Luận văn được thực hiện nhằm mục tiêu góp phần chứng minh và làm sáng tỏ vai trò chủ đạo của các tác nhân có trong dịch lên men quả táo mèo theo kinh nghiệm dân gian, đặc biệt là công dụng kháng vi khuẩn gây viêm đường hô hấp trên đã kháng kháng sinh thông dụng.
LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng và biết ơn sâu sắc nhất tơi xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới TS. Bùi Thị Việt Hà, chủ nhiệm bộ mơn Vi sinh vật học, trường ĐH Khoa học Tự Nhiên ĐH Quốc gia Hà Nội. Người đã ln tận tình chỉ bảo, hướng dẫn và tạo mọi điều kiện giúp đỡ tơi trong suốt q trình học tập cũng như làm luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn tới tồn thể cán bộ của bộ mơn Vi sinh vật học, trường ĐH Khoa học Tự Nhiên ĐH Quốc gia Hà Nội. Trong q trình làm luận văn, tơi đã ln nhận được sự chỉ bảo trực tiếp và được tạo điều kiện thuận lợi nhất. Đồng thời, tơi chân thành cảm ơn các thầy giáo, cơ giáo tại khoa Sinh học nói chung và bộ mơn Vi sinh vật học, trường ĐH Khoa học Tự Nhiên ĐH Quốc gia Hà Nội nói riêng đã tận tình dạy dỗ tơi trong q trình học tập Cuối cùng tơi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân và tồn thể các bạn trong nhóm. Những người ln bên cạnh động viên, giúp đỡ tơi trong thời gian học tập Hà Nội, ngày 20 tháng 06 năm 2012 Học viên Nguyễn Thị Minh Thư MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 BỆNH NHIỄM KHUẨN HÔ HẤP Ở NGƯỜI 1.2 Moraxella catarrhalis VÀ BỆNH VIÊM ĐƯỜNG HÔ HẤP TRÊN 1.2.1 Đặc điểm hình thái ni cấy 1.2.2 Vai trị M.catarrhalis bệnh nhiễm khuẩn hơ hấp 1.2.3 Tính kháng kháng sinh M catarrhalis 1.3 CHẤT KHÁNG SINH 10 1.3.1 Khái niệm 10 1.3.2 Chất kháng sinh có nguồn gốc từ vi khuẩn 11 1.3.3 Chất kháng khuẩn thực vật 14 1.3.4 15 Cơ chế kháng khuẩn 1.4 CÂY TÁO MÈO VÀ DỊCH CHIẾT TỪ QUẢ TÁO MÈO 16 1.4.1 Đặc điểm thực vật học 16 1.4.2 17 Sự phân bố 1.4.3 Tác dụng dược lý 17 14.4 Thành phần hóa học 18 1.4.5 Tình hình nghiên cứu táo mèo 18 Chương NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 19 2.1 NGUYÊN LIỆU 19 2.1.1 Nguồn giống 19 2.1.2 Hóa chất thiết bị 19 2.2 PHƯƠNG PHÁP 19 2.2.1 Phương pháp lên men táo mèo 19 2.2.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn 19 2.2.3 Xác định hoạt tính kháng sinh enzym 20 2.2.4 Bảo quản giống 21 2.2.5 Xác định sinh khối phương pháp đo mật độ quang học-OD 21 2.2.6 Xác định yếu tố ảnh hưởng tới khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn vi khuẩn 2.2.7 Tách chiết hợp chất dịch lên men vi khuẩn giấm táo mèo 21 2.2.8 Khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết táo mèo phân đoạn kháng khuẩn Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 HOẠT TÍNH KHÁNG Moraxella catarrhalis CỦA DỊCH LÊN MEN QUẢ TÁO MÈO 3.2 TUYỂN CHỌN CHỦNG VI SINH VẬT 28 22 28 29 3.2.