Phát hiện gián tiếp đột biến gen EGFR trong ung thư biểu mô tuyến của phổi bằng kỹ thuật hóa mô miễn dịch: Luận văn ThS. Công nghệ nano sinh học (chuyên ngành đào tạo thí điểm)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGH NINH VN QUYT PHáT HIệN GIáN TIếP ĐộT BIếN GEN EGFR TRONG UNG THƯ BIểU MÔ TUYếN CủA PHổI BằNG Kỹ THUậT HóA MÔ MIễN DịCH LUN VN THC SĨ CÔNG NGHỆ NANO SINH HỌC HÀ NỘI - 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGH NINH VN QUYT PHáT HIệN GIáN TIếP ĐộT BIếN GEN EGFR TRONG UNG THƯ BIểU MÔ TUYếN CủA PHổI BằNG Kỹ THUậT HóA MÔ MIễN DịCH Chuyờn ngnh: Cụng nghệ Nano Sinh học Mã số: Chuyên ngành đào tạo thí điểm LUẬN VĂN THẠC SĨ CƠNG NGHỆ NANO SINH HỌC Cán hƣớng dẫn:1 TS Trần Đăng Khoa PGS.TS Nguyễn Văn Hƣng HÀ NỘI - 2017 LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn: Thầy, Cô Khoa Vật lý kỹ thuật Công nghệ nano, đặc biệt thầy, cô chuyên ngành Công nghệ nano Sinh học Ban Giám hiệu, Phòng đào tạo Sau Đại học, Trƣờng Đại học Công nghệ - ĐHQGHN dạy dỗ, động viên tạo điều kiện cho suốt trình học tập làm luận văn Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn vơ hạn tới TS Trần Đăng Khoa, PGS.TS Nguyễn Văn Hƣng hai ngƣời thầy trực tiếp dạy dỗ, hƣớng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thực luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến thầy cô, đồng nghiệp, ngƣời tạo điều kiện, giúp đỡ thực luận văn gồm: - Ban Giám đốc Trung tâm Giải phẫu bệnh – Bệnh viện Bạch Mai tất anh, chị nhân viên đồng nghiệp - Các anh, chị đồng nghiệp Đơn vị Gen – Trung tâm Ung bƣớu Y học hạt nhân – Bệnh viện Bạch Mai Từ tận đáy lịng mình, xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân tình đến tất bệnh nhân gia đình họ giúp tơi có đƣợc số liệu luận văn Cuối cùng, xin ghi nhớ công ơn sinh thành, dƣỡng dục bố mẹ Con xin cảm ơn bố mẹ, tất ngƣời thân gia đình, bạn bè ln ln kề bên, chỗ dựa vững chắc, giúp vƣợt trở ngại, khó khăn sống cơng việc Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 11 năm 2017 Ninh Văn Quyết LỜI CAM ĐOAN Tôi Ninh Văn Quyết, học viên cao học khóa 22 trƣờng Đại học Công nghệ - Đại học Quốc gia Hà Nội chuyên ngành Công nghệ nano Sinh học, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực dƣới hƣớng dẫn Thầy Trần Đăng Khoa, Thầy Nguyễn Văn Hƣng Cơng trình không trùng lặp với nghiên cứu khác đƣợc công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, đƣợc xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trƣớc pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Ngƣời viết cam đoan Ninh Văn Quyết CHỮ VIẾT TẮT HMMD Hóa Mơ Miễn Dịch EGFR Thụ thể yếu tố phát triển biểu bì MBH Mơ Bệnh Học UTBM Ung thƣ biểu mô UTBMT Ung thƣ biểu mô tuyến UTP Ung thƣ phổi WHO Tổ chức y tế giới LPĐTTĐ Liệu pháp điều trị trúng đích MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1:TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lƣợc dịch tễ học ung thƣ phổi yếu tố nguy 1.1.1 Dịch tễ học 1.1.2 Các yếu tố nguy 1.2 Một số đặc điểm lâm sàng – cận lâm sàng ung thƣ phổi ung thƣ biểu mô tuyến phổi 1.2.1 Lâm sàng 1.2.2 Một số đặc điểm cận lâm sàng khác 1.3 Đặc điểm mô bệnh học ung thƣ biểu mô tuyến phổi 1.3.1 Ung thƣ biểu mô tuyến xâm nhập thông thƣờng 1.3.2 Các biến thể đặc biệt ung thƣ biểu mô tuyến