênh táng sán thương thận bám sinh Các kết quà đạt được: - Xây dim SI plnrơim pháp đa hình A D N (P C R -R F L P ) sử d ụn2 en zvm iỉiới hạn Bell trịn VÙIIÍI intron 18 2CI1 m ã cho Yêu tố VIII xác định nhũne cá thê’ hà mẹ m a n u sen bệnh truyén ch o - Xây dựng phương pháp đa hình ADN kết hợp với PCR-RPLP^sử dụng enzym giới hạn Acil vùng exon gen CYP21 để xác định đột biến điểm E1PL - Xây dựng phương pháp nested-PCR sử dụng en zy m giới hạn HhaẢ vùng intron gen CYP2Ỉ để xác định đột biến I2g vị trí cắt nối exonintron - Xây dựng phương pháp xác định nhanh đột biến đoạn bp exon gen CYP21 - Góp phần đào tạo nghiên cứu sinh theo hướng nghiên cứu đề tài (dự kiến bảo vệ vào tháng 3/2006) - Đã có báo đăng tạp chí chun ngành Tình hình kinh phí: K inh phí cấp: 0.00 0.0 00 đ K inh phí sử dụng: 0.00 0.0 00 đ CHỦ TRÌ ĐỀ TÀI TS Võ Thị Thương Lan C QUAN CHỦ TRÌ ĐỂ TÀI Đại học Q uốc G ia H Nội SƯM M ARY The title project: A pplication o f m o lecu lar genetic m ethods in diagnosis o f genetic deseases in V ietn am ese population for prevention o f h arm íul effects on the health Code num ber: QG-02,-13 Project Coordinator: Dr Vo Thi Thuong Lan Project members: - Assoc.Pro.Dr Trinh Hong Thai Department of Biology Hanoi Universitv of Science, H anoi N ational University - MSc Nguyen Thi Trung Department of Biologv, Hanoi Universitv of Science, Hanoi N ational University - MSc Nguyen Quynh Uyen Center of Biotechnologv, Hanoi National University - MSc Le N hat M inh Pasteur Institute o f Hanoi - Dr Tran K iem Hao H anoi M edicine College The objectives and research contents: 4.1 The objectives: - Application of PCR-RFLP method to analyse mutation in the intron 18 of the gene encod in g the factor VIII that involves in H em ophilia A - A pplication o f P C R -R F L P and nested- PCR m ethods to analyse m utations in the exon 1, intron and deletion in the exon of the gene CYP2Ỉ that involves in the conơenital adrenal hyperpalasia 4.2 The research contents: - Isolation of DNA from blood for PCR with the speciíic primers of the gene en co d in g the factor VIII that involves in H em o ph ilia A - A pplication o f P C R -R F L P to detect m utation in the intron 18 o f the gene encodins the factor VIII - Isolation of DNA from hairs for nested-PCR and multiplex-PCR \vith the speciíic primers of the gene encodins the 21 hvdroxylase that involves in the consenital adrcnal hvperplasia - A pplication o f P C R -R F L P to detect m utation in the exon intron and clolction in the ex on ol the eenc cncodiim the 21 hvdroxylasc Main results: - A method of PCR-RFLP using the restriction enzvm Bell for the intron 18 o f the gene enco d in g the íactor VIII to detect m others bearing the m utated aene - A method of PCR-RFLP using the restriction enzym Acil for the exon of the CYP21 gene to detect mutation in this exon - A