Mục tiêu nghiên cứu của bài viết này nhằm đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào (TB) máu của sâm Ngọc Linh sinh khối (SNLSK) (liều 375 mg/kg/ngày) trên mô hình chuột nhắt bị gây nhiễm độc chì acetat bán trường diễn (liều 20 mg/kg/ngày) ở ngày 15, 30 và 45 sau gây độc.
TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA SÂM NGỌC LINH SINH KHỐI TRÊN MÁU NGOẠI VI CỦA CHUỘT NHIỄM ĐỘC CHÌ ACETAT BÁN TRƢỜNG DIỄN Nguyễn Văn Bằng*; Nguyễn Hồng Thanh*; Trịnh Thanh Hùng** TĨM TẮT Nhiễm độc chì mạn gây thiếu máu người động vật thực nghiệm Trong nghiên cứu này, đánh giá tác dụng bảo vệ tế bào (TB) máu sâm Ngọc Linh sinh khối (SNLSK) (liều 375 mg/kg/ngày) mô hình chuột nhắt bị gây nhiễm độc chì acetat bán trường diễn (liều 20 mg/kg/ngày) ngày 15, 30 45 sau gây độc Kết cho thấy: SNLSK có tác dụng làm giảm khả nhiễm độc chì rõ rệt nhóm chuột gây nhiễm độc có dùng SNLSK so với nhóm gây độc khơng dùng SNLSK (p < 0,001) SNLSK có tác dụng bảo vệ rõ rệt hồng cầu số lượng (số lượng hồng cầu, hematocrit) chất lượng (hemoglobin) so với nhóm nhiễm độc khơng bảo vệ (p < 0,05) Số lượng bạch cầu nhóm gây độ dùng SNLSK tăng rõ rệt so với nhóm gây độc khơng dùng SNLSK (p < 0,05) * Từ khóa: Nhiễm độc chì acetat; Máu ngoại vi; Sâm Ngọc Linh sinh khối; Chuột THE EFFECT OF NGOCLINH GINSENG MASS ON PERIPHERAL BLOOD OF MICE WITH SUBCHRONIC LEAD TOXICATION SUMMARY The chronic intoxicated lead may cause anaemia on human and experimental animals In this research, we had assessed the effect of protections on peripheral blood cells of Ngoclinh ginseng mass (dose 375 mg/kg/day) on mice model with subchronic lead toxication (dose 20 mg/kg/day) on date of 15, 30, 45 The result showed that: Ngoclinh ginseng mass had effect of decrease of lead toxication on mice in comparison to the mice group without using Ngoclinh ginseng mass (p < 0,001) Additionaly, Ngoclinh ginseng mass had been shown the protection effects on peripheral blood cells under lead toxication of mice (p < 0.05) The number of white blood cell of the intoxicated group and using Ngoclinh ginseng mass increased less than in comparision to the mice group without using Ngoclinh ginseng mass (p < 0.05) * Key words: Lead toxication; Peripheral blood; Ngoclinh ginseng mass; Mice ĐẶT VẤN ĐỀ Chì hợp chất vơ chì (gọi chung chì) sử dụng nhiều lĩnh vực: công nghiệp (chế tạo ắc quy, cáp điện, ngành in, luyện thép, ); quốc phòng: đúc đầu đạn, sản xuất thuốc gợi nổ; đời sống, y học: sản xuất gốm sứ, * Bệnh viện 103 ** Bộ Khoa học Công nghệ Chịu trách nhiệm nội dung khoa học: PGS TS Lê Văn Sơn PGS TS Nguyễn Lĩnh Tồn TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 