BÁO CÁO THỰC HÀNH HÓA SINH ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ Cần Thơ, Năm 2019BÀI 2: HÓA HỌC – CHUYỂN HÓA PROTID VÀ ỨNG DỤNGSTTCÁC BƯỚC VÀ TIÊU CHÍ THỰC HIỆNCÓ THỰC HIỆNKHÔNG THỰC HIỆNĐẠTKHÔNG ĐẠTI.CHUẨN BỊ02Dụng cụống nghiệm: 20 ốngpipet chí vạch 1mL: 1 cáiống nhỏ giọt: 3 cáibecher 50mL, 100mL, 250mL: 1 cái mỗi loạiquả bóp cao su: 1 cáilọ đựng nước tiểu: 1 lọ 03Hóa chấtdung dịch Ninhydrin 0.2%dung dịch NaOH 10%, 40%dung dịch CuSO4 1%dung dịch CH3COOH 1%, 10%dung dịch NaCl bão hòadung dịch HNO3 đậm đặc (tủ hút)dung dịch H2SO4 đậm đặc (tủ hút)dung dịch acid Sulosalicylic 3%long trắng trứngdung dịch gluthathion 0.5%II. TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM1. Phản ứng Ninhydrin04Ống 1: hút 1mL nước cất+1mL Ninhydrin 0.2%, lắc đều, đun cách thủy 5 phút05Ống 2: hút 1ml glutathione+1ml Ninhydrin 0.2%, lắc đều, đun cách thủy 5 phút06Ống 3: hút 1ml long trắng trứng+1ml Ninhydrin 0.2%, lắc đều, đun cách thủy 5 phút2. Phản ứng Biuret07Ống 1: hút 1ml nước cất+0.5ml NaOH 40%+3 giọt CuSO4 1% lắc đều, quan sát màu08Ống 2: hút 1ml glutathione+0.5ml NaOH 40%+3 giọt CuSO4 1%, lắc đều, quan sát màu09Ống 3 : hút 1ml long trắng trứng+0.5ml NaOH 40%+3 giọt CuSO4 1%, lắc đều, quan sát màu3. Phản ứng tủa protein bởi nhiệt và môi trường acid yếu10Ống 1: hút 1ml long trắng trứng, đun cách thủy11ống 2: hút 1ml long trắng trứng+ 2 giọt acid acetic 1%, lắc đều, đun cách thủy12Ống 3: hút 1ml long trắng trứng+5 giọt acid acetic 10%, lắc đều, đun cách thủy13Ống 4: hút 1ml lòng trắng trứng+5 giọt acid acetic 10%+ 2 giọt NaCl bão hòa, lắc đều, đun nóng14Ống 5: hút 1ml lòng trắng trứng+2 giọt NaOH lắc đều, đun cách thủy4. Phản ứng tủa protein bởi acid mạnh và không đun nóng15Ống 1: hút 2ml lòng trắng trứng, nghiên ống nghiệm 45°, nhỏ theo thành ống nghiệm 3 giọt HNO3, quan sát tủa16Ống 2: hút 2ml lòng trắng trứng nghiên ống nghiệm 45°, nhỏ theo thành ống nghiệm 3 giọt H2SO4, quan sát tủa17Ống 3: hút 2ml lòng trắng trứng, nhỏ 3 giọt acid sulfosalicylic 3%, quan sát tủa5. Phản ứng tìm protein trong nước tiểu5.1Phương pháp đông kết18Ống A1: hút 2ml nước tiểu, đun cách thủy 2 phút, thêm 35 giọt acid acetic1%, lắc đều, quan sát hiện tượng.19Ống A2: hút 2ml nước tiểu, đun cách thủy 2 phút, thêm 35 giọt acid acetic1%, lắc đều, quan sát hiện tượng.5.2Phương pháp Heller20Ống B1: hút 2ml nước tiểu nghiên ống nghiệm 45°, nhỏ theo thành ống nghiệm 1m HNO3, quan sát hiện tượng21Ống B2: : hút 2ml nước tiểu nghiên ống nghiệm 45°, nhỏ theo thành ống nghiệm 1ml HNO3, quan sát hiện tượngBÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC HIỆN•THÍ NGHIỆM: Phản ứng NinhydrinCách tiến hànhDung dịch ống 1ống 2ống 3Nước cấtDD peptid glutathioneDD lòng trắng trứngNinhydrin 0.2%1ml1ml 1 ml1 ml1ml1mlHiện tượngKhông có hiện tượngMàu vàng trongTím xanhGiải thích: Ông 2 :Vì có nhóm – OH tác dụng với NinhydrinÔng3 : Vì có nhóm –NH2 và nhóm –COOH tự do tác dụng với Ninhydrin•THÍ NGHIỆM: PHẢN ỨNG BIURETCách tiến hành:Dung dịchỐng 1Ông 2Ông 3Nước cấtDD peptid glutathionDD lòng trắng trứngNaOH 40%DD CuSO4 1%1ml0.5ml3 giọt1ml0.5ml3 giọt1ml0.5ml3 giọtHiện tượngXanh nhạtMàu vangTím hồng Giải thích: Ông 1 : Do có CuSO4 có màu xanh Ông 2 : Vì Glutathion là một tripeptit có chứa acid amin đặc biệt Ông 3 :Vì CuSO4 có chứa Cu2+ tác dụng NaOH và lòng trắng trứng tạo 2 liên kết peptitneen có màu tím hồng•THÍ NGHIỆM: Phản ứng tủa protein bởi nhiệt và môi trường aicd yếu:12345Lòng trắng trứng đã thẩm tíchAcid acetic 1%Acid acetic 10%NaCl bão hòaNaOH 10%1ml1ml2 giọt1ml5 giọt1ml5 giọt2 giọt1ml2 giọtHiện tượngKhông có hiện tượngKết tủa trắng đụcKhông có hiện tượngKết tủa trắng đụcKết tủaGiải thích:Protein hòa trong nước tạo keo, protein tích điện cùng dấu và mang lớp áo nước. Nên các tiểu phân protein đẩy nhau và ngăn cách nhau bởi lớp áo nước. Nếu mất 2 yếu tố trên thì protein chuyển động sẽ gặp nhau dính vào nhau tạo những hạt to và kết tủa.