method of nested-PCR in combination with PCR-RFLP using the restriction enzym Hhaì for the intron of the CYP21 gene to detect mutation in this intron - A method of PCR to rapidly detect the deletion on the exon of the CYP21 gene - Two papers have been published/accepted - O ne G raduate student is being directed under the research direction o f the project C enter o f B iotechnologv Project C oordinator TS V o Thi T h u o n g Lan Project im p lem en tin g O rganization Hanoi N ational n iv ersitv I M Ụ C LỤ C Trang Lời m đầu Nội dung Kết luận 27 Tài liệu tham khảo 28 Phụ lục 30 Phiếu đăng ký kết nghiên cứu 31 II M Ở Đ Ẩ U Bệnh ưa chẩy m áu hay gọi H em ophilia m ột bệnh di truyền gen lặn, liên kết nhiễm sắc thể giới tính X Bệnh thiếu yếu tố đông m áu tham gia vào q trình đơng m áu yếu tố VIII (H em ophilia A) yếu tố IX (H em ophilia B) [1, 2], thiếu hụt yếu tố VIII chủ yếu Gen m ã hóa tổng hợp yếu tố VIII (FV III) nằm nhánh dài nhiễm sắc thể giới tính X (Xq28) có kích thước 186 kb bao gồm 26 vùng exon 25 vùng intron [4] Trên gen FV III có vị trí nhận biết enzvm e giới hạn ổc/I/intron 18; Xbaĩ/intron 22; H in d ỉỉĩ/ intron 19; ổg/1/intron 25; M spl vùng đuôi ’ Đ ây m arker dùng để đánh giá bất thường FV III gây bệnh m áu khó đơng [6, 7, 8] Bước đầu, chọn m arker nhận biết enzym Bell nhằm phân tích đa hình A D N vùng intron 18 phương pháp P C R -R F L P [5] Kết mà chúng tồi nhận phần đáp ứng cho vấn đé cấp bách đặt cần xác định bà m ẹ m ang gen dị hợp tử xhx chẩn đốn sớm, từ giai đoạn bắt đầu m ang thai, để có biện pháp xử lý thích ứng với trường hợp Bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh (TSTTBS) bệnh di truyền lặn [10, 14] Đây tronơ bệnh chuyển hoá thường gặp nhất, đặc trưng thiếu hụt hoạt tính trons enzym cần thiết cho trình sinh tổng hợp cortisol; 21-hydroxylase (21-OH), lp -h y d ro x y la se (11OH), 17-hydroxylase (17-O H ), 3P-HSD 20-22 Desm olase [10] Hầu hết (90-95% ) trường hợp m ắc bệnh TSTTBS thiếu hụt enzym 21-O H G iám thiểu lượng enzym 21-O H tác động nghiêm trọng đến tổng hợp cortisol thượng thận, khiến phần lớn aldosterone bị thiếu hụt, dẫn đến tănti tiết ACTH tuyến yên sán xuất thừa anđroơen Enzym 21 -O H mã hoá bời sen C Y P Ỉ nằm nhiễm sác thể sỏ' p ỉ -3, chiều dài khoảng kb vù gồm 10 exon Đột biến tròn gen xảy chủ yếu exon 1, intron 2, đoạn cxon [14 17] Bước đáu sử dụng phư ns pháp PC R -R PL P nesteđ-PCR với cặp mồi dặc hiệu để phân tích nhữim đột biẽn hay iiặp nàv [14, 15, 18] Két chúng tỏi nhận phục vụ cho c ỏ n tác chan đoán sớm Điéu có ý nahĩa tro n s phát bệnh điều trị thích hợp, hạn chế nguy tử vong suy thượng thận cấp Bên cạnh nguy tử vong cao, bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh dẫn đến tượng nam hoá trẻ gái, giả dậy sớm, gây ảnh hưởng nặng nề đến phát triển thể chất, chức sinh dục, sinh sản, tâm lý bệnh nhi gia đình