NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT THUỐC LIPIDAN ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN LIPID MÁU

Header Page of 166 BỘ Y TẾ BÁO CÁO KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT THUỐC LIPIDAN ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN LIPID MÁU Chủ nhiệm đề tài: PGS TS Phạm Vũ Khánh Cơ quan chủ trì đề tài: Học viện Y - Dược học cổ truyền Việt Nam 8444 HÀ NỘI - 2011 Footer Page of 166 Header Page of 166 BỘ Y TẾ BÁO CÁO KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT THUỐC LIPIDAN ĐIỀU TRỊ RỐI LOẠN LIPID MÁU Cơ quan chủ trì đề tài Chủ nhiệm đề tài Học viện YDHCT Việt Nam PGS TS Phạm Vũ Khánh HÀ NỘI - 2011 Footer Page of 166 Header Page of 166 CÁC CHỮ VIẾT TẮT ALT AST BC BCTT CCT CNT dd DĐVN III DĐVN IV Hb HC Hct hd HDL-C KQ LDL-C LPD MN MN/PCE NC NCE PCE PCE/NCE PL STT TC TLCT TLTB TN YHCT YHHĐ aspartate amino transferase alanin amino transferase bạch cầu bạch cầu trung tính chuột cống trắng chuột nhắt trắng dung dịch Dược điển Việt Nam lần xuất thứ Dược điển Việt Nam lần xuất thứ hemoglobin hồng cầu hematocrit hỗn dịch high density lipoprotein cholesterol kết low density lipoprotein cholesterol LIPIDAN micronucleus (vi nhân) tỷ lệ vi nhân/tế bào hồng cầu đa sắc nghiên cứu normochromatic erythrocyte: hồng cầu đơn sắc (hồng cầu trưởng thành) polychromatic erythrocyte: hồng cầu đa sắc (hồng cầu non) tỷ lệ hồng cầu đa sắc/hồng cầu đơn sắc/1000 tế bào/chuột nhắt trắng phụ lục số thứ tự tiểu cầu trọng lượng thể trọng lượng trung bình thí nghiệm y học cổ truyền y học đại Footer Page of 166 Header Page of 166 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU Sự chuyển hóa tác dụng lipid thể Nguyên nhân chế bệnh sinh rối loạn lipid máu Tình hình nghiên cứu bào chế thuốc điều trị hội chứng rối loạn lipid máu 3.1 Ngoài nước 3.2 Trong nước Quan niệm y học cổ truyền hội chứng rối loạn lipid máu 10 4.1 Nguyên tắc điều trị chứng đàm ẩm 10 4.2 Phương pháp điều trị đàm 10 Về thuốc LIPIDAN 11 5.1 Trần bì 11 5.2 Bán hạ nam 12 5.3 Bạch linh 12 5.4 Mộc hương nam 12 5.5 Hậu phác nam 13 5.6 Ngũ gia bì chân chim 13 5.7 Sơn tra 13 5.8 Xa tiền tử 14 5.9 Sinh khương 14 CHƯƠNG 15 NGUYÊN LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 Nguyên liệu nghiên cứu 15 1.1 Công thức thuốc LIPIDAN 15 1.2 Hỗn dịch dung dịch sử dụng nghiên cứu 15 Đối tượng nghiên cứu 16 Phương pháp nghiên cứu 16 3.1 Nghiên cứu bào chế viên nang LIPIDAN 16 3.2 Đánh giá số kỹ thuật viên nang LIPIDAN 17 3.3 Theo dõi độ ổn định thuốc 20 3.4 Xác định độ an toàn thuốc 20 3.5 Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu động vật thí nghiệm 26 Địa điểm thời gian nghiên cứu 28 4.1 Địa điểm 28 4.2 Thời gian 28 Footer Page of 166 Header Page of 166 Xử lý số liệu 28 Cách chọn mẫu, cỡ mẫu 28 6.1 Cách chọn mẫu 28 6.2 Cỡ mẫu 28 Các biện pháp khống chế sai số 29 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 29 CHƯƠNG 30 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 30 Quy trình sản xuất viên nang LIPIDAN 30 1.1 Tiêu chuẩn nguyên liệu 30 1.2 Sơ chế nguyên liệu 30 1.3 Phương pháp bào chế cao khô LIPIDAN 31 1.4 Quy trình bào chế viên nang LIPIDAN 34 1.5 Xây dựng tiêu chuẩn thành phẩm 37 1.6 Theo dõi độ ổn định thuốc 37 Độ an toàn thuốc 38 2.1 Độc tính cấp 38 2.2 Độc tính bán cấp 39 2.3 Ảnh hưởng lâu dài thuốc di truyền sinh sản 46 Tác dụng thuốc LIPIDAN thực nghiệm 49 3.1 Tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu LIPIDAN theo chế ngoại sinh 49 3.2 Tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu LIPIDAN theo chế nội sinh 52 CHƯƠNG 54 BÀN LUẬN 54 Nghiên cứu bào chế thuốc LIPIDAN 54 1.1 Kiểm nghiệm thuốc nguyên liệu, bán thành phẩm 54 1.2 Nghiên cứu bào chế thuốc LIPIDAN 54 Độc tính thuốc LIPIDAN 55 2.1 Độc tính cấp độc tính bán cấp 55 2.2 Ảnh hưởng lâu dài thuốc di truyền sinh sản 56 Tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu thuốc LIPIDAN 57 CHƯƠNG 58 KẾT LUẬN 58 KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 Footer Page of 166 Header Page of 166 ĐẶT VẤN ĐỀ Hội chứng rối loạn chuyển hóa lipid máu tình trạng thường gặp nước phát triển, có xu hướng tăng ngày nhanh nước phát triển Đây yếu tố nguy quan trọng việc hình thành bệnh vữa xơ động mạch Ở nước ta, bệnh vữa xơ động mạch - với biến chứng suy động mạch vành, đột tử, nhồi máu tim, nhồi máu não trước gặp - có xu hướng tăng nhanh theo nhịp độ phát triển xã hội, dự báo trở thành bệnh đáng lo ngại cho sức khỏe người cao tuổi Ngoài bệnh vữa xơ động mạch, rối loạn lipid máu coi yếu tố nguy quan trọng số bệnh tim mạch khác như: tăng huyết áp, đái tháo đường [1],[2],[9] Theo tài liệu Tổ chức Y tế giới, nước phát triển, tử vong nhiều bệnh tim (32%) mà chủ yếu vữa xơ động mạch, đến tai biến mạch máu não (13%), nhiều hẳn loại bệnh khác [9] Giải rối loạn chuyển hóa lipid máu trở thành mục tiêu biện pháp dự phòng tiên phát thứ phát bệnh Công thức thuốc LIPIDAN thành