thuốc vẽ, sơn, thuốc làm săn da, thuốc giảm đau, chống viêm Tuy nhiên, chì có nhiều tác hại với thể người quan tổ chức: máu quan tạo máu, thận tiết niệu, thần kinh, sinh sản [4] Chính vậy, có nhiều nghiên cứu tác hại chì thể người động vật Sâm Ngọc Linh SNLSK số tác giả nghiên cứu chứng minh có tác dụng bổ chung, tăng lực, chống viêm, giảm đau, chống oxy hóa, bảo vệ tế bào gan, hạ cholesterol, hạ glucose máu Ngồi ra, tạo phức với ion kim loại, thu dọn gốc tự [1, 2] Đây loại sâm thứ 20 giới loại sâm quý Việt Nam Trên giới Việt Nam có nhiều nghiên cứu tác hại chì quan tạo máu máu ngoại vi động vật thực nghiệm với liều, thời gian đường gây độc khác nhau, dùng số thuốc bảo vệ plombcyst, tỏi, bột nghệ [3, 6] Có nhiều thuốc điều trị nhiễm độc chì sử dụng, chưa có nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ SNLSK động vật thực nghiệm bị gây độc chì acetat Chúng tơi tiến hành đề tài nhằm: T×m hiÓu biến đổi số số tế bào máu ngoại vi chuột nhắt bị gây độc chì acetat không bảo vệ SNLSK ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng chất liệu nghiên cứu * Đối tượng nghiên cứu: Động vật thực nghiệm: chuột nhắt trắng đực, 120 Trọng lượng từ 20 - 25 gam Chuột nuôi thành lô riêng biệt * Chất liệu thời gian, địa điểm: Dung dịch chì acetat, cao đặc SNLSK sản xuất, thức ăn, nước cất, dụng cụ gây độc Địa điểm ni động vật: Bộ mơn Độc học Phóng xạ, Học viện Quân y Thời gian nuôi động vật thực nghiệm: 15 ngày, 30 ngày, 45 ngày Phƣơng pháp nghiên cứu * Thiết kế nghiên cứu: thực nghiệm, có can thiệp * Phân chia nhóm: - Trước nghiên cứu: chọn ngẫu nhiên 12 chuột (trong 120 chuột), giết lấy máu hốc mắt xét nghiệm chì máu, cơng thức máu Chúng sử dụng kết xét nghiệm 12 chuột để sử dụng chung cho nhóm thời điểm trước nghiên cứu (ngày N0) - Nhóm chứng: 36 chuột, cho uống 0,2 ml nước cất vào buổi sáng Giết chuột lấy máu hốc mắt xét nghiệm thời điểm ngày 15 (N15), 30 (N30), 45 (N45) (mỗi thời điểm 12 chuột) - Nhóm gây độc: 36 chuột, cho uống 0,2 ml chì acetat vào buổi sáng (tương đương 20 mg/kg/ngày) Giết chuột lấy máu xét nghiệm nhóm chứng - Nhóm gây độc dùng SNLSK: 36 chuột, sáng uống 0,1 ml SNLSK (tương đương liều 375 mg/kg/ngày), sau cho chuột uống 0,2 ml chì acetat (20 mg/kg/ngày) Giết chuột lấy máu xét nghiệm nhóm chứng * Lấy máu: lÊy 1,5 ml máu hốc mắt chuột, cho vào có chứa sẵn chống đơng heparin Bảo quản 40C * Xét nghiệm nồng độ chì máu: thực máy quang phổ hấp thụ nguyên tử kỹ thuật lò Graphit Viện Y học Lao động & Vệ sinh Mơi trường, Bộ Y tế TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 * Xét nghiệm công thức máu ngoại vi: thực máy phân tích huyết học tự động 19 thơng số pocH-100i (Nhật Bản), Khoa