Nghiên cứu tác dụng chống lại vi khuẩn kháng kháng sinh (Moraxella catarrhalis) gây nhiễm đường hô hấp trên ở người của dịch lên men quả táo mèo (Docynia indica)

Header Page of 148 L IC M N V i lòng kính tr ng bi t n sơu sắc nh t xin đ c gửi l i c m n chơn thành t i TS Bùi Thị Việt Hà, ch nhi m b môn Vi sinh v t h c, tr h c T Nhiên- ĐH Qu c gia Hà N i Ng ng ĐH Khoa i đư t n tình ch b o, h ng d n t o m i u ki n giúp đ su t trình h c t p nh làm lu n văn Tôi xin gửi l i c m n t i toàn th cán b c a b môn Vi sinh v t h c, tr ng ĐH Khoa h c T Nhiên- ĐH Qu c gia Hà N i Trong trình làm lu n văn, đư nh n đ c s ch b o tr c ti p vƠ đ c t o u ki n thu n l i nh t Đ ng th i, chân thành c m n th y giáo, cô giáo t i khoa Sinh h c nói chung b môn Vi sinh v t h c, tr ng ĐH Khoa h c T Nhiên- ĐH Qu c gia Hà N i nói riêng đư t n tình d y d trình h c t p Cu i xin gửi l i bi t n sơu sắc đ n gia đình, ng b n nhóm Nh ng ng i thân toàn th i bên c nh đ ng viên, giúp đ th i gian h c t p Hà Nội, ngày 20 tháng 06 năm 2012 H c viên Nguyễn Thị Minh Thư Footer Page of 148 Header Page of 148 M CL C M Đ U Ch ng 1: T NG QUAN TÀI LI U 1.1 B NH NHI M KHU N HÔ H P NG 1.2 Moraxella catarrhalis VÀ B NH VIểM Đ I NG HÔ H P TRÊN 1.2.1 Đặc m hình thái nuôi c y 1.2.2 Vai trò c a M.catarrhalis b nh nhi m khu n hô h p 1.2.3 Tính kháng kháng sinh c a M catarrhalis 1.3 CH T KHÁNG SINH 10 1.3.1 Khái ni m 10 1.3.2 Ch t kháng sinh có ngu n g c t vi khu n 11 1.3.3 Ch t kháng khu n th c v t 14 1.3.4 C ch kháng khu n 15 1.4 CÂY TÁO MÈO VÀ D CH CHI T T QU TÁO MÈO 16 1.4.1 Đặc m th c v t h c 16 1.4.2 S phân b 17 1.4.3 Tác d ng d c lý 17 14.4 Thành ph n hóa h c 18 1.4.5 Tình hình nghiên c u táo mèo 18 Ch ng NGUYÊN LI U VẨ PH NG PHỄP 19 2.1 NGUYÊN LI U 19 2.1.1 Ngu n gi ng 19 2.1.2 Hóa ch t thi t b 19 Footer Page of 148 Header Page of 148 2.2 PH NG PHỄP 19 2.2.1 Ph ng pháp lên men qu táo mèo 19 2.2.2 Ph ng pháp phơn l p vi khu n 19 2.2.3 Xác đ nh ho t tính kháng sinh enzym 20 2.2.4 B o qu n gi ng 21 2.2.5 Xác đ nh sinh kh i ph 2.2.6 Xác đ nh y u t nh h ng pháp đo m t đ quang h c-OD ng t i kh sinh tr ng ho t tính 21 21 kháng khu n c a vi khu n 2.2.7 Tách chi t h p ch t d ch lên men vi khu n gi m táo mèo 22 2.2.8 Kh o sát s b thành ph n hóa h c d ch chi t qu táo mèo phân 25 đo n kháng khu n Ch ng 3: K T QU VÀ TH O LU N 28 3.1 HO T TÍNH KHÁNG Moraxella catarrhalis C A D CH LÊN MEN 28 QU TÁO MÈO 3.2 TUY N CH N CH NG VI SINH V T 29 3.2.1 Phân l p n ch n ch ng vi sinh v t kháng Moraxella catarrhalis 29 3.2.2 Phân lo i ch ng vi khu n đư n ch n 30 3.3 ĐI U KI N NUÔI C Y THÍCH H P CHO SINH TR NG VÀ 32 HO T TÍNH KHÁNG KHU N 3.3.1 L a ch n môi tr ng nuôi c y thích h p 32 3.3.2 Ngu n cacbon thích h p 33 3.3.3 Ngu n nit thích h p 34 3.3.4 L a ch n pH nuôi c y thích h p 36 3.3.5 L a ch n nhi t đ thích h p 37 3.3.6 L a ch n th i gian nuôi c y thích h p 38 3.3.7 Kh sinh enzym ngo i bào c a TM5.2 39 Footer Page of 148 Header Page of 148 3.4 TÁCH CHI T CH