lập dựa sở lý luận y học cổ truyền Đây thuốc kinh nghiệm sử dụng dạng thuốc sắc, dùng để điều trị hội chứng rối loạn lipid máu nhiều năm cho kết khả quan Để sản xuất chế phẩm thuốc cổ truyền dây chuyền công nghiệp đạt tiêu chuẩn chất lượng theo quy định Bộ Y tế; tạo điều kiện dễ dàng việc bảo quản sử dụng thuốc, tiến hành nghiên cứu đề tài với mục tiêu: Xây dựng quy trình sản xuất thuốc quy mô pilot Xây dựng tiêu chuẩn thuốc LIPIDAN Thử tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu thuốc súc vật thí nghiệm Nội dung nghiên cứu chủ yếu: - Nghiên cứu quy trình sản xuất thuốc LIPIDAN quy mô pilot - Xác định độ an toàn thuốc (độc tính cấp, bán cấp, ảnh hưởng thuốc di truyền sinh sản) - Thử tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu thuốc súc vật thí nghiệm - Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm (nguyên liệu, bán thành phẩm, thành phẩm) Footer Page of 166 Header Page of 166 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU Sự chuyển hóa tác dụng lipid thể Trong thể, lipid chuyển hóa theo hai chu trình: ngoại sinh nội sinh - Chu trình ngoại sinh: lipid sau đưa vào thể qua đường thức ăn, phần tiêu hóa từ tá tràng; đây, tác dụng men lipase, acid béo chuyển thành dạng tự do, từ hấp thu vào thể theo đường tĩnh mạch cửa để vào gan, tham gia vào chu trình nội sinh Còn lại, phần lớn lipid từ thức ăn kết hợp với muối mật thành dạng nhũ tương (gọi chylomicron) hấp thu qua đường bạch mạch ruột để vào tuần hoàn chung - Chu trình nội sinh: chu trình tạo phần lớn lượng lipid thể Tại gan, sản phẩm chuyển hóa thể như: acetyl Co-enzym A, glycerol-3-phosphate tham gia vào trình tổng hợp thành acid béo glycerin, từ tạo thành lipid thể Lipid hấp thu vào thể qua đường thức ăn lipid hình thành từ đường nội sinh gan đưa vào tuần hoàn chung cách gắn với apoprotein để tạo thành lipoprotein tỷ trọng thấp (VLDL - Very low density lipoprotein) mà thành phần chủ yếu triglycerid VLDL theo đường tuần hoàn tới mô mỡ, sau trao phần lớn triglycerid cho mô mỡ, tỷ trọng tăng lên biến thành lipoprotein tỷ trọng trung gian (IDL - Intermediate density lipoprotein) lipoprotein tỷ trọng thấp (LDL Low density lipoprotein) gồm đa số cholesterol phospholipid Sau trao cholesterol cho tế bào theo nhu cầu, LDL chuyển thành lipoprotein tỷ trọng cao (HDL - High density lipoprotein) HDL có tác dụng vận chuyển cholesterol khỏi mô ngoại vi gan mô thừa chất [10] Tác dụng lipid thể: - Triglycerid sử dụng vào việc cung cấp lượng cho thể - Cholesterol, phospholipid số triglycerid tham gia cấu tạo nên màng tế bào, màng bào quan bào tương, thực thi số chức tế bào Cholesterol nguyên liệu ban đầu để tạo vitamin D, hormon sinh dục, hormon thượng thận muối mật Một người coi có số lipid máu bình thường khi: - Cholesterol: < 5,2mmol/l (200mg/dL) Footer Page of 166 Header Page of 166 - HDL-C: ≥ 0,9mmol/l (35mg/dL) - LDL-C: < 3,4mmol/l (130mg/dL) - Triglycerrid: 1,7mmol/l - 2,3mmol/l (150mg/dL - 200mg/dL) [2], [14], [15], [24] Nguyên nhân chế bệnh sinh rối loạn lipid máu Khi trình chuyển hóa lipid theo hai chu trình ngoại sinh nội sinh diễn bình thường không xảy tình trạng rối loạn lipid máu Tình trạng xảy yếu tố tạo nên hai chu trình bị tác động gây thừa thiếu [10] Các yếu tố bao gồm: - Ăn nhiều chất béo bão hòa trực tiếp làm tăng lipid máu, đồng thời làm tăng acetyl Co-enzym A (là nguyên liệu để tổng hợp lipid gan) Chất béo bão hòa có thức ăn có mỡ, đặc biệt sữa sản phẩm từ sữa, thịt mỡ, bơ động vật, dầu dừa, dầu cọ, loại bánh bích quy, ga tô - Ăn nhiều chất béo không bão hòa không sử dụng thức ăn chứa chất béo bão hòa thời gian dài làm giảm nồng độ cholesterol máu Cơ chế làm hạ lipid máu acid béo không bão hòa chưa rõ, chất xơ sợi thức ăn làm acid mật tái hấp thu từ ruột vào máu; thiếu acid mật, gan dùng cholesterol tạo acid mật, làm giảm cholesterol - Ít vận động dẫn tới tình trạng béo phì: theo Tổ chức Y tế giới, béo phì tình trạng tích lũy mỡ mức không bình thường vùng thể hay toàn thân đến mức ảnh hưởng tới sức khỏe Tình trạng gây nên tăng lipid cách bất thường máu - Uống rượu, hút thuốc nguyên nhân gây rối loạn lipid máu - Rối loạn lipid máu thứ phát: đái tháo đường, rối loạn chức số tuyến nội tiết (tuyến yên, tuyến giáp, tuyến thượng thận ) + Đái tháo đường có kèm theo rối loạn lipid máu thường gặp người mắc đái tháo đường typ 2: lượng glucose đưa vào thể nhiều, lượng insulin tụy tiết không đủ để đáp ứng cho việc vận chuyển glucose thể, gây nên tình trạng đái tháo đường; đồng thời, glucose vận chuyển vào thể nhiều tới gan để tham gia vào trình tạo thành acid béo triglycerid, từ gây rối loạn lipid máu + Rối loạn chức số tuyến nội tiết: số tuyến nội tiết tuyến yên, tuyến giáp, tuyến thượng thận tiết hormon (GH, ACTH, tyrosin, corticoid, adrenalin, noradrenalin) có tác dụng tham gia vào trình Footer Page of 166 Header Page of 166 chuyển hóa lipid thể Sự rối loạn chức tuyến nội tiết gây nên tình