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật kháng Moraxella catarrhalis 29 3.2.2 Phân loại chủng vi khuẩn tuyển chọn 30 3.3 ĐIỀU KIỆN NI CẤY THÍCH HỢP CHO SINH TRƯỞNG VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN 3.3.1 Lựa chọn mơi trường ni cấy thích hợp 32 3.3.2 Nguồn cacbon thích hợp 33 3.3.3 Nguồn nitơ thích hợp 34 3.3.4 Lựa chọn pH ni cấy thích hợp 36 3.3.5 Lựa chọn nhiệt độ thích hợp 37 3.3.6 Lựa chọn thời gian ni cấy thích hợp 38 3.3.7 Khả sinh enzym ngoại bào TM5.2 39 3.4 TÁCH CHIẾT CHẤT KHÁNG KHUẨN TỪ DỊCH CHIẾT TÁO MÈO VÀ DỊCH LÊN MEN VI KHUẨN 3.4.1 Khảo sát hệ dung môi rửa giải pha rắn hấp phụ 39 3.4.2 Tách chiết phân đoạn chất kháng khuẩn dịch lên men vi khuẩn 40 3.4.3 Tách chiết phân đoạn chất kháng khuẩn từ dịch chiết táo mèo 41 3.4.4 Sắc ký mỏng phân đoạn kháng khuẩn dịch lên men chủng TM5.2 dịch chiết táo mèo 3.5 NGHIÊN CỨU SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO DỊCH LÊN MEN, DỊCH CHIẾT TÁO MÈO VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN 3.5.1 Sơ thành phần hóa học cao dịch chiết táo mèo phân đoạn 42 KẾT LUẬN 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 32 40 42 42 BẢNG MỘT SỐ KÝ HIỆU VIẾT TẮT CKS Chất kháng sinh CMC Carboxymethylcellulose DMSO Dimethyl sulfoxide HTKK Hoạt tính kháng khuẩn LB Mơi trường Luria Bertani PĐ Phân đoạn TCA Tricloacetic VSV Vi sinh vật DANH SÁCH BẢNG BIỂU, BIỂU ĐỒ Bảng 1.1: Tỷ lệ vi khuẩn gây bệnh viêm họng mạn tính Bảng 1.2: Tỷ lệ kháng kháng sinh M.catarrhalis Bảng 1.3:Tỷ lệ lồi có khả sinh CKS 10 Bảng 1.4: So sánh bacteriocin chất kháng sinh 13 Bảng 2.1: Thông số thiết kế cột nhồi 23 Bảng 3.1: Hoạt tính kháng M.catarrhalis dịch lên men táo mèo 28 Bảng 3.2: Hoạt tính kháng M.catarrhalis chủng vi khuẩn 29 Bảng 3.3: Hoạt tính kháng khuẩn chủng TM5.2 lên chủng vi khuẩn kiểm định 29 Hình 3.1: Vị trí phân loại chủng TM5.2 với lồi quan hệ họ hàng gần 32 Bảng 3.4: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn chủng TM5.2 33 Hình 3.2: Hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 mơi trường 33 Bảng 3.5: Ảnh hưởng nguồn cacbon đến khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 34 Hình 3.3: Ảnh hưởng nguồn cacbon lên khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 34 Bảng 3.6: Ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 35 Hình 3.4: Ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 35 Bảng 3.7: Ảnh hưởng pH ban đầu đến sinh trưởng, hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 Hình 3.5: Ảnh hưởng pH ban đầu đến sinh trưởng HTKK TM5.2 36 Bảng 3.8: Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 Hình 3.6: Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 Bảng 3.9: Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 Hình 3.7: Ảnh hưởng thời gian ni cấy đến khả sinh trưởng hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 Bảng 3.10: Khả sinh enzym ngoại bào 37 Bảng 3.11: Kết thử hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn tách từ dịch chiết lên men Bảng 3.12: Kết thử hoạt tính kháng khuẩn M.catarrhalis cao dịch chiết táo mèo nồng độ khác Bảng 3.13: Kết thử hoạt tính kháng khuẩn M.catarrhalis phân đoạn từ dịch chiết táo mèo Bảng 3.14: Kết thử định tính nhóm hợp chất dịch chiết táo mèo