Luận văn sư phạm Nghiên cứu một số yếu tố môi trường ảnh hưởng tới khả năng sinh Cellulase từ một số chủng nấm mốc được phân lập ở Vĩnh Phúc

TR NG IH CS PH M HÀ N I KHOA SINH- KTNN _*** _ V NG C MAI NGHIÊN C U M T S Y U T TR NG NH H CELLULASE T MÔI NG T I KH N NG SINH M T S CH NG N M M C C PHÂN L P V NH PHÚC KHÓA LU N T T NGHI P Chuyên ngành: Vi sinh v t h c Ng ih TS Ph HÀ N I - 2010 ng d n khoa h c ng Phú Công L IC M N Em xin g i l i c m n sâu s c t i gi ng viên - TS Ph h ng Phú Công ng d n, ch b o t n tình, giúp đ , t o u ki n đ em th c hi n hoàn thành t t lu n v n Em c ng xin g i l i c m n chân thành t i th y cô b môn Vi sinh v t ng th i em xin c m n Ban giám hi u tr ng HSP Hà N i 2, khoa Sinh – KTNN, phòng thí nghi m vi sinh, th vi n t o u ki n giúp đ đ em hoàn thành t t lu n v n t t nghi p Ngoài ra, em xin c m n s giúp đ , đ ng viên c a b n bè, gia đình su t trình làm đ tài Em xin chân thành c m n! Hà N i, ngày tháng Sinh viên n m 2010 L I CAM OAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên c u c a riêng Các k t qu nghiên c u, s li u đ c trình bày khóa lu n hồn tồn trung th c không trùng v i k t qu c a tác gi khác Hà N i, ngày tháng Tác gi n m 2010 M CL C L i c m n L i cam đoan Danh m c t vi t t t Danh m c hình lu n v n Danh m c b ng bi u lu n v n M đ u CH NG 1: T NG QUAN TÀI LI U 1.1 Cellulose……………………………………………………………… 1.2 H th ng cellulase……………………………………………………… 1.3 C ch phân gi i cellulose……………………………………………… .8 1.4 ng d ng c a cellulase………………………………………………… 11 1.5 Các nhóm vi sinh v t phân gi i cellulose ……………………………… 15 1.5.1 N m s i ……………………………………………………………… 15 1.5.2 Vi khu n……………………………………………………………… 16 nh h 1.6 M t s y u t ng đ n sinh t ng h p cellulase c a vi sinh v t… 17 1.6.1 Gi ng vi sinh v t……………………………………………………… 17 1.6.2 Ngu n dinh d ng …………………………………………………… 18 1.6.3 i u ki n nuôi c y…………………………………………………… 19 CH NG 2: NGUYÊN LI U VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 Nguyên li u vi sinh v t……………………………………………… 21 2.1.1 Nguyên li u………………………………………………………… 2.1.2 Môi tr 21 ng…………………………………………………………… .21 2.1.2.1 Môi tr ng b o qu n gi gi ng………………………………… 21 2.1.2.2 Môi tr ng nuôi c y………………………………………………… 22 2.1.2.3 Mơi tr ng th ho t tính enzyme…………………………………… 22 2.1.3 Hóa ch t- thi t b ……………………………………………………… 23 2.1.3.1 Hóa ch t…………………………………………………………… 23 2.1.3.2 Thi t b ……………………………………………………………… 23 2.2 Ph ng pháp nghiên c u……………………………………………… 23 2.2.1 Ph ng pháp vi sinh………………………………………………… 23 2.2.2 Ph ng pháp hóa sinh………………………………………………… 24 2.2.2.1 Xác đ nh ho t tính enzyme b ng ph ng pháp c y ch m m …… 24 2.2.2.2 Xác đ nh ho t tính enzyme b ng ph tr ng pháp khu ch tán môi ng th ch (William, 1983)…………………………………………………24 2.2.2.3 Nghiên c u nh h ng c a y u t môi tr ng đ n ho t tính c a cellulase………………………………………………………………… 25 CH NG 3: K T QU VÀ BI N LU N 3.1 Tuy n ch n ch ng n m m c có ho t tính phân gi i cellulose 3.2 nh h …… 26 ng c a m t s u ki n nuôi c y đ n kh n ng sinh cellulase c a ch ng