trạng rối loạn lipid máu - Ngoài ra, tình trạng rối loạn lipd máu có tính chất gia đình liên quan đến gen di truyền [2], [4], [14], [15], [24] Tình hình nghiên cứu bào chế thuốc điều trị hội chứng rối loạn lipid máu 3.1 Ngoài nước Hiện y học đại có nhiều công trình nghiên cứu sản xuất thuốc điều trị hội chứng rối loạn lipid máu tạo sản phẩm có tác dụng như: 3.1.1 Resin - chất nhựa trao đổi ion (Cholestyramin, Cholestipol) [1], [2], [10], [14], [15], [17], [24] Một số nghiên cứu tiến hành với nhựa trao đổi ion LRC (Lipid Research Clinic Coronary Primary Prevention Trial, 1984), CLAS (Cholesterol Lowering Atherosclerosis Study, 1987), SCOR (San Francisco Specialized Center of Research, 1990), STARS (St Thomas Atherosclerosis Regression Study, 1992) chứng minh hiệu lực thuốc - Tác dụng: thuốc uống không bị hấp thụ qua niêm mạc ruột, không bị men tiêu hoá tác động, có khả trao đổi ion Cl- với acid mật, làm cho acid mật dạng liên kết không bị hấp thu trở lại mà theo phân để thải ngoài; cắt chu trình ruột - gan acid mật làm giảm cholesterol, LDL-C, tăng nhẹ HDL-C Thuốc làm tăng triglycerid VLDL - Tác dụng không mong muốn: dễ gây đầy bụng, buồn nôn, táo bón, cản trở hấp thu vitamin tan lipid số thuốc khác (digitalis, thuốc chống đông máu, hormon tuyến giáp) qua ruột 3.1.2 Acid nicotinic (Dilexpal, Novacyl) [1], [2], [10], [14], [15], [17], [24] Các nghiên cứu chứng minh tác dụng thuốc: Coronary Drug Protect (1975), CLAS (Cholesterol Lowering Atherosclerosis Study, 1987), FATS (Familial Atherosclerosis Treatment Study, 1990) - Tác dụng: với liều cao - 6g/ngày, acid nicotinic làm giảm VLDL; giảm triglycerid ức chế trình tiêu lipid tổ chức mỡ; làm giảm lượng acid béo cần thiết cho gan tổng hợp VLDL; tăng chuyển hoá VLDL, qua giảm LDL Ngoài ra, thuốc làm giảm lipoprotein(a), tăng nhẹ HDL - Tác dụng không mong muốn: dễ gây rối loạn tiêu hoá, cảm giác nóng rát dày, suy thận, tăng nhãn áp - Do dùng liều cao có nhiều tác dụng không mong muốn nên thuốc dùng nước ta Footer Page of 166 Header Page 10 of 166 3.1.3 Các acid béo không no omega-3 (Maxepa) [1], [2], [10], [14], [15], [17], [24] Nghiên cứu DART (Diet and Reinfaction Trial, 1989) dùng chế độ ăn nhiều cá Maxepa năm thấy giảm 16% tái phát nhồi máu tim, 29% tử vong so với placebo - Tác dụng: acid béo không no họ omega-3 chiết xuất từ cá biển, có tác dụng làm giảm triglycerid VLDL máu chính; giảm nhẹ cholesterol, LDL; tăng nhẹ HDL (hiệu lực chưa Fibrat); làm giảm nguy huyết khối tác động đến chuyển hoá prostaglandin - Thuốc có tác dụng không mong muốn 3.1.4 Fibrat [1], [2], [10], [14], [15], [17], [24] - Clofibrat (Misclerduon, Lipavlon), benzafibrat (Bezalip), fenofibrat (Lipanthyl), gemfibrozil (Lopid) - Các nghiên cứu fibrat: BECAIT (Bezafibrat Coronary Atheroclerosis Intervention Trial, 1996) với bezafibrat; nghiên cứu Hahmann với fenofibrat (1991); HHS (Helssinski Heart Study, 1987) với gemfibrozil Các thuốc lưu hành phổ biến nước ta - Tác dụng: giảm dòng acid béo gan, giảm tổng hợp VLDL, tăng độ thải VLDL, giảm hình thành LDL nhỏ đặc dễ gây vữa xơ động mạch, giảm oxy hoá LDL Kết làm giảm triglycerid cholesterol, giảm VLDL LDL, tăng HDL; fibrat làm giảm kết tập tiểu cầu, giảm fibrinogen, acid uric máu Các fenofibrat làm giảm lượng lipoprotein(a) gemfibrozil làm tăng tổng hợp apoproteinAI AII - Tác dụng không mong muốn: đầy bụng, buồn nôn, ỉa lỏng, mẩn ngứa, tăng men gan, yếu cơ, sỏi mật 3.1.5 Statin [1], [2], [10], [14], [15], [17], [24] - Fluvastatin (Lescol), lovastatin (Mevacor), pravastatin (Elisor), simvastatin (Zocor) - Các nghiên cứu statin: 4S (Scandinavian Simvastatin Survival Study, 1994), MASS (Multicentre Anti-Atheroma Study, 1994), PLAC (Pravastatin Limitation of Atheroclerosis in the Coronary Arrteries, 1993 - 1995) I II, WOSCOPS (The West of Scotland Coronary Prevention Statin Study, 1995), REGRESS (The Regression Growth Evaluation Statin Study, 1995) - Tác dụng: ức chế men HMGCoA reductase làm cản trở trình nội sinh cholesterol tế bào, tăng tổng hợp cảm thụ cho LDL để tăng thoái giáng LDL theo đường cảm thụ Các statin làm giảm cholesterol chính, làm Footer Page 10 of 166 Header Page 52 of 166 không uống thuốc Điều chứng tỏ thuốc không gây độc tính tủy xương chức phân chia tế bào máu tạo hồng cầu - Tỷ lệ vi nhân/tế bào hồng cầu đa sắc (MN/PCE) nhóm uống thuốc LIPIDAN so với nhóm chứng khác ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Như vậy, thuốc LIPIDAN không làm tăng tần số vi nhân liên quan đến phân ly nhiễm sắc thể trình phân bào đứt, đứt gãy nhiễm sắc thể mức độ lớn quan sát Tác dụng thuốc LIPIDAN thực nghiệm 3.1 Tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu LIPIDAN theo chế ngoại sinh Bảng 3.30 Ảnh hưởng LIPIDAN cholesterol máu chuột cống trắng (n =10 con/1 lô ) Lô nghiên cứu Lô - chứng (1) Lô - gây tăng (2) cholesterol, không trị Lô - hd Lipidan tuần (3) Cholesterol (mg/dl) Thay đổi so với (2) X ± SD 150,12 ± 17,73 247,17 ± 29,78 - 145,36 ± 12,23 giảm 41,19% Lô - hd Lipidan tuần (4) 151,27 ± 16,62 giảm 38,80% Lô - viên LPD tuần (5) 145,79 ± 14,27 giảm 41,02% Lô - viên LPD tuần (6) p giảm 38,98% 150,81 ± 21,07 p2-1 < 0,05; p3-2 < 0,05; p4-2 < 0,05; p5-2 < 0,05; p6-2 < 0,05; p3-5 > 0,05; p4-6 > 0,05 Nhận xét: - Ở lô 2, cho chuột cống trắng uống dung dịch cholesterol, làm lượng cholesterol tăng lên 164,6% so với chứng - Ở lô 4, cho chuột cống trắng uống hỗn dịch Lipidan theo phác đồ tuần, lượng cholesterol giảm có ý nghĩa thống kê với p3-2 < 0,05; p4-2 < 0,05 - Ở lô 6, cho chuột cống trắng uống viên nang LIPIDAN theo phác đồ tuần tuần, lượng cholesterol giảm có ý nghĩa thống kê với p3-2 < 0,05; p4-2 < 0,05 - Tác dụng hạ cholesterol hỗn dịch Lipidan viên nang LIPIDAN khác biệt ý nghĩa thống kê với p3-5 > 0,05; p4-6 > 0,05 Trong điều kiện thử, dạng viên nang có tác dụng tương tự dạng dung dịch Thời gian dùng tuần tác dụng tốt dùng tuần Footer Page 52 of 166 49 Header Page 53 of 166 Bảng 3.31 Ảnh hưởng LIPIDAN HDL-C máu chuột cống trắng (n =10 con/1 lô ) HDL-C (mg/dl) Lô nghiên cứu Thay đổi so với (2) X ± SD Lô - chứng (1) 41,72 ± 3,25 Lô - gây tăng (2) 42,08 ± 4,10 cholesterol, không trị Lô - hd Lipidan tuần (3) tăng 34,93% 56,78 ± 4,21 Lô - hd Lipidan tuần (4) tăng 27,19% 53,52 ± 3,73 Lô - viên LPD tuần (5) tăng 35,30% 56,82 ± 3,17 Lô - viên LPD tuần (6) tăng 27,57% 53,68 ± 4,18 p2-1 > 0,05; p3-2 < 0,05; p4-2 < 0,05; p5-2 < 0,05; p6-2 < 0,05 p p3-5 > 0,05; p4-6 > 0,05 Nhận xét: - Ở lô 2, cho chuột cống trắng uống dung dịch cholesterol, lượng HDLC tăng so với chứng, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p2-1 < 0,05 - Ở lô 4, cho chuột cống trắng uống hỗn dịch Lipidan theo phác đồ tuần, lượng HDL-C tăng có ý nghĩa thống kê với p3-2 < 0,05; p4-2 < 0,05 - Ở lô 6, cho chuột cống trắng uống viên nang LIPIDAN theo phác đồ tuần tuần, lượng HDL-C tăng có ý nghĩa thống kê với p5-2 < 0,05; p6-2 < 0,05 Đây tác dụng có lợi đáng lưu ý chế phẩm - Trong điều kiện thử, dạng viên nang có tác dụng tương tự dạng thang sắc truyền thống, khác biệt ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Trong điều kiện thử, thời gian dùng tuần tác dụng tốt dùng tuần Bảng 3.32 Ảnh hưởng LIPIDAN LDL-C máu chuột cống trắng (n =10 con/1 lô ) LDL (mg/dl) Lô nghiên cứu Thay đổi so với (2) X ± SD Lô - chứng (1) 32,81 ± 2,42 Lô - gây tăng (2) 64,36 ± 3,07 cholesterol, không trị Lô - hd Lipidan tuần (3) giảm 40,30% 38,42 ± 3,18 Lô - hd Lipidan tuần (4) giảm 35,11% 41,76 ± 2,96 Lô - viên LPD tuần (5) giảm 40,48% 38,31 ± 2,85 Lô - viên LPD tuần (6) giảm 34,63% 42,07 ± 3,25 p2-1 < 0,05; p3-2 < 0,05; p4-2 < 0,05; p5-2 < 0,05; p6-2 < 0,05 p p3-5 > 0,05; p4-6 > 0,05 Footer Page 53 of 166 50 Header Page 54 of 166 Nhận xét: - Ở lô 2, cho chuột cống trắng uống dung dịch cholesterol, làm tăng lượng LDL-C lên 196,16% so với chứng, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p2-1 < 0,05 - Ở lô 4, cho chuột cống trắng uống hỗn dịch Lipidan theo phác đồ tuần, lượng LDL-C giảm có ý nghĩa thống kê với p3-2 < 0,05; p4-2 < 0,05 - Ở lô 6, cho chuột cống trắng uống viên nang LIPIDAN theo phác đồ tuần tuần, lượng LDL-C giảm có ý nghĩa thống kê với p5-2 < 0,05; p6-2 < 0,05 - Trong điều kiện thử, dạng viên nang có tác dụng tương tự dạng thang sắc truyền thống, khác biệt ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Thời gian dùng tuần tác dụng tốt dùng tuần Bảng 3.33 Ảnh hưởng LIPIDAN triglycerid máu chuột cống trắng (n = 10 con/1 lô ) (1) Triglycerid (mg/dl) Thay đổi so với (2) X ± SD 103,97 ± 18,16 (2) 160,22 ± 21,37 Lô nghiên cứu Lô - chứng Lô - gây tăng cholesterol, không trị Lô - hd Lipidan tuần Lô - hd Lipidan tuần Lô - viên LPD tuần Lô - viên LPD tuần p (3) (4) (5) (6) - giảm 36,36% 102,12 ± 17,37 giảm 27,67% 115,89 ± 21,31 giảm 35,69% 103,03 ± 18,05 giảm 28,11% 115,19 ± 20,83 p2-1 < 0,05; p3-2 < 0,05; p4-2 < 0,05; p5-2 < 0,05; p6-2 < 0,05 p3-5 > 0,05; p4-6 > 0,05 Nhận xét: - Ở lô 2, cho chuột cống trắng uống dung dịch cholesterol, làm tăng lượng triglycerid lên 154,10% so với chứng, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p2-1 < 0,05 - Ở lô 4, cho chuột cống trắng uống hỗn dịch Lipidan theo phác đồ tuần, lượng triglycerid giảm có ý nghĩa thống kê với p3-2 < 0,05; p4-2 < 0,05 - Ở lô 6, cho chuột cống trắng uống viên nang LIPIDAN theo phác đồ tuần tuần, lượng triglycerid giảm có ý nghĩa thống kê với p5-2 < 0,05; p6-2 < 0,05 - Trong điều kiện thử, dạng viên nang có tác dụng tương tự dạng thang sắc truyền thống, khác biệt ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Thời gian dùng tuần tác dụng tốt dùng tuần Footer Page 54 of 166 51 Header Page 55 of 166 3.2 Tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu LIPIDAN theo chế nội sinh Bảng 3.34 Ảnh hưởng LIPIDAN cholesterol máu thỏ (n = con/1 lô) Lô nghiên cứu Cholesterol (mg/dl) X ± SD Trước TN Sau TN 98,12 ± 