ĐỘC CHẤT HỌC ĐẠI CƯƠNG Theo phương pháp phân lập, phân loại chất độc làm 4 nhóm ( Nhóm thứ nhất Gồm phần lớn là các chất độc hữu cơ có thể phân lập bằng cách chưng cất hơi nước như acid Cyanhydric và các muối, Methanol, Ethanol, Formol, Phenol, dẫn chất Halogen ( Nhóm thứ hai Gồm các chất độc vô cơ có thể phân lập bằng cách vô cơ hóa bằng các acid mạnh, chuyển các chất độc thành thể ion các muối Ba, Pb, H2SO4, Cu, Bi, Mn, Zn ( Nhóm thứ ba Gồm các chất độc hữu cơ có thể phân lập bằng các dung m.
ĐẠI CƯƠNG Theo phương pháp phân lập, phân loại chất độc làm nhóm: Nhóm thứ nhất: Gồm phần lớn chất độc hữu phân lập cách chưng cất nước như: acid Cyanhydric muối, Methanol, Ethanol, Formol, Phenol, dẫn chất Halogen Nhóm thứ hai: Gồm chất độc vơ phân lập cách vơ hóa acid mạnh, chuyển chất độc thành thể ion: muối Ba, Pb, H2SO4, Cu, Bi, Mn, Zn… Nhóm thứ ba: Gồm chất độc hữu phân lập dung mơi hữu thích hợp như: cồn, ether, chloroform Nhóm gồm acid hữu độc, dẫn chất nitơ độc, thuốc ngủ, DDT, alkaloid độc Nhóm thứ tư: Gồm ion độc, phân lập cách thấm qua màng bán thấm Nhóm gồm ion: fluor, oxalat… BÀI ACID CYANHYDRIC, ANDEHYD FORMIC (FORMOL) MỤC TIÊU Ứng dụng sở lý thuyết học tiến hành phân lập, phân tích (định tính, định lượng) Acid cyanhydric, andehyd formic Phần 1- ACID CYANHYDRIC Acid cyanhydric chất độc dễ bay hơi, phân lập cách cất nước Người ta dùng phần đầu dịch cất để định tính định lượng 1- ĐỊNH TÍNH ACID CYANHYDRIC: 1.1 Phản ứng Grignard hay Picrosodic: 1.1.1 Nguyên tắc: Với acid Picric môi trường kiềm, HCN cho chất Isopurpurin màu vàng cam 1.1.2 Thuốc thử: - Giấy tẩm acid Picric bão hòa - HCl đậm đặc - Dung dịch Na2CO3 10% 1.1.3 Tiến hành: Chuẩn bị băng giấy thử nhúng vào dung dịch bão hòa acid Picric, xong vào dung dịch Na 2CO3 Ép khô giấy lọc hai tờ giấy thấm khô, sau phơi tối, giấy có màu vàng Khi có HCN chuyển sang màu vàng cam rõ Isopurpurin Cho 5ml dung dịch thử vào ống nghiệm Thêm 10 giọt HCl Đậy ống nghiệm lại phía có để giấy tẩm acid Picric Nhận xét 1.2 Phản ứng xanh phổ: 1.2.1 Nguyên tắc: HCN tạo với hỗn hợp Sulfat ferơ feric môi trường kiềm chất trầm hiện, chất biến thành màu xanh phổ acid hóa trở lại 1.2.2 Thuốc thử: - HCl đậm đặc - Dung dịch NaOH 50% - Dung dịch FeSO4 10% - Dung dịch FeCl3 5% 1.2.3 Tiến hành: Kiềm hóa 5ml dung dịch nghiên cứu với 1ml dung dịch NaOH 50% Thêm giọt dung dịch Sulfat ferơ 10% pha giọt dung dịch FeCl 5% Đun sôi hỗn hợp, xong đem làm lạnh Thêm giọt HCl đậm đặc tan hết tủa nâu hydroxid sắt Nếu có HCN thấy xuất màu xanh tủa xanh Khi khơng có tủa xanh để 48 (đến buổi sau) qua thời gian kết luận HCN 2- ĐỊNH LƯỢNG HCN BẰNG PHƯƠNG PHÁP BẠC KẾ: 2.1 Nguyên tắc: Phương pháp dựa tạo thành phức hợp bạc cyanur 2HCN + Ag+ Ag(CN)2¯ + 2H+ Phức hợp bạc cyanur hòa tan amoniac tất HCN phản ứng hết lượng thừa AgNO3 cho ta chất trầm AgI không tan amoniac AgNO3 + KI AgI + KNO3 2.2 Thuốc thử: - Dung dịch amoniac đậm đặc - Dung dịch KI 1% - Dung dịch AgNO3 N/10 2.3 Tiến hành: Trong cốc có mỏ, cho 100ml dung dịch có chứa chất Cyanur + 10ml amoniac + 1ml dung dịch KI 1% Định lượng AgNO đến có tủa khơng tan Quan sát độ đục đen 2.4 Kết quả: ml dung dịch AgNO3 N/10 tương đương với 5,4 mg HCN Phần 2-ANDEHYD FORMIC HAY FORMOL Formol phân lập từ phủ tạng cách cất kéo theo nước PHẢN ỨNG ĐỊNH TÍNH: Cho 1ml dịch cất phủ tạng vào ống nghiệm Thêm vào 0,5ml dung dịch phenol 1g/l Trộn Thêm vào cách nhẹ nhàng theo thành ống nghiệm 1ml acid H 2SO4 đậm đặc xuất vòng mặt phân cách BÀI 2-PHENOL MỤC TIÊU Ứng dụng sở lý thuyết học tiến hành