phân đoạn 40 36 37 38 39 39 41 42 43 MỞ ĐẦU Nhiễm khuẩn đường hơ hấp cấp là bệnh lý có tỷ lệ tử vong đứng đầu trong số 10 bệnh lý nhiễm khuẩn các nước có thu nhập thấp. Chương trình tồn cầu về phịng chống nhiễm khuẩn hơ hấp cấp đã được WHO phát động, tại Việt Nam chương trình này đã được triển khai từ năm 1984. Kiểm sốt và phịng chống bệnh được ưu tiên hàng đầu tại các nước đang phát triển trong đó có Việt Nam, nhưng đã và đang chịu tác động bất lợi của sự phát triển và lan truyền tình trạng kháng kháng sinh của vi khuẩn gây bệnh Bệnh nhiễm khuẩn đường hơ hấp cấp gồm nhiễm khuẩn đường hơ hấp trên và nhiễm khuẩn đường hơ hấp dưới. T ỷ lệ mắc bệnh nhiễm khuẩn đường hơ hấp trên chiếm phần lớn so với các bệnh về hơ hấp khác, là bệnh thường gặp, mắc hàng năm, theo mùa nhưng có thể gây nhiều biến chứng nặng như viêm tai giữa, viêm màng não, áp xe não, áp xe sau thành họng. Khi mắc viêm đường hơ hấp trên có thể lây nhiễm xuống đường hơ hấp dưới gây viêm khí, phế quản và viêm phổi nặng. Có thể thấy bệnh gây ảnh hưởng đáng kể đến sức khỏe đặc biệt với trẻ em, người già và gây thiệt hại kinh tế Moraxella catarrhalis là căn ngun gây ra phần lớn các trường hợp mắc bệnh nhiễm khuẩn hơ hấp, đặc biệt hiện nay được coi như tác nhân gây bệnh viêm tai giữa phổ biến thứ ba sau Streptococcus pneumoniae Haemophilus influenzae. Trong khi đó M. catarrhalis hiện đã kháng lại hầu hết các chất kháng sinh thuộc nhóm betalactam, chỉ cịn nhạy cảm với cephalosporin thế hệ 2, 3 và ciprofloxacin thuộc họ quinolon. Thực trạng kháng kháng sinh của M. catarrhalis nói riêng, các vi khuẩn gây bệnh truyền nhiễm nói chung đã và đang đem đến gánh nặng kinh tế, xã hội trong việc thay thế kháng sinh thế hệ cũ bằng kháng sinh thế hệ mới đắt tiền. Với sự phát triển của ngành cơng nghệ sinh học hiện đại đem lại một triển vọng lớn cho nền Y học khi tìm kiếm thêm những hợp chất tự nhiên hỗ trợ cho việc phịng và điều trị bệnh trên. Các hợp chất này góp phần giảm tác dụng phụ khơng mong muốn của các hợp chất tổng hợp, giảm gánh nặng về mặt kinh tế cho người bệnh và xã hội Từ ngàn xưa, ơng cha ta đã lưu truyền rất nhiều bài thuốc dân gian từ cây, cỏ chữa các bệnh đường hơ hấp và rất nhiều bệnh khác. Hiện nay táo mèo và các sản phẩm chế biến từ táo mèo đặc biệt là giấm táo mèo được lan truyền rộng rãi trong cộng đồng như một bài thuốc chống béo phì, tăng cường miễn dịch, kháng khuẩn, giảm chứng suy hơ hấp Trên thế giới cây táo mèo phân bố tại Trung Quốc, Ấn Độ, Myanma, tại Việt Nam tập trung ở các tỉnh n Bái, Sơn La, Lào Cai, Lai Châu và Lâm Đồng. Năm 2010 đã có những nghiên cứu sơ bộ với kết khả quan về tác dụng kháng khuẩn, trong đó có M. catarrhalis gây bệnh hơ hấp của dịch lên men quả táo mèo đã mở ra một hướng nghiên cứu mới cũng như định hướng ứng dụng của dịch lên men quả táo mèo trong việc hỗ trợ và nâng cao thể trạng cho con người. Với mục tiêu góp phần chứng minh và làm sáng tỏ vai trị chủ đạo của các tác nhân có trong dịch lên men quả táo mèo theo kinh nghiệm dân