xâm nhập 10 1.3.3 Ung thƣ biểu mô tuyến chỗ 10 1.3.4 Ung thƣ biểu mô tuyến xâm nhập tối thiểu 11 1.4 Đột biến gen EGFR bệnh nhân ung thƣ biểu mô tuyến phổi 11 1.4.1 Đặc điểm phân tử EGFR 11 1.4.2 Đột biến gen EGFR ung thƣ biểu mô tuyến phổi 13 1.5 Hóa mơ miễn dịch 15 1.5.1 Kỹ thuật hóa mơ miễn dịch 15 1.5.2 Các nguyên lý phƣơng pháp hóa mơ miễn dịch 16 1.5.3 Yêu cầu kỹ thuật 18 1.5.4 Phƣơng pháp 18 1.6 Một số phƣơng pháp khác phát đột biến gen EGFR 22 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 26 2.1.1 Đối tƣợng 26 2.1.2 Tiêu chuẩn lựa chọn 26 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 26 2.1.4 Địa điểm nghiên cứu 26 2.1.5 Thời gian nghiên cứu 26 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 27 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 27 2.2.2 Cỡ mẫu chọn mẫu 27 2.2.3 Biến số nghiên cứu 27 2.2.4 Các bƣớc tiến hành nghiên cứu 28 2.2.5 Xử lí số liệu 28 2.2.6 Khía cạnh đạo đức nghiên cứu 28 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29 3.1 Phân bố bệnh theo tuổi giới 29 3.2 Chất lƣợng tiêu đƣợc phủ chất màu thời gian phút phút 30 3.3 Hóa mơ miễn dịch đột biến gen EGFR 31 3.3.1 Bộc lộ dấu ấn EGFR 31 3.3.2 Bộc lộ dấu ấn EGFR đánh giá theo mức độ biểu HMMD 32 3.4 Một số mối liên quan 32 3.4.1 Bộc lộ dấu ấn EGFR theo tuổi 32 3.4.2 Bộc lộ dấu ấn EGFR theo giới 33 3.5 Đối chiếu kết hóa mơ miễn dịch phƣơng pháp PCR phát đột biến gen EGFR UTBMT phổi 33 Chƣơng 4: BÀN LUẬN 36 4.1 Một số đặc điểm giới tuổi 36 4.2 Thời gian phủ chất màu ảnh hƣởng đến chất lƣợng tiêu 37 4.3 Bộc lộ EGFR 37 4.4 Liên quan bộc lộ EGFR với yếu tố 39 4.4.1 Liên quan bộc lộ EGFR với tuổi 39 4.4.2 Liên quan bộc lộ EGFR với giới 40 4.5 Đối chiếu kết hóa mơ miễn dịch phƣơng pháp PCR phát đột biến gen EGFR UTBMT phổi 40 KẾT LUẬN 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng1.1: Trình tự số mồi nhân dịng exon EGFR 25 Bảng 3.1: Phân bố bệnh theo nhóm tuổi giới 29 Bảng 3.2: Chất lƣợng tiêu đƣợc nhuộm HMMD phủ DaB thời gian phút phút 30 Bảng 3.3: Bộc lộc dấu ấn EGFR 31 Bảng3.4: Bộc lộ dấu ấn EGFR đánh giá theo mức độ biểu HMMD 32 Bảng 3.5: Bộc lộ dấu ấn EGFR theo tuổi 32 Bảng 3.6: Bộc lộ dấu ấn EGFR theo giới 33 Bảng 3.7: Kết phƣơng pháp HMMD phƣơng pháp PCR phát đột biến gen EGFR 33 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1: Phân bố bệnh theo giới 29 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Hình ảnh UTP X-quang thƣờng quy ngực nội soi phế quản Hình 1.2 Mơ hình cấu trúc hoạt động thụ thể yếu tố tăng trƣởng biểu mô 12 Hình 1.3: Cơ chế gây đột biến 14 Hình 1.4: Cấu trúc kháng nguyên – kháng thể 19 Hình 1.5: Ngun lý mơ tả phƣơng pháp hóa mơ miễn dịch 20 Hình 1.6: Ảnh minh họa dƣơng tính EGFR 22 Hình 3.1: Tiêu nhuộm lỗi, phủ DAB lâu bị 30 Hình 3.2: Tiêu nhuộm HMMD bị lỗi, tiêu bị gấp xƣớc 31 Hình 3.3: Tiêu nhuộm HMMD đạt chất lƣợng 34 Hình 3.4: Minh họa kết PCR-EGFR 35 8,12,14,19,20,29,30,31,34,35 1-7,9-11,13,15-18,21-28,32-33,36-56,65- ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, toàn giới, bệnh ung thƣ vƣợt qua bệnh tim mạch để trở thành nguyên gây tử vong hàng đầu với tỷ lệ mắc bệnh cao độ tuổi mắc bệnh ngày giảm[6][9] [70] Với tốc độ phát triển dân số gia tăng tuổi thọ nhƣ ƣớc tính đến năm 2050, giới có thêm khoảng 