•THÍ NGHIỆM: Phản ứng tủa bởi acid mạnh và không đun nóng1234Nước cất2mlLòng trắng trứng2ml2ml2mlĐể nghiêng ống nghiệm 45°, nhỏ từ từ các acid đậm đặc lên thành ống nghiệmHNO3 đậm đặc3 giọt3 giọtH2SO4(HCl) đđ3 giọtAcid sulfosalicylic1mlĐể yênTrộn đềuHiện tượngKhông có hiện tượng Dạng đụcDạng tủaĐục màuGiải thích:Khi cho các acid hữu cơ vào dung dịch protein trứng sẽ tạo nên môi trường acid yếu, có khả năng gây tủaAcid sulfosalicylic có thể tủa protein, poplypeptid và acid amin. Còn acid tricloacetic chỉ có khả năng tủa protein.•THÍ NGHIỆM: Tìm Protein trong nước tiểu:Ông 1Ống 2Nước tiểuAcid acetic 1%HNO3 đđ2ml( đun sôi 2 phút)35 giọt2ml1ml Hiện tượngKhông có hiện tượngKết tủa đám mây mờGiải thích:Ông 2: trong nước tiểu có proteinAcid vô cơ mạnh và aicd hữu cơ tác dụng làm biến tính và kết tủa protein.Kết luận : Người có mẫu nước tiểu số 1 là bình thường Người có mẫu nước tiểu số 2 chứa nhiều protein nên người này bất thường có thể bị bệnh thận , đái tháo đường hay đứng trong thời gian dàiBÀI 3: HOẠT ĐỘNG CỦA ENZYMSttCác bước và tiêu chí thực hiệnCó thực hiệnKhông thực hiênĐạtKhông đạtI. Chuẩn bi1Thiết bịBếp cách thủyTủ hút2 Dụng cụỐng nghiệm: 20 cáiPipet chia vạch 1ml: 01 cáiỐng nhỏ giọt: 03 cáiBecher 50ml, 100ml, 250ml: 01 cái mỗi loạiQuả bóp cao su: 01 cáiLọ dựng nước tiểu: 01 lọ3Hóa chấtReagent 1: Tris buffer pH 7.5+L. Aspartate (GOT) hoặc L. Alanin (GPT)+α cetoglutaratReagent 2:EnzymCoenzym+Malat dehydrogenase NADH,H++Lactat dehydrogenase NADH,H+Dung dịch NaCl 0,9 %Dung dịch hồ tinh bột 1%oII. Tiến hành thí nghiệmA. GOT GPT4Ống 1: 1000µl Reagent 1(GOT) + 200µl Reagent 2 + Huyết tương.5Ống 1: 1000µl Reagent 1(GPT) + 200µl Reagent 2 + Huyết tương.B. Xác định hoạt động của enzym amylase trong nước tiểu (PP. Wohlgemuth)6 Ống 1: 1ml dd NaCl 9% + 1mL nước tiểu, trộn đều + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C trong 30 phút + 1 giọt iod N50, lắc đều7Ống 2: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 1, trộn đều + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C trong 30 phút + 1 giọt iod N50, lắc đều8Ống 3: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 2, trộn đều, + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C trong 30 phút + 1 giọt iod N50, lắc đều9Ống 4: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 3, trộn đều + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C trong 30 phút + 1 giọt iod N50, lắc đều10Ống 5: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 4, trộn đều + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C trong 30 phút + 1 giọt iod N50, lắc đều11Ống 6: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 5, trộn đều + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C trong 30 phút + 1 giọt iod N50, lắc đều12Ống 7: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 6, trộn đều, hút bỏ 1ml + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C trong 30 phút + 1 giọt iod N50, lắc đều13Ống 1: 1ml dd NaCl 9% + 2 mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C trong 30 phút + 1 giọt iod N50, lắc đềuKết quả : Ông 7 là ống đầu tiên có màu xanhÔng biểu diễn kết quả là ống 6.