Nghiên cứu tác dụng của chế phẩm “Giáng chỉ tiêu khát linh” điều trị rối loạn lipid máu trên động vật đái tháo đường týp 2 thực nghiệm

Header Page of 161 B GIO DC V O TO B Y T TRNG I HC Y H NI V VIT HNG NGHIÊN CứU TáC DụNG CủA chế phẩm "GIáNG CHỉ TIÊU KHáT LINH" ĐIềU TRị RốI LOạN LIPID MáU TRÊN động vật ĐáI THáO ĐƯờNG týp THựC NGHIệM Chuyờn ngnh : Y hc c truyn Mó s : 62720201 TểM TT LUN N TIN S Y HC H NI - 2013 Footer Page of 161 Header Page of 161 CễNG TRèNH C HON THNH TI TRNG I HC Y H NI NGI HNG DN KHOA HC: PGS.TS Nguyn Th H PGS TS Th Phng Phn bin 1: Phn bin 2: Phn bin 3: Lun ỏn s c bo v trc Hi ng chm lun ỏn cp Trng hp ti Trng i hc Y H Ni Vo hi gi ngy thỏng nm Cú th tỡm hiu lun ỏn ti 1- Th vin i hc Y H Ni 2- Th vin Quc gia 3- Th vin thụng tin Y hc Trung ng Footer Page of 161 Header Page of 161 T VN Tớnh cp thit ca ti Hi chng chuyn hoỏ l mt chui cỏc yu t nguy c tim mch v thay i chuyn hoỏ liờn quan vi tỡnh trng tng trng lng m ca c th, ú RLLPM (RLLPM), ri lon chuyn hoỏ (RLCH) carbohydrat, tng huyt ỏp (THA) v bộo phỡ c coi l b t cht ngi; ú l nhng yu t nguy c hng u gõy va x ng mch (VXM), bnh tim mch v t qu bnh nhõn T lõu nm, tỡnh trng tng glucose mỏu, RLLPM (tng LDL-C, tng triglycerid, gim HDL-C) kộo di dn n nhiu nhng RLCH an xen l nguyờn nhõn chớnh gõy VXM v li nhng hu qu xu i vi h tim mch gõy nờn nhiu cỏc bin chng mn Do vy, cỏc thuc y hc hin i (YHH) v y hc c truyn (YHCT) iu tr T nhm kim soỏt glucose mỏu, iu chnh RLLPM cú th gim c nguy c tin trin ca cỏc bin chng v gim nguy c bnh mch vnh, hn ch tỏc dng ph ca thuc ngy cng tr nờn cp thit v luụn l quan tõm hng u ca cỏc nh khoa hc Hin nay, nhiu nh khoa hc Vit Nam cng nh trờn th gii ang cú xu hng tỡm kim v ng dng cỏc thuc ngun gc t nhiờn cú tỏc dng iu tr T v hn ch ri lon lipid bi ngun dc liu t nhiờn rt phong phỳ, d s dng v ớt tỏc dng ph, giỏ thnh r v cú th dựng thi gian lõu di Theo lý lun ca y hc c truyn (YHCT), T cú nhiu im tng ng vi chng tiờu khỏt v RLLPM tng ng vi chng m thp Trờn lõm sng thỡ RLLPM bnh nhõn T cú nhiu im tng ng vi chng tiờu khỏt th cú m thp Cho n cú nhiu v thuc, bi thuc ó c nghiờn cu ng dng iu tr chng tiờu khỏt v chng m thp Giỏng ch tiờu khỏt linh c bo ch da trờn c s bi thuc nghim phng Giỏng ch thang ó c s dng trờn lõm sng iu tr chng tiờu khỏt cú m thp (RLLPM bnh nhõn T) Do vy, cú c s khoa hc chc chn khng nh hiu qu cng nh tớnh an ton ca bi thuc Giỏng ch tiờu khỏt linh, ti: Nghiờn cu tỏc dng ca ch phm Giỏng ch tiờu khỏt linh iu tr RLLPM trờn ng vt T týp thc nghim c thc hin nhm cỏc mc tiờu sau: Mc tiờu ca lun ỏn Nghiờn cu c tớnh cp v bỏn trng din ca viờn nang Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn ng vt thc nghim Nghiờn cu tỏc dng ca viờn nang Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn mt s ch s lipid, glucose v h thng chng oxy hoỏ mỏu ng vt T týp thc nghim Footer Page of 161 Header Page of 161 NHNG ểNG GểP MI CA LUN N Gõy T týp bng ch n v tiờm STZ trờn chut cng trng Nghiờn cu c tớnh: Vi liu ung ti a chut cú th chu ng c l 53,57g cm/1kg thõn trng, gp 24,8 liu dựng trờn ngi khụng cú c tớnh cp v cha xỏc nh c LD50 ca GCTKL trờn chut nht trng GCTKL liu 0,54g/kg/ngy v 1,62 g/kg/ngy, ung liờn tc tun khụng gõy c tớnh bỏn trng din trờn chc nng to mỏu, chc nng gan, thn v hỡnh thỏi gan v thn th Giỏng ch tiờu khỏt linh vi liu ung 840 v 1260mg/kg TT cú tỏc dng: - Tỏc dng d phũng v iu tr RLLPM chut cng trng gõy RLLPM bng ch n - Tỏc dng iu tr RLLPM v h glucose mỏu chut cng trng gõy T týp sau 30 ngy v hiu qu rừ rt hn sau 60 ngy ung thuc - Ci thin tỡnh trng chng oxy hoỏ mỏu ca chut cng trng gõy ri lon lipid mỏu v T týp B CC CA LUN N: t trang; Chng 1: Tng quan 39 trang; Chng 2: i tng v phng phỏp nghiờn cu 15 trang; Chng 3: Kt qu nghiờn cu 40 trang; Chng 4: Bn lun 34 trang; Kt lun trang; Kin ngh v xut trang Lun ỏn cú 33 bng, 35 hỡnh, biu v s , 134 ti liu tham kho (Ting Vit 55, ting Anh 61, ting Trung Quc 18) Chng 1: TNG QUAN 1.1 Ri lon chuyn hoỏ lipid, hot ng gc t v va x ng mch T 1.1.1 T T l mt hi chng ri lon chuyn húa vi s tng glucose mỏu thiu tuyt i hoc tng i insulin S thiu ht insulin nh hng ti chuyn húa carbohydrat, protein v lipid; gõy cỏc ri lon hng nh ni mụi ca nc v in gii Tỡnh trng ri lon ny kộo di dn n nhng bin chng bnh nhõn T ti nhiu cỏc c quan c bit l thn, mt, thn kinh v mch mỏu 1.1.2 Ri lon chuyn húa lipid T 1.1.2.1 Lipid v lipoprotein mỏu Thnh phn lipid chớnh mỏu l acid bộo t do, triglycerid (TG), cholesterol ton phn (TC) gm cholesterol t (FC) v cholesterol este (CE), cỏc phospholipid (PL) 1.1.2.2 Chuyn húa lipoprotein Footer Page of 161 Header Page of 161 LP c chuyn húa theo hai ng ngoi sinh v ni sinh vi s tham gia ca cỏc enzyme v protein chuyn úng vai trũ sinh lý quan trng chuyn hoỏ lipoprotein l LPL (lipoprotein lipase), HL (hepatic lipase), LCAT (lecithin cholesterol acyl