21,02 163,57 ± 22,19 102,07 ± 23,61 96,84 ± 20,06 102,78 ± 22,98 95,88 ± 20,12 > 0,05 < 0,05 p Lô - chứng (1) < 0,05 Lô - hỗn dịch Lipidan (2) < 0,05 Lô - viên nang LIPIDAN (3) < 0,05 p Nhận xét: - So với lô chứng, lô thỏ uống hỗn dịch Lipidan uống viên nang LIPIDAN, lượng cholesterol huyết thỏ giảm có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 - Trong điều kiện thử, dạng viên nang có tác dụng tương tự dạng thang sắc truyền thống, khác biệt ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Bảng 3.35 Ảnh hưởng LIPIDAN HDL-C máu thỏ (n = con/1 lô) Lô nghiên cứu HDL-C (mg/dl) X ± SD Trước TN Sau TN 23,08 ± 1,73 22,72 ± 1,39 22,38 ± 1,81 31,37 ± 1,57 22,46 ± 1,74 32,48 ± 1,66 > 0,05 > 0,05 p Lô - chứng (1) > 0,05 Lô - hỗn dịch Lipidan (2) < 0,05 Lô - viên nang LIPIDAN (3) < 0,05 p Nhận xét: - So với lô chứng, lô thỏ uống hỗn dịch Lipidan uống viên nang LIPIDAN, lượng HDL-C huyết thỏ tăng có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 - Trong điều kiện thử, dạng viên nang có tác dụng tương tự dạng thang sắc truyền thống, khác biệt ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Bảng 3.36 Ảnh hưởng LIPIDAN LDL-C máu thỏ (n = con/1 lô) Lô nghiên cứu Lô - chứng (1) Lô - hỗn dịch Lipidan (2) Lô - viên nang LIPIDAN (3) p Footer Page 55 of 166 LDL-C (mg/dl) X ± SD Trước TN Sau TN 53,07 ± 2,11 82,17 ± 2,23 52,88 ± 2,36 48,63 ± 2,13 52,76 ± 2,94 48,14 ± 2,07 > 0,05 > 0,05 52 p < 0,05 < 0,05 < 0,05 Header Page 56 of 166 Nhận xét: - So với lô chứng, lô thỏ uống hỗn dịch Lipidan uống viên nang LIPIDAN, lượng LDL-C huyết thỏ giảm có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 - Trong điều kiện thử, dạng viên nang có tác dụng tương tự dạng thang sắc truyền thống, khác biệt ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Bảng 3.37 Ảnh hưởng LIPIDAN triglycerid máu thỏ (n = con/1 lô) Lô - chứng (1) Triglycerid (mg/dl) X ± SD Trước TN Sau TN 88,28 ± 6,61 168,72 ± 7,01 Lô - hỗn dịch Lipidan (2) 87,66 ± 6,54 Lô nghiên cứu 60,28 ± 6,72 p < 0,05 < 0,05 Lô - viên nang LIPIDAN (3) < 0,05 88,02 ± 7,19 59,73 ± 6,96 p > 0,05 > 0,05 Nhận xét: - So với lô chứng, lô thỏ uống hỗn dịch Lipidan uống viên nang LIPIDAN, lượng triglycerid huyết thỏ giảm có ý nghĩa thống kê với < 0,05 - Trong điều kiện thử, dạng viên nang có tác dụng tương tự dạng thang sắc truyền thống, khác biệt ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Footer Page 56 of 166 53 Header Page 57 of 166 CHƯƠNG BÀN LUẬN Nghiên cứu bào chế thuốc LIPIDAN 1.1 Kiểm nghiệm thuốc nguyên liệu, bán thành phẩm LIPIDAN chế phẩm bào chế sở thuốc nam kinh nghiệm, sử dụng điều trị rối loạn lipid máu nhiều năm cho hiệu tốt Để đáp ứng yêu cầu chuẩn hóa nguyên liệu đầu vào, tiến hành kiểm nghiệm nguyên liệu theo tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam III Dược điển Việt Nam IV Trong thành phần thuốc có hậu phác nam mộc hương nam, hai vị thuốc danh mục Dược điển Việt Nam Vì vậy, trình nghiên cứu, tiến hành kiểm nghiệm vị thuốc theo tiêu chuẩn sở Trong thành phần nguyên liệu sử dụng để bào chế viên nang LIPIDAN, xác định: bán thành phẩm cần tiến hành kiểm nghiệm cao khô LIPIDAN Cao khô LIPIDAN tạo cách bào chế từ cao lỏng Các vị thuốc nguyên liệu sắc với nước khoảng thời gian khác nhau, cho thu cao thành phẩm có hiệu suất cao nhất, sau cô đặc sấy khô điều kiện áp suất giảm Qua trình kiểm nghiệm, nhận thấy: thành phần cao khô phép thử định tính trần bì, bán hạ, ngũ gia bì chân chim Như vậy, nhận xét: trình bào chế cao khô giữ thành phần thuốc 1.2 Nghiên cứu bào chế thuốc LIPIDAN Vì LIPIDAN chế phẩm tạo thành từ vị thuốc nam nên tiến hành bào chế cao khô, góp phần giảm trọng lượng viên giảm số lượng viên lần uống Do khối lượng nguyên liệu tương đối lớn, nhận thấy bột trần bì, bột hậu phác cao khô tạo nên hỗn hợp xốp nên hạn chế đưa thêm tá dược vào công thức pha chế, đưa thêm khoảng 0,4% Tricalciphosphat (tá dược độn), giúp cho bột kép không dính bết trình trộn, tạo đồng khối bột Để tạo trơn chảy cần thiết cho trình đóng nang, bột cao dược liệu phải bào chế thành dạng hạt thuốc, nhận thấy phương pháp xát hạt ướt phù hợp trường hợp Tuy nhiên, thành phần bột kép chủ yếu cao khô, bột dược liệu phần nhỏ tá dược độn nên để tạo hạt thuốc có kích thước phù hợp cho việc bào chế viên nang, cần có thêm lượng tá dược dính định để liên kết thành phần bột kép với Footer Page 57 of 166 54 Header Page 58 of 166 Qua trình nghiên cứu, nhận thấy PVP K30 phù hợp Để giúp cho dược liệu phân tán trình trộn tránh tình trạng dính bết dược liệu xát hạt, sử dụng cồn nồng độ 96% làm dung môi để pha cồn PVP nồng độ 10% Cỡ rây ban đầu chọn 1,2mm để thuận lợi cho trình xát hạt; sấy hạt nhiệt độ 400C 15 phút, sau sửa hạt qua cỡ rây 1,0mm nhằm tạo kích thước hạt phù hợp cho trình đóng nang Kết phù hợp với nhận định Bùi Hồng Cường nghiên cứu bào chế viên nang “Bát vị quế phụ” [10] Sau nghiên cứu bào chế sản xuất thành công lô sản phẩm