M3 M6-1………………………………………………………… 30 3.2.1 nh h ng c a pH đ n kh n ng sinh cellulase……………………… 30 3.2.2 nh h ng c a nhi t đ đ n kh n ng sinh cellulase……………… 3.2.3 nh h ng c a th i gian nuôi c y đ n kh n ng sinh cellulase……… 33 3.2.4 nh h ng c a ngu n nit đ n kh n ng sinh cellulase……………… 34 3.2.5 nh h ng c a ngu n cellulose t nhiên……………………………… 35 32 K T LU N VÀ KI N NGH …………………………………………….44 TÀI LI U THAM KH O DANH M C B NG BI U TRONG LU N V N B ng 1.1 Các thành ph n c a ligno – cellulose enzyme phân gi i c a n m……………………………………………………………………… .4 B ng 1.2 Hàm l ng cellulose m t s nguyên li u…………………… B ng 3.1 Các ch ng vi sinh v t có kh n ng phân gi i cellulose(D-d, cm) 28 B ng 3.2 nh h ng c a pH đ n ho t tính cellulase………………………….31 B ng 3.3 nh h ng c a nhi t đ đ n ho t tính cellulase…………………….34 B ng 3.4 nh h ng c a th i gian nuôi c y đ n kh n ng sinh cellulase…….36 B ng 3.5 nh h ng c a ngu n nit đ n kh n ng sinh cellulase………… 38 B ng 3.6 nh h ng c a ngu n cellulose t nhiên………………………… 41 DANH M C HÌNH TRONG LU N V N Hình 1.1 C u trúc l p th c a phân t cellulose…………………………………… Hình 1.2 C u trúc c a cellulose…………………………………………………… Hình 1.3 S đ trình th y phân cellulose theo Erickson, 1973……………… 10 Hình 3.1 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng đ c nghiên c u……………… 29 Hình 3.2 nh h ng c a pH đ n kh n ng sinh cellulase………………………… 32 Hình 3.3 nh h ng c a nhi t đ đ n ho t tính cellulase………………………… 34 Hình 3.4 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng Penicilium M3 AspergillusM5-3 25 0C………………………………………………………………………………… 34 Hình 3.5 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng Penicilium M3 Aspergillus M5-3 30 0C………………………………………………………………………………… 35 Hình 3.6 nh h ng c a th i gian đ n ho t tính cellulase………………………….36 Hình 3.7 nh h ng c a ngu n nit đ n kh n ng sinh cellulase………………… 38 Hình 3.8 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng Penicilium M3 ngu n nit (NH4 )2SO4 NaNO3……………………………………………………………… 39 Hình 3.9 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng AspergillusM5-3 ngu n nit (NH4 )2SO4 NaNO3…………………………………………………………………39 Hình 3.10 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng A niger M6-1 ngu n nit (NH4 )2SO4 NaNO3………………………………………………………………….40 Hình 3.11 nh h ng c a ngu n cellulose t nhiên đ n kh n ng sinh cellulase… 41 Hình 3.12 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng Penicillium M3, AspergillusM5-3 A.niger M6-1 v tr u ……………………………………………………… .42 DANH M C T VI T T T CMC : Carboxylmethyl cellulose M3 :M u3 M6-1 : M u 6-1 M5-3 : M u 5-3 Cx : Endoglucanase C1 : Exoglucanase CBH : Celobiohydrolase SSA : Vùng b m t đ c hi u (SSA) c a cellulose Tr Khóa lu n t t nghi p M ng ảSP ảà N i U Lý ch n đ tài T xa x a, ng i bi t s d ng vi sinh v t đ i s ng hàng ngày Các trình làm r u, làm d m, làm t ng, mu i chua th c ph m…đ u ng d ng đ c tính sinh h c c a nhóm vi sinh v t Khi khoa h c phát tri n, bi t rõ vai trò c a vi sinh v t, vi c ng d ng s n xu t đ i s