Luận văn sư phạm Nghiên cứu thành phần hóa học của cây cỏ ngọt = (STEVIA REBAUDIANA (BERTONI) HEMSLEY )

Tr ng i h c S ph m Hà N i TR NG Khoá lu n t t nghi p IH CS PH M HÀ N I KHOA HỐ H C *************** Nguy n cơng NGHIÊN C U THÀNH PH N HịA H C C A CÂY C NG T (Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsley) KHOÁ LU N T T NGHI P IH C Chuyên ngành: Hoá H u C Hà N i 2009 Nguy n Duy Công K31C- Khoa Hoá h c Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p L ic m n Tr c h t, em xin đ c bày t l i c m n chân thành sâu s c t i th y giáo - TS Nguy n V n B ng- Khoa hoá h c- Tr ng i h c S ph m Hà N i t n tình ch b o, giúp đ em su t q trình th c hi n hồn thi n khoá lu n t t nghi p Em xin trân tr ng c m n TS Phan V n Ki m – Vi n hoá h c H p ch t thiên nhiên - Vi n khoa h c công ngh Vi t Nam t o u ki n giúp đ em trình th c hi n hồn thi n khố lu n Em xin đ Tr ng c g i l i c m n t i th y giáo Khoa Hoá h c- i h c S ph m Hà N i cán b Vi n hoá h c H p ch t thiên nhiên - Vi n khoa h c công ngh Vi t Nam ng h t n tình ch b o, t o u ki n thu n l i cho em hồn thành khố lu n t t nghi p Trong trình th c hi n khoá lu n t t nghi p dù r t c g ng nh ng em v n không tránh kh i m t s sai sót Vì v y, em kính mong nh n đ c s góp ý ch b o c a th y, cô b n sinh viên quan tâm Hà N i, ngày 10 tháng n m 2009 Sinh viên Nguy n Duy Công Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p L I CAM OAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên c u c a riêng Các s li u, k t qu khoá lu n trung th c Các k t qu không trùng v i k t qu đ c công b Sinh viên Nguy n Duy Công Nguy n Duy Công K31C- Khoa Hoá h c Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p M cl c L ic m n L i cam đoan M cl c Danh m c ch vi t t t Danh m c hình v b ng bi u Trang M đ u Ch ng 1: T ng quan c m, tính v cơng d ng c a c ng t 1.1.1 Th c v t h c 1.1.2 Phân b , sinh thái 1.1.3 B ph n dùng 1.1.4 Tác d ng d c lý 1.1.5 Tính v , cơng n ng 1.1.6 Công d ng 1.2 Thành ph n hố h c ho t tính sinh h c c a c ng t 1.2.1 Gi i thi u chung 1.2.2 Thành ph n hoá h c ho t tính sinh h c 1.1 1.3 Các ph ng pháp chi t m u th c v t 11 1.3.1 Ch n dung môi chi t 12 1.3.2 Quá trình chi t 14 Nguy n Duy Công K31C- Khoa Hoá h c Tr ng i h c S ph m Hà N i 1.4 Các ph 1.4.1 Khoá lu n t t nghi p ng pháp s c ký phân l p h p ch t h u c 15 c m chung c a ph ng pháp s c kí 15 ng pháp s c kí 15 1.4.2 C s c a ph 1.4.3 Phân lo i ph ng pháp s c kí 16 1.5 M t s ph ng pháp hoá lý xác đ nh c u trúc c a h p ch t h u c 18 1.5.1 Ph h ng ngo i (Infrared spectroscopy, IR) 18 1.5.2 Ph kh i l ng (Mass spectroscopy, MS) 19 1.5.3 Ph c ng h ng t h t nhân (Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, NMR) Ch ng 2: đ i t 2.1 Ph ng ph ng pháp nghiên c u 19 23 ng pháp phân l p h p ch t 23 2.1.1 S c ký l p m ng (TLC) 23 2.1.2 S c ký l p m ng u ch 23 2.1.3 S c ký c t (CC) 23 2.2 Ph ng pháp xác đ nh c u trúc hoá h c h p ch t 23 2.2.1 i m nóng ch y (MP) 23 2.2.2 Ph kh i l ng (ESI-MS) 24 2.2.3 Ph c ng h ng t h t nhân (NMR) 24 quay c c []D 24 2.3 D ng c thi t b 24 2.3.1 D ng c thi t b tách chi t 24 2.3.2 D ng c thi t b xác đ nh c u trúc 25 2.4 Hoá ch t 25 2.2.4 Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p 2.5 Chi t phân đo n phân l p h p ch t 25 Ch 27 ng 3: K t qu th o lu n 3.1 H ng s v t lý d ki n ph c a h p ch t 27 3.1.1 H p ch t 1: Stevioside 27 3.1.2 H p ch t 2: -Sitostorol 28 3.2 Xác đ nh c u trúc hoá h c c a h p ch t 28 3.2.1 H p ch t 1: Stevioside 28 3.2.2 H p ch t 2: -Sitostorol 38 K t lu n 43 Tài li u tham kh o 45 Nguy n Duy Công K31C- Khoa Hoá h c Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p Danh m c ch vi t t t quay c c Specific Optical Rotation []D 13 1 C NMR H NMR H-1H COSY 2D-NMR Ph c ng h ng t h t nhân cacbon 13 Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Ph c ng h ng t h t nhân proton Proton Magnetic Resonance Spectroscopy H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy Ph c ng h ng t h t nhân hai chi u Two-Dimensional NMR CC S c ký c t Column Chromatography DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer EI-MS FAB-MS Ph kh i l ng va ch m electron Electron Impact Mass Spectrometry Ph kh i l ng b n phá nguyên t nhanh Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivity HMQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence Ph kh i l HR-FAB-MS ng b n phá nguyên t nhanh phân gi i cao High Resolution Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry IR Ph h ng ngo i Infrared Spectroscopy Me Nhóm metyl MS Ph kh i l NOESY Nucler Overhauser Effect Spectroscopy ng Mass Spectroscopy Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p S c ký l p m ng Thin Layer Chromatography TLC Danh m c hình v b ng bi u Trang Hình 1.1: Cây c ng t hoa c a c ng t Hình 1.2.2.1: M t s h p ch t khung kauran ditecpen đ l p t c ng t c phân Hình 1.2.2.2: M t s h p ch t khung labdane ditecpen đ l p t c ng t c phân Hình 2.5: S đ chi t phân đo n tinh ch h p ch t t c ng t 26 Hình 3.2.1.1: Ph H-NMR c a h p ch t 28 Hình 3.2.1.2: Ph H-NMR dãn r ng c a h p ch t 29 Hình 3.2.1.3: C u trúc hóa h c c a h p ch t 29 Hình 3.2.1.4: Ph 13 C-NMR c a h p ch t 30 Hình 3.2.1.5: Ph 13 C-NMR ph DEPT c a h p ch t 31 Hình 3.2.1.6: Ph HSQC c a h p ch t 35 Hình 3.2.1.7: Ph HMBC c a h p ch t 36 Hình 3.2.1.8: Các t 37 ng tác HMBC c a h p ch t Hình 3.2.1.9: Ph kh i l ng ESI-MS c a h p ch t 38 Hình 3.2.2.1: C u trúc hố h c c a 39 Hình 3.2.2.2: Ph 39 H-NMR c a Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c Tr ng i h c S ph m Hà N i Hình 3.2.2.3: Ph 13 Khố lu n t t nghi p C-NMR c a 40 B ng 1: K t qu ph NMR c a h p ch t 32 B ng 2: K t qu 40 ph NMR c a h p ch t B ng 3: Hai h p ch t phân l p đ c t c ng t Nguy n Duy Cơng 43 K31C- Khoa Hố h c Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p M đ u Vi t Nam n m khu v c nhi t đ i có khí h u nóng m, đ 80%, l m cao ng m a l n, nhi t đ trung bình kho ng 15 đ n 270C ó u ki n r t thích h p cho th c v t phát tri n Do v y h th c v t Vi t Nam vô phong phú, đa d ng v i kho ng 12000 lồi, có t i 4000 loài đ c nhân dân ta dùng làm th o d c [7] i u th c s có ý ngh a to l n cho s phát tri n c a ngành y t , ngành hoá h c m t s ngành khác H th c v t phong phú đ h c h p ch t thiên nhiên c coi nh ti n đ cho s phát tri n ngành hóa n c ta T ngàn x a, ông cha ta s d ng nhi u ph c đ ch a b nh, b i b c th hay làm h đ gi i