quy mô pilot, tiến hành kiểm tra tiêu chuẩn kỹ thuật, xây dựng tiêu chuẩn sở bán thành phẩm, thành phẩm viên nang LIPIDAN Tiêu chuẩn kiểm tra theo chuyên luận viên nang Dược điển Việt Nam xuất lần thứ 4; đồng thời, phải phép thử định tính trần bì, bán hạ, ngũ gia bì chân chim chế phẩm Qua trình thử nghiệm thuốc LIPIDAN, lô sản phẩm đạt tiêu chuẩn viên nang theo Dược điển Việt Nam IV, thuốc phép thử định tính trần bì, bán hạ, ngũ gia bì chân chim [7] Thuốc Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương thẩm định (Phụ lục) Sau hoàn thành trình sản xuất thử nghiệm lô thuốc LIPIDAN quy mô pilot, tiến hành theo dõi sản phẩm điều kiện tủ vi khí hậu nhiệt độ 400C ± 20C, độ ẩm 70 ± (%) Thời gian theo dõi: tháng Do thời gian thực phương pháp lão hóa cấp tốc kinh phí thực đề tài có hạn nên theo dõi tháng chưa làm thí nghiệm định lượng hàm lượng số hoạt chất thuốc Để đánh giá xác thời gian lưu thuốc, cần có thời gian theo dõi thêm, tiến hành sắc ký định lượng thay đổi hàm lượng số hoạt chất thuốc thời gian theo dõi Qua trình nghiên cứu, tiêu cảm quan, độ rã, độ nhiễm khuẩn đạt tiêu cho phép theo tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam IV; thuốc phản ứng định tính bán hạ, trần bì, ngũ gia bì chân chim Thuốc LIPIDAN lưu nhiệt độ thường thời gian 18 tháng Độc tính thuốc LIPIDAN 2.1 Độc tính cấp độc tính bán cấp LIPIDAN chế phẩm Đông dược hình thành từ thuốc nghiệm phương sử dụng lâm sàng nhiều năm Tuy công nhận tác dụng qua trình sử dụng theo phương pháp sắc truyền thống, để đảm bảo yêu cầu Bộ Y tế tuân thủ quy định đạo đức nghiên cứu, tiến hành nghiên cứu độc tính cấp bán cấp thuốc Kết Footer Page 58 of 166 55 Header Page 59 of 166 nghiên cứu cho thấy: trình bào chế cải dạng thuốc không gây độc cho chế phẩm (Phụ lục) Đây kết lạc quan trình nghiên cứu cải dạng thuốc YHCT, kết góp phần thúc đẩy nghiên cứu đại hóa YHCT, mở hướng tiếp tục nghiên cứu cải dạng thuốc YHCT có tác dụng tốt điều trị, tạo điều kiện dễ dàng cho người bệnh trình sử dụng thuốc YHCT Đồng thời, kết nghiên cứu độc tính cấp thuốc giúp cho việc phân liều điều trị xác 2.2 Ảnh hưởng lâu dài thuốc di truyền sinh sản Trên thực tế, việc điều trị hội chứng rối loạn lipid máu lâm sàng thường tiến hành thời gian tương đối dài Vì vậy, để hạn chế tối đa hậu đáng tiếc xảy sau sử dụng thuốc, tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng lâu dài thuốc di truyền sinh sản thuốc Nghiên cứu thực thực nghiệm hai cấp độ: ảnh hưởng thuốc đến trình sinh sản, phát triển tác động thuốc đến chất liệu di truyền - Nghiên cứu ảnh hưởng thuốc đến trình sinh sản, phát triển thực ba hệ chuột nhắt trắng cho thấy: tỷ lệ chuột nhắt trắng thụ thai, số thai trung bình chuột mẹ, số chuột sinh lứa, trọng lượng trung bình chuột sinh, so sánh thử mức liều 30mg/100g trọng lượng thể chuột/24h với chứng, khác biệt ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Không phát thấy thai chết sớm, chết muộn, dị tật bẩm sinh chuột nhắt trắng sinh Điều chứng tỏ chế phẩm LIPIDAN không ảnh hưởng đến trình sinh sản, phát triển - Nghiên cứu chất liệu di truyền lô chuột nhắt trắng mức liều LIPIDAN sử dụng 30mg/100g trọng lượng thể chuột/24h, uống liên tục 30 ngày, kết quả: + Chưa thấy ảnh hưởng đến chất liệu di truyền test vi nhân tế bào hồng cầu tủy xương chuột nhắt trắng, so sánh lô thử lô chứng, khác biệt ý nghĩa thống kê (p > 0,05) + Các rối loạn bất thường chất liệu di truyền so sánh lô chứng với lô thử, khác biệt ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Điều chứng tỏ LIPIDAN không gây độc với chất liệu di truyền mức liều khảo sát Vì mức liều sử dụng để nghiên cứu ảnh hưởng chế phẩm LIPIDAN trình sinh sản, phát triển tác động thuốc đến chất liệu di truyền cao gấp lần so với liều sử dụng thông thường nên từ kết trên, nhận xét rằng: chế phẩm LIPIDAN an toàn mức liều sử dụng Như vậy, Footer Page 59 of 166 56 Header Page 60 of 166 thầy thuốc người bệnh yên tâm tính an toàn thuốc sử dụng điều trị thời gian dài Tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu thuốc LIPIDAN Công thức thuốc LIPIDAN ứng dụng lâm sàng để điều trị hội chứng rối loạn lipid máu thời gian dài cho kết khả quan Tuy nhiên, sau trình nghiên cứu bào chế, cần đánh giá lại tác dụng điều chỉnh tình trạng rối loạn lipid máu chế phẩm Đồng thời, trình nghiên cứu cần so sánh với dung dịch thuốc sắc theo phương pháp truyền thống để đánh giá tương đương tác dụng thuốc nghiệm phương sản phẩm Đông dược cải dạng Kết nghiên cứu cho thấy hai dạng thuốc (thang sắc truyền thống viên nang LIPIDAN) có tác dụng việc điều chỉnh rối loạn lipid máu chế ngoại sinh chế nội sinh, khác biệt ý nghĩa thống kê với p > 0,05 Như vậy, dạng thang sắc truyền thống chế phẩm LIPIDAN vừa có tác dụng ức chế hấp thu, vừa có tác dụng tăng đào thải thành phần lipid máu lợi cho thể Kết nghiên cứu thể tính ưu việt thuốc nghiệm phương chế phẩm LIPIDAN, tác dụng làm tăng lượng HDL-C Đây tác