phân lập, phân tích (định tính, định lượng) phenol Phenol sản phẩm việc cất nhựa than sản xuất phương pháp tổng hợp Phenol sử dụng nhiều kỹ nghệ làm nhựa Trong Y Dược, Phenol dùng để khử trùng sát trùng nên thường gây ngộ độc uống nhầm hay hít phải khơng khí nơi làm việc có Phenol 1- ĐỊNH TÍNH PHENOL: 1.1 Phản ứng tạo Tribromophenol: Cho 1ml dịch nghiên cứu (dịch chưng cất có cất kéo phủ tạng nước hay nước tiểu thủy giải) vào ống nghiệm Thêm vào 3-5 giọt dung dịch bão hịa nước Brom Ta có tủa trắng 1.2 Phản ứng với sắt (III) clorur: Cho 1-2ml dung dịch nghiên cứu vào chén sứ Thêm 1-2 giọt FeCl pha Ta có màu tím xanh Màu biến thêm vào 1-2 giọt nước 1.3 Phản ứng tạo Indophenol: Trộn 1ml dung dịch nghiên cứu với giọt dung dịch Anilin 1-2 giọt dung dịch Natri hypoclorid xuất màu xanh chàm bẩn, màu ổn định thêm vào vài giọt NH4OH đậm đặc 1.4 Phản ứng với acid Nitric bốc khói: Cho vào chén sứ 1ml dung dịch nghiên cứu với 10 giọt acid Nitric bốc khói Đun nóng bếp cách thủy dung dịch có màu vàng tạo thành acid Picric 2- ĐỊNH LƯỢNG PHENOL TRONG NƯỚC TIỂU: 2.1 Nguyên tắc: Phenol có nước tiểu dạng acid Phenyl sulfonic: OSO3H to H2O + H2SO4 OH + H2SO4 Acid giải phóng acid sulfuric Chất Phenol phóng thích cho tác dụng với lượng thừa Brom, cho ta chất trầm 2,4,6-tribromophenol Lượng Brom thừa xác định phương pháp Iod kế, nghĩa cho tác dụng với dung dịch KI dung dịch Natri thiosulfat chuẩn để xác định lượng Iod sinh Từ đó, suy lượng Phenol có nước tiểu Phương trình phản ứng: C6H5OH + Br2 C6H2Br3OH + HBr Vậy phân tử gam Phenol tương ứng với 6Eq Brom 2.2 Thuốc thử: Lấy 25 ml nước tiểu cho vào bình cầu có ống sinh hàn thẳng đứng, thêm vào 2,5 ml acid H2SO4 đậm đặc Đun sôi cách thủy 30 phút Để nguội Thêm vào 20 ml dung dịch Bromur – bromat, để nghỉ 10 phút Thêm vào 10 ml dung dịch KI 10%, lắc đều, đậy nút Để nghỉ phút Thêm ml Cloroform Định lượng Iod phóng thích dung dịch Na2S2O3 0,1N Ta có n ml Làm song song định lượng mẫu trắng với 25 ml nước cất, không cần đun sôi ống sinh hàn thẳng, ta n ’ ml 2.3 Cách tính: Biết ml Na2S2O3 0,1N tương ứng với 1,56 mg Phenol, nên lượng Phenol có lít nước tiểu là: * Chú ý: (n’ – n) x 1,56 x 1000 25 = mg/lít - Vì Tribromophenol hấp phụ Iod nên cần thêm vài giọt CHCl để hòa tan chất trầm - Cho giọt Natri thiosulfat 0,1N vào, lắc mạnh màu lớp cloroform hoàn toàn BÀI 3- CÁC CHẤT ĐỘC HỮU CƠ CHIẾT TỪ DUNG DỊCH ACID BẰNG ETE HOẶC CLOROFORM MỤC TIÊU Ứng dụng sở lý thuyết học tiến hành phân lập, phân tích định tính nhóm barbituric cafein 1- PHẢN ỨNG ĐỊNH TÍNH BARBITURIC (PHẢN ỨNG PARI): Được gọi chung Barbituric, hợp chất có nhân Malonylurê hay acid O barbituric NH O C C CH2 NH C O Barbituric không tan nước, tan cloroform, tan rượu, etyl acetat, tan ete Barbituric có phản ứng acid hydro linh động nhóm –NH Với chất kiềm, Barbituric cho muối tan nước Với acid, barbituric kết tủa dung dịch nước trích dễ dàng ete Barbituric thăng hoa 1.1 Nguyên tắc: Do có diện nhóm -CO-NH-CO-, Barbituric cho với Cobalt nitrat môi trường Amoniac khan nước phức hợp Cobaltơ có màu tím xanh (phenobarbital) tím hoa cà (Barbital) 1.2 Thuốc thử: - Dung dịch Cobalt nitrat 0,15% cồn metylic - Amoniac đậm đặc 1.3 Tiến hành: Cho 1ml dung dịch Barbituric 1% vào chén sứ, đun cách thủy đến cắn khô Nhỏ vào 2-3 giọt dung dịch Cobalt nitrat 0,15% Làm bốc cách thủy cho thật khô Úp ngược chén, hơ miệng chai đựng Amoniac đậm đặc Màu tím xanh (Phenobarbital) hay tím hoa cà (Barbital) * Ghi chú: - Chất cắn Barbituric chén phải ẩm, nên úp miệng chén lên nước hơ miệng chai