27 triệu trƣờng hợp ung thƣ mắc khoảng 17,5 triệu bệnh nhân tử vong năm[6] [70]; phải kể đến ung thƣ phổi (UTP), nguyên gây tỷ lệ mắc tử vong hàng đầu với thể ung thƣ biểu mô tuyến phổichiếmđến40%cáctrƣờnghợp [12][13] Những nghiên cứu thực nƣớc có y học tiên tiến cho thấy việc áp dụng kỹ thuật sinh học phân tử chẩn đoán điều trị mang lại lợi ích bật cho bệnh nhân ung thƣ Các nhà khoa học đánh giá cách tổng quát tƣơng tác gen, đƣờng dẫn truyền tín hiệu nội bào ảnh hƣởng dịng thác tín hiệu tế bào đến trình tái bản, chép phiên mã, từ tác động lên q trình sinh trƣởng, biệt hóa, di chuyển chết theo chƣơng trình tế bào Nhƣ vậy, với biến đổi gen xảy làm thay đổi cân hoạt động sống tế bào, biến tế bào lành trở thành tế bào ác tính gây chết tế bào Mặt khác, có biến đổi gen lại khiến tế bào trở nên nhạy cảm đề kháng với tác nhân ngoại bào nhƣ tác nhân lý, hóa Trong đó, thay đổi tính đáp ứng tế bào với các thuốc điều trị ung thƣ ví dụ điển hình Đây sở khoa học để nhà khoa học nghiên cứu ứng dụng loại thuốc tác động trực tiếp lên thụ thể tế bào nhằm ức chế phát triển tế bào ung thƣ gọi liệu pháp điều trị ung thƣ trúng đích (targeted cancer therapy) Ƣu điểm phƣơng pháp liều điều trịthấp, đặc hiệu, độc hại đặc biệt hiệu đƣợc nâng cao cách rõ rệt, thể trạng ngƣời bệnh đƣợc tăng cƣờng kéo dài thời gian sống cho bệnh nhân[9][28] 36 Dong Y.J, Cai Y.R, Zhou L.J cs (2016), Association between the histological subtype of lung adenocarcinoma, EGFR/KRAS mutation status and the ALK rearrangement according to the novel IASLC/ATS/ERS classification Oncology Letters, 11, 2552-2558 37 Elison G, DonaldE, McWalter G cs (2010), A comparison of ARMS and DNAsequencing for mutation analysis in clinical biopsy samples Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 29, doi: 10.1186/1756-9966-1129-1132 38 Finber K.E, Sequist L.V, Joshi V.A cs (2007), Mucinous differentiation correlates with absence of EGFR mutation and presence of KRAS mutation in lung adenocarcinomas with bronchioloalveolar features Journal of Molecular Diagnostics, 9, 320-326 39 Gadzar AF (2009), Activating and resistance mutations of EGFR in non-small-cell lung cancer: role in clinical response to EGFR tyrosine kinase inhibitors Oncogene, 28, S24-S31 40 Gahr S, Stoehr R, Geissinger E cs (2013), EGFR mutational status in a large series of Caucasian European NSCLC patients: data from daily practice British Journal of Cancer, 109, 1821-1828 41 Gioeli D (2011), Targeted Therapies Mechanisms of Resistance, Humana Press, Humana Press, USA 42 Girad N, Sima C.S, Jackman D.M cs (2012), Nomogram to predict the presence of EGFR activating mutation in lung adenocarcinoma European Respiratory Journal, 39, 366-372 43 Guha M, Castellanos-Rizaldos E Makrigiorgos G.M (2013), DISSECT Method Using PNA-LNA Clamp Improves Detection of EGFR T790m Mutation 10.1371/journal.pone.0067782 Plos One, 8, doi: 44 Hasleton P Flieder D.B (2013), Spencer’s Pathology of the Lung, Cambridge University Press, USA 45 Herth F.J.F (2011), Bronchoscopic techniques in diagnosis and staging of lung cancer Breathe, 7, 325-337 46 Hsu C.H, Tseng C.H, Chiang C.J cs (2016), Characteristics of young lung cancer: Analysis of Taiwan's nationwide lung cancer registry focusing