c m, Nhân sâm đ t ng c Nâu đ nhu m màu Các ph ng thu c dân gian t ng li u, ph m màu nh Tía tơ ng s c đ kháng, S đ t o mùi th m, c ng thu c y h c c truy n th hi n nh ng m t m nh u tr b nh đ c tính tác d ng ph Do có nh ng u m nh nên ngày ng i ngày quan tâm đ n h p ch t có ho t tính sinh h c cao th c v t đ ng v t V lâu dài đ i v i s phát tri n d c ph m m i h p ch t có ho t tính sinh h c đóng vai trị quan tr ng, kh i đ u cho vi c t ng h p nên lo i thu c m i có tác d ng t t h n Theo tài li u [28] công b hi n có kho ng 60% - 70% lo i thu c ch a b nh đ c l u hành ho c giai đo n th nghi m lâm sàng có ngu n g c t h p ch t thiên nhiên Cây c ng t đ c bi t đ n m t lo i có ho t tính sinh h c cao, ch a nhi u thành ph n hoá h c có nhi u tác d ng d nh t c a c ng t ch a b nh đái tháo đ c lý Tác d ng quan tr ng ng, b nh béo phì, cao huy t áp Vi c nghiên c u, kh o sát thành ph n hoá h c tác d ng d Nguy n Duy Công c lý c a K31C- Khoa Hoá h c 10 Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p Hình 3.2.1.6: Phổ HSQC hợp chất Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c 45 Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p Hình 3.2.1.7: Phổ HMBC hợp chất Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c 46 Tr ng T i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p ng tác HMBC t proton anome H-1’ ( 5,25) sang cacbon cacbonyl C-1’ ( 175,70) kh ng đ nh v trí liên k t c a đ n v đ t i cacbon C-19 nv đ ng glucose th hai đ cacbon C-13 b i tín hi u t c xác đ nh liên k t v i ng tác HMBC t proton H-1” ( 4,45) sang ng tác xa H-C t proton H-1’’’ ( 4,36) cacbon C-19 ( 84,72) Tín hi u t sang cacbon C-2” ( 82,59) nh n đ đ nh v trí liên k t c a đ n v đ đ ng glucose th nh t c ph HMBC c a cho phép xác ng th ba vào cacbon C-2” c a đ n v ng th hai OH HO HO HO O OH O O O OH HO CH3 CH2 OH O OH3C HO HO O OH Hình 3.2.1.8: Các t ng tác HMBC c a h p ch t T t t c d ki n ph trên, v i s phù h p hoàn toàn v s li u NMR c a so v i s li u đ s li u ph kh i l c công b c a h p ch t stevioside [1] ng ESI-MS t i m/z 827,2 [M +Na]+ t ng ng v i công th c phân t C38H60O18 cho phép xác đ nh xác h p ch t stevioside, m t thành ph n hóa h c c a c ng t Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c 47 Tr ng i h c S ph m Hà N i Hình 3.2.1.9: Ph kh i l Khoá lu n t t nghi p ng ESI-MS c a h p ch t 3.2.2 H p ch t 2: -Sitosterol H p ch t c ng đ c phân l p d i d ng tinh th hình kim màu tr ng Ph NMR c a có d ng ph chung c a m t h p ch t sterol có m t n i đơi m t nhóm hydroxyl Ph H-NMR xu t hi n tín hi u c a nhóm metyl có hai nhóm metyl b c ba t i  0,68 (3H, s), 1,01 (3H, s), tín hi u doublet t i  0,92 (3H, d, J = 6,5 Hz), 0,83 (3H, d, J = 7,3 Hz), 0,81 (3H, d, J = 6,8 Hz), m t tín hi u triplet t i  0,84 (3H, t, J = 7,5 Hz) Tín hi u c a nhóm oximetin t i  3,54 (tt, J = 5,1, 11,7 Hz) n i đôi th v trí t i  5,37 (br d, J = 5,1 Hz) Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c 48 Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p 26 22 18 24 27 29 20 17 28 19 HO Hình 3.2.2.1: C u trúc hố h c c a H nh 3.2.2.2: Ph Nguy n Duy Cơng H-NMR c a K31C- Khoa Hố h c 49 Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p Hình 