đựng Amoniac đậm đặc 10 - Phản ứng nhạy, không đặc hiệu Các chất có chứa nhóm -CO-NH-COnhư: Alloxan, acid uric, Theobromin, cho phản ứng 2- PHẢN ỨNG ĐỊNH TÍNH CAFEIN: Cafein alkaloid cà phê, trà Cafein tan nước, cồn 90 0, tan cloroform Cafein chất lưỡng tính 2.1 Với acid: Cafein cho muối dễ bị phân hóa, dễ lấy mơi trường acid cloroform Đối với phản ứng chung alkaloid, Cafein không cho kết tủa với phản ứng Valse-Mayer Nhưng với phản ứng Dragendoff, Cafein cho kết tủa đỏ thắm Iodobismutit cafein.6 H3C N CO OC H3C N C N O C4 N H3C CH3 N hay CH O N CH3 N N CH3 2.2 Với chất kiềm (Phản ứng Murexid): Đây phản ứng đặc hiệu Cafein có nhân purin mà 2.2.1 Nguyên tắc: Cafein bị oxy hóa nước Brom bão hịa cho acid Amylic (Tetra metyl aloxanthin) H3C N OC H3C N CO NH CH3 C N C N + CH H2O + CO 3/2 O2 O H3C N C OC H3C N Methylure O OH HO C C C C C O O Acid amylic Dưới tác dụng NH3, acid Amylic cho phức chất màu đỏ tím N OC H3C CO NH OC C N + NH2 Cafein H3C CH3 CO N CO C OC 2.2.2 Tiến hành: 11 CH3 N CH3 N CH3 CO N CH3 Cho vào chén sứ giọt dung dịch chứa Cafein, đun cách thủy cho khơ Cho 2-3 giọt nước Brom bão hịa, làm bốc cách thủy thật khô Làm lại lần (bốc nước Brom bão hòa), ta có cắn màu vàng Úp ngược chén hơ miệng chai đựng Amoniac đậm đặc Hơi Amoniac làm chất cặn có màu hồng tím 3- CHIẾT XUẤT VÀ TÌM CHẤT ĐỘC TRONG MÔI TRƯỜNG ACID: 3.1 Chiết xuất phát Barbituric Cafein rượu vang: Gồm giai đoạn: Giai đoạn 1: Loại khỏi môi trường chất làm cản trở ly trích chất độc cách: - Đun cách thủy 50ml chất thử nghiệm cịn 2/3 thể tích ban đầu để loại cồn acid bay (trong trường hợp rượu) - Khử bã với 3ml acid Tricloacetic để loại protein 50ml chất thử nghiệm (trường hợp sữa dịch sinh học) Giai đoạn 2: Ly trích chất độc môi trường acid cách: Acid hóa chất thử nghiệm (đã cịn 2/3 thể tích) với acid HCl đậm đặc giấy quỳ tím chuyển sang màu hồng Quậy đều, cho vào ống lắng trích chất độc 10ml ete Phải trích thật kỹ để lấy cho hết chất độc cách xoay tròn, trở ngược ống lắng khoảng 20 lần Để yên 10 phút, lấy lớp nước phía chén sứ (phần nước cịn lại để tìm chất độc mơi trường kiềm) Đổ dịch chiết ete miệng ống lắng Ta trích tinh chứa tất độc chất tan ete môi trường acid Chia dịch chiết ete cho vào chén sứ Giai đoạn 3: Định danh độc chất: - Cho dịch chiết ete vào chén sứ, làm bốc đến khô nồi đun cách thủy Sau làm phản ứng Murexid để tìm Cafein - Cho dịch chiết ete vào chén sứ khác làm bốc đến khơ nồi đun cách thủy Sau làm phản ứng Pari để tìm Barbituric 3.2 Chiết xuất phát Barbituric nước tiểu: 3.2.1 Nguyên tắc: Barbituric chiết xuất từ nước tiểu ete môi trường acid (pH = 1-2) Dịch chiết ete sau khử nước Natri sulfat khan khử màu than Sau làm bay ete, chất cắn barbituric làm phản ứng Pari 3.2.2 Thuốc thử: - HCl đậm đặc 12 - Ete - Natri sulfat khan - Dung dịch Cobalt nitrat 0,15% cồn metylic - Amoniac đậm đặc 3.2.3 Tiến hành: Chiết xuất: Acid hóa 50 ml nước tiểu 0,5 ml HCl đậm đặc Cho vào bình lắng 150 ml với 10 ml ete Lắc trở đầu đuôi 10 lần Lắc nhẹ nhàng, không q mạnh Quay trịn bình vài lần Để nghỉ, gạn lấy lớp ete bình nón Chiết lần với 10 ml ete cần làm * Chú ý: Nếu có nhũ tương đem quay ly tâm hỗn hợp ete nước tiểu hay cho vào vài giọt alcol để phá hủy nhũ tương Lắc lớp ete chiết xuất với 10g Natri sulfat khan nước bình nón, lọc Rửa chất bột Natri sulfat với ml ete cần trộn chung với lớp ete lọc Lọc ete qua lọc rải bột than (độ 0,5g thành đậy giấy lọc gắn phễu Nhớ lọc nhanh hứng vào cốc khô) Bay hơi: cho dịch chiết ete vào chén sứ, cô cách thủy đến khô Lấy chén ete