on epidermal growth factor receptor mutation and smoking status Oncotarget, 7, 46628-46635 47 International Agency for Research on Cancer (2012), Lung Cancer Estimated Worldwide Incidence, Mortality in and Prevalence 2012, 48 Jemal A, Tiwari R.C, Murray T cs (2004), Cancer Statistics CA: A Cancer Journal for Clinicians, 54, 8-29 49 Kadota K, Nitadori J, Sarkaria I.S cs (2013), Thyroid Transcription Factor–1 Expression Is an Independent Predictor of Recurrence and Correlates with the IASLC/ATS/ERS Histologic Classification in Patients with Stage I Lung Adenocarcinoma Cancer, 119, 931-938 50 Kadota K, Yeh Y.C, D'Angelo S.P cs (2014), Associations between mutations and histologic patterns of mucin in lung adenocarcinoma: Invasive mucinous pattern and extracellular mucin are associated with KRAS mutation 51 Kawada I, Soejima K, Watanabe H cs (2008), An alternative method for screening EGFR mutation using RFLP in non-small cell lung cancer patients J Thorac Oncol, 3, 1096-1103 52 Kim H.J, Choi E.Y, Jin H.J cs (2014), Relationship Between EGFR Mutations and Clinicopathological Features of Lung Adenocarcinomas Diagnosed via Small Biopsies Anticancer Research, 34, 3189-3196 53 Kozielski J, Kaczmarczyk G, Porebska I cs (2012), Lung cancer in patients under the age of 40 years Contemporary Oncology, 16, 413-415 54 Kwei KA, Kim YH, Girard L cs (2008), Genomic profiling identifies TITF1 as a lineage-specific oncogene amplified in lung cancer Oncogene, 27, 3635-3640 55 Lai Y, Zhang Z, Li j cs (2013), EGFR Mutations in Surgically Resected Fresh Specimens from 697 Consecutive Chinese Patients with Non-Small Cell Lung Cancer and Their Relationships with Clinical Features International Journal of Molecular Sciences, 14, 2454924559 56 Lemmon M.A (2009), Ligand-induced ErbB receptor dimerization Experimental cell research, 315, 638-648 57 Li A.R, Chitale D, Riely G.J cs (2008), EGFR Mutations in Lung Adenocarcinomas Clinical Testing Experience and Relationship to EGFR Gene Copy Number and Immunohistochemical Expression The Journal of Molecular Diagnostics: JMD, 10, 242-248 58 Liam C.K, Lim K.H Wong C.M (2002), Non-small Cell Lung Cancer in Very Young and Very Old Patients* Chest, 121, 354-357 59 Liang H.Y, Li X.L, Yu X.S cs (2009), Facts and fiction of the relationship between preexisting tuberculosis and lung cancer risk: a systematic review Int J Cancer, 125, 2936-2944 60 Littlefield P, Lijun L, Mysore V cs (2014), Structural analysis of the EGFR/HER3 heterodimer reveals the molecular basis for activating HER3 mutations Science signaling, 7, ra114 61 Liu J, XY L, YQ Z cs (2014), Genotype-phenotype correlation in Chinese patients with pulmonary mixed type adenocarcinoma: Relationship between histologic subtypes, TITF-1/SP-A expressions and EGFR mutations Pathology - Research and Practice, 210, 176-181 62 Lo Y.M (1998), The amplification refractory mutation system Methods Mol Med, 16, 61-69 63 Luo M Fu L.W (2014), Redundant kinase activation and resistance of EGFR-tyrosine kinase inhibitors American Journal of Cancer Research, 4, 608-628 64 Ma Y, Fan M, Dai L cs (2015), The expression of TTF-1 and Napsin A in early-stage lung adenocarcinoma correlates with the results of surgical