ng hàng ngày r ng rãi có hi u qu l n [8] Cellulose thành ph n ch y u c a màng t bào th c v t Hàng ngày, hàng gi , m t l ng l n cellulose đ c tích l y l i đ t s n ph m t ng h p c a th c v t th i ra, c i ch t đi, cành r ng xu ng…N u q trình phân gi i c a vi sinh v t l ng ch t h u c kh ng l s tràn ng p trái đ t Trong thiên nhiên, có nhi u nhóm vi sinh v t có kh n ng phân h y cellulose nh có h enzyme cellulase ngo i bào nh : vi khu n( Pseudomonas, Xenllulomonas, Achromobacter, Clostridium.), x khu n (Streptomyces ).Trong đó, vi n m nhóm có kh n ng phân gi i m nh ti t môi tr ng m t l ng l n enzyme đ y đ thành ph n, đ c bi t loài n m m c có ho t tính phân gi i cellulose m nh h n c nh Aspegillus, Mucor, Tricoderma … Cellulase m t ph c h enzyme r t quan tr ng đ rãi nhi u l nh v c Trong hi n t i t c ng d ng r ng ng lai, ng i ta s d ng cellulase cho hai m c đích chính: - Dùng cellulase tr c ti p phân gi i ph th i c a công nghi p th c ph m, ph th i nông nghi p b sung vào th c n gia súc công ngh môi tr ng - Th y phân cellulose t o c ch t lên men đ thu s n ph m cu i khác V Ng c Mai K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p ng ảSP ảà N i c bi t, ch n nuôi, m t nh ng bi n pháp nâng cao n ng su t v t nuôi nâng cao hi u su t s d ng ch t dinh d cao nh t gi i quy t nhi m v này, ng ng c a th c n m c i ta có th dùng ch ph m enzyme b sung vào kh u ph n th c n c a v t nuôi Các enzyme v i enzyme có s n đ ng tiêu hóa s phân gi i ch t dinh d th c n giúp cho v t tiêu hóa đ c t t h n [13] Cellulase m t s enzyme th ch n nuôi gia súc Tuy nhiên, ng mà th ng c a ng đ c b sung vào th c n i ta không b sung riêng ch ph m enzyme ng b sung v i enzyme khác nh amylase, protease, xylase t o m t d ng ch ph m ch a nhi u lo i enzyme (multienzyme) Vi c b sung nhi u lo i enzyme giúp v t nuôi s h p th t t h n ngu n th c n khác T lâu, ng i c ng bi t đ n ch ng n m m c ng d ng c a chúng nhi u l nh v c nh công nghi p ch bi n th c ph m, công nghi p d c ph m, công ngh môi tr ng, nông nghi p Tuy nhiên c ng ch a có nhi u nghiên c u t p trung vào ch ng n m m c phân gi i cellulose, nguyên nhân có th t nhiên có nhi u nhóm vi sinh v t t u th h n so v i n m m c v kh n ng sinh cellulase Nh ng n u xét v kh n ng ch ng ch u pH, kh n ng s d ng ngu n cacbon, ngu n nit n m m c t u th h n so v i nhóm vi sinh v t khác Hàng n m, ho t đ ng ngành nông nghi p th i môi tr ng hàng tr m ngàn t n ph ph m, hi n m t nh ng nguyên nhân gây ô nhi m môi tr ng N u l ng ph ph m đ c x lý làm th c n gia súc ho c phân bón c ng s m t ngu n l i l n.Trên th gi i c ng nh Vi t Nam, có nhi u nghiên c u v cellulose ng d ng th c n ch n nuôi nh : Chu Th Thanh Bình CS (2002) ng d ng ch ng n m men ch bi n bã th i hoa qu giàu cellulose làm th c n gia V Ng c Mai K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p K t qu phù h p v i m t s nghiên c u tr ng ảSP ảà N i c đây, ch ng n m s i sinh t ng h p cellulase m nh nh t kho ng pH= 4,5 - 6,0 ( ng Minh H ng, 1999) 3.2.2 nh h ng c a