vừa bay hết Phát hiện: hòa chất cặn với 1-2 giọt dung dịch Cobalt nitrat 0,15% cồn Cô cách thủy chất cắn khô Hơ chén miệng chai amoniac đậm đặc, màu tím xanh có Barbituric * Ghi chú: Phương pháp nhạy nước tiểu chứa từ 5-10 mg Barbituric lít nước tiểu Nên tập trung ete vào đáy chén để màu tím đậm đặc dễ nhìn Dung dịch ete phải khô khử màu để tránh màu phụ sinh nước tiểu làm phản ứng Pari Không để than tiếp xúc lâu với ete phần Barbituric bị hấp phụ than Tránh để hỗn hợp bị nhũ tương hóa Barbituric bị bám vào bọt nhũ tương Barbituric tiết từ thận vào nước tiểu dạng tự khơng phải dạng kết hợp Do đó, không cần làm phản ứng thủy giải trước chiết xuất 13 BÀI 4: CÁC CHẤT ĐỘC HỮU CƠ CHIẾT TỪ DUNG DỊCH KIỀM BẰNG ETE HAY CLOROFORM MỤC TIÊU Ứng dụng sở lý thuyết học tiến hành phân lập, phân tích định tính morphin, codein, strychnin, atropin, quinin Các chất độc bao gồm đa số Alkaloid chất tổng hợp có chứa base hữu Trong phạm vi thực tập này, đặc biệt trọng đến Alkaloid 1- ALKALOID CỦA NHỰA OPIUM: Morphin, Codein Morphin Codein alkaloid có nhân Phenantren Codein 3-methyl morphin 1.1 Morphin: HO O N CH3 HO Morphin - Ít tan dung môi hữu - Tan ethyl acetat cồn amylic - Với chất kiềm mạnh, Morphin cho muối morphinat tan ete kết tủa - Với chất kiềm yếu Bicarbonat, Morphin kết tủa lấy ete - Morphin cho phản ứng tổng quát Alkaloid (Valse-Mayer, Dragendoff) 1.1.1 Phản ứng Frohde: Với Sulfomolybdic (thuốc thử Frohde), morphin cho màu tím ngã dần sang xanh dương, lục, vàng sau màu hồng (độ nhạy μg) Nên làm với alkaloid base Tác dụng khử lần lần oxy acid molybdic Morphin 14 Tiến hành: Cho vài giọt Morphin vào chén sứ, cô cạn Thêm giọt thuốc thử Frohde, ta có màu tím ngã dần sang xanh dương, lục, vàng sau màu hồng 1.1.2 Phản ứng Lafon: Với thuốc thử Sulfo selenium, morphin cho màu xanh lục oliu Tiến hành: Cho vài giọt Morphin vào chén sứ Làm bốc đến khô bếp cách thủy Thêm giọt thuốc thử Lafon màu lục oliu 1.2 Codein: Codein Alkaloid có nhân Phenantren, 3-methyl morphin MeO O HO N CH3 Codein Codein tan nước, tan ete, acetat etyl, benzen, cồn metylic, tan cồn cloroform, không tan ete dầu hỏa Codein cho kết tủa với thuốc thử tổng quát alkaloid: Valse-Mayer, Dragendoff Ngồi cịn có phản ứng đặc biệt đây: 1.2.1 Phản ứng Frohde: Cho vào chén nhỏ 0,5 ml dịch chứa codein, đun cách thủy đến cắn khô Cho giọt dung dịch Frohde vào ta màu lục ngã sang xanh dương (Morphin cho tím ngã sang hồng) 1.2.2 Phản ứng Lafon: Cho vào chén nhỏ 0,5 ml dịch chứa codein, đun cách thủy đến cắn khô Cho giọt dung dịch Lafon vào ta màu lục ngọc thạch (Morphin cho màu lục oliu) 2- ALKALOID CỦA MÃ TIỀN: Ta nghiên cứu alkaloid Mã tiền Strychnin 15 STRYCHNIN alkaloid có nhân Indol: N N CH O O Strychnin gần không tan ete etyl acetat, tan cồn benzen, tan cloroform Strychnin cho phản ứng tổng quát alkaloid: ValseMayer (1/50.000), Dragendoff (1/50.000) * Phản ứng oxy hóa mơi trường acid sulfuric: 2.1 Thuốc thử: - H2SO4 đậm đặc - Kalibicromat hạt 2.2 Tiến hành: Cho vài giọt dung dịch chứa strychnin vào chén sứ, đun cách thủy đến khô Thêm giọt H2SO4 đậm đặc khơng có màu Thêm hạt Kalibicromat, dùng đũa thủy tinh kéo hạt Kalibicromat thấy sọc tím ngã sang đỏ anh đào, vàng biến 3- ALKALOID CỦA CÀ ĐỘC DƯỢC: Cà độc dược thuộc họ Solanaceae, có chứa alkaloid độc Atropin, Hyoscyamin Trong đó, Atropin alkaloid chủ yếu: H2C CH H3C H2C N CH CH2 C6H5 CH – O – CO – CH CH2 CH2OH Atropin tan ete etyl acetat, tan cloroform cồn, tan dầu hỏa Đó amin bậc ba, hóa trị một, cho muối tan nước Atropin cho phản ứng thông