Ông6 có chứa 164 mL nước tiểu .164 mL nước tiểu có khả năng thủy phân 2 mL dung dịch hồ tinh bột 1%Như vậy 1 mL nước tiểu sẽ thủy phân 2x64 =128 mL hồ tinh bộtHoạt độ amylase =64(độ pha loãng)x2=128 (Wohlgemuth)Bài 4: HÓA HỌC VÀ CHUYỂN HOÁ LIPIDSTTCác bước và tiêu trí thực hiệnCÓ THỰC HIỆN KHÔNGTHỰC HIỆNĐẠTKHÔNG ĐẠT1Thiết bịKhông có2Dung cụ Ống nghiệm: 10 ốngMicropipet: 1cái Ống nhỏ giọt: 3 cái Becher 50 ml, 100 ml, 250 ml: 1 cái mỗi loại Lọ đựng nước tiểu: 2 lọ3Hoá chất Ether hay acol Acetol Dầu ăn Na2CO3 10% Xà phòng Acid acetic đậm đặc Sodium nitrioprussiat 10% NH4OH đậm đặc Mẫu nước tiểuII. TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM1. KHẢO SÁT TÍNH HOÀ TAN5ỐNG 1: 5 giọt Dầu ăn + 1ml Nước cất lắc kỹỐng 2: 5 giọt dầu ăn + 1ml alcol lắc kỹỐng 3: 5 giọt dầu ăn + 1ml aceton lắc kỹ2. SỰ XÀ PHÒNG HOÁ 6Cho vào bình nón: 1ml dầu ăn + 5ml NaOH 10% trong alcolĐẩy bằng phểu . Đun nóng trên bếp điện khoảng 510 phút. Khi dầu tan hết trong NaOH , lấy phễu ra , tiếp tục cho đến khô sẽ được xà phòngHoà tan xà phòng trong 10 ml nước , đun cho tan rồi cho chia làm 2 phần Lấy một nữa cho vào ống nghiệm – đun sôi, thêm vào 10 giọt HCl đđ , tiếp tục đun sẽ thấy có phần đặc nổi lên trên và phần lỏng ở dướiCòn một nữa để lại làm phản ứng nhũ tương hoá3. SỰ NHŨ TƯƠNG HOÁ7ỐNG 1: 10 ml nước cất + 1 giọt dầu ăn + 10 giọt Na2CO3 Lắc mạnh – để yên trong 5 phútỐNG 2: 10 ml nước cất + 1 giọt dầu ăn + 10 giọt Xà phòngỐNG 3: 10 ml nước cất + 1 giọt dầu ăn 4.TÌM THỂ CETON TRONG NƯỚC TIỂU8Cho vào ống nghiệm Nước tiểu 10 giọtAcid acetic đậm đặc: 2 giọtSodium nitroprussiat 10%: 2 giọtTrộn đều, hút 1ml NH4OH đậm đặc –nghiêng ống 450 – nhỏ cẩn thận từng giọt theo thành ốngQuan sát: sau vài phút có ceton sẽ thấy vòng tim ở mặt phân cách dung dịchBÁO CÁO KẾT QUẢ THÍ NGHIỆMTHÍ NGHIỆM 1: Khảo sát tính hoà tan Cách tiến hành:Dung dịchỐng 1Ống 2Ống 3Dầu ănNước cấtEther (hay alcol)Aceton 5 giọt1 ml5 giọt1 ml5 giọt1 mlHiện tượngTách lớp, dầu nỗi trên mặtMàu vàng đục, không tách lớpKhông tách lớp, tan màu đục hơn ống 2Giải thích: Ống 1 dầu có tỷ trong nhỏ hơn nước nên nỗi trên mặt nước Ống 2 dầu tan trong dung môi hữu cơ nên tạo thành nhũ tương bền Ống 3 tương tự ống 2 nhưng dầu tan nhiều hơn trong acetonlipid tan trong dung môi hữu cơ tạo nên nhũ tương bền, không tan trong dung môi phân cực THÍ NGHIỆM 2: Sự nhũ tương hoáCách tiến hành:Dung dịchỐng 4Ông 5Ống 6Nước cấtDầu ănNa2CO3 10%Xà phòng10 ml1 giọt10 giọt10 ml1 giọt10 giọt10 ml1 giọtLắc mạnh để yên trong 5 phútHiện tượngTrắng đụctrắng đục Tách lớpGiải thích: Ống 1, 2 có thêm Na2CO3, và xà phòng nên làm cho nhũ tương bền không tách lớp Ống 3 dầu nhẹ hơn nước nên nổi trên mặt nướcxà phòng, Na2CO3 là chất nhũ tương hoá làm cho nhũ tương bềnTHÍ NGHIỆM 3: Tìm thể ceton trong nước tiểuDung dịchỐng 7Ống 8Nước tiểu mẫu (1)Nước tiểu mẫu (2)Acid acetic đậm đặcSodium nitrioprusiat 10%20 giọt4 giọt4 giọt20 giọt4 giọt4 giọtTrộn đều, nghiêng ống nghiệm 450, nhỏ từ từ theo thành ống nghiệm đến hết 1 ml NH4OH, để yên quan sátGiải thích Ống 1 xuất hiện vòng tímở mặt phân cách giữa 2 dung dịch Ống 2 không có xuất hiện vòng tím giữa mạt phân cách giữa 2 dung dịchmẫu nước tiểu (1) có ceton, thường có trong trường hợp sau:+ Bệnhtiểu đường nặng hoặc điều trị bằng insulin không đủ liều, bệnh nhân đe doạ hôn mê.