treatment Tumour Biol, 36, 8085-8092 65 Min L Li-Wu F (2014), Redundant kinase activation and resistance of EGFR-tyrosine kinase inhibitors American Journal of Cancer Research, 4, 608-628 66 Mok T.S, Yi-Long W, Thongprasert S cs (2009), Gefitinib or Carboplatin–Paclitaxel in Pulmonary Adenocarcinoma The NEW ENGLAND JOURNAL of MEDICINE, 361, 947-957 67 National Cancer Institute (2011), Radon and Cancer, 68 Oxnard G.R, Arcila M.E, Chmielecki J cs (2011), New Strategies in Overcoming Acquired Resistance to EGFR Tyrosine Kinase Inhibitors in Lung Cancer Clinical Cancer Research, 17, 5530-5537 69 Oxnard GR, Arcila ME Sima CS (2011), Acquired resistance to EGFR tyrosine kinase inhibitors in EGFR-mutant lung cancer: distinct natural history of patients with tumors harboring the T790M mutation Clinical cancer research: an official journal of the American Association for Cancer Research, 17, 1616-1622 70 Parkin D.M, Pisani P Ferlay J (1993), Estimates of the worldwide incidence of eighteen major cancers in 1985 Int J Cancer, 54, 594-606 71 Pelosi G, Fraggetta F, Pasini F cs (2001), Immunoreactivity for thyroid transcription factor-1 in stage I non-small cell carcinomas of the lung Am J Surg Pathol, 25, 363-372 72 Ping Z, Qian Q, Benjamin W cs (2013), Prognostic value of TTF-1 expression in patients with non-small cell lung cancer: a meta-analysis Translational cancer research, 2, 25-32 73 Qingchun Zh, Song X, Jinghao L cs (2015), Thyroid transcription factor-1 expression is significantly associated with mutations in exon 21 of the epidermal growth factor receptor gene in Chinese patients with lung adenocarcinoma OncoTargets and therapy, 8, 2469-2478 74 Russell P.A Wirght G.M (2016), Predominant histologic subtype in lung adenocarcinoma predicts benefit from adjuvant chemotherapy in completely resected patients: discovery of a holy grail? Annals of Translational Medicine, 4, doi: 10.3978/j.issn.2305- 5839.2015.3910.3921 75 Russell P.A Wright G.M (2016), Predominant histologic subtype in lung adenocarcinoma predicts benefit from adjuvant chemotherapy in completely resected patients: discovery of a holy grail? Annals of Translational Medicine, 4, doi: 10.3978/j.issn.2305- 5839.2015.3910.3921 76 Shanzhi W, Yiping H, Ling H cs (2014), The Relationship between TTF-1 Expression and EGFR Mutations in Lung Adenocarcinomas Plos One, 9, :e95479 doi:95410.91371/journal.pone.0095479 77 Sheffield B.S, Bosdet I.E, Ali R.H cs (2014), Relationship of thyroid transcription factor to EGFR status in non-small-cell lung cancer Current Oncology, 21, 305-308 78 Shi Y, Au J.S-K, Thongprasert S cs (2014), A Prospective, Molecular Epidemiology Study of EGFR Mutations in Asian Patients with Advanced on–Small-Cell Lung Cancer of Adenocarcinoma Histology (PIONEER) Journal of Thoracic Oncology, 9, 154-162 79 Siegel R.L, Miller K.D Jemal A (2016), Cancer statistics CA: A Cancer Journal for Clinicians, 66, 7-30 80 Skov BG, Høgdall E, Clementsen P cs (2015), The prevalence of EGFR mutations in non-small cell lung cancer in an unselected Caucasian population APMIS, 123, 108-115 81 Slaughter E, Gersberg R.M, Kayo W cs (2011), Toxicity of cigarette butts, and their chemical components, to marine and freshwater