3.2.2.3: Ph 13 C-NMR c a B ng 2: K t qu ph NMR c a h p ch t C C [2] C (125MHz) 37,27 37,67 31,64 32,05 71,77 72,19 42,29 42,70 140,76 141,17 121,69 122,50 31,92 32,32 Nguy n Duy Công H (500MHz) 3,54 (tt, J = 5,1, 11,7 Hz) 5,37 (br d, J = 5,1 Hz) K31C- Khoa Hoá h c 50 Tr a ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p 31,92 32,32 50,15 50,55 10 36,51 36,91 11 21,10 21,49 12 39,80 40,19 13 42,33 42,73 14 56,78 57,18 15 24,31 24,71 16 28,25 28,65 17 56,08 56,48 18 11,89 12,26 0,68 (3H, s) 19 19,39 19,79 1,01 (3H, s) 20 36,15 36,55 21 18,80 19,18 22 33,96 34,36 23 26,11 26,51 24 45,85 46,25 25 29,18 29,57 26 19,82 20,24 0,83 (3H, d, J = 7,3 Hz) 27 19,05 19,44 0,81 (3H, d, J = 6,8 Hz) 28 23,08 23,48 29 11,99 12,39 0,92 (3H, d, J = 6,5 Hz) 0,84 (3H, t, J = 7,5 Hz) o CDCl3, b125MHz, c500MHz Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c 51 Tr ng Ph i h c S ph m Hà N i 13 C-NMR cho th y có 29 cabon, s xu t hi n c a 01 cacbon oximetin 01 liên k t đơi đ c ng h Khố lu n t t nghi p c kh ng đ nh l n l t b i tín hi u ng t i  72,19 (C-3) 141,17 (C-5)/122,50 (C-6) Nh v y, h p ch t m t steroit có m t n i đơi m t nhóm hydroxyl So sánh d ki n ph NMR c a v i h p ch t -sitosterol [2] cho th y s trùng kh p t i t t c v trí t ng ng T nh ng d ki n nêu trên, h p ch t đ d ng -sitosterol, m t h p ch t sterol ph bi n Nguy n Duy Công c nh n th c v t K31C- Khoa Hoá h c 52 Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p K t lu n Trong th i gian làm khóa lu n v i đ tài: “Nghiên c u thành ph n hoá h c c a c ng t (Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsley )” Tôi ti n hành nghiên c u thành ph n hoá h c có c ng t b ng ph ng pháp s c ký k t h p bao g m s c ký c t nh i silicagel pha th ng, s c ký c t nh i silicagel pha đ o s c ký l p m ng u ch thu đ c hai ch t là:  H p ch t 1: Stevioside  H p ch t 2: -Sitosterol ng th i s d ng ph h ng pháp ph hi n đ i bao g m ph c ng ng t h t nhân m t chi u (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT 135, DEPT 90) ph kh i l ng đ xác đ nh c u trúc hoá h c c a h p ch t B ng 3: Hai h p ch t phân l p đ H p ch t 1: Stevioside c t c ng t 3'" 2'" HO HO 4'" Công th c phân t HO 1'" 2" O 1" OH O 6" OH 5" 6'" C38H60O18 4" 3" O O 5'" HO OH 12 20 11 o 13 i m ch y 238-239 C + MS: 827,2 [M +Na] 10 16 17 14 H 15 H OH 4' 6' 18 O 19 O 5' HO HO 1' O 2' OH 3' Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c 53 Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p H p ch t 2: -Sitosterol 26 Công th c phân t 22 C29H50O 18 o i m ch y 136-137 C 24 29 27 20 17 28 19 HO Các k t qu nghiên c u khơng nh ng đóng góp vào vi c làm sáng t thành ph n hoá h c c a c ng t(Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsley) mà gi i thích đ c tác d ng ch a b nh c ng nh đ nh h nghiên c u ti p theo nh m khai thác có hi u qu ngu n tài nguyên d n ng c li u c Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c 54 Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p TàI LI U THAM KH O Boonkaewwan C, Ao M, Toskulkao C, Rao MC Specific [1] immunomodulatory and secretory activities of stevioside and steviol in intestinal cells J Agric Food Chem 2008, 56, 3777-84 Boonkaewwan