AM7, Bệnh viện 103 Giá trị bình thường thực theo thang chuẩn hóa máy xét nghiệm * Xử lý số liệu: theo phương pháp thống kê y học, sử dụng excel, Epi.info 2005 (version 3.3.2), EpiCalc 2000 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Nồng độ chì máu nhóm nghiên cứu Khi nghiên cứu nhiễm độc chì người động vật, thiếu máu triệu chứng hay gặp Chì gây giảm số lượng hồng cầu, Hb hematocrit [4] Bảng 1: Nồng độ chì máu thời điểm nghiên cứu NỒNG ĐỘ CHÌ MÁU (µg/dl) NHĨM No (n = 12) (a) N15 (n = 12) (b) N30 (n = 12) (c) N45 (n = 12) (d) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) p pba > 0,05 Nhóm chứng (n = 36) (1) 2,99 ± 0,82 2,92 ± 0,63 2,91 ± 0,83 2,96 ± 0,82 pca > 0,05 pda > 0,05 pba < 0,001 Nhóm gây độc (n = 36) (2) Nhóm gây độc + SNLSK 2,99 ± 0,82 21,01 ± 1,77 23,34 ± 2,17 24,97 ± 1,59 pca < 0,001 pda < 0,001 2,99 ± 0,82 12,43 ± 1,56 11,93 ± 1,58 11,38 ± 1,64 (n = 36) (3) pba < 0,001 pca < 0,001 pda < 0,001 p p21 < 0,001 p21 < 0,001 p21 < 0,001 p32 < 0,001 p32 < 0,001 p32 < 0,001 Nồng độ chì máu trung bình nhóm gây độc tăng có ý nghĩa so với thời điểm trước gây nhiễm độc so với nhóm chứng thời điểm (p < 0,001) Nhóm gây độc + SNLSK, nồng độ chì máu tăng so với trước gây nhiễm độc, mức tăng so với nhóm gây độc khơng dùng SNLSK thời điểm (p < 0,001) Trong nghiên cứu, nồng độ chì máu nhóm gây độc chì acetat tăng cao từ ngày 15 tăng dần ngày 30 45 Nồng độ chì máu nhóm gây độc dùng SNLSK gi¶m rõ rệt so với nhóm gây độc, SNLSK có khả tạo phức với ion kim loại, có chì thải khỏi thể, làm cho nồng độ chì máu giảm Nơng Thanh Sơn [3] gây độc chì acetat thỏ, thấy nồng độ chì máu tăng so với nhóm chứng (từ 45,7 ± 1,7 µg/dl lên 74,0 ± 3,4 µg/dl ngày 30) giảm xuống 52,8 ± 8,8 µg/dl nhóm dùng plombcyst Trong nghiên cứu này, sâm Ngọc Linh có tác dụng làm giảm nồng độ chì máu TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 Kết xét nghiệm công thức máu ngoại vi Bảng 2: Biến đổi số lượng hồng cầu thời điểm nghiên cứu SỐ LƯỢNG HỒNG CẦU (T/l) NHĨM Nhóm (n = 36) (1) chứng Nhóm gây (n = 36) (2) No N15 N30 N45 (n = 12) a) (n = 12) (b) (n = 12) (c) (n = 12) (d) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) 7,81 ± 0,34 7,85 ± 0,31 7,79 ± 0,39 7,84 ± 0,32 p pba > 0,05 pca > 0,05 pda > 0,05 độc Nhóm gây độc + SNLSK (n = 36) (3) 7,81 ± 0,34 6,92 ± 0,42 6,88 ± 0,25 6,86 ± 0,30 pba < 0,001 pca < 0,001 pda < 0,001 7,81 ± 0,34 7,28 ± 0,38 7,31 ± 0,35 7,30 ± 0,29 pba < 0,01 pca < 0,01 pda < 0,01 p p21 < 0,001 p21 < 0,001 p21 < 0,001 p32 < 0,05 p32 < 0,05 p32 < 0,05 Số lượng hồng cầu trung bình nhóm gây độc giảm rõ rệt so với nhóm chứng ngày 15, 30 45 (p < 0,001) Số lượng hồng cầu nhóm gây độc + SNLSK giảm