nhi t đ đ n kh n ng sinh cellulase Ti n hành nuôi c y ba ch ng Penicillium M3, Aspergillus M5-3 A niger M6-1 đ c n ch n môi tr Nghiên c u nh h n ch n b ng ph ng c a nhi t đ đ n ho t tính cellulase c a ba ch ng đ ng pháp trình bày c a d ch ph n ng đ tr ng thích h p (ph n2.1.2.2) ng th ch K t qu đ ph n 2.2.2.3 Ho t tính cellulase c xác đ nh b ng ph c trình bày B ng 3.3 nh h ng pháp khu ch tán mơi b ng 3.3 hình 3.3 ng c a nhi t đ đ n ho t tính cellulase Nhi t đ M5-3 M3 M6-1 (0C) (D-d,cm) (D-d,cm) (D-d,cm) 25 0,7 1,1 0,6 30 1,2 2,2 1,6 35 1,1 2,0 0,9 40 1,0 1,5 0,8 V Ng c Mai c 33 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p Hình 3.3 nh h ng ảSP ảà N i ng c a nhi t đ đ n ho t tính cellulase Hình 3.4 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng Penicilium M3, AspergillusM5-3 250C V Ng c Mai 34 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p ng ảSP ảà N i Hình 3.5 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng Penicilium M3, AspergillusM5-3 300C K t qu cho th y c ba ch ng Penicillium M3, Aspergillus M5-3 A niger M6-1 cho kh n ng sinh t ng h p cellulase cao nh t nhi t đ 300C, sau kh n ng sinh t ng h p cellulase c a ba ch ng gi m d n m c nhi t đ ti p theo (400C) Các ch ng n m th ng ch ng a nhi t nhi t đ t i u cho kh n ng sinh t ng h p cellulase 300C nhi t đ kh o sát Nh ng nghiên c u tr c cho th y, ch ng n m khác c ng sinh t ng h p cellulase m nh nh t 3.2.3 nh h Ch ng đ d i nhi t đ 310C- 340C ( ng Minh H ng, 1999) ng c a th i gian c nuôi c y môi tr ng Czapek- Dox (ph n 2.1.2.2) v i m c th i gian khác t 1-5 ngày Sau m i ngày, l y d ch nuôi c y đem li tâm lo i b sinh kh i Xác đ nh ho t tính cellulase d ch li tâm V Ng c Mai 35 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p b ng ph ng pháp trình bày ng ảSP ảà N i ph n 2.2.2.2 K t qu đ c trình bày b ng 3.4 hình 3.6 B ng 3.4 nh h ng c a th i gian nuôi c y đ n kh n ng sinh cellulase M5-3 M3 M6-1 (ngày) (D-d,cm) (D-d,cm) (D-d,cm) 0.37 0.41 0.35 0.59 0.8 0.6 0.8 0.9 0.68 1.0 1.2 0.9 0.5 0.63 0.63 D-d, cm Th i gian 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 M5-3 M3 M6-1 (ngày) Th i gian Hình 3.6 nh h Qua s li u ng c a th i gian đ n ho t tính cellulase b ng 3.4 hình 3.6, tơi nh n th y ho t tính cellulase c a ba ch ng t ng d n theo th i gian c ba ch ng đ u đ t giá tr c c đ i sau ngày nuôi c y th Qua ngày ni c y th 4, ho t tính c a ba ch ng đ u V Ng c Mai 36 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p gi m d n có th sinh tr ng ảSP ảà N i ng c a n m m c gi m d n, ngu n dinh d ng c n ki t… K t qu phù h p v i nh ng nghiên c u tr c ch ng n m s i a nhi t sinh t ng h p cellulase m nh nh t sau 72h - 96h nuôi c y C ba ch ng Penicillium M3, Aspergillus M5-3 A niger M6-1 có th i gian kh n ng sinh t ng h p cellulase t ng đ ng v i ch ng n m s i nghiên c u Nh v y th i gian ni c y có nh h sinh t ng h p cellulase c a ba ch ng đ 3.2.4 nh h ng rõ r t đ n kh n ng c n ch n ng c a ngu n nit đ n kh n ng sinh cellulase phân gi