T KHÁNG KHU N T D CH CHI T TÁO MÈO 39 VÀ D CH LÊN MEN VI KHU N 3.4.1 Kh o sát h dung môi rửa gi i pha rắn h p ph 40 3.4.2 Tách chi t phơn đo n ch t kháng khu n c a d ch lên men vi khu n 40 3.4.3 Tách chi t phơn đo n ch t kháng khu n t d ch chi t táo mèo 41 3.4.4 Sắc ký b n m ng phơn đo n kháng khu n c a d ch lên men ch ng 42 TM5.2 d ch chi t táo mèo 3.5 NGHIÊN C U S B THÀNH PH N HÓA H C CAO D CH LÊN 42 MEN, D CH CHI T TỄO MỆO VẨ CỄC PHỂN ĐO N 3.5.1 S b thành ph n hóa h c c a cao d ch chi t táo mèo vƠ phơn đo n 42 K T LU N 45 TÀI LI U THAM KH O PH L C Footer Page of 148 Header Page of 148 B NG M T S Footer Page of 148 KÝ HI U VI T T T CKS Ch t kháng sinh CMC Carboxymethylcellulose DMSO Dimethyl sulfoxide HTKK Ho t tính kháng khu n LB Môi tr PĐ Phơn đo n TCA Tricloacetic VSV Vi sinh v t ng Luria Bertani Header Page of 148 DANH SÁCH B NG BI U, BI U Đ B ng 1.1: Tỷ l vi khu n gây b nh viêm h ng m n tính B ng 1.2: Tỷ l kháng kháng sinh c a M.catarrhalis B ng 1.3:Tỷ l loài có kh sinh CKS 10 B ng 1.4: So sánh bacteriocin ch t kháng sinh 13 B ng 2.1: Thông s thi t k c t nh i 23 B ng 3.1: Ho t tính kháng M.catarrhalis c a d ch lên men qu táo mèo 28 B ng 3.2: Ho t tính kháng M.catarrhalis c a ch ng vi khu n 29 B ng 3.3: Ho t tính kháng khu n c a ch ng TM5.2 lên ch ng vi khu n 29 ki m đ nh Hình 3.1: V trí phân lo i c a ch ng TM5.2 v i loài quan h h hàng g n 32 B ng 3.4: nh h 33 ng c a môi tr ng nuôi c y đ n kh sinh tr ng ho t tính kháng khu n c a ch ng TM5.2 Hình 3.2: Ho t tính kháng khu n c a TM5.2 môi tr B ng 3.5: nh h ng ng c a ngu n cacbon đ n kh sinh tr 33 ng ho t 34 tính kháng khu n c a TM5.2 Hình 3.3: nh h ng c a ngu n cacbon lên kh sinh tr ng ho t 34 tính kháng khu n c a TM5.2 B ng 3.6: nh h ng c a ngu n nit đ n kh sinh tr ng ho t tính 35 ng ho t tính 35 kháng khu n c a TM5.2 Hình 3.4: nh h ng c a ngu n nit đ n kh sinh tr kháng khu n c a TM5.2 Footer Page of 148 Header Page of 148 B ng 3.7: nh h ng c a pH ban đ u đ n sinh tr ng, ho t tính kháng khu n 36 Hình 3.5: nh h ng c a pH ban đ u đ n sinh tr ng HTKK c a TM5.2 36 B ng 3.8: nh h ng c a nhi t đ đ n kh sinh tr c a TM5.2 ng ho t tính 37 ng ho t tính 37 kháng khu n c a TM5.2 Hình 3.6: nh h ng c a nhi t đ đ n kh sinh tr kháng khu n c a TM5.2 B ng 3.9: nh h ng c a th i gian nuôi c y đ n kh sinh tr ng 38 ng 39 ho t tính kháng khu n c a TM5.2 Hình 3.7: nh h ng c a th i gian nuôi c y đ n kh sinh tr ho t tính kháng khu n c a TM5.2 B ng 3.10: Kh sinh enzym ngo i bào 39 B ng 3.11: K t qu thử ho t tính kháng khu n c a phơn đo n tách t d ch 40 chi t lên men B ng 3.12: K t qu thử ho t tính kháng khu n M.catarrhalis c a cao d ch 41 chi t táo mèo t i n ng đ khác B ng 3.13: K t qu thử ho t tính kháng khu n M.catarrhalis c a phân 42 đo n t d ch chi t táo mèo B ng 3.14: K t qu thử đ nh tính nhóm h p ch t c a d ch chi t qu táo mèo vƠ phơn đo n Footer Page of 148 43 Header Page of 148 M Nhi m khu n đ Đ U ng hô h p c p b nh lý có tỷ l tử vong đ ng đ u