fish Tobacco Control, 20, i25-i29 82 Somaiah N, Fidler M.J, Garrett-Mayer E cs (2014), The Relationship between TTF-1 Expression and EGFR Mutations in Lung Adenocarcinomas Oncoscience, 1, 522-528 83 Song Z, Zhu H, Guo Z cs (2013), Correlation of EGFR mutation and predominant histologic subtype according to the new lung adenocarcinoma classification in Chinese patients Med Oncol, 30, doi: 10.1007/s12032-12013-10645-12031 84 Stenhouse G, Fyfe N, King G cs (2004), Thyroid transcription factor in pulmonary adenocarcinoma Journal of Clinical Oncology, 57, 383-387 85 Subramanian J, Morgensztern D, Goodgame B cs (2010), Distinctive characteristics of non-small cell lung cancer (NSCLC) in the young: a surveillance, epidemiology, and end results (SEER) analysis Journal of Thoracic Oncology, 5, 23-28 86 Sun P.L, Seol H, Lee H.J cs (2012), High incidence of EGFR mutations in Korean men smokers with no intratumoral heterogeneity of lung adenocarcinomas: correlation with histologic subtypes, EGFR/TTF1 expressions, and clinical features J Thorac Oncol, 7, 323-330 87 Tang X, Kadara H, Behrens C cs (2011), Abnormalities of the TITF-1 lineage-specific oncogene in NSCLC: Implications in lung cancer pathogenesis and prognosis Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research, 17, 2434-2443 88 Thomas A, Chen Y, Yu T cs (2015), Trends and characteristics of young non-small cell lung cancer patients in the United States Frontier in Oncology, 5, 10.3389/fonc.2015.00113 89 Thunnissen E (2012), Pulmonary adenocarcinoma histology Translational Lung Cancer Research, 1, 276-279 90 Thunnissen E, Beasley M.B, Borczuk A.C cs (2012), Reproducibility of histopathological subtypes and invasion in pulmonary adenocarcinoma: An international interobserver study Modern pathology : an official journal of the United States and Canadian Academy of Pathology, Inc, 25, 1574-1583 91 Tomizawa Y, Iijima H, Sunaga N cs (2005), Clinicopathologic significance of the mutations of the epidermal growth factor receptor gene in patients with non-small cell lung cancer Clinical Cancer Research, 11, 6816-6822 92 Travis W.D, Brambila E, Noguchi M cs (2011), International Association for the Study of Lung Cancer/American Thoracic Society/European Respiratory Society International Multidisciplinary Classification of Lung Adenocarcinoma Journal of thoracic oncology: official publication of the International Assocication for the Study of Lung Cancer, 6, 244-285 93 Travis W.D, Brambilla E, Burke A.P cs (2015), WHO Classification of Tumours of the Lung, Pleura, Thymus and Heart, WHO Press, Switzerland 94 Travis W.D, Brambilla E, Müller-Hermelink H.K cs (2004), Pathology & Genetics Tumours of the Lung, Pleura, Thymus and Heart, IARC Press, Lyon 95 Tsuta K, Kawago M, Inoue E cs (2013), The utility of the proposed IASLC/ATS/ERS lung adenocarcinoma subtypes for disease prognosis and correlation of driver gene alterations Lung Cancer, 81, 371-376 96 Turner M.B, Cagle P.T, Sainz I.M cs (2012), Napsin A, a New Marker for Lung Adenocarcinoma, Is Complementary and More Sensitive and Specific Than Thyroid Transcription Factor in the Differential Diagnosis of Primary Pulmonary Carcinoma Arch Pathol Lab Med, 136, 163-171 97 Ujiie