i polysaccarit khó phân gi i nh cellulose t bào vi sinh v t ph i t ng h p m t l ng l n cellulase, th trình sinh t ng h p có th c n t i l ng l n nit , có ch ng có th s d ng t i 60% nit t ng s cho vi c s n xu t enzyme Vì v y, ngồi vi c nghiên c u nh h ng c a ngu n nit lên kh n ng sinh t ng h p cellulase c a ch ng n m m c đ lên men c ng có ý ngh a quan tr ng Ba ch ng n m Penicillium M3, Aspergillus M5-3 A niger M6-1 n ch n đ c nuôi c y môi tr v i ngu n nito đ c s d ng l n l ng Czapek- Dox thích h p (ph n 2.1.2.1) t NaNO3, NaNO2, NH4Cl, (NH4)2SO4 th i gian ngày Sau đó, l y d ch ni c y đem li tâm lo i b sinh kh i Xác đ nh ho t tính cellulase d ch ni c y theo ph đ c trình bày ph n 2.2.2.2 K t qu đ V Ng c Mai 37 ng pháp c trình bày b ng 3.5 hình 3.7 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p B ng 3.5 nh h ng ảSP ảà N i ng c a ngu n nit đ n kh n ng sinh cellulase M5-3 M3 M6-1 (D-d,cm) (D-d,cm) (D-d,cm) NaNO3 1.7 2.1 1.5 NaNO2 0.8 1.6 0.9 NH4Cl 1.4 1.8 1.3 (NH4)2SO4 1.1 2.0 1.2 Ngu n nit Hình 3.7 nh h Qua k t qu ng c a ngu n nit đ n kh n ng sinh cellulase b ng s li u, nh n th y ba ch ng đ u có kh n ng s d ng nhi u ngu n nit NaNO3 ngu n nit t t nh t cho c ba ch ng sinh t ng h p cellulase i u phù h p v i nhi u nghiên c u cho r ng nitrat ngu n nit thích h p đ t ng h p cellulase nhi u n m s i nh Aspergillus, Trichoderma V Ng c Mai 38 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p ng ảSP ảà N i Hình 3.8 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng Penicilium M3 ngu n nit (Nả4)2SO4 NaNO3 Hình 3.9 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng AspergillusM5-3 ngu n nit (Nả4)2SO4 NaNO3 V Ng c Mai 39 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p ng ảSP ảà N i Hình 3.10 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng A niger M6-1 ngu n nit (Nả4)2SO4 NaNO3 3.2.5 nh h ng c a ngu n cellulose t nhiên Ngu n cacbon có nh h ng l n đ n kh n ng t o sinh kh i sinh enzyme c a n m Nó có vai trò nh m t ch t kích thích n m sinh t ng h p cellulase Do đó, tơi ti n hành nghiên c u nh h ng c a ngu n cellulose t nhiên đ n kh n ng sinh cellulase c a ba ch ng n m n ch n Ch ng Penicillium M3, Aspergillus M5-3 A niger M6-1 đ c y môi tr l nl tđ c ni ng Czapek- Dox thích h p (ph n 2.1.2.1) v i ngu n cacbon c s d ng lõi ngô, v tr u, v l c th i gian ngày Sau l y d ch ni c y đem li tâm lo i b sinh kh i Xác đ nh ho t tính cellulase d ch ni b ng ph đ ng pháp đ c trình bày ph n 2.2.2.2 K t qu c trình bày b ng 3.6 hình 3.11 V Ng c Mai 40 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p B ng 3.6 nh h ng ảSP ảà N i ng c a ngu n cellulose t nhiên Ngu n M5-3 M3 M6-1 cellulose (D-d,cm) (D-d,cm) (D-d,cm) Lõi ngô 1.3 1.8 0.7 V tr u 1.9 2.2 1.7 V lc 0.8 2.0 0.9 Hình 3.11 nh h ng c a ngu n cellulose t nhiên đ n kh n ng sinh cellulase V Ng c Mai 41 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p ng ảSP ảà N i Hình 3.12 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng Penicillium