gian, đặc biệt là công dụng kháng vi khuẩn gây viêm đường hô hấp trên đã kháng kháng sinh thông dụng, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu tác dụng chống lại vi khuẩn kháng kháng sinh (Moraxella catarrhalis) gây nhiễm đường hơ hấp trên ở người của dịch lên men quả táo mèo (Docynia indica)” Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 BỆNH NHIỄM KHUẨN HƠ HẤP Ở NGƯỜI Nhiễm khuẩn hơ hấp là tình trạng một hoặc một số bộ phận thuộc bộ máy hơ hấp bị viêm nhiễm do vi khuẩn hoặc virut gây ra Về phương diện lâm sàng, nhiễm khuẩn hơ hấp gồm hai loại: nhiễm khuẩn hơ hấp trên và nhiễm khuẩn hơ hấp dưới. Nhiễm khuẩn hơ hấp trên khơng phải là một bệnh lý riêng biệt mà gồm nhiều bệnh lý (các bệnh tai mũi họng) như: + Viêm mũi + Viêm họng + Viêm amidan + Viêm tai giữa + Viêm xoang Bệnh nhiễm khuẩn hơ hấp dưới được coi là bệnh cảnh nặng nhưng trên thực tế bệnh chiếm tỷ lệ thấp và khơng dễ mắc. Trong khi đó nhiễm khuẩn hơ hấp trên là chứng bệnh thường gặp hàng năm, mắc tái diễn theo mùa, tái mắc nhiều lần trong năm, dễ gây biến chứng nặng nề và chiếm tỷ lệ lớn so với các bệnh về hơ hấp khác. Theo thống kê của các tổ chức y tế Hoa Kỳ, trung bình người trưởng thành có thể bị viêm đường hơ hấp trên khoảng 2 – 4 lần mỗi năm và con số này cao hơn rất nhiều ở trẻ em, trong đó trẻ có thể nhiễm đến 10 lần. Mỗi năm tại Hoa Kỳ, nhiễm khuẩn hơ hấp trên gây giảm khả năng làm việc trong 170 triệu ngày, 23 triệu ngày trẻ phải nghỉ học, 18 triệu ngày phải nghỉ làm Điều này cho thấy dù là loại bệnh được cho là tự khỏi nhưng chúng đã gây ra những thiệt hại đáng kể khơng chỉ về sức khỏe mà cịn cả về kinh tế xã hội 10 TÀI LIỆU THAM KHẢO I TÀI LIỆU VIỆT NAM Nguyễn Văn Bản (1996), Phân tích sàng lọc hóa thực vật, Tập II, tr 132-169 Nguyễn Đình Bảng (1992), “Vấn đề kháng sinh Tai Mũi Họng” , Chuyên đề Tai Mũi Họng, tr 20-24 Nguyễn Thị Ngọc Bích (2007), Nghiên cứu giá trị phương pháp cấy đờm tìm vi khuẩn chẩn đốn ngun nhân nhiễm khuẩn hô hấp, Luận văn tốt nghiệp bác sỹ chuyên khoa II, Học viên Quân y Phạm Văn Ca (2005), “Tần suất bắt gặp Moraxella catarrhalis vi khuẩn gây bệnh mức độ kháng thuốc Việt Nam”, Tạp chí Y học dự phịng, 15(1), tr 55 – 59 Đinh Thị Kim Chung (2007), “Ảnh hưởng số yếu tố tới trình lên men vang tóa mèo (Docynia indica)”, Tạp chí KH&CN, 45(2), tr 87 – 92 Danh lục loài Thực vật (2006), Tập II 10 11 12 13 14 15 16 17 Bùi Xuân Đồng (2000), Vi nấm dùng công nghệ sinh học, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Đào Đình Đức, Lê Đăng Hà, Phạm Văn Ca (1996), Tình hình nhiễm khuẩn kháng kháng sinh số vi khuẩn gây bệnh bệnh viện Bạch Mai năm (1990-1994), Một số cơng trình nghiên cứu độ nhạy cảm vi khuẩn với thuốc khánh sinh (1994-1995), tr 30-32 Bùi Thị Việt Hà (2006), Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật Việt Nam, Luận án Tiến sỹ sinh học Nguyễn Minh Hải, Nguyễn Tiền (2007), “ Nghiên cứu nguyên vi khuẩn đờm tính nhạy cảm kháng sinh chúng đợt bùng phát COPD”, Tạp chí y học lâm sàng, 108 Trần Thị Thu Hằng (2009), Thuốc sử dụng hóa trị liệu, Dược lực học, Nxb Phương Đơng, tr 681 – 685 Phạm Thị Hóa, Lê Kim Phụng, Lương Lệ Nhi (2010), Hợp chất thiên nhiên thuốc y học cổ truyền, Dược học cổ truyền, Bộ môn dược học cổ truyền, tr 11 – 24 Nguyễn Hồng Lâm, (2009), Nghiên cứu tình hình kháng kháng sinh vi khuẩn Moraxella catarrhalis khả măng gây bệnh chúng bệnh viện Tai Mũi Họng Trung Ương từ tháng năm 2007 đến tháng năm 2008, Khóa luận tốt nghiệp, trường Đại hoc Khoa Học Tự nhiên Phạm Thùy Linh (2010), Nghiên cứu công nghệ sản xuất sử dụng chất diệt khuẩn sinh học (nicin enterocin) dùng bảo quản nông sản thực phẩm, Luận án tiến sỹ sinh học, Viện công nghệ Sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Nguyễn Thị Thanh Loan cộng (2011), “ Tác dụng chống béo phì giảm trọng lượng dịch chiết táo mèo Docynia indica (Wall.) Decne mô hình chuột béo phì thực nghiệm”, Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội, 27, tr 125 – 133 Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học Vũ Văn Ngũ (1987), Các tác nhân gây viêm cấp tính đường hơ hấp trẻ em tuổi, Nxb Y học, tr 3-7 18 Nguyễn Phi Kim Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nxb ĐH Quốc gia TP Hồ Chí Minh Đỗ Quyết (2010), “Nguyên nhân vi khuẩn giai đoạn đầu sau đợt bùng phát bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính”, Tạp chí y – dược học quân sự, Vũ Thị Hạnh Tâm (2011), Nghiên cứu tác dụng hạ lipid đường huyết dịch chiết táo mèo (Docynia indica (Wall.) Dene) mơ hình chuột thực nghiệm, Luận văn tốt nghiệp, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội Hoàng Thị Minh Tân (2009), Nghiên cứu tách chiết số hợp chất tự nhiên từ táo mèo có tác dụng chống rối loạn trao đổi gluxit, lipid, Luận văn thạc sỹ sinh học WHO (2008), Gánh nặng bệnh tật toàn cầu: cập nhật 2004 19 20 21 22 II TÀI LIỆU TIẾNG ANH 23 Akinjogunla, O.J and Eghafona, N.O (2011), “Prevalence, Haemolytic activities and flouroquinolones susceptibility profiles of Moraxella catarrhalis, Streptococcus pneumoniae associated with acut otitis media”, Nature and Science, 9(6), pp 85 – 92 24 Austria R (1981), “Pneumococcus: The first one hundred years”, Rev Infect, 3, pp – 183 25 Borris, R.P (1996), “ Natural products research: perspective from a major pharmaceutical company”, J Ethnopharmacol, 51, pp 29 – 38 26 Catlin BW (1990), “Branhamella catarrhalis: an organism gaining respect as a pathogen”, Clinical Microbiology Reviews, 3, pp 293 – 320 27 Cees M Verduin, Cees Hol, Andre Fleer, Hans van Dijk, and Alexvan Belkum (2002), “ Moraxella catarrhalis: from Emerging to Established pathogen”, Clinical Microbiology Reviews, 15(1), pp 125 – 144 28 Chen H., Hoover D.G (2003), “Bacteriocins and their food application”, Compre Rev in Foood Scien Food Safety, 2(3), pp 82-100 29 Cleveland J., Montville T J., Nes I F., Chikindas M L (2001), “Bacteriocins: Safe, natural antimicrobials for food preservation”, Int J Food Microbiol, 71, pp 1-20 30 Critchley et al (2002), “Antimicrobial resistance