+ Nhịn đói lâu ngày, nôn nhiều+ Vận động cơ nhiều, Cushing,… Bài 5: XÉT NGHIỆM GLUCOSE CHOLESTEROL,UREA TRONG MÁU STTCác bước và tiêu chí thực hiệnCó thực hiệnKhông thực hiệnĐạtKhôngI. Chuẩn Bị01Thiết bịMáy đo quang phổ1 cây pipet 20 µl1 cây pipet 1000 µl02Dụng cụ ống nghiệm: 10 ống pipet chí vách 1ml: 1 cái ống nhỏ giọt: 3 cái becher 50ml, 100ml,250ml, 1 cái mỗi loại. quả bớp cao su: 1 cái lọ đựng nước tiểu.03Hoá chất Reagent1 Glucose standard Huyết thanh Cholesterol standard.II. Tiến Hành Thí Nghiệm 1. định lượng Glucose trong máu 04ống 1(Blank): hút 1000 µl nước cất.05Oongs2(Reagent blank): hút1000µl reagent1.06Oongs3(Standard blank): 1000µl reagent l + 10µl . Glucose standard07ống 4(Sample): 1000µl reagentl +10µl Huyết thanh.2. Định lượng Cholesterol trong máu.08ống 1 (Blank): hút 1000 µl nước cất.09ống 2 (Reagent blank): 1000µl reagentl 10ống 3 (Standard blank): 1000µl reagentl + 10µl Cholesterol standard.11ống 4(Sample):1000µl reagentl+10µl huyết thanh BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC HIỆN 1.Định Lượng Glucose trong máuCách tiến hành BlankReagent blankStandard blanksampleNước cấtReagent 1Glucose standardHuyết thanh1000 µl1000 µl1000 µl10 µl

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐƠ BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC HÀNH HĨA SINH Cần Thơ, Năm 2019 BÀI 2: HÓA HỌC – CHUYỂN HÓA PROTID VÀ ỨNG DỤNG STT CÁC BƯỚC VÀ TIÊU CHÍ THỰC HIỆN I.CHUẨN BỊ 02 Dụng cụ - ống nghiệm: 20 ống - pipet chí vạch 1mL: - ống nhỏ giọt: - becher 50mL, 100mL, 250mL: loại - bóp cao su: - lọ đựng nước tiểu: lọ 03 Hóa chất - dung dịch Ninhydrin 0.2% - dung dịch NaOH 10%, 40% - dung dịch CuSO4 1% - dung dịch CH3COOH 1%, 10% - dung dịch NaCl bão hòa - dung dịch HNO3 đậm đặc (tủ hút) - dung dịch H2SO4 đậm đặc (tủ hút) - dung dịch acid Sulosalicylic 3% - long trắng trứng - dung dịch gluthathion 0.5% II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM Phản ứng Ninhydrin 04 Ống 1: hút 1mL nước cất+1mL Ninhydrin 0.2%, lắc đều, đun cách thủy phút 05 Ống 2: hút 1ml glutathione+1ml Ninhydrin 0.2%, lắc đều, đun cách thủy phút 06 Ống 3: hút 1ml long trắng trứng+1ml Ninhydrin 0.2%, lắc đều, đun cách thủy phút Phản ứng Biuret 07 Ống 1: hút 1ml nước cất+0.5ml NaOH 40%+3 giọt CuSO4 1% lắc CĨ THỰC HIỆN ĐẠT KHƠNG ĐẠT KHÔNG THỰC HIỆN đều, quan sát màu 08 Ống 2: hút 1ml glutathione+0.5ml NaOH 40%+3 giọt CuSO4 1%, lắc đều, quan sát màu 09 Ống : hút 1ml long trắng trứng+0.5ml NaOH 40%+3 giọt CuSO4 1%, lắc đều, quan sát màu Phản ứng tủa protein nhiệt môi trường acid yếu 10 Ống 1: hút 1ml long trắng trứng, đun cách thủy 11 12 13 14 ống 2: hút 1ml long trắng trứng+ giọt acid acetic 1%, lắc đều, đun cách thủy Ống 3: hút 1ml long trắng trứng+5 giọt acid acetic 10%, lắc đều, đun cách thủy Ống 4: hút 1ml lòng trắng trứng+5 giọt acid acetic 10%+ giọt NaCl bão hòa, lắc đều, đun nóng Ống 5: hút 1ml lịng trắng trứng+2 giọt NaOH lắc đều, đun cách thủy Phản ứng tủa protein acid mạnh khơng đun nóng 15 Ống 1: hút 2ml lòng trắng trứng, nghiên ống nghiệm 45°, nhỏ theo thành ống nghiệm giọt HNO3, quan sát tủa 16 Ống 2: hút 2ml lòng trắng trứng nghiên ống nghiệm 45°, nhỏ theo thành ống nghiệm giọt H2SO4, quan sát tủa 17 Ống 3: hút 2ml lòng trắng trứng, nhỏ giọt acid sulfosalicylic 3%, quan sát tủa Phản ứng tìm protein nước tiểu 5.1 Phương pháp đông kết 18 19 5.2 Ống A1: hút 2ml nước tiểu, đun cách thủy phút, thêm 3-5 giọt acid acetic1%, lắc đều, quan sát tượng Ống A2: hút 2ml nước tiểu, đun cách thủy phút, thêm 3-5 giọt acid acetic1%, lắc đều, quan sát tượng Phương pháp Heller 20 Ống B1: hút 2ml nước tiểu nghiên ống nghiệm 45°, nhỏ theo thành ống nghiệm 1m HNO3, quan sát tượng Ống B2: : hút 2ml nước tiểu nghiên ống nghiệm 45°, nhỏ theo thành ống nghiệm 1ml HNO3, quan sát tượng 21 BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC HIỆN • THÍ NGHIỆM: Phản ứng Ninhydrin Cách tiến hành Dung dịch ống Nước cất 1ml DD peptid glutathione DD lòng trắng trứng Ninhydrin 