H, Kadota K, Chaft J.E cs (2015), Solid Predominant Histologic Subtype in Resected Stage I Lung Adenocarcinoma Is an Independent Predictor of Early, Extrathoracic, Multisite Recurrence and of Poor Postrecurrence Survival Journal of Clinical Oncology, 33, 2877-2884 98 Villa C, Cagle P.T, Johnson M cs (2014), Correlation of EGFR Mutation Status With Predominant Histologic Subtype of Adenocarcinoma According to the New Lung Adenocarcinoma Classification of the International Association for the Study of Lung Cancer/American Thoracic Society/European Respiratory Society Arch Pathol Lab Med, 138, 99 Wang S, Yu B, Ng C.C cs (2015), The suitability of small biopsy and cytology specimens for EGFR and other mutation testing in non-small cell lung cancer Translational Lung Cancer Research, 4, 119-125 100 Weir B.A, Woo M.S, Getz G cs (2007), Characterizing the cancer genome in lung adenocarcinoma Nature, 450, 893-898 101 Wieduwilt MJ Moasser MM (2008), The epidermal growth factor receptor family: biology driving targeted therapeutics Cellular and molecular life sciences: CMLS, 65, 1566-1584 102 Yamaguchi T, Yanagisawa K, Sugiyama R cs (2012), NKX21/TITF1/TTF-1-Induced ROR1 is required to sustain EGFR survival signaling in lung adenocarcinoma Cancer cell, 21, 348-361 103 Yang L, Lin M, Ruan W cs (2012), Nkx2-1: a novel tumor biomarker of lung cancer Journal of Zhejiang University Science, 13, 855-866 104 Yatabe Y, Matsuo K Mitsudomi T (2011), Heterogeneous distribution of EGFR mutations is extremely rare in lung adenocarcinoma J Clin Oncol, 29, 2972-2977 105 Yip P.Y (2015), Phosphatidylinositol 3-kinase-AKT-mammalian target of rapamycin (PI3K-Akt-mTOR) signaling pathway in non-small cell lung cancer Translational Lung Cancer Research, 4, 165-176 106 Yoshizawa A, Motoi N, Riely G.J cs (2011), Impact of proposed IASLC/ATS/ERS classification of lung adenocarcinoma: prognostic subgroups and implications for further revision of staging based on analysis of 514 stage I cases Modern Pathology, 24, 653-664 107 Yoshizawa A, Sumiyoshi S, Sonobe M cs (2013), Validation of the IASLC/ATS/ERS lung adenocarcinoma classification for prognosis and association with EGFR and KRAS gene mutations: analysis of 440 Japanese patients Journal of Thoracic Oncology, 8, 52-61 108 Young E.C, Owens M.M, Adebiyi I cs (2013), A comparison of methods for EGFR mutation testing in non-small cell lung cancer Diagn Mol Pathol, 22, 190-195 109 Yuxin L, Xian W Hongchuan J (2014), EGFR-TKI resistance in NSCLC patients: mechanisms and strategies American Journal of Cancer Research, 4, 411-435 110 Zenali M.J, Weissferdt A, Solis L.M cs (2015), An update on clinicopathological, immunohistochemical, and molecular profiles of colloid carcinoma of the lung Hum Pathol, 46, 836-842 111 Zhao Q, Xu S, Liu J cs (2015), Thyroid transcription factor-1 expression is signifcantly associated with mutations in exon 21 of the epidermal growth factor receptor gene in chinese patients with lung adenocarcinoma OncoTargets and Terapy, 8, 2469-2478 PHỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN LÀM XÉT NGHIỆM HMMD STT Họ Tên Tuổ i Giới Tính Nam Nƣ̃ Số bênh ̣ phẩ m Lê Thi ̣ Kim O 70 X CB2951 Đặng Thị T 60 X CB2738 Phạm Văn L 73 