thường alkaloid * Phản ứng Vitali-Morin: Cho ml dung dịch có chứa Atropin vào chén sứ nhỏ, làm bốc thật khô bếp cách thủy Nhỏ vào vài giọt HNO lại đun cách thủy cho thật khơ Thêm ml Aceton, hịa tan cắn Thêm vài giọt KOH 1/10 cồn metylic xuất màu 16 tím Màu tím dùng để định lượng Atropin phương pháp đo quang * Chú ý: Phản ứng Vitali-Morin thực với Strychnin, Strychnin cho màu đỏ tím so với Atropin Khi chắn khơng có Strychnin tìm Atropin phản ứng 4- ALKALOID CỦA QUINQUINA: QUININ alkaloid có nhân quinolein nhân quinuclidin nối với chức rượu bậc hai OH CH2 CH CH2 CH = CH2 H3C O N Quinin tan benzen, etyl acetat, tan ete, cồn, cloroform Quinin cho kết tủa với thuốc thử thông thường alkaloid như: Valse-Mayer, Dragendoff 4.1 Phản ứng huỳnh quang: Trong dung dịch sulfuric 0,1%, Quinin cho huỳnh quang xanh dương Nếu dung dịch có clo (Cl‾), ta khơng thấy phát quang 4.2 Phản ứng Thaleoquinin: Trong ống nghiệm, cho 2-3 ml dung dịch thử Quinin, thêm 3-5 giọt acid acetic 1% Thêm giọt nước Brom bão hịa pha lỗng 1/10 có màu vàng lợt Thêm vài giọt dung dịch amoniac 1/10 màu xanh lục Phản ứng Thaleoquinin chung cho Quinidin không cho màu với Cinchonin Cinchonidin Phản ứng khó thực Nếu cho nhiều Quinin q acid mạnh q màu lục khơng 4.3 Phản ứng Erythroquinin: Trong ống nghiệm, cho 2-3 ml dung dịch thử Quinin ml CHCl Thêm giọt nước Brom bão hòa pha lỗng 1/10 có màu vàng lợt Nhỏ giọt dung dịch Ferocyanur (cứ giọt nước Brom cho giọt Ferocyanur) Lắc 17 20-30 giây Thêm vài giọt dung dịch amoniac 1/10 Lắc mạnh, để nghỉ Trong điều kiện này, Quinin cho màu hồng lớp cloroform 5- CHIẾT XUẤT VÀ TÌM KIẾM CHẤT ĐỘC TRONG RƯỢU Ở MÔI TRƯỜNG KIỀM: Gồm giai đoạn: Giai đoạn 1: Loại khỏi môi trường chất làm cản trở ly trích chất độc cách: - Đun cách thủy 50 ml chất thử nghiệm cịn 2/3 thể tích ban đầu để loại rượu acid bay (trong trường hợp rượu) - Khử bã với ml acid tricloacetic để loại protein 50 ml chất thử nghiệm (trường hợp sữa dịch sinh học) Giai đoạn 2: Ly trích chất độc mơi trường kiềm cách: Kiềm hóa dung dịch chất thử nghiệm (đã cịn 2/3 thể tích) với KHCO dung dịch làm xanh giấy thảo lam Cho dung dịch vào bình lắng trích chất độc 10 ml ete Phải trích thật kỹ để lấy cho hết chất độc cách xoay tròn ống lắng, trở ngược bình lắng khoảng 20 lần Để yên 10 phút, lấy lớp nước phía chén sứ (trích lại CHCl 3) để tìm Morphin, Strychnin… Rửa ete 10 ml nước Hứng nước rửa cho vào phần nước Đổ ete miệng bình lắng Ta trích tinh chứa tất độc chất tan ete môi trường kiềm Giai đoạn 3: Định danh chất độc: Trích tinh ete chia làm chén, làm bay đến cắn khô nồi cách thủy * Chén (1): Tìm Morphin hay Codein phản ứng Lafon: Morphin + Thuốc thử Lafon màu lục oliu Codein + Thuốc thử Lafon màu lục ngọc thạch Nếu khơng có màu, sang chén (2) * Chén (2): Tìm Quinin phản ứng huỳnh quang: Cho vào cắn khô ml nước, thêm vài giọt H2SO4 0,1%, đổ vào ống nghiệm, đem ánh sáng soi đồng thời với ống nghiệm có chứa nước cất Nếu có huỳnh quang xanh dùng phản ứng Erythroquinin để kiểm chứng lại: 18 Thêm ml CHCl3, thêm giọt Brom bão hịa pha lỗng 1/10 màu vàng Thêm giọt dung dịch Kaliferocyanur (cứ giọt Brom cho giọt Ferocyanur) Lắc Thêm giọt amoniac 1/10 Lắc mạnh, để nghỉ Nếu có Quinin màu hồng lớp cloroform Nếu khơng có huỳnh quang, sang chén (3) * Chén (3): Tìm Strychnin phản ứng oxy hóa môi trường acid: Thêm giọt H2SO4 đậm đặc khơng màu Thêm vài hạt Kalibicromat thấy có sọc tím ngã sang đỏ anh đào, vàng biến (dùng đũa khơ kéo hạt Kalibicromat) Nếu khơng có sọc tím chuyển sang chén (4) * Chén (4): Tìm Atropin