M3, AspergillusM5-3 A niger M6-1 v tr u Trong th c t , có nhi u ch ng vi sinh v t có ho t tính phân gi i cellulose hòa tan (CMC) nh ng l i khơng có kh n ng phân gi i ngu n cellulose t nhiên ho c phân gi i r t Nh ng k t qu nghiên c u cho th y, c ba ch ng đ c n ch n đ u có kh n ng phân gi i ngu n c ch t t nhiên đ sinh cellulase V tr u ngu n cellulose t nhiên t t nh t cho s phát tri n sinh t ng h p enzyme ba ch ng n m i u thu n l i cho vi c l a ch n ngu n cacbon r ti n đ lên men thu enzyme ng d ng th c n gia súc K t qu c ng giông nh k t qu nghiên c u tr V Ng c Mai 42 c đây, ch ng K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p ng ảSP ảà N i n m s i sinh t ng h p cellulase m nh nh ng môi tr cacbon t nhiên ( V Ng c Mai ng có ngu n ng Minh H ng,1999; Hoàng Qu c Khánh et al., 2003) 43 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p ng ảSP ảà N i K T LU N VÀ KI N NGH K t lu n 1.1 T 30 ch ng n m m c có kh n ng t ng h p cellulase đ nghi m vi sinh, Khoa Sinh – KTNN, tr ng HSP Hà N i phân l p t m u rác th i, cành g , cây, r m r m c, đ t mùn ch n đ c phòng thí V nh Phúc, n c ch ng M3, M5-3 M6-1 có kh n ng sinh t ng h p cellulase cao nh t 1.2 Chúng ti n hành nghiên c u đ c m sinh lí, sinh hóa đ c tính sinh h c c a ba ch ng M3, M5-3 M6-1 nh lo i đ n chi đ t tên Penicillium M3 ( Samson ctv 1995), Aspergillus M5-3, A niger M6-1 ( Raper & Fennell, 1965) 1.3 Ti n hành nghiên c u m t s y u t môi tr ng nh h ng đ n kh n ng sinh t ng h p cellulase c a hai ch ng M3, M5-3, M6-1 rút u ki n môi tr ng nuôi c y t t nh t cho trình sinh t ng h p cellulase c a hai ch ng là: - pH thích h p pH= - Nhi t đ thích h p 300C - Th i gian nuôi c y: ngày - Ngu n nit t t nh t NaNO3 - Ngu n cellulose t nhiên thích h p v tr u Ki n ngh 2.1 K t qu b c đ u cho th y ba ch ng nghiên c u có nhi u kh n ng s n s n xu t cellulase 2.2 Ti p t c nghiên c u đ c tính lý, hóa enzyme cellulase c a ba ch ng đ c n ch n dùng vi c ng d ng s n xu t cellulase ph ph ph m nông nghi p V Ng c Mai Vi t Nam, đ b sung vào th c n ch n ni Qua giá 44 K32D Sinh - KTNN Tr Khóa lu n t t nghi p tr kinh t c a ph ph c ph m nông nghi p đ thi n kinh t cho ng V Ng c Mai ng ảSP ảà N i c nâng cao, góp ph n c i i nơng dân, đ ng th i làm gi m ô nhi m môi tr 45 ng K32D Sinh - KTNN TÀI LI U THAM KH O A Tài li u ti ng vi t Chu Th Thanh Bình, Nguy n Lân D ng, L ng Th Thùy D ng - Phân l p, n ch n nghiên c u ch ng n m men có kh n ng phân gi i cellulose nh m ng d ng x lý bã th i hoa qu làm th c n ch n nuôi Trung tâm Công ngh Sinh h c, i h c Qu c gia Hà N i 2.T ng Th Chính, Lý Kim B ng, Lê Gia Hy; 1999 - Nghiên c u s n xu t cellulase c a m t s ch ng vi sinh v t u nhi t phân l p t b rác Báo cáo khoa h c, H i ngh Công ngh sinh h c Toàn qu c Nxb Khoa h c K thu t, Hà N i; tr 790 - 797 Ph m Th Trân Châu, Tr n Th Áng; 1992 - Hóa sinh h c Nxb Giáo d c; tr 80 - 81 Nguy n Lân D ng, Nguy n Th Hòa, Nguy n Anh B o; 1991 ki n sinh kh i n m s i Aspergillus hennebergii TH 386 môi tr iu ng x p s n ngơ, t