transferase) v EL (endothelial lipase) Chylomicron: TG, TC, PL t lipid thc n c hp thu qua niờm mc rut non to thnh; VLDL: Giu TG, c to thnh gan 90% v rut non 10%, vo mỏu n cỏc mụ ngoi vi, cú vai trũ chuyn TG ni sinh; IDL: Tr li gan, gn vo cỏc receptor c hiu (ApoB, E) mng t bo v chu s tỏc ng ca lipase gan; LDL: L cht chuyn chớnh cholesterol mỏu, ch yu di dng CE, n cỏc mụ ngoi vi; HDL: c tng hp ti gan(HDL mi sinh) hoc t s thoỏi giỏng ca VLDL v CM mỏu HDL cú vai trũ chuyn cholesterol t cỏc mụ ngoi vi tr v gan, l yu t bo v chng VXM 1.1.2.3 Ri lon chuyn húa lipoprotein Nm 1965, Fredrickson cn c vo k thut in di, siờu ly tõm cỏc thnh phn lipid huyt v phõn thnh týp da trờn nhng thay i ca thnh phn LP RLLPM cú th tiờn phỏt di truyn hoc th phỏt sau cỏc bnh khỏc nh bộo phỡ, nghin ru, nhng ri lon ni tit (T, suy giỏp trng, ), hi chng thn h, suy thn mn, sau dựng kộo di mt s thuc (cỏc loi glucocorticoid, thuc li tiu,) Ch n v s ri lon chuyn hoỏ lipoprotein: Ngi ta thy cú mi tng quan thun gia mc tiờu th cht bộo bóo hũa vi nng cholesterol mỏu 1.1.2.4 Ri lon chuyn húa lipid T Cỏc c im chung nht ca ri lon chuyn húa lipid bnh T l TG mỏu tng, HDL-C gim v xut hin cỏc phn t LDL nng v nh hn (t trng tng v kớch thc nh hn) Ngi ta ó quan sỏt thy s tng mc glycosyl húa bi phn ng khụng enzym vi tt c cỏc loi LP tun hon, iu ny cú th cng lm tng kh nng gõy VXM * Ri lon chuyn húa lipid T týp - Tng TG huyt tng: bt thng ph bin nht bnh nhõn T týp l tng TG huyt tng tng VLDL Gim HDL-C huyt tng thng gp phi hp vi tng TG mỏu * Ri lon chuyn húa lipid T týp nh hng ca T týp trờn chuyn húa lipid v lipoprotein phc hn nhiu vỡ chu tỏc ng ca nhiu yu t nh tỡnh trng khỏng insulin, bộo phỡ, phng phỏp iu tr, mc kim soỏt glucose mỏu, s dng thuc iu tr cỏc ri lon phi hp v iu tr cỏc bin chng ca bnh T Ri lon chuyn húa lipid c trng T týp l tng TG, CT v gim HDL-C, v xut hin cỏc phn t LDL nng v nh (t trng tng v kớch thc nh hn) huyt tng Tng TG mỏu tng bi tit VLDL v s gim hot Footer Page of 161 Header Page of 161 ca enzym LPL, c trng bi s ng cỏc phn t tn d sau thu phõn VLDL, l yu t gõy VXM 1.1.3 Stress oxy hoỏ bnh T 1.1.3.1 Cỏc dng oxy hot ng c th v quỏ trỡnh peroxi húa lipid Cỏc dng oxy hot ng bao gm gc t cú oxy luụn c sn sinh cỏc hot ng sinh lý ca c th sng Anion superoxid (O2 ) c to nờn quỏ trỡnh hụ hp t bo l gc t u tiờn, t ú sinh hng lot cỏc dng oxy hot ng khỏc nh hydroperoxid (H2O2), gc hydroxyl (HO), oxy n bi (1O2), gc peroxyl (LOO), gc alkyl (L), gc alkoxyl (LO) 1O2, H2O2, HO l nhng cht c i vi t bo vỡ chỳng s tn cụng cỏc acid bộo khụng bóo hũa cú lipid mng t bo gõy nờn nhng bin i mng t bo v bin i ca nhng phõn t DNA, gõy t bin gen 1O2, HO cú hot tớnh hoỏ hc rt mnh, chỳng l th phm chớnh gõy peroxi húa lipid mng, mt gc HO s oxy húa hng trm phõn t acid bộo khụng bóo hũa nhiu ni ụi theo c ch dõy truyn trc b dp tt 1.1.3.2 H thng chng oxy húa ca c th H thng chng oxy hoỏ ca c th cú vai trũ ngn nga, chng li v loi b tỏc dng c hi ca cỏc gc t v cỏc dng oxy hot ng khỏc * H thng chng oxy húa cú bn cht enzym : Loi ny tn ti ch yu t bo; hot cỏc enzym chng oxy húa rt thp huyt tng, dch sinh hc khỏc nh dch nóo ty, bao hot dch Superoxid dismutase (SOD - EC.1.15.1.1): Enzym ny cú tt c cỏc t bo cú chuyn húa oxy, xỳc tỏc s phõn hy anion superoxid Catalase: L enzym chng oxy húa c bit u tiờn, xỳc tỏc phn ng phõn hy hydroperoxid vụ c nng cao Glutathion peroxidase (GPx EC.1.11.1.9): Glutathion peroxidase (GPx) xỳc tỏc phn ng loi b cỏc peroxid hu c v H2O2 cú nng thp GSH l glutathion dng kh, GSSG l glutathion dng oxy húa, ROOH l peroxid hu c hoc vụ c * H thng chng oxy húa cú bn cht khụng enzym Gm cú nhúm chớnh l nhúm cỏc polyphenol, nhúm cỏc thiol v nhúm cỏc phi t ca st hay ng Chỳng hoc cú sn c th hoc c a t ngoi vo theo dng thc n, nc ung 1.1.3.3 Stress oxy húa bnh T Cỏc bnh nhõn T thng c cho l chu tỏc ng ca cỏc stress oxy húa Khi nng glucose t bo cao cú th gõy c bng cỏc c ch nh tng chuyn hoỏ glucose theo ng polyol, glucosamin, to thnh cỏc sn phm tn AGE, hin tng glycosyl hoỏ khụng enzym, to thnh v hot hoỏ protein kinase C * Tng chuyn hoỏ glucose theo ng Polyol Footer Page of 161 Header Page of 161 Chuyn hoỏ glucose theo ng polyol gúp phn gõy glycosyl hoỏ protein khụng enzym Khi nng glucose t bo quỏ cao, aldose reductase xỳc tỏc phn ng chuyn glucose thnh polyalcol sorbitol bng cỏch kh nhúm aldehyd ca glucose v s dng cofactor NADPH quỏ mc lm cn kit NADPH ca t bo, lm gim lng GSH * Hin tng Gluco-oxy hoỏ (gluco-oxidation) v s to thnh gc t v cỏc sn phm tn (AGE) Trong quỏ trỡnh glycosyl hoỏ, s oxy hoỏ ca 3-deoxyglucoson thnh glucose dng dicarbonyl sn sinh cỏc gc t do: anion superoxid ( O ), hydroxy peroxid (H2O2) v cỏc gc t hydroxyl (HO) Cỏc gc t ny s m u mt dõy chuyn sn sinh cỏc gc t nhiu gp bi Hin tng glycosyl hoỏ tng nng glucose cao Cỏc sn phm glycosyl