among respiratory pathogens collected in Thailand during 1999- 2000”, J Chemother, 14, pp 147- 154 31 Dask., R.K.S Tiwari and D.K.Shrivastava (2010), “ Techniques for evaluation of medicinal plant products as antimicrobial agent: Curent methods and future trends”, Journal of Medicinal Plants Research, (2), pp 104-111 32 Ejlertsen T, Thisted E, Ebbesen F, Olesen B, Renneberg J (1994), “ Branhamella catarrhalis in children and adults A study of prevalence, time of coloisation, and association with upper and lower respiratory tract infections”, J Infect, 29, pp 23- 31 33 Fang G., Fine M., Orloff J., et al (1990), “New and emerging etilogies for community – acquired pneumonia with implications for therapy”, Medicine, 69, pp 307 – 316 34 FAO yearbook (2008), pp 35 – 37 35 Frances M.Boyle, Paul R Georghiou, martyn H Tilse & Joseph G McCormack (1991), " Branhamella (Moraxella) catarrhalis: pathogenic significance in respiratory infection", The Medical Journal of Australia, 154, pp 592-596 36 Hongli Qiu, Wakako Kumita, Kenya Sato , Shinichi Nakajima, Hiroyuki Nishiyama , Ryoichi Saito, Etsuko Sawabe, Emi Ono, Toshio Chida and Noboru Okamura (2009), “uspA1 of Moraxella catarrhalis Clinical Isolates in Japan and its Relationship with Adherence to HEp-2 Cells”, Med Dent Sci, 56, pp 61-67 37 Jacobs MR (1996), “ Increaing importance f antibiotic – resistant Streptococcus pneumoniae in acute otitis media”, Pediatric Infect Dis J 15, pp 940 – 943 38 Karalus, R., and A.Campagnan (2000), “Moraxella catarrhalis, a review of an important human mucosal pathogen”, Microbes Infect, 2, pp 547 – 559 39 Klaenhammer T.R (1993), “Genetics of bacteriocins produced by lactic acid bacteria”, FEMS Microbiol Rev, 12, pp 39-85 40 Krystal, Reval, LauraA.Dobbs, Sungeeta Narr, Janak A.Patel, Jame J.Grady, Tasnee Chonmaitree (2007), “Incidence of Acute Otiris Media and Sinusitis complicating Upper Respiratory Tract Infection: The effect of age”, Pediatric, 119(6), pp 1408- 1412 41 M.C.Enright, H.Mc Kenzie (1997), “Moraxella (Branhamella) catarrhalis – clinical and molecular aspects of a redicovered pathogen”, J.Med Microbiol, 46, pp 360- 371 42 Marjorie Murphy Cowan (1999), “ Plant products as antimicrobial agents”, Clinical Microbiology Reviews, 12(4), pp 564- 582 43 Meyer GA, Shope TR, Waecker NJ, Lanningham FH (1995), “ Moraxella (Branhamella) catarrhalis bacteremia in children A report of two patients and review of literature”, Clin Pediatr, 34, pp 146- 150 44 Moerman, D.E (1996), “ An analysis of the food plants and drug plants of native North America”, I.Ethopharmacol, 58, pp 85- 88 45 Riley M.A., Wertz J.E (2002), “Bacteriocins: evolution, ecology, and application”, Annual Review of Microbiology, 56, pp 117-137 46 Rohani et al (1999), “Antimicrobial resistance among respiratory pathogens collected in Malaysia”, Int Med Res J, 3, pp 57 47 Timothy F Murphy, G Iyer Parameswaran, (2009), “Moraxella catarrhalis, a Human Respiratory Tract Pathogen”, Clinical Infectious