p chí nơng nghi p công nghi p th c ph m Nguy n Lân D ng; 1994 - Nghiên c u kh n ng phân gi i cellulose c a m t s ch ng vi sinh v t phân l p Vi t Nam Báo cáo t i H i ngh Khoa h c y ban Khoa h c k thu t nông nghi p Nguy n Lân D ng; 1976 - Góp ph n nghiên c u c i ti n c c u th c n ch n nuôi l n; Báo cáo t i H i ngh Khoa H c; Tr Nguy n Lân D ng; 1976 - M t s ph ng i h c T ng H p ng pháp nghiên c u vi sinh v t T p 1-2-3; Nxb Khoa h c K thu t Hà N i; tr 325 - 347 Nguy n Thành t; 1999 - C s sinh h c vi sinh v t Nxb Giáo d c Nguy n Lân D ng, Nguy n Th Hòa, Nguy n Anh B o, Lê Chí Cơng; 1993- Nghiên c u kh n ng tích l y sinh kh i c a ch ng Aspergillus hennbergii TH 386 môi tr ng nuôi c y d ch th ch a b t s n s ng, t p chí Sinh h c; tr 3-7 10 Nguy n Thành t, Nguy n Duy Th o, V hành vi sinh v t Nxb Giáo d c ng Tr ng Hào; 1990 - Th c 11 ng Minh H ng; 1999 - Nghiên c u y u t nh h ng đ n kh n ng sinh t ng h p cellulase c a m t s ch ng vi sinh v t đ x lý rác Báo cáo khoa h c, H i ngh Cơng ngh Sinh h c tồn qu c Nxb Khoa h c K thu t; tr 333 - 339 12 Nguy n c L ng, Cao T ng, Nguy n Ánh Tuy t, Lê Th Th y Tiên, T Thu H ng, Hu nh Ng c Anh, Nguy n Thúy H Công ngh enzym, Nxb 13 Th.s ng, Phan Th Huy n, i h c Qu c Gia Tp.H Chí Minh H u Ph ng; c san khoa h c k thu t th c n ch n nuôi, s 3/2004 14 Nguy n Xuân Thành, Lê V n H ng, Ph m V n To n; 2003 - Công ngh vi sinh v t s n xu t nông nghi p x lý môi tr ng, Nxb Nông nghi p 15 TS.Tr n C m Vân; Giáo trình Vi sinh v t h c môi tr ng Nxb ih c Qu c gia Hà N i; tr - 63 B Tài li u ti ng anh 16 Hrmova M, Fincher GB; 2009 - Plant and microbial enzymes involved in the depolymerisation of (1,3)- -D-glucans and related polysaccharides In: Chemistry, Biochemistry and Biology of (1,3)- -D-Glucans and Related Polysaccharides, Academic Press, Elsevier Inc., San Diego, USA, 677 pp, 16 color plates (Bacic T, Fincher GB, Stone BA, eds), pp 119-170 17 Robert A Samson, John I Pitt; 2000 - Integration of modern taxonomic methods for Penicillium and Aspergillus classification, p: 83- 113 18 Raper Fennell ; 1965 - The Genus Aspergillus, The williiams & Wikins Company 428 E Preston street Baltimore, Md 21202 U.S.A, 570pp C Tài li u internet 19 http://d.violet.vn/uploads/resources/562/529259/Enzime/Chuong9.pdf 20 http://www.sinhhocvietnam.com/forum/showthread.php?t=1839 21 http://www.vcn.vnn.vn/PrintPreview.aspx?ID=3596 ... nh Yên (V nh Phúc) đ cs d ng đ phân l p ch ng vi sinh v t phân hu cellulose Ý ngh a khoa h c c a đ tài 4.1 Ý ngh a lý lu n Nghiên c u nh m sâu, tìm hi u hình thái, đ c m sinh lý, sinh hoá ch ng... Hình 1.3 S đ trình th y phân cellulose theo Erickson, 1973……………… 10 Hình 3.1 Kh n ng sinh cellulase c a ch ng đ c nghiên c u……………… 29 Hình 3.2 nh h ng c a pH đ n kh n ng sinh cellulase ………………………... c u - Phân l p, n ch n ch ng n m m c có ho t tính phân gi i cellulose - Nghiên c u nh h ng c a m t s u ki n nuôi c y đ n kh n ng sinh cellulase c a ch ng n m m c đ it c n ch n ng ph m vi nghiên