hoỏ cú th b oxy hoỏ to cỏc sn phm tn glycosyl (AGE) tớch t lõu ngy gõy tn thng mụ 1.1.4 T v va x ng mch * Th no l va x ng mch VXM l bnh ca ng mch ln v va, th hin bng hai loi tn thng c bn v c trng l mng va x rt giu cholesterol v mụ x c hỡnh thnh lp ni mc v mt phn lp trung mc; lm hp lũng ng mch, cn tr mỏu n nuụi dng cỏc t chc Cú nhiu yu t nguy c gõy nờn VXM nh RLCH lipid, THA, bộo phỡ, T,trong ú ri lon chuyn húa lipid úng vai trũ ch yu * T v va x ng mch i vi bnh nhõn T týp 2, c ch VXM rt phc Ngoi cỏc yu t nờu trờn cũn cú s tham gia v thỳc y quỏ trỡnh VXM nh THA, nng cao ca glucose mỏu, s khỏng insulin, gim nhy cm insulin, cỏc sn phm tn ca quỏ trỡnh glycosyl húa, 1.2 T V RI LON CHUYN HO LIPID THEO Y HC C TRUYN 1.2.1 T theo quan nim ca Y hc c truyn Y hc c truyn khụng cú bnh danh T; nhng i chiu vi cỏc chng trng lõm sng, cn bnh ny c quy vo phm vi chng tiờu khỏt Chng tiờu khỏt ca YHCT l chng rt nhiu nguyờn nhõn gõy ra, trờn lõm sng ly cỏc triu chng chớnh nh ung nhiu, n nhiu, tiu tin nhiu, gy sỳt, mt mi hoc nc tiu cú v ngt gi l chng Tam a nht thiu(Ni kinh t vn) Tiờu cú ba hm ý, mt l ch thc n nc ung tiờu nhanh nờn mau v ung nhiu, hai l ch tiờu hao tõn dch nhiu lm cho tõn dch mt nuụi dng, õm khụng thng dng, nhit ni sinh, ba l ch hỡnh th yu gy, c nhc teo nho, sỳt cõn 1.2.1.2 C ch bnh sinh Theo Hi Thng Lón ễng: "Chng tiờu khỏt phn nhiu ho lm Footer Page of 161 Header Page of 161 tiờu hao chõn õm, nm cht dch khụ kit m sinh ra" ú tng ph, t, thn l ch yu C ch bnh sinh chng tiờu khỏt cú th túm tt s sau: M THC BT TệC TN THNG T V TIấN THIấN BT TệC NG TNG H NHC TèNH CH THT IU KH UT HểA HA LAO LC QU M DCH TIấU HAO M H NI NHIT TO NHIT THNG PH TN DCH MT PHN B A M PH V TO NHIT TRUNG TIấU NHIT MNH TIấU CC A THC T V KH H THP NHIT TINH VI BT SINH, T CHI THT DNG GY MếN CAN THN M H TNG CHA A THT IU, C NIU NHIP Vễ NNG 1.2.2 Quan nim ca YHCT v hi chng RLLPM 1.2.2.1 Chng m thp, nguyờn nhõn, c ch bnh sinh m thp l sn phm bnh lý, m l cht c, thp khụng c nh m, m thp sau sinh s gõy nhng chng bnh mi Ngun gc sinh m thp s hoỏ bt thng ca tõn dch ngng t bin hoỏ m thnh Bỡnh thng s hoỏ thy thp c th c iu ho bi tng t, ph, thn Bi vy m thp cú liờn quan n tng t, ph, thn Chng thuc t l chng quan trng nht c ch sinh chng m tr m thp t dng mt chc nng hoỏ, lm chuyn hoỏ tõn dch b ngng tr li thnh thp, thp thng sinh m Cú loi m: m hu hỡnh v m vụ hỡnh m hu hỡnh l cht m sinh t ph, thn Hi chng RLLPM theo YHCT l m vụ hỡnh gõy bnh Biu hin trờn lõm sng rt a dng m thp thỡ ngi bộo phỡ, i li nng n 1.2.2.3 S tng ng gia chng m thp v hi chng RLLPM Cn c trờn cỏc biu hin lõm sng, ngi ta thy gia hi chng RLLPM v chng m thp cú mt s tng ng khỏ sõu sc v bnh nguyờn, bnh sinh v nguyờn tc tr liu Chng m thp phỏt sinh nhng nguyờn nhõn ch yu sau: + Yu t th cht tiờn thiờn quyt nh, thng l tiờn thiờn bt tỳc + Yu t n ung: n quỏ nhiu cỏc cht cao lng, thc n ngt bộo lm tn thng t v, khin hoỏ tht iu, m thp ni sinh m gõy bnh + Yu t ớt ng th lc: nm nhiu hi khớ, ngi nhiu hi c nhc Thng khớ dn n khớ h, thng nhc dn n t h, t khớ h suy m gõy bnh + Yu t tinh thn (tht tỡnh) lo ngh hi t, gin d hi can, can mc vng khc t th lm t v ri lon, h yu, cụng nng hoỏ suy gim, m trc tr kinh mch m sinh bnh õy chớnh l yu t stress ca YHH Footer Page of 161 Header Page of 161 1.3 IU TR T V RLLPM THEO Y HC HIN I V Y HC C TRUYN 1.3.1 Y hc hin i iu tr T v RLLPM bnh nhõn T cỏc RLCH an xen phc ú RLLPM va l yu t nguy c, va l h qu bi tỡnh trng thiu insulin v tng glucose mỏu bờn cnh ú l cỏc yu t nguy c khỏc, vy chin lc iu tr cn thit phi song song mc tiờu l: (1) Kim soỏt glucose mỏu (2) iu tr RLLPM 1.3.2 Y hc c truyn iu tr T v RLLPM 1.3.2.1 iu tr chng tiờu khỏt Cn c vo c ch phỏt bnh trờn c bn õm h sinh ni nhit, ni nhit l ngn l tiờu, õm h l gc l bn, iu tr bng thuc da vo nguyờn tc chớnh l "B h" thc cht l dng õm, b cỏi h ca thn thy, t: cỏi thc dng nhit ca tõm ha, tr cỏi tỏo nhit ca trng v Vy chng tiờu khỏt cn b õm h, tr nhit, ớch khớ, sinh tõn, hot huyt, húa " 1.3.2.2 iu tr chng m thp: - Nguyờn tc tr liu: (1)Vỡ bnh cú c im "bn h tiờu thc" cho nờn iu tr phi chỳ ý c tiờu, c bn (2) Phi chỳ trng phộp cha m vỡ m thp cú vai trũ quan trng c ch bnh sinh (3) Tr m phi chỳ ý nguyờn tc "tr m tiờn tr khớ, khớ thun m t tiờu" Gm phng phỏp, bnh nh dựng hoỏ m, bnh nng dựng tiờu m, m mt ch khụng phi dựng phộp iu m Vỡ m hi chng RLLPM l vụ hỡnh, lu hnh v ng huyt mch nờn dựng phỏp hoỏ m iu tr nguyờn nhõn sinh m, lm cho m t ht ch khụng dựng n phộp tiờu v iu m - Cỏc phng phỏp iu tr c bn: cú phng phỏp Hot huyt hoỏ ;T õm dng huyt; Tr m hoỏ trc; Th can bỡnh can; Li thu thm thp; Thanh nhit gii c; ễn kinh thụng dng; B ớch nguyờn khớ: 1.3.2.3 Th bnh kt hp gia chng tiờu khỏt trờn th trng m thp Trong th lõm sng ca chng tiờu khỏt, th cú nhng biu hin trờn lõm sng cng nh nguyờn nhõn v c ch bnh sinh theo YHCT tng ng