0.2% 1ml ống ml ml ống 1ml 1ml Hiện tượng Màu vàng Tím xanh Khơng có tượng Giải thích: Ơng :Vì có nhóm – OH tác dụng với Ninhydrin Ơng3 : Vì có nhóm –NH2 nhóm –COOH tự tác dụng với Ninhydrin • THÍ NGHIỆM: PHẢN ỨNG BIURET Cách tiến hành: Dung dịch Ống Ông Ông Nước cất DD peptid glutathion DD lòng trắng trứng NaOH 40% DD CuSO4 1% 1ml 0.5ml giọt 1ml 0.5ml giọt 1ml 0.5ml giọt Hiện tượng Xanh nhạt Màu vang Tím hồng Giải thích: Ơng : Do có CuSO4 có màu xanh Ơng : Vì Glutathion tripeptit có chứa acid amin đặc biệt Ơng :Vì CuSO4 có chứa Cu2+ tác dụng NaOH lịng trắng trứng tạo liên kết peptitneen có màu tím hồng • THÍ NGHIỆM: Phản ứng tủa protein nhiệt mơi trường aicd yếu: Lòng trắng trứng thẩm tích 1ml 1ml 1ml 1ml Acid acetic 1% giọt Acid acetic 10% giọt giọt NaCl bão hòa giọt NaOH 10% - 1ml giọt Hiện tượng Khơng có Kết tủa tượng trắng đục Khơng có Kết tủa tượng trắng đục Kết tủa Giải thích: - Protein hịa nước tạo keo, protein tích điện dấu mang lớp áo nước Nên tiểu phân protein đẩy ngăn cách lớp áo nước - Nếu yếu tố protein chuyển động gặp dính vào tạo hạt to kết tủa • THÍ NGHIỆM: Phản ứng tủa acid mạnh khơng đun nóng Nước cất 2ml Lịng trắng trứng 2ml 2ml 2ml Để nghiêng ống nghiệm 45°, nhỏ từ từ acid đậm đặc lên thành ống nghiệm giọt giọt HNO3 đậm đặc H2SO4(HCl) đđ giọt Acid sulfosalicylic 1ml Để yên Hiện tượng Không có tượng Dạng đục Trộn Dạng tủa Đục màu Giải thích: - Khi cho acid hữu vào dung dịch protein trứng tạo nên môi trường acid yếu, có khả gây tủa - Acid sulfosalicylic tủa protein, poplypeptid acid amin Cịn acid tricloacetic có khả tủa protein • THÍ NGHIỆM: Tìm Protein nước tiểu: Ơng Nước tiểu Acid acetic 1% HNO3 đđ Hiện tượng 2ml( đun sôi phút) 3-5 giọt Khơng có tượng Ống 2ml 1ml Kết tủa đám mây mờ Giải thích: -Ơng 2: nước tiểu có protein Acid vơ mạnh aicd hữu tác dụng làm biến tính kết tủa protein Kết luận : Người có mẫu nước tiểu số bình thường Người có mẫu nước tiểu số chứa nhiều protein nên người bất thường bị bệnh thận , đái tháo đường hay đứng thời gian dài BÀI 3: HOẠT ĐỘNG CỦA ENZYM St Các bước tiêu chí thực t Có thực Khơng Đạt đạt Khơng thực hiên I Chuẩn bi Thiết bị 1- 2- Bếp cách thủy Tủ hút Dụng cụ Ống nghiệm: 20 Pipet chia vạch 1ml: 01 Ống nhỏ giọt: 03 Becher 50ml, 100ml, 250ml: 01 loại Quả bóp cao su: 01 Lọ dựng nước tiểu: 01 lọ Hóa chất -Reagent 1: Tris buffer pH 7.5 +L Aspartate (GOT) L Alanin (GPT) +α- cetoglutarat -Reagent 2:Enzym/Coenzym +Malat dehydrogenase/ NADH,H+ +Lactat dehydrogenase/ NADH,H+ -Dung dịch NaCl 0,9 % -Dung dịch hồ tinh bột 1%o II Tiến hành thí nghiệm A GOT & GPT Ống 1: 1000µl Reagent 1(GOT) + 200µl Reagent + Huyết tương Ống 1: 1000µl Reagent 1(GPT) + 200µl Reagent + Huyết tương B Xác định hoạt động enzym amylase nước tiểu (PP Wohlgemuth) Ống 1: 1ml dd NaCl 9% + 1mL nước tiểu, trộn + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C 30 phút + giọt iod N/50, lắc Ống 2: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 1, trộn + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C 30 phút + giọt iod N/50, lắc Ống 3: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 2, trộn đều, + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C 30 phút + giọt iod N/50, lắc Ống 4: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 3, trộn + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C 30 phút + giọt iod N/50, lắc Ống 5: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 4, trộn 10 + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C 30 phút + giọt iod N/50, lắc Ống 6: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 5, trộn 11 + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C 30 phút + giọt iod N/50, lắc Ống 7: 1ml dd NaCl 9% + 1mL ống 6, trộn đều, 12 hút bỏ 1ml + 2mL hồ tinh bột 1%o, để cách thủy 370C 30 phút + giọt iod N/50, lắc Ống 1: 1ml dd NaCl 9% + mL hồ tinh bột 13 1%o, để cách thủy 370C 30 phút + giọt iod N/50, lắc Kết : Ông ống có màu xanh Ơng biểu diễn kết ống 6.