C, Toskulkao C, Vongsakul M Anti-Inflammatory and [2] Immunomodulatory Activities of Stevioside and Its Metabolite Steviol on THP-1 Cells J Agric Food Chem 2006, 54, 785-789 Chatsudthipong V, Muanprasat C Stevioside and related compounds: [3] therapeutic benefits beyond sweetness Pharmacol Ther 2009, 121, 4154 Chen TH, Chen SC, Chan P, Chu YL, Yang HY, Cheng JT [4] Mechanism of the hypoglycemic effect of stevioside, a glycoside of Stevia rebaudiana Planta Med 2005, 71, 108-113 Curi R, Alvarez M, Bazotte RB, Botion LM, Godoy JL, Bracht A [5] Effect of Stevia rebaudiana on glucose tolerance in normal adult humans Braz J Med Biol Res 1986, 19, 771-4 Dacome A S., Silva, Cecilia C C., Costa E M., Fontana J D., Adelmann J., and Costa S C., Sweet diterpenic glycosides balance of a [6] new cultivar of Stevia rebaudiana (Bert.) Bertoni: Isolation and quantitative distribution by chromatographic, spectroscopic, and electrophoretic methods, Process Biochemistry, 40, 3587-3594 (2005) [7] Huy Bích, ng Quang Trung, Bùi Xuân Ch Nguy n Duy Công ng, Nguy n Th ng K31C- Khoa Hoá h c 55 Tr ng i h c S ph m Hà N i Dong, Khoá lu n t t nghi p Trung àm, Ph m V n Hi n, V Ng c L , Ph m Duy Mai, Ph m Kim Mãn, oàn Th Thu, Nguy T p Tr n Toàn, Cây thu c đ ng v t làm thu c Vi t Nam, Nhà xu t b n Khoa h c K thu t Hà N i, t p I, trang 495-498 (2004) Ferreira EB, de Assis Rocha Neves F, da Costa MA, Prado WA, de [8] Ara jo Funari Ferri L, Bazotte RB Comparative effects of Stevia rebaudiana leaves and stevioside on glycaemia and hepatic gluconeogenesis Planta Med 2006, 72, 691-696 Ghanta S, Banerjee A, Poddar A, Chattopadhyay S Oxidative DNA [9] damage preventive activity and antioxidant potential of Stevia rebaudiana (Bertoni) Bertoni, a natural sweetener J Agric Food Chem 2007, 55, 10962-10967 [10] Goad J L and Akihisa T., Analysis of sterols, Blackie Academic and Professional Pub., First edition, p.378 (1997) Jeppesen PB, Gregersen S, Rolfsen SE, Jepsen M, Colombo M, Agger [11] A, Xiao J, Kruh ffer M, Orntoft T, Hermansen K Antihyperglycemic and blood pressure-reducing effects of stevioside in the diabetic GotoKakizaki rat Metabolism 2003, 52, 372-378 Kennelly EJ Sweet and non-sweet constituents of Stevia rebaudiana [12] (Bertoni) Bertoni In: Kinghorn AD (Ed.), Stevia, the genus Stevia Medicinal and aromatic plants-Industrial profiles, Vol 19 Taylor and Francis, London and NewYork, pp 68-85 (2002) [13] Kohda Hiroshi, Ryoji Kasai, Kazuo Yamasaki, Kuniko Murakami and Osamu Tanaka New sweet diterpene glucosides from Stevia Nguy n Duy Công K31C- Khoa Hoá h c 56 Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p rebaudiana Phytochemistry, 1976, 15, 981-983 McGarvey BD, Attygalle AB, Starratt AN, Xiang B, Schroeder FC, [14] Brandle JE, Meinwald J New non-glycosidic diterpenes from the leaves of Stevia rebaudiana J Nat Prod 2003, 66, 1395-1398 McGarvey BD, Attygalle AB, Starratt AN, Xiang B, Schroeder FC, [15] Brandle JE, Meinwald J New non-glycosidic diterpenes from the leaves of Stevia rebaudiana J Nat Prod., 2003, 66, 1395-1398 [16] Ogawa T et al., Total synthesis of stevioside Tetrahedron, 1980, 36, 2641-2648 Oshima