vi chng tiờu khỏt trờn ngi bnh cú th trng m thp ú l: Th t v khớ h v th thp nhit trung tr 1.4.1 Mụ hỡnh gõy T thc nghim týp gõy mụ hỡnh T týp ng vt thc nghim, ngi ta s dựng cỏc hoỏ cht gõy phỏ hu t bo tuyn tu Hai thuc thng c s dng l alloxan v streptozotocin (STZ) 1.4.2 Mụ hỡnh gõy T týp - Bng chn lc t nhiờn v lai to ging nh cỏc chng: chut cng GK (Gotokakizaki), chut cng ZDF (Zucker Diabectic Fatty), chut nht Footer Page of 161 Header Page 10 of 161 chng KK-Ay, chut nht Db/DbGn õy, phng phỏp chut c nuụi bng ch n giu lipid gõy bộo phỡ, RLLPM sau ú tiờm STZ vi cỏc liu t 50-100mg/kg th trng mt liu nht 1.4.3 Streptozotocin v cỏc mụ hỡnh gõy T trờn ng vt thc nghim STZ cú tờn hoỏ hc l 2deoxy-2 (3methyl-3nitrosoureido)-D-glucopyranose, c phõn lp ln u nm 1960 t Streptozotocin achromogenes Dựng STZ nhiu liu thp thỡ s tng glucose mỏu xut hin t t v cú s thõm nhim t bo lympho o tu (viờm o tu) Dựng STZ nhiu liu thp dng nh cú c ch bnh sinh ging T týp ngi Trong nhng nm gn õy, STZ c cỏc nh khoa hc trờn th gii v Vit nam dựng gõy T trờn thc nghim Nm 2000, Reed M.J v cng s ó to mụ hỡnh ng vt T týp chut cng trng bng cỏch tiờm STZ cho chut c nuụi dng bng ch n giu cht bộo gõy bộo phỡ 1.5 Xut x bi thuc Bi thuc nghiờn cu xut phỏt t bi thuc nghim phng "Giỏng ch thang" c trớch t cun Thiờn gia diu phng thnh phn gm: an sõm 8g, hong tinh 4g, h th ụ 8g, trch t 8g, sn tra 6g tr chng m tr v gia thờm v: sinh hong k 8g, linh chi 8g, thiờn hoa phn 8g, hong liờn 4, ngu tt 6g, tr chng tiờu khỏt (T) v ớch trớ nhõn 4g ụn b tỡ v Bi thuc cụng b kiờm t, ly b lm chớnh gm: B khớ (hong k), B huyt (H Th ễ), B õm, sinh tõn (Hong tinh, Thiờn hoa phn); T phỏp gm: hot huyt (ngu tt, an sõm), nhit hoỏ thp (hong liờn) Cỏc v thuc h tr gm: Sn tra tỏc dng tiờu tớch tr, hoỏ m, thp tr, gii c; ch trớ nhõn tỏc dng iu ho ớch v, ụn m t v, gim bt tớnh lnh ca cỏc v thuc khỏc CHNG 2: I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 2.1 Cht liu v i tng nghiờn cu 2.1.1 Thuc nghiờn cu: Cm Giỏng ch tiờu khỏt linh Liu dựng trờn ngi 50kg 30 60 ngy: Liu 1: 18 viờn 500mg (9g cm)/ngy (tng ng thang thuc sc ung/ngy) Liu 2: 12 viờn 500mg (6g cm)/ngy Liu lng thuc ung cho chut nghiờn cu thc nghim: h s chuyn i tng ng gia ngi v chut cng l 1:7 thỡ liu ung 1260mg/1kg thõn trng/ngy v liu ung 840mg cm /1kg thõn trng/ngy 2.1.2 i tng nghiờn cu 2.1.2.1 c tớnh cp v bỏn trng din: - Chut nht trng chng Swiss, hai ging, kho mnh, nng 18-22g; Th chng Newzealand White, lụng trng, ging, kho mnh, 1,7 - 2,2kg - Hoỏ cht v mỏy múc: Kit nh lng cỏc enzym v cht chuyn hoỏ mỏu: ALT, AST, bilirubin ton phn, albumin, cholesterol v Dung dch xột nghim mỏu ABX Minidil LMG ca hóng ABX - Footer Page 10 of 161 11 Header Page 13 of 161 2.2.3.5 ỏnh giỏ tỏc dng iu tr ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn cỏc ch s glucose, lipid mỏu, trng thỏi chng oxy hoỏ mỏu v s thay i mụ bnh hc chut cng trng gõy T týp Cỏc lụ 6, 7, chut c n ch n giu lipid (40% lipid) sut quỏ trỡnh thớ nghim Ngy th 31, chut c gõy T bng cỏch tiờm STZ mt liu nht vo mng bng vi liu 50mg/kg Sau 48-72 gi ly mỏu uụi chut nh lng nng glucose, nng glucose 11mmol/L c xem l chut T Chut gõy T, hng ngy trc n 30 phỳt chut c ung: Lụ (n=14) ung dung dch NaCl 0,9% liu 1ml/100gam Lụ (n=14) v Lụ (n=14) ung GCTKL liu 840mg/kg v 1260mg/kg/ngy Cỏc thi im ngy th 31, 61, 91 ca nghiờn cu (Sau 30, 60 ngy ung GCTKL), cỏc lụ chut git chut mi lụ, ly mỏu tim xỏc nh nng TG, TC, LDL-C, HDL-C, TAS huyt v hot SOD hng cu v GPx mỏu ton phn Ngy th 91 ca nghiờn cu, mi lụ chn ngu nhiờn chut xỏc nh mụ bnh hc MC 2.3 Cỏc k thut c s dng nghiờn cu Tin hnh ti Khoa Hoỏ sinh BV Vit NamThu in, Uụng - K thut nh lng glucose, TC, TG, HDL-C, LDL-C, TAS huyt tng, hot SOD hng cu, GPx mỏu ton phn v THb trờn mỏy phõn tớch húa sinh t ng Olympus-AU 400 (Nht Bn) bng thuc th ca chớnh hóng - K thut mụ bnh hc: K thut vi th c thc hin ti B mụn Gii phu bnh Trng HY H Ni 2.4 X lý s liu * Nghiờn cu c tớnh cp v bỏn trng din Kt qu c x lý thng kờ theo phng phỏp t test Student v test trc sau S liu c biu din di dng: X SD S khỏc bit cú ý ngha p < 0,05 * Nghiờn cu tỏc dng ca thuc Kt qu nghiờn cu c x lý bng thut toỏn thng kờ Y hc, biu din di dng giỏ tr trung bỡnh, lnh chun v giỏ tr trung v So sỏnh s khỏc bit gia nhúm s dng thut toỏn wilcoxon rank-sum test (Mann-Whitney) CHNG 3: KT QU NGHIấN CU 3.1 Kt qu nghiờn cu c tớnh cp v bỏn trng din ca giỏng ch tiờu khỏt linh 3.1.1 Kt qu nghiờn cu c tớnh cp trờn chut nht trng Giỏng ch tiờu khỏt linh 53,57 gam/kg th trng chut, gp 24,8 ln liu tng ng dựng trờn ngi (tớnh chut nht trng h s ngoi suy liu l 12) nhng thuc th khụng cú biu hin c tớnh cp; chut khụng cú hin tng gỡ c bit: chut n ung, ng bỡnh thng, chut khụng b khú th, khụng b i a, khụng cú chut no cht Cha xỏc nh c LD50 ca Footer Page 13 of 161 12 Header Page 14 of 