phản ứng Vitali-Morin: (Phải tìm STRYCHNIN trước, khơng có tìm ATROPIN) Nhỏ vào chén sứ vài giọt HNO đậm đặc Làm bốc cách thủy cho khô Làm lại lần làm bốc thật khô Thêm ml Aceton cho tan hết cặn Thêm vài giọt KOH/cồn metylic màu tím có Atropin * Chén (5): để kiểm chứng lại nghi ngờ chất mà phản ứng khơng thấy rõ, thực lại phản ứng để tìm chất • Khi tìm Morphin hay Codein phản ứng Lafon, có màu khơng rõ ta kiểm lại phản ứng Frohde o Morphin: Tím hồng (nhìn lúc nhỏ thuốc thử) o Codein: Lục xanh dương • Nếu mơi trường ete tìm khơng ly trích phần nước cịn lại với 10 ml CHCl3 để tìm Morphin, Codein 6- CHIẾT XUẤT VÀ TÌM ĐỘC CHẤT TRONG RƯỢU Ở CẢ HAI MÔI TRƯỜNG: Trong phần thực tập, sinh viên làm theo thứ tự sau: Lấy 50 ml rượu cho vào chén sứ, làm bốc nồi đun cách thủy lại 2/3 chén để loại rượu Acid hóa HCl đậm đặc giấy quỳ tím chuyển sang màu hồng chiết 10 ml ete Lắc kỹ, để yên 10 phút Cho lớp nước vào chén sứ (chén 1) Đổ ete miệng bình lắng Ta có trích tinh I Kiềm hóa chén KHCO dung dịch làm xanh giấy thảo lam Chiết 10 ml ete Ta trích tinh II Sau tìm định danh độc chất theo bảng sau: 19 * MƠI TRƯỜNG ACID: Trích tinh I chia làm chén nhỏ, làm bay đến cắn khô - Chén (1): làm phản ứng Murexid để tìm Cafein - Chén (2): làm phản ứng Pari để tìm Barbituric * MƠI TRƯỜNG KIỀM: Trích tinh II chia làm chén, làm bay đến khô nồi cách thủy Tiến hành tìm độc chất mơi trường kiềm mô tả 20 BÀI 5: CÁC CHẤT ĐỘC VÔ CƠ MỤC TIÊU Ứng dụng sở lý thuyết học tiến hành phân lập, phân tích định tính chất độc ki m loại nặng: arsen, bismuth, crom phân tích định lượng arsen Để xác định chất độc vô cơ, trước tiên ta phải phá hủy chất hữu cách vơ hóa mẫu thử Có nhiều phương pháp để vơ hóa: - Phương pháp dùng Clor sinh - Phương pháp dùng hỗn hợp Sulfo-nitric hay có thêm acid percloric H2O2 1- ĐỊNH TÍNH CÁC CHẤT ĐỘC VƠ CƠ: 1.1 Arsen: Phản ứng Bougault 1.1.1 Nguyên tắc: dựa hoàn nguyên oxyd arsen acid hypophosphorơ môi trường HCl cho arsen kim loại trạng thái tự có màu nâu đen Phản ứng nhanh nhiệt độ cao với hợp chất As III với As V Phản ứng xúc tác vết iod thực môi trường khơng có chất oxy hóa, phải loại bỏ hoàn toàn acid nitric dẫn chất nitơ ta vơ hóa phương pháp dùng acid sulfo-nitric 1.1.2 Thuốc thử: - Thuốc thử Bougault - Dung dịch iod-iodur 0,1% 1.1.3 Tiến hành: ống nghiệm cho lối ml dung dịch vơ hóa, thêm ml thuốc thử hypophosphorơ (Bougault) giọt dung dịch iod-iodur 0,1% Đun cách thủy sôi 30 phút Quan sát xuất tủa nâu (độ nhạy 10 μg) 1.2 Bismuth: Phản ứng Leger 1.2.1 Nguyên tắc: phản ứng dựa thành lập tủa màu đỏ cam Iodobismutit quinin tan dung môi hữu 1.2.2 Thuốc thử: - Dung dịch Formo-iodur Fourneau - Tinh thể sulfat quinin - Dung dịch acetat etyl 21 1.2.3 Tiến hành: ống nghiệm cho lối ml dung dịch vơ hóa vài tinh thể sulfat quinin, thêm giọt dung dịch formo-iodur Fourneau Ta thấy xuất kết tủa màu đỏ cam Thêm 10 giọt acetat etyl, lắc đều, lớp dung mơi có màu đỏ cam * Chú ý: - Có thể thay quinin Cinchonin hay Antipyrin - Phản ứng xảy môi trường acid yếu, dung dịch vơ hóa q acid cho thêm vào dung dịch natri hydroxid đậm đặc 1.3 Crom: Phản ứng Cazeneuve 1.3.1 Nguyên tắc: môi trường sulfuric, dung dịch Diphenyl carbazid cho với dung dịch cromat bicromat màu tím hồng Vì crom dạng Cr 3+ dung dịch vơ hóa nên cần oxy hóa thành muối Cr6+ dung dịch kalipersulfat môi trường acid với diện Ag+ làm chất xúc tác 1.3.2 Thuốc thử: - Dung dịch AgNO3 1% - Dung dịch HCl 1/10 - Dung dịch Diphenyl carbazid 1% rượu - Kalipersulfat - Dung dịch H3PO4 1.3.3 Tiến hành: ống nghiệm cho ml