r a NỘ I DU NG CH ÍNH CỦA ĐỂ TÀI Đề tài tiến hành với hai bệnh: bệnh máu khó đơng Hemophilia A bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh * Bệnh máu khó đơng Hemophilia A bệnh di truyền gen lặn Đại đa số bệnh nhân (>90%) mắc bệnh đột biến gen mã cho yếu tố FVIII Gen nằm nhiễm sắc thể giới tính X Do đó, bệnh biểu người trai người mẹ mang gen mã cho yếu tố FVIII bị đột biến Trên gen FVIII có số dấu chuẩn vị trí nhận biết enzyme giới hạn Bc/I/intron 18, A7x/I/intron 22, H in d ỉĩỉ/ intron 19, #g/I/intron 25, M sp\ vùng đuôi ’ Đây dấu chuẩn cho phép đánh giá bất thường FVIII gây bệnh máu khó đơng Bước đầu, chọn dấu chuẩn nhận biết enzym Bell nhằm phân tích đa hình ADN vùnơ intron 18 phương pháp PCR-RFLP Mẫu ADN tách từ mẫu máu lấy từ bà mẹ bệnh nhân nam (con trai) * B ệ n h tăng sản th ợ n g th ậ n bẩm sinh (TSTTBS) bệnh di truyền lặn Hầu hết bệnh nhân TSTTBS liên quan đến đột biến gen CYP21 nằm nhiễm sắc thể thường Đột biến xảy gcn chủ yếu exon 1, intron đoạn exon Vì chúng tơi phân tích loại đột biến sử dụns ADN tách từ mẫu tóc số bệnh nhân trẻ em, số trẻ sơ sinh bị muối, suy thận cấp chẩn đoán mắc bệnh TSTTBS Do hầu hết bệnh nhàn nhỏ tuổi (2 tháng-5 tuổi) nên áp dụng phương pháp tách chiết ADN từ mẫu tóc khơng lấy máu nhằm giam thiếu đau bệnh nhân lượng mẫu khơng địi hỏi nhiều D ưới đ â y c h ú n g tơi x in trìn h b y tó m tắt n h ữ n g k ế t q u ả m đ ề tài đ t đ ợ c B Ệ N H M Á U K H Ĩ Đ Ơ N G H E M O P H I L I A A 1.1 Đối tuọng cho máu: C h ín bà m ẹ v n c i c o n trai (đ é u bị m ắ c b ệ n h m u k h ó đ n g H e m o p h i l a A ) d ợ c c h ọ n m đ ố i tư ợ n g n g h iê n cứu 1.2 T ách ch iết A D N genom e từ máu: ■ N ăm m l m áu lấy từ m ỗi đối tượng nghiên cứu M áu chống đông E D T A lOmM Thêm 15 ml dung dịch phá vỡ tế bào hồng cầu trộn lắc nhẹ ủ mẫu đá 30 phút hồng cầu ly tan hết Ly tâm thu cặn bạch cầu có nhân Các tế bào bào bạch cầu dùng để tách A D N thông qua bước sử dụng dung dịch phá vỡ m àng nhân, phân hủy protein proteinase K tủa AD N isopropanol Bước cuối cùng, AD N rửa với cồn 70% hoà 400 ul đệm TE A D N sử dụng phản ứng PCR 1.3 P hản ứng PCR: Phản ứng PCR thực với cặp mồi đặc hiệu cho vùng intron 18 để nhân đoạn tương ứng từ gen FVIII AD N genome Do phản ứng PCR nhạy với thay đổi nồng độ chất tham gia phản ứng, nhiệt độ gắn mồi, số chu kỳ nhân nên chúng tơi tiến hành thí nghiệm thăm dị tìm điều kiện tối ưu cho phản ứng Chúng tơi tìm điều kiện tối ưu cho phản ứng thể tích 50 ul sau: ịi AD N khuôn; 00 |iM dNTPs; l,5 m M M g C l2; 0,5 u Taq; lịil loại mồi nồng độ 40nM; 5|il đệm PCR Phản ứng PCR thực máy Am p Gen 9700 với chương trình 94°C- ’; 30 chu kỳ: ° c - 1’; 58°C-1’; ° c -1 ’; 720C 10 phút; ° C -2 \ Trình tự cặp mồi đặc hiệu trình bày Bảng Báno 1: Trình tự cặp mồi đặc hiệu °en FVIII dùng phàn ứng PCR để phát đột biến gây bệnh máu khó đơng Hemophilia A M ồi 8.1 5' T A A A A G C T T T A A A T G G T C T A G G C ’ M ồi 8.2 5' T T C G A A T T C T G A A A T T A T C T T G T T C G cn F V III 3' 10 PHẦN PHỤ LỤC TRUỒNG ĐHY HÀ NỘI * * * Sơ : íí^t.