161 Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn chut nht trng bng ng ung theo phng phỏp Litchfield Wilcoxon 3.1.2 Kt qu nghiờn cu c tớnh bỏn trng din trờn th 3.1.2.2 ỏnh giỏ chc nng to mỏu Bng 3.2 nh hng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh n s lng hng cu, hm lng huyt sc t, hematocrit, th tớch trung bỡnh hng cu Lụ chut (n=10) Lụ chng Lụ tr Lụ tr Thi gian S lng hng cu (T/l) p(1,2) > 0,05 5,18 0,44 5,14 0,42 5,27 0,45 Trc ung thuc > 0,05 5,29 0,58 5,20 0,38 5,38 0,46 Sau tun ung thuc > 0,05 5,19 0,31 5,25 0,34 5,30 0,46 Sau tun ung thuc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trc - sau) Hm lng huyt sc t (g/l) p(1,2) > 0,05 97,5 7,9 97,6 5,9 97,1 6,9 Trc ung thuc > 0,05 98,3 10,8 97,9 8,0 97,4 6,1 Sau tun ung thuc > 0,05 98,9 6,6 98,5 5,6 98,3 4,8 Sau tun ung thuc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trc - sau) Hematocrit (L/L) p(1,2) > 0,05 31,17 2,53 30,90 2,59 31,41 3,01 Trc ung thuc > 0,05 30,97 3,65 31,84 1,84 32,32 2,26 Sau tun ung thuc > 0,05 31,38 2,79 32,13 3,56 32,45 2,91 Sau tun ung thuc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trc - sau) Th tớch trung bỡnh hng cu (fL) p(1,2) > 0,05 62,40 2,59 62,30 2,58 61,80 1,48 Trc ung thuc > 0,05 62,50 1,84 62,80 1,55 61,90 1,60 Sau tun ung thuc > 0,05 62,90 0,88 62,30 2,50 62,00 2,11 Sau tun ung thuc p (trc - sau) > 0,05 > 0,05 > 0,05 3.1.2.3 ỏnh giỏ chc nng gan Bng 3.9 nh hng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh n hot AST, ALT mỏu th Hot AST (U/L) Lụ (n=10) Lụ chng Lụ tr Lụ tr Thi gian Hot AST (U/L) p(1,2) > 0,05 34,11 7,94 34,92 5,82 34,36 5,04 Trc ung thuc > 0,05 34,55 5,50 35,42 5,36 34,97 8,55 Sau tun ung thuc > 0,05 35,70 8,41 36,20 5,35 37,00 4,90 Sau tun ung thuc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trc - sau) Thi gian Hot ALT (U/L) p(1,2) > 0,05 52,07 9,23 53,62 6,62 52,90 4,58 Trc ung thuc > 0,05 53,71 8,62 53,70 5,89 53,61 3,58 Sau tun ung thuc > 0,05 53,50 4,79 54,60 4,03 54,70 5,08 Sau tun ung thuc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trc - sau) Footer Page 14 of 161 13 Header Page 15 of 161 3.1.2.4 ỏnh giỏ chc nng thn Bng 3.14 nh hng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh n nng creatinin mỏu th Creatinin (àmol/l) Thi gian p(1,2) Lụ chng Lụ tr Lụ tr (n=10) (n=10) (n=10) > 0,05 10,3 1,2 10,3 0,9 10,6 0,7 Trc ung thuc > 0,05 10,6 0,5 10,5 0,5 10,4 0,7 Sau tun ung thuc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p(trc - sau) > 0,05 10,4 0,5 10,5 0,5 10,5 0,5 Sau tun ung thuc > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trc - sau) 3.2 Tỏc dng ca giỏng ch tiờu khỏt linh trờn mc glucose mỏu chut cng trng 3.2.1 Tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn mc glucose mỏu chut cng trng bỡnh thng Bng 3.15 Tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn mc glucose mỏu chut cng trng bỡnh thng Lụ (n = 7) Lụ C1 Lụ 1A Lụ 1B Trc ung thuc 5,71 1,03 5,87 0,73 5,76 0,96 Nng glucose mỏu (mmol/l) ti cỏc thi im Sau gi Sau gi Sau gi p p p GLU GLU GLU 5,630,97 > 0,05 5,530,97 > 0,05 5,500,98 > 0,05 5,670,71 > 0,05 5,590,69 > 0,05 5,480,72 > 0,05 5,49 0,89 > 0,05 5,360,90 > 0,05 5,210,87 > 0,05 Lụ C1 ung NaCl 0,9%, lụ 1A ung GCTKL 840mg, lụ 1B ung GCTKL 1260mg/kg 3.2.2 Tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn mc glucose mỏu chut cng trng gõy T týp Nng glucose (mmol/l) Lụ C2: T + NaCl 0,9% Lụ 2A: T + GCTKL 840mg 30 25 Lụ 2B: T + GCTKL 1260mg 20 15 10 Thi im 0h 2h 4h 6h 8h 10h 12h 14h Biu 3.1 Nng glucose mỏu chut cng trng T týp ung Giỏng ch tiờu khỏt linh liu 840mg/kg v 1260mg Footer Page 15 of 161 14 Header Page 16 of 161 3.3 nh hng ca ch n giu cht bộo trờn cỏc ch s lipid v trng thỏi chng oxy hoỏ mỏu chut cng trng 3.3.1 nh hng ch n giu cht bộo lờn cõn nng chut cng trng Bng 3.17 nh hng ch n giu cht bộo lờn cõn nng chut cng trng Lụ (n=7) Trc thc nghim 124,3 7,9 125,7 12,7 > 0,05 Chng Lụ p Cõn nng (g) Sau 30 ngy Sau 60 ngy (D31) (D61) 175,8 16,2 224,3 9,8 181,4 15,7 241,4 15,7 > 0,05 > 0,05 Sau 90 ngy (D91) 275,7 19,9 291,4 27,9 > 0,05 3.3.2 nh hng ch n giu cht bộo trờn cỏc ch s lipid mỏu chut cng trng Bng 3.18 nh hng ch n giu cht bộo trờn cỏc ch s lipid mỏu chut cng trng Thi im Cỏc ch s lipid (mmol/L) TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X SD X SD X SD X SD Chng 0,810,26 0,7 1,410,19 1,4 0,820,13 0,85 0,360,11 0,33 1,490,20 1,5 1,960,3 1,9 0,740,26 0,72 0,580,26 0,53 Lụ p < 0,01 < 0,01 > 0,05 > 0,05 1,0,05 1,4 0,880,09 0,88 0,330,06 0,33 Chng 0,860,15 0,8 2,370,29 2,5 2,390,26 2,4 0,710,15 0,65 0,910,27 0,90 Lụ p < 0,01 < 0,01 < 0,05 < 0,01 Chng 0,940,25 0,9 1,310,20 1,4 0,810,15 0,83 0,260,07 0,27 2,730,37 2,7 3,570,56 3,5 0,700,14 0,65 1,660,62 1,85 Lụ p < 0,01 < 0,001 > 0,05 < 0,01 Lụ chng: n ch n 12% l lipid, lụ 1: n ch n 40% l