s n 10 b nh lý nhi m khu n c có thu nh p th p Ch phòng ch ng nhi m khu n hô h p c p đư đ ch đ ng trình nƠy đư đ ng trình toƠn c u v c WHO phát đ ng, t i Vi t Nam c tri n khai t năm 1984 Ki m soát phòng ch ng b nh c u tiên hƠng đ u t i n c phát tri n có Vi t Nam, nh ng đư vƠ ch u tác đ ng b t l i c a s phát tri n lan truy n tình tr ng kháng kháng sinh c a vi khu n gây b nh B nh nhi m khu n đ nhi m khu n đ ng hô h p c p g m nhi m khu n đ ng hô h p d ng hô h p i Tỷ l mắc b nh nhi m khu n đ chi m ph n l n so v i b nh v hô h p khác, b nh th ng hô h p ng gặp, mắc hàng năm, theo mùa nh ng có th gây nhi u bi n ch ng nặng nh viêm tai gi a, viêm màng não, áp xe não, áp xe sau thành h ng Khi mắc viêm đ lây nhi m xu ng đ ng hô h p d th th y b nh gây nh h ng hô h p có th i gây viêm khí, ph qu n viêm ph i nặng Có ng đáng k đ n s c kh e đặc bi t v i trẻ em, ng i già gây thi t h i kinh t Moraxella catarrhalis lƠ nguyên gơy ph n l n tr b nh nhi m khu n hô h p, đặc bi t hi n đ ng h p mắc c coi nh tác nhân gây b nh viêm tai gi a ph bi n th ba sau Streptococcus pneumoniae Haemophilus influenzae Trong M catarrhalis hi n đư kháng l i h u h t ch t kháng sinh thu c nhóm beta-lactam, ch nh y c m v i cephalosporin th h 2, ciprofloxacin thu c h quinolon Th c tr ng kháng kháng sinh c a M catarrhalis nói riêng, vi khu n gây b nh truy n nhi m nói chung đư vƠ đem đ n gánh nặng kinh t , xã h i vi c thay th kháng sinh th h cũ kháng sinh th h m i đắt ti n V i s phát tri n c a ngành công ngh sinh h c hi n đ i đem l i m t tri n v ng l n cho n n Y h c tìm ki m thêm nh ng h p ch t t nhiên h tr cho vi c phòng u tr b nh Các h p ch t góp ph n gi m tác d ng ph không mong mu n Footer Page of 148 Header Page of 148 c a h p ch t t ng h p, gi m gánh nặng v mặt kinh t cho ng i b nh xã h i T ngƠn x a, ông cha ta đư l u truy n r t nhi u thu c dân gian t cây, c ch a b nh đ ng hô h p r t nhi u b nh khác Hi n táo mèo s n ph m ch bi n t táo mèo đặc bi t gi m táo mèo đ c ng đ ng nh m t thu c ch ng béo phì, tăng c c lan truy n r ng rãi ng mi n d ch, kháng khu n, gi m ch ng suy hô h p Trên th gi i táo mèo phân b t i Trung Qu c, Đ , Myanma, t i Vi t Nam t p trung n t nh Yên Bái, S n La, LƠo Cai, Lai Chơu vƠ Lơm Đ ng Năm 2010 đư có nh ng nghiên c u s b v i k t qu kh quan v tác d ng kháng khu n, có M catarrhalis gây b nh hô h p c a d ch lên men qu táo mèo đư m m t h ng nghiên c u m i nh đ nh h ng ng d ng c a d ch lên men qu táo mèo vi c h tr nâng cao th tr ng cho ng i V i m c tiêu góp ph n ch ng minh làm sáng t vai trò ch đ o c a tác nhân có d ch lên men qu táo mèo theo kinh nghi m dân gian, đặc bi t công d ng kháng vi khu n gơy viêm đ ng hô h p kháng kháng sinh thông d ng, ti n hành th c hi n đ tài: “ Nghiên cứu tác dụng chống l i vi khuẩn kháng kháng sinh (Moraxella catarrhalis) gây nhiễm đường hô hấp người dịch lên men qu táo mèo (Docynia indica)” Footer Page of 148 Header Page 10 of 148 Ch 1.1 ng 1: T NG QUAN TÀI LI U B NH NHI M KHU N