Nghiên cứu khả năng phòng chống vi khuẩn moraxella catarrhalis gây viêm đường hô hấp trên ở người của dịch lên men quả táo mèo docynia

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰNHIÊN DƢƠNG THỊ PHƢƠNG NGHI ÊN CỨU KHẢ NĂNG PHÒNG CHỐNG VI KHUẨN Moraxella catarrhalis GÂY VI ÊM ĐƯỜNG HÔ HẤP TRÊN Ở NGƯỜI CỦA DỊ CH LÊN M EN QUẢTÁO M ÈO Docynia Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60420107 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Bùi Thị Việt Hà Hà Nội –2015 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Bùi Thị Việt Hà, Chủ nhiệm Bộ môn Vi sinh vật học, trƣờng ĐH Khoa học Tự Nhiên- ĐH Quốc gia Hà Nội Ngƣời tận tình bảo, hƣớng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình học tập nhƣ làm luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới toàn thể cán Bộ môn Vi sinh vật học, trƣờng ĐH Khoa học Tự Nhiên- ĐH Quốc gia Hà Nội.Trong trình làm luận văn, nhận đƣợc bảo trực tiếp đƣợc tạo điều kiện thuận lợi Đồng thời, chân thành cảm ơn thầy giáo, cô giáo khoa Sinh học nói chung môn Vi sinh vật học, trƣờng ĐH Khoa học Tự nhiên- ĐH Quốc gia Hà Nội nói riêng tận tình dạy dỗ trình học tập Cuối xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến gia đình, ngƣời thân toàn thể bạn nhóm.Những ngƣời bên cạnh động viên, giúp đỡ thời gian học tập Hà Nội, ngày 20 tháng 06 năm 2015 Học viên Dương Thị Phương MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.BỆNH NHIỄM KHUẨN HÔ HẤP Ở NGƢỜI 1.2 Moraxella catarrhalis VÀ BỆNH VIÊM ĐƢỜNG HÔ HẤP TRÊN 1.2.1.Đặc điểm hình thái nuôi cấy 1.2.2.Vai trò M.catarrhalis bệnh nhiễm khuẩn hô hấp 1.2.3 Tính kháng kháng sinh M catarrhalis 1.3 CHẤT KHÁNG SINH 10 Khái niệm 10 1.3.1 1.3.2 Chất kháng sinh có nguồn gốc từ vi khuẩn 11 1.3.3 Chất kháng khuẩn thực vật 14 1.3.4 Cơ chế kháng khuẩn 15 1.4 CÂY TÁO MÈO VÀ DỊCH CHIẾT TỪ QUẢ TÁO MÈO 17 1.4.1 Đặc điểm thực vật học 17 1.4.2 Sự phân bố 17 1.4.3 Tác dụng dƣợc lý 17 1.4.4 Thành phần hóa học 18 1.4.5.Tình hình nghiên cứu táo mèo 18 Chƣơng 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 20 2.1 NGUYÊN LIỆU 20 2.1.1 Nguồn giống 20 2.1.2 Hóa chất thiết bị 20 2.2 PHƢƠNG PHÁP 20 2.2.1 Phƣơng pháp lên men táo mèo 20 2.2.2 Phƣơng pháp phân lập vi khuẩn 21 2.2.3 Xác định hoạt tính kháng sinh enzym 22 2.2.4 Bảo quản giống 23 2.2.5 Xác định sinh khối phƣơng pháp đo mật độ quang học - OD 23 2.2.6 Xác định yếu tố ảnh hƣởng tới khả sinh trƣởng hoạt tính 23 kháng khuẩn vi khuẩn 2.2.7 Tách chiết hợp chất dịch lên men vi khuẩn giấm táo mèo 24 2.2.8 Khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết táo mèo phân 26 đoạn kháng khuẩn Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 HOẠT TÍNH KHÁNG Moraxella catarrhalis CỦA DỊCH LÊN MEN 30 QUẢ TÁO MÈO 3.2 TUYỂN CHỌN CHỦNG VI SINH VẬT 32 3.2.