lipid (TV: Trung v) Lụ n=7 Sau 30 ngy -D31 Sau 60 ngy D61 Sau 90 ngy D91 TG HDL/L DL X 2,44 1,42 < 0,05 2,77 0,87 < 0,01 3,10 0,50 < 0,01 3.3.3 nh hng ch n giu cht bộo trờn hot SOD hng cu, GPx mỏu ton phn v TAS huyt tng chut cng trng Bng 3.19 nh hng ca ch n giu cht bộo trờn nng TAS huyt tng, hot SOD, GPx chut cng trng cú ch n giu lipid Thi im Lụ (n =7) TAS (mmol/l) SOD (U/gHb) TV X SD X SD Chng 1,47 1,43 0,08 2239 177 Sau 30 ngy Lụ 1,49 0,13 1,48 2290 497 (D31) p > 0,05 Chng 1,51 1,54 0,11 2298 181 Sau 60 ngy Lụ 1,37 0,09 1,35 2105 151 (D61) p < 0,05 < 0,05 Sau 90 Chng 1,59 0,30 1,51 2239 135 ngy Lụ 1,38 0,10 1,36 2126 164 (D91) > 0,05 p Footer Page 16 of 161 TV GPx (U/gHb) THb (g/L) X SD 752 74 774 153 TV X SD 2177 2352 745 799 155 13 157 31 2241 2110 745 68 620 41 755 639 154 11 153 15 759 621 158 147 < 0,05 2309 2133 765 50 621 < 0,05 15 Header Page 17 of 161 Lụ chng: n ch n 12% l lipid, lụ 1: n ch n 40% l lipid (TV: Trung v) 3.4 Tỏc dng d phũng ca giỏng ch tiờu khỏt linh trờn cỏc ch s lipid v trng thỏi chng oxy hoỏ mỏu chut cng trng 3.4.2 Tỏc dng d phũng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn cỏc ch s lipid mỏu chut cng trng vi ch n giu lipid Bng 3.21 Tỏc dng d phũng RLLPM ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn cỏc ch s lipid mỏu chut cng trng sau 30 ngy nghiờn cu Lụ n=7 Chng Lụ Lụ Lụ p (1,2) p (1,3) Cỏc ch s lipid (mmol/L) sau 30 ngy nghiờn cu (D31) HDL /LDL TG TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X 0,81 0,26 0,7 1,41 0,19 1,4 0,82 0,13 0,85 0,36 0,11 0,33 2,44 1,49 0,20 1,5 1,96 0,29 1,9 0,74 0,26 0,72 0,58 0,26 0,53 1,42 0,42 0,08 0,4 1,81 0,30 1,8 1,06 0,15 1,09 0,54 0,11 0,53 1,99 0,80 0,38 0,7 1,29 0,17 1,3 0,78 0,04 0,79 0,59 0,15 1,35 1,41 < 0,01 < 0,05 > 0,05 < 0,01 < 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,01 > 0,05 < 0,01 Bng 3.22 Tỏc dng d phũng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn cỏc ch s lipid mỏu chut cng trng sau 60 ngy nghiờn cu Lụ n =7 TG Chng 0,86 0,15 Lụ 2,37 0,29 0,51 0,14 Lụ 21,5% 0,66 0,27 Lụ 27,8% < 0,01 p(1,2) < 0,01 p(1,3) Cỏc ch s lipid (mmol/L) sau 60 ngy nghiờn cu (D61) TC HDL-C LDL-C TV TV TV 1, 0,05 0,8 1,4 0,88 0,09 0,88 0,33 0,06 2,5 2,39 0,26 2,4 0,71 0,15 0,65 0,91 0,27 0,5 1,69 0,30 1,7 1,17 0,23 1,08 0,32 0,12 70,7% 164,8% 35,2% 0,30 0,14 0,5 1,81 0,40 1,9 1,32 0,24 1, 75,7% 185,9% 33,0% < 0,01 < 0,05 < 0,01 < 0,01 < 0,01 < 0,01 TV 0,33 0,9 0,29 HDL/ LDL X 2,77 0,87 3,94 0,25 4,91 < 0,01 < 0,01 3.4.3 Tỏc dng d phũng ca GCTKL trờn nng TAS huyt tng, hot SOD hng cu v GPx mỏu ton phn chut cng trng ch n giu lipid Bng 3.23 Tỏc dng d phũng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn ch s TAS huyt tng, hot SOD v GPx chut cng trng cú ch n giu lipid Thi im TAS (mmol/l) SOD (U/gHb) GPx (U/gHb) THb (g/L) Nhúm (n =7) TV TV TV Chng 1,47 2177 752 74 745 155 13 1,43 0,08 2239 177 Lụ 1,48 2352 774 153 799 157 30 1,49 0,13 2290 497 Sau 30 Lụ 1,43 2259 803 89 802 1,47 0,15 2260 249 142 ngy Lụ 1,44 2157 724 1,40 0,11 2137 217 713 78 140 17 (D31) p (1,2) > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (1,3) > 0,05 > 0,05 > 0,05 Chng 1,51 2241 745 68 755 154 11 1,54 0,11 2298 181 Lụ 1,35 2110 620 41 639 153 15 1,37 0,09 2105 151 Sau 60 Lụ 1,55 2260 741 71 747 1,56 0,95 2212 325 147 ngy Lụ 1,51 2216 724 38 716 153 15 1,53 0,08 2184 308 (D61) p (1,2) < 0,01 > 0,05 < 0,01 p (1,3) < 0,01 > 0,05 < 0,01 Lụ ung NaCl 0,9%; lụ ung GCTKL liu 840 mg; lụ ung GCTKL liu 1260 mg (TV: Trung v) Footer Page 17 of 161 16 Header Page 18 of 161 3.5 Tỏc dng iu tr ca giỏng ch tiờu khỏt linh trờn cỏc ch s lipid v trng thỏi chng oxy hoỏ mỏu chut cng trng 3.5.2 Tỏc dng iu tr RLLPM ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn cỏc ch s lipid huyt tng ca chut cng trng vi ch n giu lipid Bng 3.25 Tỏc dng iu tr RLLPM ca Giỏng ch tiờu khỏt linh chut cng trng sau 30 ngy iu tr liu 840mg v 1260mg Lụ n=7 Lụ Lụ Lụ p (1,4) p (1,5) Cỏc ch s lipid (mmol/L) sau 30 ngy iu tr (D61) HDL/ LDL TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X 2,37 0,29 2,5 2,39 0,26 2,4 0,71 0,15 0,65 0,91 0,27 0,90 0,87 2,07 0,50 0,8 1,76 0,48 1,9 0,96 0,27 0,96 0,86 0,61 0,41 1,58 0,90 0,05 0,9 1,42 0,16 1,5 0,79 0,19 0,79 0,68 0,15 0.32 1,97 TG < 0,05 < 0,01 < 0,05 < 0,01 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 Lụ ung NaCl 0,9%, lụ : ung GCTKL liu 840 mg; lụ 5: ung GCTKL liu 1260 mg Bng 3.26 Tỏc dng iu tr RLLPM ca Giỏng ch tiờu khỏt linh chut cng trng sau 60 ngy iu tr liu 840mg v 1260mg Cỏc ch s lipid (mmol/L) sau 60 ngy iu tr (D91) HDL/L Lụ DL TG TC HDL-C LDL-C n=7 TV TV TV TV X Lụ 2,72 0,37 2,7 3,57 0,55 3,5 0,70 0,14 0,65 1,66 0,62 1,85 0,50 0,90 0,39 1,1 1,86 0,69 1,9 1,14 0,46 1,16 0,38 0,14 0,36 2,93 Lụ 33,1% 52,1% 162,9% 22,9% 1,09 0,38 1,1 1,79 0,19 1,8 1,28 0,08 