Ơng6 có chứa 1/64 mL nước tiểu 1/64 mL nước tiểu có khả thủy phân mL dung dịch hồ tinh bột 1% Như mL nước tiểu thủy phân 2x64 =128 mL hồ tinh bột Hoạt đợ amylase =64(đợ pha lỗng)x2=128 (Wohlgemuth) Bài 4: HĨA HỌC VÀ CHUYỂN HỐ LIPID STT Các bước tiêu trí thực CĨ THỰC HIỆN ĐẠT KHƠNG ĐẠT Thiết bị - Khơng có KHƠNG THỰC HIỆN Dung cụ - Ống nghiệm: 10 ống -Micropipet: 1cái - Ống nhỏ giọt: - Becher 50 ml, 100 ml, 250 ml: loại - Lọ đựng nước tiểu: lọ Hoá chất - Ether hay acol - Acetol - Dầu ăn - Na2CO3 10% - Xà phòng - Acid acetic đậm đặc - Sodium nitrioprussiat 10% - NH4OH đậm đặc - Mẫu nước tiểu II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM KHẢO SÁT TÍNH HOÀ TAN -ỐNG 1: giọt Dầu ăn + 1ml Nước cất lắc kỹ -Ống 2: giọt dầu ăn + 1ml alcol lắc kỹ -Ống 3: giọt dầu ăn + 1ml aceton lắc kỹ SỰ XÀ PHỊNG HỐ *Cho vào bình nón: 1ml dầu ăn + 5ml NaOH 10% alcol Đẩy phểu Đun nóng bếp điện khoảng 5-10 phút Khi dầu tan hết NaOH , lấy phễu , tiếp tục khơ xà phịng *Hồ tan xà phòng 10 ml nước , đun cho tan cho chia làm phần -Lấy cho vào ống nghiệm – đun sôi, thêm vào 10 giọt HCl đđ , tiếp tục đun thấy có phần đặc lên phần lỏng -Còn để lại làm phản ứng nhũ tương hoá SỰ NHŨ TƯƠNG HOÁ -ỐNG 1: 10 ml nước cất + giọt dầu ăn + 10 giọt Na2CO3 Lắc mạnh – để yên phút -ỐNG 2: 10 ml nước cất + giọt dầu ăn + 10 giọt Xà phòng -ỐNG 3: 10 ml nước cất + giọt dầu ăn 4.TÌM THỂ CETON TRONG NƯỚC TIỂU Cho vào ống nghiệm -Nước tiểu 10 giọt -Acid acetic đậm đặc: giọt -Sodium nitroprussiat 10%: giọt Trộn đều, hút 1ml NH4OH đậm đặc –nghiêng ống 450 – nhỏ cẩn thận giọt theo thành ống Quan sát: sau vài phút có ceton thấy vòng tim mặt phân cách dung dịch BÁO CÁO KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM THÍ NGHIỆM 1: Khảo sát tính hoà tan Cách tiến hành: Dung dịch Ống Dầu ăn giọt Nước cất ml Ether (hay alcol) Aceton Hiện tượng Tách lớp, dầu nỗi mặt Ống giọt ml Màu vàng đục, không tách lớp Ống giọt ml Không tách lớp, tan màu đục ống Giải thích: - Ống dầu có tỷ nhỏ nước nên nỗi mặt nước - Ống dầu tan dung môi hữu nên tạo thành nhũ tương bền - Ống tương tự ống dầu tan nhiều aceton lipid tan dung môi hữu tạo nên nhũ tương bền, không tan dung môi phân cực THÍ NGHIỆM 2: Sự nhũ tương hoá Cách tiến hành: Dung dịch Ống Ông Ống Nước cất 10 ml 10 ml 10 ml Dầu ăn giọt giọt giọt Na2CO3 10% 10 giọt Xà phòng 10 giọt Lắc mạnh để yên phút Hiện tượng Trắng đục trắng đục Tách lớp Giải thích: - Ống 1, có thêm Na2CO3, xà phịng nên làm cho nhũ tương bền khơng tách lớp - Ống dầu nhẹ nước nên mặt nước xà phịng, Na2CO3 chất nhũ tương hố làm cho nhũ tương bền THÍ NGHIỆM 3: Tìm thể ceton nước tiểu Dung dịch Ống Nước tiểu mẫu (1) 20 giọt Nước tiểu mẫu (2) Acid acetic đậm đặc giọt Sodium nitrioprusiat 10% giọt Ống 20 giọt giọt giọt Trộn đều, nghiêng ống nghiệm 450, nhỏ từ từ theo thành ống nghiệm đến hết ml NH4OH, để yên quan sát Giải thích - Ống xuất vịng tímở mặt phân cách dung dịch - Ống khơng có xuất vịng tím mạt phân cách dung dịch mẫu nước tiểu (1) có ceton, thường có trường hợp sau: + Bệnhtiểu đường nặng điều trị insulin không đủ liều, bệnh nhân đe doạ mê + Nhịn đói lâu ngày, nơn nhiều + Vận động nhiều, Cushing,… Bài 5: XÉT NGHIỆM GLUCOSE CHOLESTEROL,UREA TRONG MÁU STT Các bước tiêu chí thực