ĩr/QĐ/YHN CỘNG HOÀ XẢ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hanh phúc //ò n ộ i, ngày2.^ tháng 10 năm 2002 QUYẾT ĐỊNH CỦA HIỆU TRUỞNG TRUỒNG ĐẠI n ọ c Y HÀ NỘI vé việ c cô n g nh ậ n lé n để i cán hướng dả i\ NC S kim năm 2002 H IỆ U T R Ư Ở N G T R Ư Ờ N G ĐẠI HỌC V HẢ NÔI - C ăn n g h ị ( iịiili TỘ /Z Y D - N Đ ngày 28 tliá n g ] nám /955 cùa H ộ i dong C liin li p liù quy đ ịn li Iiliiệ m vụ, quyền hạn l ổ chức m áy Trường Đ i học Y ỉ ỉ N ội - C ăn đ ịn lt s ố 97- TTg ngày 11 llìán g năm 1977 cùa T liù tướng C hính p liù ginn nliiệm vụ đ lạ n n g liic n cứu sinh tro n g nước cho Trường D i học Y H N ội - C ăn cử q uyế t (lịn h s ố Ỉ8 IG D & D T ngày tháng năm 2000 cùa Bộ trường Bộ G iáo dục Đ o tạo vê q u y c liế d o tạo San d i học - Căn dịnìi s ổ 4387/QĐ/BGD&ĐT-SĐH ngày 24 tháng nám 2002 cùa Bộ tn t â iỉí Ị B ộ G iá o d ụ c vò D o tạ o vê v iệ c c ô n g n h ậ n N ịịI iì c ii cứu s in li năm 200 c ủ a Trường Dại học Y Hà Nội - Theo dê nghị ông Trưởng phồng Đào tạo Sau đại học Q U Y Ế T Đ ỊN II D iều 1: Cổng nhạn T lis Trần K iôm llà o , sinh năm 1970 lại Thừa lliiổ n Huê, l;\ nghiên cứu sinh quy dài hạn Iiăni 2002 cúa.Trường (lại học Y I nội với ilc lài Xác đ ịn li dột biên so gcn gíìy bệnh tăng sán thượng thận bẩm siiUi phát người lành m ang gen bệnh " Chuyên ngành : Nhi khoa; Mã sỏ : 3.01.43 Hình thức đào tạo : Tập trung Cán hướng dan: PGS.TS Nguyễn Thị Phượng, C.N: Nhi khoa - Đ1ỈYHN -I1DC TS Võ Thương Lan, CN : Sinh học - ĐHỌC Hà Nội - IIDP Uiều 2: Nghiên cứu sinh , cán hướng (lẫn có nhiệm vụ (lược hương quyên lợi gĩĩĩ Qui c h ế Đào tạo Sau dại học hành Bộ Giáo dục Đào tạo Đicu 3" Các ông Trường phòng Đaò tạo Sau đại học, cán hướng dân \à Iiglucn cưu sinh có tên irong đicu chiu trách nhiệm tin hanh Quyet đinh na) Nơi nhân: - Như điểu - Lưu VP Vụ SĐH ị , ’ |j■V IV0NS TIIĨNH MC&PT CỞNfi NBHỆSÌNH 1' ị' B ộ KHOA HỌC VA CÔNG NGHỆ I n HỘI CÔNG NGHỆ SINH HỌC VIỆT I ỳ:é; HỘI CAC NGÀNH SINH HỌC VIỆTN :1 , nỆN CÔNG NGHỆ SINH liợà Ẽ $ fo U lfô TẮM’ KHOA HỘCíTỰ NHIÊNVÀ CƠN g Ể Ệ Ê ị; Ị Ê - ?£:: Ê •, m * •• !T Ị " ■ ' ỵ •>' V n -„h Kim N auvén S ỹ Nguyên, D u v n g Thị Thuỷ, Dặng Dàng Hồng Phuvc Hiến, Dăng D‘nh«‘2 a T h ị Thòm J e n s D a h lm a n n T o m o a ki Itayam a 70 74 75 79 I H ội nghị Cơng nghệ Sinh học tồn quốCy Hà Nội 2003 nh iệt đới: tre t ẩ m vô n g , lõi thọ, khoai m ỡ khoai l a n g T h e application of p h o to a u to tr o p h ỉc m icrop ro pag atio n for s o m e tropical plant species: T h yrso sta ch ys s id m e n s is , G m e lin a a r b o r e a Roxb., dio sco rea alata, Ipo m o e a b a la ta s L 3B.P.23 s t u d y on b io c h e m ic a ỉ c h a c te ris tic s of high te m p e tu