1,29 0,27 0,05 0,26 4,78 Lụ 40,1% 50,1% 182,9% 16,3% < 0,001 < 0,01 < 0,001 > 0,05 < 0,001 p (1,4) < 0,001 < 0,01 < 0,01 < 0,001 < 0,001 p (1,5) < 0,01 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (4,5) Lụ ung NaCl 0,9%, lụ : ung GCTKL liu 840 m; lụ 5: ung GCTKL liu 1260 mg Biu 3.3: S thay i nng lipid huyt tng chut cng trng gõy RLLPM sau 60 ngy iu tr GCTKL liu 840mg v 1260mg Footer Page 18 of 161 17 Header Page 19 of 161 3.5.3 Tỏc dng ca iu tr ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn nng TAS huyt tng, hot SOD hng cu v GPx mỏu ton phn chut cng trng RLLPM Bng 3.27 Tỏc dng iu tr ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn nng TAS huyt tng, hot SOD v GPx chut cng trng cú ch n giu lipid Thi im Nhúm (n =7) 1,51 Lụ 1,59 0,30 1,38 0,10 Lụ 1,41 0,73 Chng Sau 60 ngy iu tr (D91) TAS (mmol/l) TV SOD (U/gHb) TV 2309 1,36 2239 135 2126 164 1,39 2220 124 2180 2133 GPx (U/gHb) THb(g/L) TV X 765 50 759 158 621 147 621 754 85 726 154 13 714 100 723 155 Lụ 1,43 0,12 1,37 2168 360 2217 > 0,05 > 0,05 < 0,01 p (1,4) > 0,05 > 0,05 < 0,05 p (1,5) Lụ ung NaCl 0,9%, lụ ung GCTKL liu 840 mg; lụ ung GCTKL liu 1260 mg 3.6 Tỏc dng ca giỏng ch tiờu khỏt linh trờn cỏc ch s glucose, lipid v trng thỏi chng oxy hoỏ mỏu chut cng trng gõy T týp 3.6.3 Tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn cỏc ch s glucose v lipid mỏu chut cng trng gõy T týp Bng 3.30 Tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn nng glucose mỏu chut cng trng T sau 30 v 60 ngy iu tr Lụ n=7 Nng Glucose (mmol/L) Sau 30 ngy iu tr (D61) Sau 60 ngy iu tr (D91) TV TV % so vi lụ 5,63 1,15 5,57 0,96 5,6 5,4 16,35 1,43 17,70 1,64 16,5 17,4 13,20 2,16 14,13 0.90 13,5 14,7 79,8% 12,51 1,76 12,01 2,45 12,8 12,8 67,8% Lụ Lụ Lụ Lụ < 0,01 < 0,01 p(6,7) < 0,01 < 0,01 p(6,8) Lụ v ung NaCl 0,9%, lụ ung GCTKL liu 840mg; lụ ung GCTKL liu 1260mg Bng 3.31 Tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn nng lipid mỏu chut cng trng T sau 30 ngy iu tr (D61) Lụ n=7 TG Lụ Lụ Lụ Lụ p(6,7) p(6,8) p(7,8) 2,370,29 2,520,37 1,190,25 1,020,24 < 0,001 < 0,001 > 0,05 Cỏc ch s lipid sau 30 ngy iu tr (mmol/L) HDL/L DL TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X 2,5 2,380,26 2,4 0,710,15 0,65 0,910,27 0,91 0,87 2,720, 2,1 7,321,08 7,5 0,470,08 0,5 2,88 0,18 1,3 4,520,38 4,7 0,760,11 0,79 2,330,22 2,43 0,33 1,0 3,730,56 3,8 0,850,13 0,83 1,980,26 1,97 0,43 < 0,01 < 0,01 > 0,05 < 0,01 < 0,001 < 0,01 < 0,05 < 0,01 < 0,05 > 0,05 < 0,05 < 0,05 Footer Page 19 of 161 18 Header Page 20 of 161 Lụ v ung NaCl 0,9%, lụ ung GCTKL liu 840mg; lụ ung GCTKL liu 1260mg Bng 3.32 Tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn nng lipid mỏu chut cng trng T sau 60 ngy iu tr (D91) Lụ n=7 Lụ Lụ Lụ Lụ p(6,7) p(6,8) p(7,8) TG X SD 2,720,37 2,670,22 1,060,17 39,7% 0,960,15 36,0% < 0,001 < 0,001 >0,05 Cỏc ch s lipid sau 60 ngy iu tr (mmol/L) HDL/L DL TC HDL-C LDL-C TV TV TV TV X SD X SD X SD X 2,7 3,570,55 3,5 0,700,14 0,65 1,660,62 1,85 0,50 2,7 8,900,92 8,8 0,590,18 0,57 2,840,24 2,81 0,21 1,0 4,700,41 4,8 0,870,16 0,89 2,420,18 2,45 0,36 52,8% 147,5% 85,2% 0,9 3,570,61 3,4 0,920,11 0,96 1,800,34 1,89 0,52 40,1% 155,9% 63,4% < 0,01 < 0,001 < 0,05 < 0,01 < 0,01 < 0,05 < 0,01 < 0,01 >0,05 < 0,01 < 0,001 < 0,05 Lụ v ung NaCl 0,9%, lụ ung GCTKL liu 840mg; lụ ung GCTKL liu 1260mg Biu 3.5: S thay i nng lipid huyt tng chut cng trng gõy T týp iu tr GCTKL liu 840mg v 1260mg 3.6.4 Tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn hot SOD hng cu, GPx mỏu v TAS huyt tng chut cng trng T týp Bng 3.33 Tỏc dng iu tr ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn nng TAS huyt tng v hot SOD, GPx chut cng trng T týp Thi im Sau 60 ngy iu tr (D91) Nhúm (n =7) Chng Lụ Lụ Lụ p (6,7) p (6,8) TAS (mmol/l) TV 1,59 0,30 1,51 1,36 0,13 1,39 1,42 0,17 1,32 1,46 0,10 1,47 >0,05 >0,05 SOD (U/gHb) TV 2239 135 2309 2066 185 2249 2221 142 2006 2234 165 2192 >0,05 >0,05 GPx (U/gHb) THb (g/L) TV 765 50 759 158 613 56 618 159 17 715 45 710 163 14 709 47 712 166 15 < 0,01 < 0,01 Lụ ung NaCl 0,9%, lụ ung GCTKL liu 840mg; lụ ung GCTKL liu 1260mg 3.7 nh hng ca giỏng ch tiờu khỏt linh trờn s thay i mụ bnh hc ca chut cng trng 3.7.1 Hỡnh thỏi vi th ng mch ch ca chut cng trng thc nghim Hỡnh 3.15: Hỡnh thỏi vi th MC chut lụ RLLP gõy T sau 90 ngy nghiờn cu (HE x Footer Page 20 of 161 Hỡnh 3.17: Hỡnh thỏi vi th MC chut lụ T sau 60 ngy iu tr GCTKL 1260mg/kg 19 Header Page 21 of 161 400) (sng phng ri rỏc t bo ni mụ) (HE x 400) (khụng thy tn thng) CHNG 4: BN LUN 4.1 c tớnh cp v bỏn trng din ca giỏng ch tiờu khỏt linh 4.1.1 c tớnh cp ca GCTKL trờn chut nht trng GCTKL cho chut nht trng ung ti nng ti a v th tớch ti a m chut cú th chu ng c l 53,57 g cm/kg TT chut v khụng cú chut khụng cht, khụng thy cú biu hin c tớnh cp, vỡ vy khụng th xỏc