Có thực Đạt I Chuẩn Bị 01 Thiết bị Máy đo quang phổ pipet 20 µl pipet 1000 µl 02 Dụng cụ - ống nghiệm: 10 ống - pipet chí vách 1ml: - ống nhỏ giọt: - becher 50ml, 100ml,250ml, loại - bớp cao su: - lọ đựng nước tiểu 03 Hoá chất - Reagent1 - Glucose standard - Huyết - Cholesterol standard II Tiến Hành Thí Nghiệm định lượng Glucose máu 04 ống 1(Blank): hút 1000 µl nước cất 05 Oongs2(Reagent blank): hút1000µl reagent1 06 Oongs3(Standard blank): 1000µl reagent l + 10µl Glucose standard 07 ống 4(Sample): 1000µl reagentl +10µl Huyết Định lượng Cholesterol máu 08 ống (Blank): hút 1000 µl nước cất 09 ống (Reagent blank): 1000µl reagentl 10 ống (Standard blank): 1000µl reagentl + 10µl Cholesterol standard 11 ống 4(Sample):1000µl reagentl+10µl huyết Không Không thực BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC HIỆN Định Lượng Glucose máu Cách tiến hành Nước cất Reagent Glucose standard Huyết Hiện tượng Blank 1000 µl - Reagent blank 1000 µl - Standard blank 1000 µl 10 µl - sample 1000 µl 10 µl =>lắc đều, để yên 10 phút nhiệt độ 37 độ, sau tiến hành đọc kết máy quang phổ Kết Qủa: - Chỉ số Glucose 3.10 mmol/l - Kết luận: so với số bình thường (4,2 đến 6,4mmol/l) trị số 3.10 mmol/l kết bình thường Định lượng Cholesterol máu Nước cất Reagent Cholesterol standard Huyết Hiện tượng Blank 1000 µl - Reagent blank 1000 µl - Standard blank 1000 µl 10 µl - sample 1000 µl 10 µl => lắc đều, để yên phút nhiệt độ 37 độ, sau tiến hành đọc kết máy quang phổ Kết quả: AU 4347 X 200 = X 200 = AS 2685 323,8 mg% - Kết luận: so với số Cholestrol bình thường máu ( 140 đến 250 mg%) kết 323.8mg% cho thấy lượng Cholestrol máu lượng huyết tăng cao - trị số tăng thường gặp trường hợp: vàng da tắt mật, thận hư nghiệm mỡ, da ngộ độc, đái tháu đường, suy thận mãn… - giảm thường do: tổn thương gan, xơ gan, suy dinh dưỡng, viêm đại tràng thiếu máu… - - Bài 6: XÉT NGHIỆM PROTEIN TRONG MÁU - STT Các bước tiêu chí thực Có thực Đạt Khơng I Chuẩn Bị 01 Thiết bị Máy quang phổ kế 02 Dụng cụ - Ống nghiệm: 4ống -Micropipet: 1cái - Ống nhỏ giọt: - Becher 50 ml, 100 ml, 250 ml: loại 03 Hoá chất - Dung dịch protein mẫu 6,25 g/l - Thuốc thử Gornall (biuret): CuSO3 Tartrat Kalium Natrium Nước cất - Huyết II Tiến Hành Thí Nghiệm định lượng Glucose máu 04 Ống 1: Hút 4,9 ml nước cất + 0,1 ml huyết + ml thuốc thử Gornall, trộn 05 Ống 2: Hút ml nước cất + ml dung dịch protein mẫu 6,25 g/l +5 ml thuoccs thử Gornall, trộn 06 Ống 3:5 ml nước cất + ml thuốc thử Gornal, trộn - BÁO CÁO KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM THÍ NGHIỆM 1: Xét nghiệm protein máu Không thực - Cách tiến hành: Dung dịch Ống Ống Nước cất 4,9 ml ml Huyết 0,1 ml Dung dịch protein mẫu 6,25 g/l ml Thuốc thử Gornall ml ml Trộn đều, để nhiệt độ phòng 20 phút, đem đo Đọc mật độ quang (D) bước sóng 530nm - Ống 5ml ml Kết quả, bàn luận: - Tính nồng độ protein toàn phần huyết (g/l): = 158,26 g/l Giá trị bình thường protein 65-85 g/l nồng độ protein huyết cao giá trị bình thường, người bị số bệnh như: + Mất nước liên tục (nôn, tiêu chảy) + Sốt kéo dài + Bệnh u tuỷ + Bệnh Addison - Bài 7: XÉT NGHIỆM SINH HÓA NƯỚC TIỂU - STT Các bước tiêu chí thực Có thực Đạt Không thực Không I Chuẩn Bị 01 Thiết bị Máy phân tích nước tiểu 02 Dụng cụ Que thử nước tiểu 03 Hoá chất Mẫu nước tiểu II Tiến Hành Thí Nghiệm định lượng Glucose máu 04 Lấy que thử nhúng vào mẫu nước tiểu đemvào máy đo đọc kết - I Phân tích 10 thơng số nước tiểu Tỉ trọng: Bình thường tỷ trọng nước tiểu vào khoảng 1.015 - 1.025 Tỷ trọng tăng bệnh đái tháo đường, giảm bệnh đái tháo nhạt Tỷ trọng thấp kéo dài