dung dịch vơ hóa, thêm 1-2 giọt AgNO3 1% 0,01g kalipersulfat Để nồi cách thủy vòng 15 phút Thêm giọt HCl 1/10 Đun lần nồi cách thủy sôi vài phút, làm nguội, thêm giọt H3PO4, giọt Diphenyl carbazid rượu Ta có màu hồng tím 2- ĐỊNH LƯỢNG ARSEN BẰNG PHƯƠNG PHÁP CRIBIER: 2.1 Nguyên tắc: phương pháp dựa khử arsen thành khí H 3As hydro sinh As2O3 + 6H2 2H3As + 3H2O Khí tác dụng lên giấy tẩm HgCl cho màu vàng đến màu cam sau màu nâu tùy theo số lượng arsen Đó phản ứng As HgCl diễn theo trình tự sau: H3As + HgCl2 H2As(HgCl) + HCl (màu vàng) H2As(HgCl) + HgCl2 HAs(HgCl)2 + HCl (màu cam) 22 HAs(HgCl)2 + HgCl2 As(HgCl)3 + HCl (màu nâu) Chất tạo thành phức chất arseno thủy ngân Màu không đặc hiệu cho H3As, H2S, H3P (phosphorur hydro) cho màu vàng với HgCl Nên tìm định phân arsen ta phải tránh tượng giao thoa cách oxy hóa tất hợp chất có S H2SO4 có P H3PO4 Trong arsen tạo H 3AsO4 có H3AsO4 bị hydro sinh khử nhiệt độ thường tạo H3As 2.2 Thuốc thử: - Giấy tẩm chì acetat 10% - Giấy tẩm HgCl2 10% - Bột kẽm - H2SO4 đậm đặc 2.3 Mô tả máy Cribier: 12 cm cm 30 cm 10 cm 3 Giấy tẩm dd HgCl2 Giấy tẩm chì acetat Bộ phận nút bình Bình đựng H3As Bình làm lạnh Bình Cribier Gồm bình 150 ml, miệng rộng, đậy nút chai có ống giữa, có đường kính phía 5mm dài 30cm Đầu ống kéo nhọn bịt kín Cách mũi nhọn 25mm có lỗ trịn, đường kính 3mm, vị trí lỗ trịn cách mặt nút chai 10mm (để ngăn giọt nước nhỏ theo luồng khí vào ống) 23 Để vào ống thoát giấy tẩm chì acetat phơi khơ (giấy hình chữ nhật dài 100mm, rộng 40mm), giấy có nhiệm vụ hút tất nước theo luồng khí vào ống phản ứng H 3As HgCl2 xảy môi trường khan nước, giữ lại H2S hay S cịn sót lại Phía giấy chì giấy thử có nhúng HgCl2 (dài từ 12-15mm, rộng 4,5mm) phơi khơ để cách giấy tẩm chì acetat 20mm 2.4 Kỹ thuật vận hành hệ thống Cribier: Cho vào bình Cribier 100 ml dung dịch định lượng As (đã phá hủy chất hữu cơ), thêm vào 3g bột kẽm 12 ml H 2SO4 đậm đặc Đậy bình lại để becher chứa nước (để tránh nhiệt tỏa phản ứng Zn H 2SO4) Hydro sinh tác dụng Zn + H2SO4 ZnSO4 + H2 tác dụng với As cho H3As bay lên ngang giấy chì nước bị giữ lại tới giấy HgCl H3As tác dụng cho màu vàng đến nâu tùy theo hàm lượng arsen Muốn giữ màu lâu cố định màu dung dịch KI 10%, HgCl dư tan dạng kali iodomercurat, lúc màu đậm giữ tháng Ta định lượng cách so sánh với giai mẫu có nồng độ As từ 1/1000mg đến 1/10mg (so sánh với bảng Echelle pour le dosage de l’ arsenic par la méthode de CRIBIER), biết 1/10mg có màu giấy chiều dài 18,5mm Muốn thực giai mẫu ta pha dung dịch có 1,32g As 2O3/1000ml nước Dung dịch tương đương với 1g As/1 lít nước 2.5 Kết quả: Theo Gariel Bertianol arsen yếu tố cho tế bào với tỷ lệ bình thường 1/200g 100g nội tạng, theo Koln Abrest tổng khối lượng arsen có thể 3/10mg Ngồi cịn có arsen thức ăn dược phẩm đem vào Arsen tiết theo đường niệu nhiều Ngồi cịn tiết theo da, sữa để ngồi Vì vậy, tìm thấy 10mg As chưa kết luận bị trúng độc, phải 10mg kể Liều chết người mg/kg 24 BÀI 6: CÁC CHẤT ĐỘC VÔ CƠ (TT) ĐỊNH LƯỢNG THỦY NGÂN BẰNG PHƯƠNG PHÁP TẠO PHỨC CHẤT Cu2I2 MỤC TIÊU Ứng dụng sở lý thuyết học tiến hành phân lập, phân tích định tính chất độc ki m loại nặng: mangan, chì, phân tích định lượng thủy ngân 1- ĐỊNH TÍNH CHẤT ĐỘC VƠ CƠ: 1.1 Mangan: Phản ứng Marshall Trong dung dịch vơ hóa, Mn2+ bị oxy hóa thành Mn7+ dung dịch kali persulfat môi trường acid với diện ion Ag + làm chất xúc tác, ta có màu hồng tím 1.1.1 Thuốc thử: - Dung dịch AgNO3 1% - Kali persulfat 1.1.2 Tiến hành: ống nghiệm cho lối ml dung dịch vơ hóa, giọt H3PO4 đậm đặc, giọt