re tolerant calli - derived rice lin e s T h e pu re lin es of d ia tio n -in d u c e d m u ta n ts from aromatic Tam R i c e Prim ary resu lt o n s o m a t i c e m b r y o g e n e s i s in A nthunum a n d re a n u m P e g - m e d i a te d tr a n s ío r m a tio n into proto plasts of Brassica n a p u s 3B P.28 962 966 967 970 971 875 H T h ị T huý, Trấn T h ị H ạnh, Đ ố N ng Vịnh T o d ò n g tứ bội th ể c a m xã đ ồi b ằ n g xử lý cchicine chổi nuôi cấy điểu kiện in v i t r o * 976 Induction of tetraplo id p la n ts írom dipỉoỉd o n g e cullivnr Xa doni hy colchicine shool tr e a tm e n t ỉn v it r o 900 Đ ỏ N ả ng V ịnh, H T h ị T huý, D in h Đ oàn Long, Lẻ H uy Hàm N g h iê n u q u y trinh n h â n n h a n h in vitro thuốc quý nh ập nội Potasites hybridus L R ap id clonal p r o p a g a t io n of exotic medicinal plant Petasilesr hybridus L 3B.P.29 961 R ysch ka , u, L ẽ H u y H àm , P hạ m Thị L ý Thu, Đ ổ Nàng Vịnh Biến n p g e n v o tế b o trần cải d ầ u ( Brassica napus) thông q ua polyethylene glycol 3B.P.27 958 Đ o àn D u y Thanh, N g u y é n H u y Thuần, N g uyẻ n Thanh Toàn, Đỏ Nàng Vịnh Một s ố kết q u ả n g h iê n c ứ u tạ o phơi vỏ tính ỏ c â y Hổng môn (A nthurium andreanu m ) 3B P.26 957 L ẻ X u â n Thám, H ố Q u a n g Cua, N g u yé n Thị Thu Hiển, N guyẻn N gọc Ngân, N guyẻn Thị N g ọ c Tú, L ê T rán B ìn h , L ê X u â n Dắc C c d ò n g độ t b iến p h ó n g x th u ẩ n giống lúa tám thơm ( Oryza sativa L subsp ịapo nica ) 3B.P.25 953 N g u yê n T h ị Tâm , N g u y ễ n T h ị Tỵ, L ẽ Trán B in h Đ n h giá m ột s o đ ặ c đ ie m h o sinh c ù a c c d ị n g lúa chọn lọc có nguổn gố c từ mô se o chịu nhiệt đ ộ c a o 3B.P.24 29 981 986 D ng M in h Nga, H T hị Thuý, Lé Q uỳn h Mal, Đổ Nảng Vịnh N g h iê n cử u h o n thiện q u y trinh n h n n h an h c c giống hoa dón g liền (G o b e ịa m e s o n ii) 987 n h ậ p nội b ằ n g c ô n g n g h ộ in v it r o 991 s t u d y o n rapid multiplication of new G e rb e varieties by in vitro lech niqu es 3B P.30 N g u y ê n Q u ó c Thiện, P hạ m Thị B ích Thủy, Phạm Thị Nhung, Vú Q uốc Luận, N g uyê n Trl M in h , D o n g Tấn N h ự t Ả nh h n g c ủ a n uò l c ấ y th o n g lên s ự sinh trưởng vá phái triển c ủ a c â y h o a Bi Bi nuỏl c ấ y II) E ííect of th e a e l io n on the grovvth an d developm ent of G ypsophyla P a n icu la ta \ 992 996 CÔ NG NGHẸ SINH HỌC Y - DƯỢC N g u y ê n T hị Thanh Hà, H T h ị L lín , N g uyẻ n Thị Phích Tìm hiểu s m a n g vi k h u ẩ n kh k h án g sinh mũi hon g Irè lành tuổi H Nôi N a s o p h n r y n g e a l c a r r ia g e of antibiolic-resislant s p n e u m oniae a n d H m fìuenzae isolated from children in Hanoi, V ie tn a m 999 1003 I H ội nghị Cóng nghệ Sinh học tồn quốc, Hà Nội 2003 3B P 29 nhiệt đới: tre t ầ m v ô n g , lõi thọ, khoai mỡ khoai l a n g 953 T h e application of p ho to a u to tro p h ỉc micropropagation