so với nhóm gây độc không điều trị thời điểm (p < 0,05), giảm đáng kể so với trước gây nhiễm độc (p < 0,01) Bảng 3: Biến đổi hàm lượng hemoglobin (Hb) thời điểm nghiên cứu NHÓM Nhóm chứng (n = 36) (1) No (n = 12) (a) HEMOGLOBIN (g/l) N15 N30 (n = 12) (b) (n = 12) (c) N45 (n = 12) (d) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) 90,5 ± 4,2 89,6 ± 4,7 90,3 ± 5,3 91,7 ± 5,1 p pba > 0,05 pca > 0,05 pda > 0,05 Nhóm gây độc (n = 36) (2) 90,5 ± 4,2 80,4 ± 3,9 77,7 ± 3,8 75,6 ± 4,5 pba < 0,001 pca < 0,001 pda < 0,001 Nhóm gây độc + SNLSK (n = 36) (3) 90,5 ± 4,2 84,6 ± 3,7 85,0 ± 4,4 86,8 ± 4,9 pba < 0,01 pca < 0,01 pda < 0,01 p p21 < 0,001 p21 < 0,001 p21 < 0,001 p32 < 0,05 p32 < 0,05 p32 < 0,05 TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 Hemoglobin trung bình nhóm gây độc giảm dần nồng độ chì máu tăng, từ 90,5 ± 4,2 g/l xuống 75,6 ± 4,5 g/l (p < 0,05) nhóm gây độc dùng SNLSK, Hb giảm so với nhóm gây độc (p < 0,05) Nguyên nhân gây giảm số lượng hồng cầu, hàm lượng Hb, hematocrit chì ức chế enzym trình tổng hợp Hb, tác động đến việc sử dụng sắt trình tổng hợp chuỗi globin hồng cầu, làm giảm thẩm thấu màng hồng cầu [4] Bảng 4: Biến đổi hematocrit (%) thời điểm nghiên cứu HEMATOCRIT (%) NHÓM No N15 N30 N45 (n = 12) (a) (n = 12) (b) (n = 12) (c) (n = 12) (d) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) 38,3 ± 5,6 39,2 ± 5,1 37,9 ± 5,4 40,0 ± 4,4 Nhóm chứng (n = 36) (1) p pba > 0,05 pca > 0,05 pda > 0,05 Nhóm gây độc (n = 36) (2) pba > 0,05 38,3 ± 5,6 34,6 ± 4,6 33,8 ± 4,3 32,1 ± 5,0 pca < 0,05 pda < 0,05 Nhóm gây độc + SNLSK (n = 36) (3) pba > 0,05 38,3 ± 5,6 37,7 ± 3,9 37,2 ± 4,1 36,6 ± 4,7 pca > 0,05 pda > 0,05 p p21 < 0,05 p21 < 0,05 p21 < 0,05 p32 > 0,05 p32 < 0,05 p32 < 0,05 Hematocrit trung bình nhóm gây độc thời điểm ngày 30, 45 giảm có ý nghĩa so với nhóm chứng thời điểm (p < 0,05) Hematocrit trung bình nhóm gây độc + SNLSK giảm so với nhóm gây độc thời điểm ngày 30, 45 (p < 0,05) Theo Samuel O B CS (2010) [8], gây độc chuột với liều 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg Pb2+/kg thấy nồng độ chì máu tăng từ 0,12 ± 0,01 µg/ml lên 0,67 ± 0,02 µg/ml, số lượng hồng cầu trung bình giảm từ 7,23 ± 0,57 T/l xuống 6,80 ± 0,57 T/l, Hb từ 16,12 ± 4,53 g/dl xuống 7,52 ± 2,21 g/dl, đồng thời có giảm MCH, MCHC giảm dần nồng độ chì máu tăng Theo Caylak E CS [5], gây độc chì acetat chuột cho thấy giảm số lượng hồng cầu hàm lượng Hb Nông Thanh Sơn [3] gây độc chì acetat nồng độ thấp, dài ngày chuột nhắt thấy: hàm lượng Hb giảm 10 - 20%, số lượng hồng cầu giảm rõ rệt so với trước đánh độc có tương quan nghịch hàm lượng Hb với nồng độ chì máu Kết tương tự nghiên cứu SNLSK có