AgNO3 1% 0,01g kali persulfat, để nồi cách thủy sơi 15 phút Ta có màu hồng tím 1.2 Chì: 1.2.1 Phản ứng với dung dịch Dithizone: Pb2+ + 2H2Dz Pb(HDz)2 + 2H+ Cho vào ống nghiệm ml dung dịch phủ tạng vô hóa Thêm vào giọt thuốc thử Dithizone (Diphenylthiocarbazone): xuất màu tím hồng 1.2.2 Phản ứng với dung dịch KI: cho vào ống nghiệm 1ml dung dịch phủ tạng vơ hóa Thêm 2-3 giọt dung dịch KI 1%, có tủa vàng xuất 1.2.3 Phản ứng với kali bicromat: cho vào ống nghiệm ml dung dịch nghiên cứu, thêm 2-3 giọt kali bicromat, xuất tủa vàng không tan acid acetic, tan acid vô kiềm 2Pb(CH3COO)2 + K2Cr2O7 + H2O 2CH3COOK + 2PbCrO4 + 2CH3COOH 25 2- ĐỊNH LƯỢNG THỦY NGÂN BẰNG PHƯƠNG PHÁP TẠO PHỨC CHẤT Cu2I2: Khi tiến hành định lượng thủy ngân đối tượng nghiên cứu (ngun liệu sinh vật) khơng vơ hóa hồn tồn mà giới hạn giai đoạn phá hủy kết cấu 2.1 Nguyên tắc: Cu2I2 phối hợp với ion Hg2+ dung dịch để tạo phức có màu theo phản ứng sau: HgI2 + 2KI K2[HgI4] Cu2I2 + K2[HgI4] Cu2[HgI4] + 2KI So sánh với gam mẫu có nồng độ biết Từ suy lượng thủy ngân có dung dịch nghiên cứu 2.2 Thuốc thử: - Cồn 900 - HNO3 đậm đặc - H2SO4 đậm đặc - Dung dịch đồng iodur - Dung dịch thành phần - Dung dịch thủy ngân chuẩn 0,01 mg/ml - Dung dịch hấp phụ 2.3 Tiến hành: 2.3.1 Phân lập thủy ngân: (tham khảo) Bỏ 20g gan hay thận nghiền nhỏ vào bình nón 100 ml, thêm 2-3 ml etanol 10 ml nước Lắc đều, thêm 10 ml HNO đậm đặc Thêm 10 ml H2SO4 đậm đặc vào bình cách cẩn thận giọt để khí NO khơng bốc lên qua cổ bình Sau phản ứng mãnh liệt có sủi bọt kết thúc đun chất lỏng nồi cách thủy sơi 60 phút lọc nóng qua lần giấy lọc thấm nước cất Rửa cặn giấy lọc nước nóng 2-3 lần gộp nước rửa vào dịch lọc Cho dịch lọc vào bình định mức 200 ml thêm nước cất đến vạch Lấy 100 ml dịch nước này, thêm nước vào đến 300 ml thêm ml đồng iodur Khi có tủa màu hồng sáng, khơng có màu thêm nốt 100 ml dịch lọc cịn lại Thỉnh thoảng khuấy chất lỏng với tủa Sau 10 phút lọc rửa cẩn thận dung dịch đến phản ứng trung tính với giấy thảo lam, rửa đến hoàn toàn hết màu vàng 26 Xử lý tủa lọc dung dịch iod 0,35% dung dịch KI 3% từ 5-50 ml Dùng dung dịch để định lượng thủy ngân 2.3.2 Định lượng: Lấy từ 0,5-6 ml dung dịch định lượng thủy ngân Nếu cần thêm dung dịch hấp phụ đến thể tích ml, thêm ml dung dịch thành phần Lắc cẩn thận, để 10 phút, so với giai mẫu 2.3.3 Pha giai mẫu: lấy ống nghiệm, đánh số từ đến Cho lần lượt: SỐ THỨ TỰ Dung dịch hấp phụ (ml) 6 5,9 5,8 5,6 5,4 5,2 ỐNG ĐO Dung dịch mẫu 0,01 mg/ml (ml) 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 ml dd định lượng Dung dịch thành phần (ml) 4 4 4 4 Lượng Hg (μg) 10 ? Để yên 15 phút, lắc so màu * Cách pha dung dịch thành phần: cho vào becher nhỏ 16 ml dung dịch natri sulfit 2,5N Thêm từ từ khuấy cho tan hết ml dung dịch CuSO 7% (dung dịch phải trong) Tiếp tục cho vào 12 ml NaHCO 8%, khuấy Dung dịch thu suốt có màu xanh lơ * Ghi chú: cho giai mẫu xong pha dung dịch thành phần 27 ... khô nồi cách thủy Tiến hành tìm độc chất mơi trường kiềm mô tả 20 BÀI 5: CÁC CHẤT ĐỘC VÔ CƠ MỤC TIÊU Ứng dụng sở lý thuyết học tiến hành phân lập, phân tích định tính chất độc ki m loại nặng: arsen,... CHIẾT XUẤT VÀ TÌM KIẾM CHẤT ĐỘC TRONG RƯỢU Ở MÔI TRƯỜNG KIỀM: Gồm giai đoạn: Giai đoạn 1: Loại khỏi môi trường chất làm cản trở ly trích chất độc cách: - Đun cách thủy 50 ml chất thử nghiệm cịn... trích chất độc 10ml ete Phải trích thật kỹ để lấy cho hết chất độc cách xoay tròn, trở ngược ống lắng khoảng 20 lần Để yên 10 phút, lấy lớp nước phía chén sứ (phần nước cịn lại để tìm chất độc