HÔ H P NG I Nhi m khu n hô h p tình tr ng m t m t s b ph n thu c b máy hô h p b viêm nhi m vi khu n virut gây V ph ng di n lâm sàng, nhi m khu n hô h p g m hai lo i: nhi m khu n hô h p nhi m khu n hô h p d i Nhi m khu n hô h p không ph i m t b nh lý riêng bi t mà g m nhi u b nh lý (các b nh tai mũi h ng) nh : + Viêm mũi + Viêm h ng + Viêm amidan + Viêm tai gi a + Viêm xoang B nh nhi m khu n hô h p d iđ c coi b nh c nh nặng nh ng th c t b nh chi m tỷ l th p không d mắc Trong nhi m khu n hô h p ch ng b nh th ng gặp hƠng năm, mắc tái di n theo mùa, tái mắc nhi u l n năm, d gây bi n ch ng nặng n chi m tỷ l l n so v i b nh v hô h p khác Theo th ng kê c a t ch c y t Hoa Kỳ, trung bình ng viêm đ i tr ng thành có th b ng hô h p kho ng ậ l n m i năm vƠ s nƠy cao h n r t nhi u trẻ em, trẻ có th nhi m đ n 10 l n M i năm t i Hoa Kỳ, nhi m khu n hô h p gây gi m kh lƠm vi c 170 tri u ngày, 23 tri u ngày trẻ ph i ngh h c, 18 tri u ngày ph i ngh lƠm Đi u cho th y dù lo i b nh đ c cho t kh i nh ng chúng đư gơy nh ng thi t h i đáng k không ch v s c kh e mà c v kinh t xã h i Đ it ng mắc b nh ch y u trẻ em kho ng tỷ l vong đ tu i d c tính toàn c u m i năm có t trẻ b b nh nhi m khu n hô h p c p, chi m 15 -20% s tử i T i khu v c Đông Nam Ễ, có Vi t Nam b nh nguyên nhân cao nh t (25%) gây tử vong trẻ, ti p theo tiêu ch y vƠ s sinh k t h p v i b nh khác, l i nguyên nhân khác [22] Footer Page 10 of 148 trẻ em Header Page 50 of 148 B ng 3.14: Kết qu thử định tính nhóm hợp chất dịch chiết qu táo mèo phân đo n Nhóm ch t K t qu Thu c thử Cao c n PĐ1 PĐ2 PĐ3 Shinoda ++ ++ + + Diazo - + - - NaOH 10% ++ +++ ++ ++ H2SO4 ++ ++ + + - + - - Acetat chì ++ ++ + + Dragendorf ++ +++ + + +++ + + ++ Flavonoit Galatin/ Tannin Ankaloit Glycozit NaCl KellerKillian Ghi chú: + : Ph n ng d ng tính - : Ph n ng âm tính K t qu cho th y d ch chi t qu táo mèo nh m i phơn đo n đ u có nhóm ch t: flavonoit, tannin, ankaloit, glycozit v i hƠm l ng khác V i thu c thử (ph ng pháp đ nh tính) khác k t qu thu đ c r t khác nhau, ví d đ i v i vi c đ nh tính nhóm flavonoit, dùng thu c thử diazo NaOH 10% k t qu r t khác đ nh y c a m i thu c thử v i t ng nhóm ch t khác 43 Footer Page 50 of 148 Header Page 51 of 148 K t qu đ nh tính cho th y phơn đo n 1(PĐ1) giàu nhóm flavonnoit ankaloit h n phơn đo n hai vƠ ba (PĐ2, PĐ3); phơn đo n l i giàu nhóm glycozit h n phơn đo n K t qu thử ho t tính kháng M catarrhalis (b ng 3.13) l i cho th y HTKK c a phơn đo n cao nh t Nh v y có th ho t tính kháng khu n ch ng M catarrhalis liên quan đ n hƠm l ng s có mặt c a m t s ch t nƠo thu c nhóm flavonoit ankaloit 44 Footer Page 51 of 148 Header Page 52 of 148 K T LU N Sau ti n hành nghiên c u tác d ng kháng khu n Moraxella catarrhalis kháng kháng sinh gơy viêm đ thu đ ng hô h p c a d ch lên men qu táo mèo, chúng c m t s k t qu sau: D ch lên men qu táo mèo có kh kháng M catarrhalis kháng kháng sinh pH n ng đ ch t d ch nh h ng đ n ho t tính kháng M catarrhalis Phân l