tác dụng làm giảm nồng độ chì máu, mà theo số tác giả có tương quan nghịch nồng độ chì máu với số lượng hồng cầu hàm lượng Hb, nên nhóm gây độc dùng SNLSK, số lượng hồng cầu, hàm lượng Hb, hematocrit giảm so với nhóm gây độc TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 Bảng 5: Biến đổi số lượng bạch cầu thời điểm nghiên cứu No (n = 12) (a) NHĨM Nhóm (n = 36) (1) chứng Nhóm gây độc (n = 36) (2) Nhóm gây độc + SNLSK (n = 36) (3) SỐ LƯỢNG BẠCH CẦU (g/l) N15 N30 (n = 12) (b) (n = 12) (c) N45 (n = 12) (d) p ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) 13,28 ± 0,51 12,94 ± 0,45 13,35 ± 0,49 13,21 ± 0,52 pba > 0,05 pca > 0,05 pda > 0,05 13,28 ± 0,51 13,98 ± 0,56 14,60 ± 0,72 14,76 ± 0,68 pba < 0,01 pca < 0,001 pda < 0,001 13,28 ± 0,51 13,85 ± 0,44 13,98 ± 0,61 14,04 ± 0,57 pba < 0,01 pca < 0,01 pda< 0,01 p21 < 0,01 p21 < 0,01 p21 < 0,01 p32 > 0,05 p32 < 0,05 p32 < 0,05 p Số lượng bạch cầu trung bình nhóm gây độc tăng so với thời điểm trước gây nhiễm độc so với nhóm chứng thời điểm (p < 0,01 < 0,001) Nhóm gây độc + SNLSK tăng so với nhóm thời điểm ngày 30, 45 (p < 0,05) Số lượng bạch cầu nhóm gây độc cao rõ rệt so với nhóm chứng, tăng từ ngày 15 tăng dần theo thời gian từ 13,98 ± 0,56 g/l lên 14,76 ± 0,68 g/l ngày thứ 45 Theo Samuel O B CS (2010) [8], gây độc chuột với liều 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg Pb2+/kg thấy số lượng bạch cầu tăng từ 13,51 ± 0,60 g/l lên 15,94 ± 0,61 g/l Theo tác giả, chì coi tác nhân viêm, vào thể gây phản ứng kích thích tăng số lượng bạch cầu động vật thực nghiệm Kết tương tự với nghiên cứu Samuel O B: SNLSK làm giảm nồng độ chì máu, theo chúng tơi làm giảm tác nhân kiểu viêm dẫn đến số lượng bạch cầu nhóm gây độc dùng SNLSK tăng so với nhóm gây độc Bảng 6: Biến đổi số lượng tiểu cầu thời điểm nghiên cứu SỐ LƯỢNG TIỂU CẦU (g/l) NHĨM Nhóm đối chứng (n = 36) (1) Nhóm gây độc (n = 36) (2) p No (n = 12) (a) N15 (n = 12) (b) N30 (n = 12) (c) N45 (n = 12) (d) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) ( X ± SD) 725 ± 48 738 ± 81 715 ± 55 722 ± 46 pba > 0,05 pca > 0,05 pda > 0,05 725 ± 48 741 ± 59 750 ± 46 749 ± 54 pba > 0,05 pca > 0,05 pda > 0,05 TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 (1) (2) (3) (4) (5) (6) Nhóm gây độc + SNLSK (n = 36) (3) 725 ± 48 749 ± 61 726 ± 62 728 ± 57 pba > 0,05 pca > 0,05 pda > 0,05 p21 > 0,05 p21 > 0,05 p21 > 0,05 p32 > 0,05 p32 > 0,05 p32 > 0,05 p Số lượng tiểu cầu trung bình nhóm thay đổi khơng đáng kể thời điểm nghiên cứu KẾT LUẬN Gây độc chì acetat (liều 20 mg/kg) bán trường diễn 120 chuột nhắt đánh giá tác dụng bảo vệ SNLSK (liều 375 mg/kg), chúng tơi nhận thấy: - Nồng độ chì máu trung