Diseases, 49, pp 124– 31 48 Vaneechoutte M, Verschraegen G, Clayeys G, Weise B, Van den Abeele (1990), “Respiratory tract carrier rates of Moraxella (Branhamella) catarrhalis in adults and children and interpretation of the isolation of M.catarrhalis from sputum”, J Clin Microbiol, 28, pp 2674 – 2680 49 Vu Thi Hue, Bui Thi Viet Ha (2010), “ Study on antibacterial activity toward bacteria causing upper respiratory (Moraxella catarrhalis) of Bacillus sp TM1.2 isolated from vinegar Docynia fruit (Docynia indica (Wall.) Decne)”, J Scien anh Technol, 26(4), pp 537-542 CÁC WEBSITE 50. http://www.duoclieu.org PHỤ LỤC Phụ lục 01. Thành phần các môi trường nuôi cấy VSV sử dụng trong nghiên cứu Môi trường thạch thường Peptone 10g Nước mắm 20ml Thạch 16g Nước cất 1000ml pH 7 Môi trường LB Peptone 10g Cao nấm men 5g NaCl 5g Nước cất 1000ml pH 7 M ôi tr ường giá đỗ Giá đỗ 100g Glucoza 10g Nước cất 1000ml pH 6,8 Phụ lục 02: Một số hình ảnh liên quan đến luận văn Hình 1: Khuẩn lạc chủng TM5.2 Hình 2: Tế bào chủng TM5.2 (x 10.000) Hình 3: Khuẩn lạc M.catarrhalis Hình 4: Tế bào M.catarrhalis Hình 5: Quả táo mèo Hình 6: Dịch lên men táo mèo Hình 7: Hoạt tính kháng M.catarrhalis dịch lên men táo mèo 1: Dịch lên men táo mèo nguyên chất (pH 4,3) 2: Dịch lên men táo mèo nguyên chất (pH 7) 3: Đối chứng Hình 8: Hoạt tính kháng M.catarrhalis dịch lên men táo mèo với tỷ lệ pha khác với nước cất 1: Dịch lên men táo mèo nguyên chất 2: Tỷ lệ 1:1 3: Tỷ lệ 1:2 4: Tỷ lệ 1:3 5: Tỷ lệ 1:4 6: Đối chứng Hình 9: Hoạt tính kháng M.catarrhalis chủng TM5.2 1: Dịch lên men TM5.2 2: Đối chứng Hình 10: Hoạt tính kháng M.catarrhalis phân đoạn tách chiết từ dịch lên men TM5.2 1: PĐ 3: PĐ 2 - 4: Đối chứng Hình 11: Hoạt tính kháng khuẩn M.catarrhalis cao dịch chiết táo mèo nồng độ khác 1: Nồng độ cao 50mg/ml 2: Nồng độ cao 100mg/ml 3: Đối chứng PĐ Hình 12: Hoạt tính kháng khuẩn M.catarrhalis phân đoạn tách chiết từ táo mèo 1: PĐ 2: PĐ 3: PĐ 4: Đối chứng PĐ Hình 13: Sắc ký mỏng phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn dịch lên men chủng TM5.2 PĐ PĐ PĐ Hình 14: Sắc ký mỏng phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết táo mèo ... sinh (Moraxella catarrhalis)? ?gây? ?nhiễm? ?đường? ?hô? ?hấp? ?trên? ?ở? ?người? ?của? ?dịch? ?lên? ?men? ?quả? ?táo mèo? ?(Docynia? ?indica)? ?? Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 BỆNH NHIỄM KHUẨN HƠ HẤP? ?Ở? ?NGƯỜI Nhiễm? ?khuẩn? ?hơ? ?hấp? ?là tình trạng một hoặc một số bộ phận thuộc bộ ... quan về? ?tác? ?dụng? ?kháng? ?khuẩn, trong đó có M. catarrhalis? ?gây? ?bệnh hơ hấp? ?của? ?dịch? ?lên? ?men? ?quả? ?táo? ?mèo? ?đã mở ra một hướng? ?nghiên? ?cứu? ?mới cũng như định hướng ứng? ?dụng? ?của? ?dịch? ?lên? ?men? ?quả ? ?táo? ?mèo? ?trong? ?vi? ??c hỗ... nghiệm dân gian, đặc biệt là cơng? ?dụng? ?kháng? ?vi? ?khuẩn? ?gây? ?vi? ?m? ?đường? ?hơ? ?hấp trên? ?đã? ?kháng? ?kháng? ?sinh? ?thơng? ?dụng, chúng tơi tiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu tác dụng chống lại vi khuẩn kháng kháng