X SI6349 Nguyễn Anh T 45 X SI4132 Đặng Văn Đ 77 X SI8502 Tạ Thị Minh Ch 56 Nguyễn Khắc H 45 X Phạm Quốc D 64 X Nguyễn Thị Y 71 10 Vƣơng văn chín 46 X SI8799 11 Nguyễn V L 63 X SI7525 12 Dƣơng Văn Đ 66 X SI4685 13 Nguyễn V Q 80 X 14 Lê Thị C 59 15 Lƣơng trí T 69 16 Vũ Thị suốt 64 17 Trần Đức Đạt 55 X Nguyễn Đức T 79 X Nguyễn Ngọc B 70 X Phạm Thị S 55 Nguyễn Văn Y 63 18 19 20 21 X SI9718 SI5473 SH8841 SI8690 X SH8843 X SH7876 X X SH8141 SH7878 SH9302 SJ3716 X X SH7457 SJ1953 SI653 22 SJ3186 Đinh V D 73 X Vƣơng Văn M 57 X 24 Trần Thị S 68 25 Nguyễn Đình L 60 26 Vƣơng Thị T 59 27 Trần M 72 X Nguyễn Văn chu 71 X Nguyễn Vũ P 75 X 30 Bùi Xuân T 77 X 31 Nguyễn văn bảng 66 X SE1388 32 Lƣu Xuân T 65 X SJ4568 33 Nguyễn Văn H 57 X 34 Bùi quốc chiến 50 X 35 Hoàng Kim Q 77 X Hoàng Ngọc C 61 X 37 Trần Công Ứ 50 X 38 Tạ Thị Đ 67 X Nguyễn Thị B 63 X 40 Phan Thị B 54 X 41 Nguyễn Hữu P 32 42 Nguyễn Thị N 69 43 Trần Bích T 61 X 44 Đinh Khắc H 58 X 45 Lê Văn L 72 X 23 28 29 36 39 SI4994 X SI8275 SI6760 X X SI9031 CB3463 SI7523 CB2741 SF4898 SI4679 SI0099 SI8276 SI6430 SI4400 SI9116 SI5520 SI9393 SI7057 X X SI3067 SI8869 SI8410 SI5866 46 SI5462 Cung Xuân T 49 X 47 Trƣơng Thanh L 59 X 48 Trần Bích T 45 Hồng Thế P 39 50 Nguyễn Đình H 58 X SI6478 51 Trần Thị B 57 X SJ6736 Lê Thị M 68 X Hứa Văn L 54 X Nguyễn Hoàng C 57 X Phạm Hồng C 62 X Nguyễn Thị H 62 X Đặng Ngọc B 60 X Nguyễn Thị V 74 X Nguyễn Thị Kim Kh 43 X Bùi Minh Đ 64 Lê Thị D 59 Bùi Văn S 53 Tạ Ngọc T 67 X Trần Thị T 39 X Trịnh Cg 68 X Lê Ngọc Quang 60 X 49 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 SI9826 X SI5558 SI7836 X SH7150 SH6127 SH2842 SH8577 SH6099 SH7528 SH5963 SH7352 SH9537 X SH9141 X SH8622 X SJ1778 SI3280 SI7771 SI5727 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 SH9414 Trƣơng Quang D 68 Nguyễn Thị H 50 Nguyễn Thành C 60 Lê Thị G 68 Vũ Đức T 70 X Phạm Văn H 62 X Lê Văn T 54 Nguyễn Thị T 42 Nguyễn Văn Q 42 Nguyễn Quốc T 53 Nguyễn Anh T 75 X Nguyễn Văn C 58 X Thành Ngọc L 59 Phạm Văn Ch 73 Nguyễn Thị C 58 Nguyễn Xuân H 58 X Đỗ Lƣỡng Hải 45 X Hoàng Mai H 38 Lê Văn G 58 X Nguyễn Văn V 56 X X SJ0352 X SJ7436 X SJ4566 X SJ2391 CB2873 SJ1568 X SJ7810 X SJ7770 X SH4292 X CB3353 SK0795 SI5368 X SI6119 X SI5313 X SI5294 SI4189 SI0796 X SI5041 SI9900 87 SI9991 Nguyễn Thị B 61 Nguyễn Văn Q 57 X 89 Trần ngọc doanh 68 X 90 Đỗ Văn H 54 X 91 Đàm Quang Trung 58 X 92 Nguyễn Thị Liên V 71 Dƣơng Văn N 61 X Cao Sơn H 49 X 95 Nguyễn Văn P 35 X 96 Nguyễn Đình T 64 X 97 Nguyễn Trọng T 57 X 98 Phan Văn B 72 X 99 Vũ Văn D 60 X 100 Lê Đình K 55 X SI6839 101 Phạm Văn L 60 X SI6566 Hồ Thị T 77 Đào Văn T 49 X Ngô Văn X 64 X 105 Nguyễn Quốc L 46 X 106 Bùi Thị S 64 107 Phạm Văn L 62 X 108 Trần Quang Á 42 X 109 Trần Thị H 56 X Trần Thị Kim O 43 X 88 93 94 102 103 104 110 X SI3678 SI3124 SI3801 SI4222 X SI7127 SI5398 SI7522 SI1078 SI4910 SI0097 SI0921 SI4687 X SI4719 SJ2260 SJ2547 SH8573 X SI4255 SI0915 SH7503 SH6997 SJ1867 Lê Thị Đ 73 Đoàn Văn V 57 X 113 Phạm Huy P 60 X 114 Nguyễn Thị T 65 115 Nguyễn Sơn H 55 X SI2864 116 Lê Tuấn H 66 X SI6540 117 Nguyễn Đức L 58 X SI0527 118 Phùng Văn S 57 X SI3323 119 Nguyễn Văn Ng 56 X SI4128 120 Bùi Thị M 44 111 112 Học viên X SJ1786 SJ1599 SI3516 X X SI1077 SI4359 Xác nhận TTGPB – BV Bạch Mai