nh c liu cht 50% (LD50) Nu so vi liu dựng trờn ngi l thang/ngy tng ng vi g cm/ngy thỡ vi liu ti a trờn ó gp 24,8 ln liu dựng trờn ngi (tớnh chut nht trng h s ngoi suy liu l 12) 4.1.2 c tớnh bỏn trng din * nh hng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh vi trng lng c th th: * nh hng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh n h thng to mỏu, chc nng gan chc nng thn ca th: Th ung thuc liờn tc tun vi cỏc liu 0,54g /kg /ngy v liu 1,62g /kg/ngy (tng ng vi liu cho ngi v gp ln liu thng dựng cho ngi) cng khụng gõy thay i cú ý ngha v tỡnh trng chung, chc phn to mỏu v v cỏc chc phn húa sinh ca gan, thn 4.2 nh hng ca ch n giu lipid trờn cỏc ch s lipid mỏu v trng thỏi chng oxy hoỏ mỏu chut cng trng Sau 30 ngy thc nghim, so vi lụ chng nng TG tng gp 1,84, TC tng 1,39 ln v t l HDL-C/LDL-C gim ỏng k (p0,05 4.6.3 Lý gii v tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn trng thỏi chng oxy hoỏ mỏu Mt s cỏc nghiờn cu vi Linh chi (Ganoderma lucidum), Hong k (Radix astagali), Hong liờn (Rhizoma Coptidis) cho thy tỏc dng chng oxy hoỏ ca cỏc v thuc Hot cht tanshinone IIA c nh lng Giỏng ch tiờu khỏt linh cho thy cú th cú tỏc dng chng oxy hoỏ Tanshinone IIA cng ó c nghiờn cu cú tỏc dng thỳc y hot ng chng viờm, chng oxy húa, v chng c t bo, v cng nh to quỏ trỡnh apoptosis 4.7 Bn v tỏc dng ca giỏng ch tiờu khỏt linh v mt s bi thuc y hc c truyn iu tr T cú RLLPM T týp thng i kốm vi RLLPM, vũng son bnh lý ny gõy nhng bin chng v din bin bnh tt cng phc iu tr RLLPM cn song song vi vic kim soỏt glucose mỏu Giỏng ch tiờu khỏt linh gm cú nhiu v cú tỏc dng va h glucose mỏu, va cú tỏc dng iu chnh lipid mỏu v chng oxy hoỏ nh an sõm, Linh chi, Hong k, Ngu tt Nhiu nghiờn cu tỏc dng kộp ca cỏc v ny cng ó c phõn tớch cỏc phn bn lun trờn v kim nghim phõn tớch v thnh phn cú cm Giỏng ch tiờu khỏt linh (ph lc 3) cng lý gii hiu qu iu chnh lipid mỏu ng thi h glucose mỏu ca Giỏng ch tiờu khỏt linh iu tr T cú RLLPM Mt s bi thuc ó c chng minh tỏc dng thụng qua cỏc nghiờn cu sau õy cng cho chỳng ta thy rừ hn u th ca s phi ng cỏc v thuc theo bin chng lun tr ca y hc c truyn iu tr T cú RLLPM nh cỏc nghiờn cu v "Bi thuc Lc v a hong hon", bi thuc " B dng hon ng thang"cho thy tỏc dng ci thin tỡnh trng bnh nhõn tiu ng, tng cng kh nng khỏng, gim lipid mỏu 4.8 Bn v liu dựng ca giỏng ch tiờu khỏt linh Trong nghiờn cu ny chn hai liu dựng trờn chut cng thc nghim: Footer Page 25 of 161 24 Header Page 26 of 161 Liu 1: 1260mg /kg thõn trng/ngy tng ng vi liu cho mt ngi nng 50kg dựng trờn lõm sng l thang/ngy Liu 2: 840mg/kg thõn trng/ngy (bng 2/3 liu 1) Chn liu nghiờn cu nhm mc ớch ỏnh giỏ tỏc dng ca thuc trờn thc nghim cú th gim liu thuc ó chit xut so vi liu thuc thang hay khụng? Kt qu cho thy dự l tỏc dng d phũng hay iu tr RLLPM trờn chut cng trng thỡ cng ch cn dựng liu 840mg/kgTT/ngy l cú hiu qu tt c tỏc dng d phũng v tỏc dng iu tr thc nghim trờn chut cng trng KT LUN c tớnh cp v bỏn trng din ca Giỏng ch tiờu khỏt linh + GCTKL vi liu ung ti a m chut cú th chu ng c l 53,57g cm/1kg thõn trng chut, gp 24,8 liu dựng trờn ngi khụng cú c tớnh cp v cha xỏc nh c LD50 ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn chut nht trng bng ng ung theo phng phỏp Litchfield Wilcoxon GCTKL liu 0,54g/kg/ngy v 1,62g/kg/ngy, ung liờn tc tun khụng gõy c tớnh bỏn trng din trờn chc nng to mỏu, chc nng gan, thn v hỡnh thỏi gan v thn th Tỏc dng ca Giỏng ch tiờu khỏt linh trờn chut cng trng gõy ri lon lipid mỏu v ỏi thỏo ng týp thc nghim: 2.1 GCTKL ng ung cú tỏc dng d phũng v iu tr ri lon lipid mỏu chut cng trng gõy ri lon lipid mỏu sau 30 ngy v hiu qu rừ rt hn sau 60 ngy: + GCTKL d phũng liu 840mg/kg v 1260 mg/kg/ngy sau 60 ngy cú tỏc dng gim cỏc ch s lipid mỏu cũn 21,5 v 27,8% (TG), 70,7% v 75,7% (TC), 35,2 v 33% (LDL-C), tng 164,8% v 185,9% (HDL-C) + GCTKL iu tr liu 840mg v 1260mg/kg/ngy sau 60 ngy cú tỏc dng gim cỏc ch s lipid mỏu cũn 33,1% & 40.1 (TG), 52,1 v 50,1% (TC), 22.9% v 16,3% (LDL-C), tng 162,9% v 182.9 (HDL-C) + Tỏc dng d phũng v iu tr ri lon lipid mỏu ca GCTKL liu 840mg v 1260mg/kg/ngy l nh 2.2 GCTKL ng ung cú tỏc dng h glucose mỏu, iu chnh RLLPM sau 30 ngy v hiu qu rừ rt hn sau 60 ngy iu tr chut cng trng T týp thc nghim: + GCTKL liu 840mg v 1260mg/kg/ngy sau 60 ngy iu tr cú tỏc dng gim cỏc ch s cũn: 79,8% v 67,8% (Glucose), 39,7% v 36%(TG), 52,8% v 40,1% (TC), 85,2% v 63,4% (LDL-C), tng 147% v 155,9% (HDL-C) huyt GCTKL liu 1260mg/kg/ngy cú tỏc dng hiu qu hn so vi liu 840 mg/kg/ngy trờn cỏc ch s: Glucose, TC, LDL-C v tỏc dng nh trờn cỏc ch s TG, HDL-C huyt 2.3 Tỏc dng trờn trng thỏi chng oxy hoỏ chut cng trng ri lon lipid mỏu v ỏi thỏo ng týp thc nghim: + Hot GPx mỏu chut ri lon lipid mỏu v chut ỏi thỏo ng c iu tr liu 840mg v 1260mg/kg/ngy gim ớt hn so vi cỏc chut khụng c iu tr, s khỏc bit vi p