p, n ch n đ c ch ng TM5.2 t d ch lên men qu táo mèo có ho t tính kháng khu n M catarrhalis m nh nh t n đ nh nh t Ch ng TM5.2 thu c loài Bacillus subtilis, chi Bacillus, có kh sinh tr ng t t môi tr ng LB, ngu n cacbon tinh b t, ngu n nit lƠ cao n m men, pH 7, nhi t đ 300C, th i gian lên men thích h p 48- 72 gi Tách chi t đ c phơn đo n có ho t tính kháng M catarrhalis t d ch lên men ch ng TM5.2 T d ch chi t qu táo mèo tách chi t đ c phơn đo n có ho t tính kháng khu n M catarrhalis Các phơn đo n có ho t tính kháng M catarrhalis t d ch lên men ch ng TM5.2 d ch chi t qu táo mèo đ u ch a nhi u ch t khác Qu táo mèo, phơn đo n có ho t tính kháng khu n c a d ch chi t qu táo mèo đ u có đ y đ nhóm ch t nh flavonoit, tannin, ankaloit, glycozit Ho t tính kháng khu n ch ng M catarrhalis c a phơn đo n kháng khu n thu đ c t d ch chi t táo mèo có th liên quan đ n hƠm l ng s có mặt c a m t s ch t nƠo thu c nhóm nhóm flavonoit ankaloit KI N NGH Ti p t c nghiên c u n ch n ch ng vi khu n khác d ch lên men qu táo mèo có kh kháng M catarrhalis kháng kháng sinh Nghiên c u b n ch t hóa h c c a ch t kháng M catarrhalis kháng kháng sinh thu đ c t d ch lên men ch ng TM5.2 t d ch chi t qu táo mèo 45 Footer Page 52 of 148 Header Page 53 of 148 TÀI LI U THAM KH O I TÀI LI U VI T NAM Nguy n Văn B n (1996), Phân tích sàng lọc hóa thực vật, T p II, tr 132-169 Nguy n Đình B ng (1992), “V n đ kháng sinh Tai Mũi H ng” , Chuyên đề Tai Mũi ảọng, tr 20-24 Nguy n Th Ng c Bích (2007), Nghiên cứu giá trị ph ơng pháp cấy đờm tìm vi khuẩn chẩn đoán nguyên nhân nhiễm khuẩn hô hấp, Lu n văn t t nghi p bác sỹ chuyên khoa II, H c viên Quân y Ph m Văn Ca (2005), “T n su t bắt gặp Moraxella catarrhalis vi khu n gây b nh m c đ kháng thu c t i Vi t Nam”, T p chí Y học dự phòng, 15(1), tr 55 ậ 59 Đinh Th Kim Chung (2007), “ nh h ng c a m t s y u t t i trình lên men vang tóa mèo (Docynia indica)”, T p chí KH&CN, 45(2), tr 87 ậ 92 Danh lục loài Thực vật (2006), T p II Bùi Xuơn Đ ng (2000), Vi nấm dùng công nghệ sinh học, Nxb Khoa h c kỹ thu t, Hà N i ĐƠo Đình Đ c, Lê Đăng HƠ, Ph m Văn Ca (1996), Tình hình nhiễm khuẩn kháng kháng sinh số vi khuẩn gây bệnh t i bệnh viện B ch Mai năm (1990-1994), M t s công trình nghiên c u v đ nh y c m c a vi khu n v i thu c khánh sinh (1994-1995), tr 30-32 Bùi Th Vi t Hà (2006), Nghiên cứu x khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật Việt Nam, Lu n án Ti n sỹ sinh h c 10 Nguy n Minh H i, Nguy n Ti n (2007), “ Nghiên c u nguyên vi khu n đ m tính nh y c m kháng sinh c a chúng đ t bùng phát c a COPD”, T p chí y học lâm sàng, 108 Footer Page 53 of 148 Header Page 54 of 148 11 Tr n Th Thu Hằng (2009), Thuốc sử dụng hóa trị liệu, D ợc lực học, Nxb Ph 12 ng Đông, tr 681 ậ 685 Ph m Th Hóa, Lê Kim Ph ng, L ng L Nhi (2010), Hợp chất thiên nhiên thuốc y học cổ truyền, D ợc học cổ truyền, B môn d ch c c truy n, tr 11 ậ 24 13 Nguy n H ng Lâm, (2009), Nghiên cứu tình hình kháng kháng sinh vi khuẩn