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật kháng Moraxella catarrhalis 32 3.2.2 Phân loại chủng vi khuẩn tuyển chọn 33 3.2.3 Một số đặc điểm sinh học chủng TM5.2 35 3.3 ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY THÍCH HỢP CHO SINH TRƢỞNG VÀ 37 HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN 3.3.1 Lựa chọn môi trƣờng nuôi cấy thích hợp 37 3.3.2 Nguồn cacbon thích hợp 38 3.3.3 Nguồn nitơ thích hợp 39 3.3.4 Lựa chọn pH nuôi cấy thích hợp 39 3.3.5 Lựa chọn nhiệt độ thích hợp 41 3.3.6 Lựa chọn thời gian nuôi cấy thích hợp 41 3.3.7 Khả sinh enzym ngoại bào chủngTM5.2 42 3.4 TÁCH CHIẾT CHẤT KHÁNG KHUẨN TỪ DỊCH CHIẾT TÁO MÈO 43 VÀ DỊCH LÊN MEN VI KHUẨN 3.4.1.Tách chiết chất khoáng sinh từ dịch lên men vi khuẩn TM5.2 43 3.4.2.Xác định số đặc tính chất kháng sinh từ chủng vi khuẩn TM5.2 46 3.4.3.Tinh chất kháng sinh HPLC 48 3.4.4.Phân tích chất kháng khuẩn khối phổ MS 48 3.5 TÁCH CHIẾT CÁC CHẤT CÓ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪ DỊCH 51 CHIẾT QUẢ TÁO MÈO 3.5.1.Hoạt tính kháng khuẩn cao dịch chiết táo mèo 51 3.5.2 Tách chiết phân đoạn chất kháng khuẩn từ dịch chiết táo mèo 51 3.5.3 Sắc ký mỏng phân đoạn kháng khuẩn dịch lên men chủng 52 TM5.2 dịch chiết táo mèo 3.5.4 Sơ thành phần hóa học cao dịch chiết táo mèo phân đoạn 53 3.6 NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CÔNG THỨC LÊN MEN QUẢ TÁO MÈO 54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC BẢNG MỘT SỐ KÝ HIỆU VIẾT TẮT CKS Chất kháng sinh CMC Carboxymethylcellulose DMSO Dimethyl sulfoxide HTKK Hoạt tính kháng khuẩn LB Môi trƣờng Luria Bertani PĐ Phân đoạn TCA Tricloacetic VSV Vi sinh vật DANH SÁCH BẢNG BIỂU, BIỂU ĐỒ Bảng 1.1: Tỷ lệ vi khuẩn gây bệnh viêm họng mạn tính Bảng 1.2: Tỷ lệ kháng kháng sinh M.catarrhalis Bảng1.3: Tỷ lệ loài có khả sinh CKS 10 Bảng 1.4: So sánh bacteriocin chất kháng sinh 13 Bảng 2.1: Thông số thiết kế cột nhồi 24 Hình 3.1: Vòng vô khuẩn dịch chiết táo mèo nguyên chất với 30 M.catarrhalis Bảng 3.1: Hoạt tính kháng M.catarrhalis dịch lên men táo mèo 31 Bảng 3.2: Hoạt tính kháng M.catarrhalis chủng vi khuẩn 32 Bảng 3.3: Hoạt tính kháng khuẩn chủng TM5.2 lên chủng vi khuẩn 33 kiểm định Hình 3.2: Vị trí phân loại chủng TM5.2 với loài quan hệ họ hàng gần 35 Bảng 3.4: Một số đặc điểm sinh học chủng TM5.2 36 Hình 3.3: Quan sát bào tử chủng TM5.2 dƣới kính hiển vi quang học (A) 37 kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) (B) Hình 3.4: Hoạt tính kháng khuẩn TM5.2 môi trƣờng 38 