for so m e tropical plant spe cies: T h yrso sta ch ys s id m e n s is , G m elina a r b o r e a Roxb., d ioscorea alaỉa, Ip o m o e a b a ỉa ỉ a s L 957 N g u yễ n T hl Tâm, N g u y ẻ n T h l Tỵ, Lẻ Trổn B ình Đ a n h gia m ọt s o đ ặ c đ ie m h o a sinh c u a c c dịng lúa chọn lọc có n gu ổn g ố c từ mò s ẹ o chịu nhiệt đ ộ c a o 958 s t u d y on b io ch em ical c h a c te ristic s of high tem p eratu re tolerant calli - derived rice l i n e s B P 24 961 L ẻ X u â n Thám , H ố Q u s n g Cua, N g uyê n Thị Thu Hiến, N guyên N g ọc Ngàn, N g uyê n ThỊ N g ọ c Tú, Lẽ Trần B ìn h , L ẽ X u â n Đác C c d ị n g đ ột biến p h ó n g xạ th u ẩn giống lúa tám thơm (O ryza saíiva L subsp ịa po nica ) 962 966 T h e p u relin es of diatio n -ind uced m u tan ts from aromatic Tam R i c e 3B P.25 Đ o àn D u y Thanh, N g u y é n H u y Thuẩn, N g uyê n Thanh Toàn, Dỏ Nảng Vịnh Một sỏ kết q u ả n g h iê n u tạo phơi vơ tính c ây Hống mịn (A n th u riu m a n d re a n u m ) 967 970 Primary resu lt o n s o m a ti c e m b r y o g e n e s i s in A nthurium a n dreanu m 3B P.26 R ysch ka , u, Lẻ H u y Hàm, P hạm Thị L ý Thu, Đ ỏ Nàng Vịnh Biến n p g e n v o tế b o trần cải d ầ u (B rassica napus) thòng q u a poly ethylene glycol 971 875 P e g - m e d i a te d tr a n sío rm a tio n into protop lasts of Brassica n a p u s 3B P.27 Hà T hị Thuý, Trần ThỊ H ạnh, D ổ N àng Vịnh T o d ò n g tứ bội th ể c a m xã đoài b ằ n g xử lý colchicine chổi nuôi cấ y điều kiện in v i t r o .* ỉnduction of totraploid plan ts from diplold o n g e cultivar Xa doai hy colchicine shoot t r e a tm e n t in v i t r o 3B.P.28 976 900 Đ ỏ N ảng Vịnh, Hà T hị T huý, D inh Đ oàn Long, Lẻ Huy Hàm N ghiên u q u y trinh n h â n n h a n h in vitro thuốc quý n h ậ p nội Pữtasites hyb rid us L 981 986 R ap id clonal p ro p a g a tio n of exotic medicinal plant P eta sites hyb rid us L B P.29 D ng M in h Nga, Hà T hị Thuý, Lẻ Q uỳn h Mal, Đỏ Nảng Vịnh N ghiên cứu lìo n thiện q uy trình n h â n n h a n h c c giống ho a đóng tiền {G c b e ịa m o s o n ii) nhập nội công B P.30 987 991 n g h ộ i n V I t r o S tu d y on rapid multiplication of new G e rb e varieties by in V I tro t e c h n i q u e s N g u yê n Q u ố c Thiện, P hạ m Thị B ic h Thủy Phạm Thị N hung, Vù Q uốc Luận, N g uyé n Trl M in h , D u v n g Tân N h ụ t Ảnh h ng c ủ a n uòl c ấ y th o n g khí lên s ự sinh trường phát triển c ù a c y h o a Bi Bi 992 996 n uôi c â y //) E ííect of th e a e r a t io n o n (he grovvth a nd d evelo pm ent oí G ypsophyla P a n icu la ta L C Ô NG NGHỆ SINH HỌC Y - Dược N g u y ề n T hl Thanh Hà, H Thl Llin, N g uyé n ThỊ P hlch * Tìm hiểu s ự m a n g vi k h u ẩ n k h a n g k h án g sinh ỏ mùi họng t r ẻ a n h dlưới L N ansTo ph hnnlrayen ag el ^a lc ca anrri aiagg ee of an.ibio.ic-resis.an írom children in H anoi, V ietn am s pneum oniB e an d