Moraxella catarrhalis kh măng gây bệnh chúng t i bệnh viện Tai Mũi ảọng Trung ơng từ tháng năm 2007 đến tháng năm 2008, Khóa lu n t t nghi p, tr 14 ng Đ i hoc Khoa H c T nhiên Ph m Thùy Linh (2010), Nghiên cứu công nghệ s n xuất sử dụng chất diệt khuẩn sinh học (nicin enterocin) dùng b o qu n nông s n thực phẩm, Lu n án ti n sỹ sinh h c, Vi n công ngh Sinh h c, Vi n Khoa h c Công ngh Vi t Nam 15 Nguy n Th Thanh Loan c ng s (2011), “ Tác d ng ch ng béo phì gi m tr ng l ng c a d ch chi t qu táo mèo Docynia indica (Wall.) Decne mô hình chu t béo phì th c nghi m”, T p chí Khoa học Đ i học Quốc gia Hà Nội, 27, tr 125 ậ 133 16 Đ T t L i (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y h c 17 Vũ Văn Ngũ (1987), Các tác nhân gây viêm cấp tính đ ờng hô hấp d ới trẻ em d ới tuổi, Nxb Y h c, tr 3-7 18 Nguy n Phi Kim Ph ng (2007), Ph ơng pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nxb ĐH Qu c gia TP H Chí Minh 19 Đ Quy t (2010), “Nguyên nhơn vi khu n giai đo n đ u vƠ sau đ t bùng phát b nh ph i tắc ngh n m n tính”, T p chí y – d ợc học quân sự, 20 Vũ Th H nh Tâm (2011), Nghiên cứu tác dụng h lipid đ ờng huyết dịch chiết qu táo mèo (Docynia indica (Wall.) Dene) mô hình chuột thực nghiệm, Lu n văn t t nghi p, Tr nhiên Hà N i Footer Page 54 of 148 ng Đ i h c Khoa h c T Header Page 55 of 148 Hoàng Th Minh Tân (2009), Nghiên cứu tách chiết số hợp chất tự 21 nhiên từ táo mèo có tác dụng chống rối lo n trao đổi gluxit, lipid, Lu n văn th c sỹ sinh h c WHO (2008), Gánh nặng bệnh tật toàn cầu: cập nhật 2004 22 II 23 TÀI LI U TI NG ANH Akinjogunla, O.J and Eghafona, N.O (2011), “Prevalence, Haemolytic activities and flouroquinolones susceptibility profiles of Moraxella catarrhalis, Streptococcus pneumoniae associated with acut otitis media”, Nature and Science, 9(6), pp 85 ậ 92 24 Austria R (1981), “Pneumococcus: The first one hundred years”, Rev Infect, 3, pp ậ 183 25 Borris, R.P (1996), “ Natural products research: perspective from a major pharmaceutical company”, J Ethnopharmacol, 51, pp 29 ậ 38 26 Catlin BW (1990), “Branhamella catarrhalis: an organism gaining respect as a pathogen”, Clinical Microbiology Reviews, 3, pp 293 ậ 320 27 Cees M Verduin, Cees Hol, Andre Fleer, Hans van Dijk, and Alexvan Belkum (2002), “ Moraxella catarrhalis: from Emerging to Established pathogen”, Clinical Microbiology Reviews, 15(1), pp 125 ậ 144 28 Chen H., Hoover D.G (2003), “Bacteriocins and their food application”, Compre Rev in Foood Scien Food Safety, 2(3), pp 82-100 29 Cleveland J., Montville T J., Nes I F., Chikindas M L (2001), “Bacteriocins: Safe, natural antimicrobials for food preservation”, Int J Food Microbiol, 71, pp 1-20 30 Critchley et al (2002), “Antimicrobial resistance among respiratory pathogens collected in Thailand during 1999- 2000”, J Chemother, 14, pp 147- 154 Footer Page 55 of 148 Header Page 56 of 148 31 Dask., R.K.S Tiwari and D.K.Shrivastava (2010), “ Techniques for evaluation