dụng có lợi đáng lưu ý chế phẩm Để khẳng định chế tác dụng LIPIDAN, cần có thêm nghiên cứu chế tác dụng thuốc Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu thuốc thực nghiệm cho thấy: thời gian sử dụng thuốc thời gian dài (6 tuần) có tác dụng tốt Như vậy, để có tác dụng tốt nhất, thuốc nên sử dụng thời gian dài Footer Page 60 of 166 57 Header Page 61 of 166 CHƯƠNG KẾT LUẬN Xây dựng quy trình sản xuất thuốc LIPIDAN quy mô pilot Hoàn thiện hồ sơ thuốc LIPIDAN, bao gồm : 2.1 Hoàn thiện hồ sơ tiêu chuẩn nguyên liệu, bán thành phẩm, thành phẩm thuốc LIPIDAN 2.2 Hoàn thành hồ sơ tiền lâm sàng thuốc LIPIDAN bao gồm: - Thử nghiệm độc tính cấp: chưa xác định độc tính cấp (LD50) LIPIDAN dùng theo đường uống Với thể tích lớn đưa vào dày chuột nhắt trắng, không gây chết chuột nhắt trắng thực nghiệm liều 240mg/100g TLCT - Thử nghiệm độc tính bán cấp: dùng uống thời gian 42 ngày liên tục thỏ thực nghiệm : + Thuốc không ảnh hưởng đến phát triển trọng lượng thể + Thuốc không làm ảnh hưởng đến sóng điện tim thỏ + Thuốc không độc với tế bào máu (số lượng hồng cầu, hemoglobin, hematocrite , tiểu cầu, bạch cầu, công thức bạch cầu) + Thuốc không ảnh hưởng đến chức gan, thận + Thuốc không gây tổn thương mô bệnh học gan, lách thận - Thử nghiệm ảnh hưởng lâu dài thuốc di truyền sinh sản: + Ảnh hưởng thuốc lên trình sinh sản, phát triển ba hệ chuột nhắt trắng: Thuốc không ảnh hưởng tới khả thụ thai, số thai trung bình chuột mẹ, số chuột sinh lứa, trọng lượng trung bình chuột sinh Không phát thấy thai chết sớm, chết muộn, dị tật bẩm sinh chuột nhắt trắng sinh + Nghiên cứu chất liệu di truyền (nhiễm sắc thể): Chưa thấy ảnh hưởng đến chất liệu di truyền test vi nhân tế bào hồng cầu tủy xương chuột nhắt trắng Không thấy rối loạn bất thường chất liệu di truyền Thuốc có tác dụng hạ cholesterol, LDL-C, triglycerid; tăng HDL-C máu thực nghiệm Footer Page 61 of 166 58 Header Page 62 of 166 KIẾN NGHỊ Tiếp tục có nghiên cứu chế tác dụng thuốc LIPIDAN Tiếp tục nghiên cứu tác dụng thuốc người khỏe mạnh tình nguyện người có hội chứng rối loạn lipid máu, so sánh tác dụng LIPIDAN với loại thuốc điều trị rối loạn lipid máu có nguồn gốc thảo dược khác Footer Page 62 of 166 59 Header Page 63 of 166 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đỗ Thị Thuý Anh (2004), Nghiên cứu tác dụng thuốc TTII bệnh nhân tăng huyết áp có rối loạn lipid máu, Luận văn Thạc sỹ y học, Học viện Quân y Nguyễn Văn Ánh (2006), Nghiên cứu tác dụng điều trị rối loạn lipid máu viên Cholestin, Luận văn Thạc sỹ y học, Học viện Quân y Bộ môn Bào chế, Đại học Dược Hà Nội (2004), Sinh dược học viên nén, Sinh dược học nang cứng, Sinh dược học bào chế (Tài liệu đào tạo sau đại học), Nhà xuất Y học, tr 112 - 131 Bộ môn Miễn dịch - Sinh lý bệnh, trường Đại học Y Hà Nội (2004), “Rối loạn chuyển hóa lipid”, Sinh lý bệnh học, Nhà xuất Y học, tr 81 - 93 Bộ Y tế (1996), Quy chế đánh giá tính an toàn hiệu lực thuốc cổ truyền Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam III, Nhà xuất Y học Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học Bộ Y tế (2006), Kỹ thuật bào chế sinh dược học dạng thuốc, tập 2, Nhà xuất Y học, tr 156 - 202 Bộ Y tế (2006), Viên nén, Kỹ thuật bào chế sinh dược học dạng thuốc, tập 2, Nhà xuất Y học, tr 156 - 202 10 Bộ Y tế (2009), Rối loạn lipid máu, Lão khoa Y học cổ truyền, Nhà xuất Giáo dục Việt Nam, tr 98 - 116 11 Bùi Hồng Cường (2007), Nghiên cứu chế biến phụ tử cao phụ tử từ ô đầu Sa Pa để chế tạo thuốc Bát vị quế phụ, Báo cáo tổng kết đề tài cấp Bộ, Bộ Giao thông - Vận tải 12 Đại học Y Hà Nội (1998), Phương pháp nghiên cứu khoa học y học, Nhà xuất Y học 13 Đỗ Trung Đàm (2001), Phương pháp ngoại suy liều có hiệu tương đương người động vật thí nghiệm, Thông tin y dược lâm sàng chuyên san khoa học đào tạo, số 2, tr - 12 14 Đoàn Quốc Dũng (2001), Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh hội chứng rối loạn lipid máu thuốc Nhị trần thang gia giảm, Luận văn Thạc sỹ y học, Đại học Y Hà Nội 15 Phan Việt Hà (1998), So sánh tác dụng điều trị hội chứng rối loạn lipid máu thuốc “Giáng ẩm” với Lipanthyl, Luận văn Thạc sỹ y học, Viện YHCT Quân đội 16 Hải Thượng Lãn ông Lê Hữu Trác, Hải Thượng Y tông tâm lĩnh, Nhà xuất Y học, 1997 17 Vũ Trung Hải (2006), Thuốc chữa tăng lipid máu, (Online) Footer Page 63 of 166 60 Header Page 64 of 166 http://www.moh.gov.vn/homebyt 18 Võ Hiền Hạnh, Lương Thuý Quỳnh (1990), Bước đầu đánh giá tác dụng hạ cholesterol máu alliso (tỏi), Tạp chí nội khoa số 1,tr 24-25 19 K.H (giới thiệu) (2006), Chanh, (Online) http://nghe-online.org 20 Nguyễn Khang, Nguyễn Thị Liên, Phạm Tử Dương cộng (1996), Nghiên cứu ứng dụng củ nghệ làm thuốc hạ cholesterol máu, Tạp chí dược liệu tập 1, số 3+4, tr 116, 117, 118,128 21 Khoa Y học cổ truyền, trường Đại học Y Hà Nội (2005), Các thuốc trừ đàm, Bài giảng Y học cổ truyền, tập 1, Nhà xuất Y học 22 Phạm Khuê, Bùi Thị Nguyệt (1995), Bước đầu