thường gặp suy thận - pH: - Bình thường từ - - pH axit: ĐTĐ khơng kiểm sốt, nước, đói lả - pH kiềm: nhiễm khuẩn tiết niệu Các chất cetonic: - Bình thường khơng có chất cetonic nước tiểu Khi chúng xuất bệnh nhân mắc bệnh đái tháo đường có biến chứng toan ceto, bệnh nhân nhịn đói lâu ngày, nôn mửa kéo dài, vài trường hợp ngộ độc Máu: - Bình thường khơng có hồng cầu nước tiểu - Dương tính hồng cầu nguyên: Sỏi thận, lao thận, ung thư thận, viêm thận - Dương tính hồng cầu vỡ: tan máu sốt rét, vàng da tan máu, ngộ độc photpho … Bilirubin (sắc tố mật) - Bình thường Bilirubin khơng có mặt nước tiểu - Dương tính: có tổn thương gan đường dẫn mật Urobilinogen - Bình thường có nước tiểu - Tăng: bệnh gan tan huyết - Nếu tắc mật hồn tồn khơng có Urobilinogen nýớc tiểu Protein niệu: - Bình thường nước tiểu có chứa lượng nhỏ Protein không đủ tạo phản ứng dương tính giấy thử - Dương tính: bệnh nhân , nhiễm trùng tiết niệu, THA, ngộ độc thai nghén, suy tim xung huyết Đường niệu: - Bình thường khơng có Glucose nước tiểu - Dương tính: ĐTĐ, Stress, Viêm tụy cấp, Cushing, sau gây mê, … Nitrit: - Bình thường khơng có nước tiểu - Dương tính: nhiễm trùng tiết niệu 10 Bạch cầu: - Bình thường khơng có nước tiểu - Dương tính: nhiễm trùng bàng quang hay thận STT Trị s ố bình thường Bạ ch cầu 10 – 25 Leu/UL (LEU) neg Nitrit ( NIT ) 0.05 – 0.1 mg/dL Urobilinogen 3.5 0.2 – 1.0 mg/dL ( URO ) umol/L 3.5 – 17 mmol/L Protein ( PRO ) neg 7.5 – 20 mg/dL 0.075 – 0.2 g/L pH 6.0 4.6 – 8.0 0.015 – 0.062 mg/dL Máu ( BLO ) neg – 10 Ery/UL Tỷ trọng ( SG ) 1.030 1.005 – 1.030 2.5 – 5.0 mg/dL Ketone ( KET ) 0.25 – 0.5 mmol/L Bilirubin 0.4 – 0.8 mg/dL neg ( BIL ) 6.8 – 13.6 mmol/L 50 – 100 mg/dL 10 Glucose (GLU ) 2.5 – 5.0 mmol/L - II Các bước sử dụng phân tích nước tiểu - Bước 1: Bật công tắt máy, thử nghiệm hình lên chữ READY FOR TEST (lưu ý que thử phải phù hợp với máy) - Bước 2: Lấy que thử từ chai đựng que thử đậy nắp lại - Bước 3: Nhúng sâu que thử vào mẫu nước tiểu lấy - Bước 4: Ấn nút xanh máy ngón tay - Bước 5: Địng thời thấm giọt nước tiểu dư cách dựng nghiêng que thử lên giấy thấm mềm - Bước 6: Đặt que thử lên bàn thử hướng vị trí Khay tự động kéo vào bên máy PTNT - Bước 7: Khi thử nghiệm kết thúc, bỏ que thử sử dụng, lau khay thử cần giấy thấm mềm cần - Bước 8: Ghi kết III KẾT QUẢ LEU NIT URO PRO pH BLO SR ++ - neg neg 3,5 mmol/l 1,5 g/l 6,5 neg 1,010 KET BIL - - - +- 0,5 mol/l neg GLU +++ 70 mmol/l  - Bệnh nhân dương tính với ceton nước tiểu, bình thường khơng có chất cetonic nước tiểu Khi chúng xuất bệnh nhân mắc bệnh đái tháo đường có biến chứng toan ceto, bệnh nhân nhịn đói lâu ngày, nơn mửa kéo dài, vài trường hợp ngộ độc - Glucose nước tiểu cao người bị: Đái tháo đường, Stress, Viêm tụy cấp, Cushing, sau gây mê, - Protein nước tiểu dương tính mức cao, bình thường nước tiểu có chứa lượng nhỏ Protein khơng đủ tạo phản ứng dương tính giấy thử Dương tính: bệnh nhân , nhiễm trùng tiết niệu, THA, ngộ độc thai nghén, suy tim xung huyết  ... nồng độ protein huyết cao giá trị bình thường, người bị số bệnh như: + Mất nước liên tục (nôn, tiêu chảy) + Sốt kéo dài + Bệnh u tuỷ + Bệnh Addison - Bài 7: XÉT NGHIỆM SINH HÓA NƯỚC TIỂU - STT... vài trường hợp ngộ độc - Glucose nước tiểu cao người bị: Đái tháo đường, Stress, Viêm tụy cấp, Cushing, sau gây mê, - Protein nước tiểu dương tính mức cao, bình thường nước tiểu có chứa lượng nhỏ... -Micropipet: 1cái - Ống nhỏ giọt: - Becher 50 ml, 100 ml, 250 ml: loại - Lọ đựng nước tiểu: lọ Hoa? ? chất - Ether hay acol - Acetol - Dầu ăn - Na2CO3 10% - Xà phòng - Acid acetic đậm đặc - Sodium