of medicinal plant products as antimicrobial agent: Curent methods and future trends”, Journal of Medicinal Plants Research, (2), pp 104-111 32 Ejlertsen T, Thisted E, Ebbesen F, Olesen B, Renneberg J (1994), “ Branhamella catarrhalis in children and adults A study of prevalence, time of coloisation, and association with upper and lower respiratory tract infections”, J Infect, 29, pp 23- 31 33 Fang G., Fine M., Orloff J., et al (1990), “New and emerging etilogies for community ậ acquired pneumonia with implications for therapy”, Medicine, 69, pp 307 ậ 316 34 FAO yearbook (2008), pp 35 ậ 37 35 Frances M.Boyle, Paul R Georghiou, martyn H Tilse & Joseph G McCormack (1991), " Branhamella (Moraxella) catarrhalis: pathogenic significance in respiratory infection", The Medical Journal of Australia, 154, pp 592-596 36 Hongli Qiu, Wakako Kumita, Kenya Sato , Shinichi Nakajima, Hiroyuki Nishiyama , Ryoichi Saito, Etsuko Sawabe, Emi Ono, Toshio Chida and Noboru Okamura (2009), “uspA1 of Moraxella catarrhalis Clinical Isolates in Japan and its Relationship with Adherence to HEp-2 Cells”, Med Dent Sci, 56, pp 61-67 37 Jacobs MR (1996), “ Increaing importance f antibiotic ậ resistant Streptococcus pneumoniae in acute otitis media”, Pediatric Infect Dis J 15, pp 940 ậ 943 38 Karalus, R., and A.Campagnan (2000), “Moraxella catarrhalis, a review of an important human mucosal pathogen”, Microbes Infect, 2, pp 547 ậ 559 39 Klaenhammer T.R (1993), “Genetics of bacteriocins produced by lactic acid bacteria”, FEMS Microbiol Rev, 12, pp 39-85 Footer Page 56 of 148 Header Page 57 of 148 40 Krystal, Reval, LauraA.Dobbs, Sungeeta Narr, Janak A.Patel, Jame J.Grady, Tasnee Chonmaitree (2007), “Incidence of Acute Otiris Media and Sinusitis complicating Upper Respiratory Tract Infection: The effect of age”, Pediatric, 119(6), pp 1408- 1412 41 M.C.Enright, H.Mc Kenzie (1997), “Moraxella (Branhamella) catarrhalis ậ clinical and molecular aspects of a redicovered pathogen”, J.Med Microbiol, 46, pp 360- 371 42 Marjorie Murphy Cowan (1999), “ Plant products as antimicrobial agents”, Clinical Microbiology Reviews, 12(4), pp 564- 582 43 Meyer GA, Shope TR, Waecker NJ, Lanningham FH (1995), “ Moraxella (Branhamella) catarrhalis bacteremia in children A report of two patients and review of literature”, Clin Pediatr, 34, pp 146- 150 44 Moerman, D.E (1996), “ An analysis of the food plants and drug plants of native North America”, I.Ethopharmacol, 58, pp 85- 88 45 Riley M.A., Wertz J.E (2002), “Bacteriocins: evolution, ecology, and application”, Annual Review of Microbiology, 56, pp 117-137 46 Rohani et al (1999), “Antimicrobial resistance among respiratory pathogens collected in Malaysia”, Int Med Res J, 3, pp 57 47 Timothy F Murphy, G Iyer Parameswaran, (2009), “Moraxella catarrhalis, a Human Respiratory Tract Pathogen”, Clinical Infectious Diseases, 49, pp 124ậ31 48 Vaneechoutte M, Verschraegen G, Clayeys G, Weise