bình nhóm gây độc tăng rõ rệt từ ngày 15 so với nhóm chứng (p < 0,001) Số lượng hồng cầu, huyết sắc tố nhóm gây độc giảm rõ rệt so với nhóm chứng (p < 0,001), hematocrit nhóm gây độc giảm rõ rệt so với nhóm chứng (p < 0,001) - Sâm Ngọc Linh sinh khối có tác dụng làm giảm rõ rệt nồng độ chì máu nhóm gây độc khơng dùng SNLSK (p < 0,001) Số lượng hồng cầu, hemoglobin trung bình nhóm gây độc dùng SNLSK giảm so với nhóm gây độc ngày 15, 30 45 (p < 0,05) Hematocrit giảm ngày thứ 30, 45 (p < 0,05) Số lượng bạch cầu nhóm gây độc dùng SNLSK tăng so với nhóm gây độc ngày 30 45 (p < 0,05) TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thị Thu Hương Tóm tắt nghiên cứu gần tác dụng dược lý sâm Việt Nam Tạp chí Khoa học Công nghệ Môi trường 2002, 1, tr.20-23 Nguyễn Văn Long Nghiên cứu quy trình tạo sinh khối tế bào đánh giá số tác dụng sinh học SNLSK Luận án Tiến sỹ Y học Học viện Quân y Hà Nội 2011 Nông Thanh Sơn Nghiên cứu ảnh hưởng acetat chì liều thấp, dùng dài ngày tác dụng phòng chống số chế phẩm sản xuất nước động vật thực nghiệm Luận án Phó Tiến sỹ Y dược Học viện Quân y Hà Nội 1996 Lê Trung Bệnh nhiễm độc nghề nghiệp Nhà xuất Y học Hà Nội 2002, tr.92-123 Caylak E, Aytekin M, Halifeoglu I Antioxidant effects of methionine, δ-lipoic acid, N-acetylcysteine and homocysteine on leadinduced oxidative stress to erythrocytes in rats Experimental and Toxicologic Pathology 2008, 60 (4 - 5), pp.289- 294 Dewanjee S, Sahu R, Karmakar S, et al Toxic effects of lead exposure in Wistar rats: Involvement of oxidative stress and the beneficial role of edible jute (Corchorus olitorius) leaves Food and Chemical Toxicology 2013, pp 270-277 Gidlow D A Lead toxicity Society of Occupational Medicine 2004, Vol 54, No 2, pp.76-81 Samuel O B, Solomon A E, Clara T F, et al Investigation on subchronic lead intoxication on blood indices of male rats Global Veterinaria 2010, (5), pp.532- 535 TẠP CHÍ Y – DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ - 2013 Ngày nhận bài: 28/2/2013 Ngày giao phản biện: 19/3/2013 Ngày giao thảo in: 26/4/2013 ... 2] Đây loại sâm thứ 20 giới loại sâm quý Vi t Nam Trên giới Vi t Nam có nhiều nghiên cứu tác hại chì quan tạo máu máu ngoại vi động vật thực nghiệm với liều, thời gian đường gây độc khác nhau,... nhiễm độc chì sử dụng, chưa có nghiên cứu đánh giá tác dụng bảo vệ SNLSK động vật thực nghiệm bị gây độc chì acetat Chúng tơi tiến hành đề tài nhằm: T×m hiĨu biến đổi số số tế bào máu ngoại vi. .. điểm nghiên cứu KẾT LUẬN Gây độc chì acetat (liều 20 mg/kg) bán trường diễn 120 chuột nhắt đánh giá tác dụng bảo vệ SNLSK (liều 375 mg/kg), nhận thấy: - Nồng độ chì máu trung bình nhóm gây độc