Y, Jun-ichi Saito, Hiroshi Hikino Sterebins A, B, C and D, [17] bisnorditerpenoids of Stevia rebaudiana leaves Tetrahedron, 1986, 42, 6443-6446 Oshima Yoshiteru, Jun-Ichi Saito, Hitoshi Hikino, Sterebins E, F, G [18] and H, diterpenoids of Stevia rebaudiana leaves Phytochemistry, 1988, 27, 624-626 Pariwat, P., Homvisasevongsa, S., Muanprasat, C., & Chatsudthipong, [19] V (2008) A natural plant-derived dihydroisosteviol prevents cholera toxin-induced intestinal fluid secretion J Pharmacol Exp Ther 324, 798−805 Shiozaki, K., Fujii, A., Nakano, T., Yamaguchi, T., & Sato, M (2006) [20] Inhibitory effects of hot water extract of the Stevia stem on the contractile response of the smooth muscle of the guinea pig ileum Biosci Biotechnol Biochem 70, 489−494 Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c 57 Tr ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p Starratt Alvin N, Christopher W Kirby, Robert Pocs, James E [21] Brandle, Rebaudioside F, a diterpene glycoside from Stevia rebaudiana Phytochemistry, 2002, 59, 367-370 Starratt AN, Kirby CW, Pocs R, Brandle JE Rebaudioside F, a [22] diterpene glycoside from Stevia rebaudiana Phytochemistry 2002 Feb;59(4):367-70 Takahashi,K.,Matsuda,M.,Ohashi, K., Taniguchi,K., Nakagomi,O., [23] Abe, Y., et al (2001) Analysis of anti-rotavirus activity of extract from Stevia rebaudiana Antiviral Res 49, 15−24 Tomita, T., Sato, N., Arai, T., Shiraishi, H., Sato, M., Takeuchi, M., et al (1997) Bactericidal activity of a fermented hot-water extract from [24] Stevia rebaudiana Bertoni towards enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 and other food-borne pathogenic bacteria Microbiol Immunol 4, 1005−1009 Toskulkao C, Chaturat L, Temcharoen P, Glinsukon T Acute toxicity [25] of stevioside, a natural sweetener, and its metabolite, steviol, in several animal species Drug Chem Toxicol 1997, 20, 31-44 [26] Wood HB, Allerton R, Diehl HW, Fletcher HG Stevioside I The structure of the glucose moieties J Org Chem 20, 875−883 (1955) Yasukawa K, Kitanaka S, Seo S Inhibitory effect of stevioside on [27] tumor promotion by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate in twostage carcinogenesis in mouse skin Biol Pharm Bull 2002, 25, 14881490 Nguy n Duy Cơng K31C- Khoa Hố h c 58 Tr [28] ng i h c S ph m Hà N i Khoá lu n t t nghi p Peter J.Houghton and Lu Ming Lian, Triterpenes From Desfontainia spinosa, Phytochemistry, Vol.25(8), 1939-1944(1986) Nguy n Duy Công K31C- Khoa Hoá h c 59 ... H-5’’? ?) 3,35-3,70 (2H, H-6’’? ?). ; 13C-NMR (125 MHz, DMSO), H (ppm): 41,02 (C- 1), 18,69 (C- 2), 37,43 (C- 3), 43,54 (C- 4), 56,51 (C- 5), 21,23 (C- 6), 42,04 (C- 7), 43,54 (C- 8), 53,17 (C- 9), 40,13 (C-1 0), ... (C1 1), 35,65 (C-1 2), 84,72 (C-1 3), 43,27 (C-1 4), 46,94 (C-1 5), 153,55 (C-1 6), 103,96 (C-1 7), 28,10 (C-1 8), 175,70 (C-1 9), 15,17 (C-2 0), 94,17 (C-1? ?), 75,29 (C-2? ?), 77,65 (C-3? ?), 69,58 (C-4? ?), ... CDCl 3), H (ppm): 5.37 (br d, J = 5.1 Hz, H- 6), 3.54 (tt, J = 5.1, 11.7 Hz, H- 3), 0.68 (3H, s, H1 8), 1.01 (3H, s, H-1 9), 0.92 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.83 (3H, d, J = 7.3 Hz, H2 6), 0.81 (3H, d, J =