đánh giá tác dụng điều trị cholesterol máu cao ngưu tất, Luận văn tốt nghiệp bác sĩ chuyên khoa II, Đại học Y Hà Nội 23 Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt nam, Nhà xuất Y học, tr 44 - 47, 215 - 217, 222 - 223, 355 - 357, 366 - 368, 372 - 374, 379 382, 384 - 385, 396 - 397 24 Bùi Thị Mẫn (2004), Nghiên cứu tác dụng điều trị hội chứng rối loạn lipid máu viên BKC, Luận văn Thạc sỹ y học, Đại học Y Hà Nội 25 Phí Thị Ngọc (2001), Nghiên cứu tác dụng thuốc HHKV lên số số lipid máu thỏ chuột, Luận văn Thạc sỹ y học, Đại học Y Hà Nội 26 Đoàn Thị Nhu cộng (1997), Tác dụng chống tăng cholesterol huyết ngưu tất, Công trình nghiên cứu khoa học y dược, Hà Nội 27 Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Quang Hoan (1986), Nghiên cứu tác dụng dược lý ngưu tất tác dụng hạ cholesterol máu hạ huyết áp, Công trình nghiên cứu khoa học, Nhà xuất Y học, tr 145 - 149 28 Phạm Xuân Sinh, Phùng Hoà Bình (2000), Dược học cổ truyền, Nhà xuất Y học 29 Thông tin y dược Việt Nam, Xử trí chứng rối loạn lipid máu, (Online) http://www.cimsi.org.vn/TimMach 30 Hoàng Khánh Toàn, Chu Quốc Trường (1998), Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh hội chứng rối loạn lipid máu thể phong đàm Bán hạ bạch truật thiên ma thang, Luận văn Thạc sỹ y học, Học viện Quân y 31 Viện Y học cổ truyền Việt Nam (1993), Phương pháp bào chế sử dụng Đông dược, Nhà xuất Y học 32 Phạm Thị Bạch Yến (2009), Đánh giá tính an toàn hiệu điều trị hội chứng rối loạn lipid máu nấm Hồng chi Đà Lạt (Ganoderma lucidum), Luận án tiến sỹ y học, Đại học Y Hà Nội 33 Phạm Thị Bạch Yến, Đào Văn Phan (2007), Nghiên cứu tác dụng hạ lipid máu nấm Hồng chi Đà Lạt (Ganoderma lucidum) thực nghiệm, Tạp chí nghiên cứu y học, trường Đại học Y Hà Nội, số 5, tr 30 - 34 Footer Page 64 of 166 61 Header Page 65 of 166 Tiếng Anh 34 Abrham W.B (1978), Techniques of Animal and Clinical Toxicology, Med Pub Chicago, pp 55 - 68 35 Cimino M.C (2001), New OCED genetic toxicology guidelines and interpretation of results, W.n Chog (ed.), Genetic Toxicology and Cancer Risk Assessment, Marcel Dekker, Inc., New York, pp 223 - 248 36 David K et al (1987), Animal techniques for evaluating hypercholesterolemic drugs, Med Pub INC 35 East wacker drive, Chicago 37 Drew R.T et al (1978), Environmental inhalation chambers Methods of Animal Experimentation, Vol.IV Academic Press, New York, pp.1 - 41 38 E Walum (1998), Acute oral toxicity, Environ Health Perspect, April, 106(Suppl 2), pp 497 - 503 39 Han L.K (1999), Reduction in fat storage during chitin - chitosan treatment in mice fed a high - fat diet, In Obes Relat Metab Disord 23, pp 174 179 40 ICH (1996), Technical requirement for registration of pharmaceutical for human use Guidence on specific aspects of regulatory genotoxicity test for pharmaceuticals S2A document recommendated for adoption at step of the ICH process on july 19, 1995 federal register 61: 18198-18202, April 24, pp 275 - 291 41 National Toxicology Program (2008), Micronucleus, (Online) http://ntp.niehs.nih.gov/go/9401 42.Qed-experiment, Micronucleus Test, Introduction to GENETIC TOXICOLOGY, (Online) http://www.qedexperiment.com/genetictoxicology/1micronucleustest.html 43 Schlede E., Mischke U., Roll R., Kayser D (1992), A national validation study of the acute-toxic-class method an alternative to the LD50 test, Arch Toxicol, 66(7), pp 455 - 470 44 Trovato A et al (1996), Effects of fruit juices of Citrus sinensis L and Citrus limon L on experimental hypescholesterolemia in the rat, Phytomedicine Vol 2(3), pp 221 - 227 45 WHO (1992), Recomentations guiding physicians in biomedical research involving human subject, Declaration of Helsinki From World Drug Information, Vol N04, pp 186 - 188 46 WHO (1992), Report of the meeting of the working group on the safety and efficacy of herbal medicine, Manila, pp - - 10 47 WHO (1993), Research Guidelines for Evaluating the Safety and Efficacy of Herbal Medicines, Manila, Philippine, pp 35 - 41 48 Wikipedia, Micronucleus test, (Online) http://en.wikipedia.org/wiki/Micronucleus_test Footer Page 65 of 166 62 Header Page 66 of 166 Tiếng Trung 49 50 China Journal of Chinese Materia Medica (1999), , Vol 24, No5, (Online) http://www.wanfangdata.com.cn , (1999), , , , 307 - 316 Footer Page 66 of 166 63 ... hình nghiên cứu bào chế thuốc điều trị hội chứng rối loạn lipid máu 3.1 Ngoài nước Hiện y học đại có nhiều công trình nghiên cứu sản xuất thuốc điều trị hội chứng rối loạn lipid máu tạo sản phẩm... Nghiên cứu thuốc - Nghiên cứu thuốc Giáng ẩm điều trị hội chứng rối loạn lipid máu [15] - Nghiên cứu tác dụng thuốc THB94 điều chỉnh rối loạn lipid máu thể đàm thấp [1] - Nghiên cứu tác dụng điều chỉnh... loạn lipid máu [32] - Nghiên cứu tác dụng điều trị rối loạn lipid máu viên cholestin [2] Về công trình nghiên cứu sản xuất thuốc: có vài công trình nghiên cứu sản xuất thuốc hạ lipid máu từ dược