B, Van den Abeele (1990), “Respiratory tract carrier rates of Moraxella (Branhamella) catarrhalis in adults and children and interpretation of the isolation of M.catarrhalis from sputum”, J Clin Microbiol, 28, pp 2674 ậ 2680 49 Vu Thi Hue, Bui Thi Viet Ha (2010), “ Study on antibacterial activity toward bacteria causing upper respiratory (Moraxella catarrhalis) of Bacillus sp TM1.2 isolated from vinegar Docynia fruit (Docynia indica (Wall.) Decne)”, J Scien anh Technol, 26(4), pp 537-542 Footer Page 57 of 148 Header Page 58 of 148 CÁC WEBSITE 50 http://www.duoclieu.org Footer Page 58 of 148 Header Page 59 of 148 PH L C Ph l c 01 Thành ph n môi tr Môi tr ng th ch th ng Peptone 10g N 20ml c mắm Th ch 16g N 1000ml cc t pH Môi tr ng LB Peptone 10g Cao n m men 5g NaCl 5g N 1000ml cc t pH Môi tr Giá đ Glucoza N pH Footer Page 59 of 148 cc t ng giá đ 100g 10g 1000ml 6,8 ng nuôi c y VSV sử d ng nghiên cứu Header Page 60 of 148 Ph l c 02: M t s hình nh liên quan đ n lu n văn Hình 1: Khuẩn l c chủng TM5.2 Hình 3: Khuẩn l c M.catarrhalis Footer Page 60 of 148 Hình 2: T bào chủng TM5.2 (x 10.000) Hình 4: T bào M.catarrhalis Header Page 61 of 148 Hình 5: Qu táo mèo Hình 6: D ch lên men qu táo mèo Footer Page 61 of 148 Header Page 62 of 148 Hình 7: Ho t tính kháng M.catarrhalis d ch lên men qu táo mèo 1: D ch lên men qu táo mèo nguyên ch t (pH 4,3) 2: D ch lên men qu táo mèo nguyên ch t (pH 7) 3: Đ i chứng Hình 8: Ho t tính kháng M.catarrhalis d ch lên men qu táo mèo v i tỷ l pha khác v i n 1: D ch lên men qu táo mèo nguyên ch t 2: Tỷ l 1:1 3: Tỷ l 1:2 4: Tỷ l 1:3 5: Tỷ l 1:4 6: Đ i chứng Footer Page 62 of 148 c c t Header Page 63 of 148 Hình 9: Ho t tính kháng M.catarrhalis Hình 10: Ho t tính kháng chủng TM5.2 M.catarrhalis phơn đo n 1: D ch lên men TM5.2 tách chi t từ d ch lên men TM5.2 2: Đ i chứng 1: PĐ - 4: Đ i chứng 3: PĐ Hình 11: Ho t tính kháng khuẩn Hình 12: Ho t tính kháng khuẩn M.catarrhalis cao d ch chi t táo M.catarrhalis phơn đo n mèo n ng đ khác tách chi t từ qu táo mèo 1: N ng đ cao 50mg/ml 1: PĐ 2: PĐ 2: N ng đ cao 100mg/ml 3: PĐ 4: Đ i chứng 3: Đ i chứng Footer Page 63 of 148 Header Page 64 of 148 PĐ PĐ Hình 13: S c ký b n m ng phơn đo n có ho t tính kháng khuẩn d ch lên men chủng TM5.2 PĐ PĐ PĐ Hình 14: S c ký b n m ng phơn đo n có ho t tính kháng khuẩn d ch chi t qu táo mèo Footer Page 64 of 148 ... th c hi n đ tài: “ Nghiên cứu tác dụng chống l i vi khuẩn kháng kháng sinh (Moraxella catarrhalis) gây nhiễm đường hô hấp người dịch lên men qu táo mèo (Docynia indica) Footer Page of 148 Header... a tác nhân có d ch lên men qu táo mèo theo kinh nghi m dân gian, đặc bi t công d ng kháng vi khu n gơy vi m đ ng hô h p kháng kháng sinh thông d ng, ti n hành th c hi n đ tài: “ Nghiên cứu tác. .. đích nghiên c u cách sử d ng ch t kháng sinh  D a vào m c đ tác d ng: kháng sinh di t khu n, kháng sinh c ch kìm hãm vi khu n  D a vào ph tác d ng kháng sinh: ch t kháng sinh ph hẹp, ch t kháng