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng nguồn cacbon đến khả sinh trƣởng hoạt 38 tính kháng khuẩn chủng TM5.2 Bảng 3.6: Ảnh hƣởng nguồn nitơ đến khả sinh trƣởng hoạt tính kháng khuẩn chủng TM5.2 39 Bảng 3.7: Ảnh hƣởng pH ban đầu đến sinh trƣởng, hoạt tính kháng khuẩn 40 chủng TM5.2 Hình 3.5: Ảnh hƣởng pH ban đầu đến sinh trƣởng HTKK TM5.2 40 Bảng 3.8: Ảnh hƣởng nhiệt độ đến khả sinh trƣởng hoạt tính 41 kháng khuẩn chủng TM5.2 Bảng 3.9: Ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy đến khả sinh trƣởng 42 hoạt tính kháng khuẩn chủng TM5.2 Bảng 3.10: Khả sinh enzym ngoại bào 42 Bảng 3.11: Hoạt tính kháng sinh dịch chiết từ sinh khối 43 Hình 3.6: Hoạt tính kháng sinh dịch chiết từ sinh khối với loại dung 44 môi Hình 3.7: Hoạt tính kháng sinh dịch ngoại bào 45 Hình 3.8: Hoạt tính kháng sinh từ dịch chiết ngoại bào 45 Bảng 3.12: Độ bền kháng sinh với pH 46 Hình 3.9: Khả bền kháng sinh với nhiệt độ 47 Hình 3.10: Hoạt tính kháng sinh xử lý mức nhiệt độ thời gian 47 khác Hình 3.11: Kết phân tích hợp chất thu đƣợc sắc ký lỏng cao áp 48 Hình 3.12: Phổ MS phân đoạn 49 Hình 3.13: Phổ MS phân đoạn 49 Hình 3.14: Sơ đồ tách chiết chất kháng sinh từ chủng TM5.2 50 Bảng 3.13: Kết thử hoạt tính kháng khuẩn M.catarrhalis cao dịch 51 chiết táo mèo nồng độ khác Bảng 3.14: Kết thử hoạt tính kháng khuẩn M.catarrhalis phân 52 đoạn từ dịch chiết táo mèo Bảng 3.15: Kết thử định tính nhóm hợp chất dịch chiết táo mèo phân đoạn 53 Bảng 3.16: Kích thƣớc vòng vô khuẩn 14 mẫu giấm táo mèo sau tháng 54 Hình 3.15: Kích thƣớc vòng vô khuẩn 14 mẫu giấm táo mèo sau tháng 55 Bảng 3.17: Kích thƣớc vòng kháng M.catarrhaliscủa 14 mẫu giấm táo mèo 55 sau tháng(mm) Hình 3.16: Vòng vô khuẩn với M.catarrhaliscủa mẫu giấm táo mèo lên men tự nhiên sau tháng 57 MỞ ĐẦU Nhiễm khuẩn đƣờng hô hấp cấp bệnh lý có tỷ lệ tử vong đứng đầu số 10 bệnh lý nhiễm khuẩn nƣớc có thu nhập thấp Chƣơng trình toàn cầu phòng chống nhiễm khuẩn hô hấp cấp đƣợc WHO phát động, Việt Nam chƣơng trình đƣợc triển khai từ năm 1984 Kiểm soát phòng chống bệnh đƣợc ƣu tiên hàng đầu nƣớc phát triển có Việt Nam, nhƣng chịu tác động bất lợi phát triển lan truyền tình trạng kháng kháng sinh vi khuẩn gây bệnh Bệnh nhiễm khuẩn đƣờng hô hấp cấp gồm nhiễm khuẩn đƣờng hô hấp nhiễm khuẩn đƣờng hô hấp dƣới Tỷ lệ mắc bệnh nhiễm khuẩn đƣờng hô hấp chiếm phần lớn so với bệnh hô hấp khác, bệnh thƣờng gặp, mắc hàng năm, theo mùa nhƣng gây nhiều biến chứng nặng nhƣ viêm tai giữa, viêm màng não, áp xe não, áp xe sau thành họng Khi mắc viêm đƣờng hô hấp lây nhiễm xuống đƣờng hô hấp dƣới gây viêm khí, phế quản viêm phổi nặng.Có thể thấy bệnh gây ảnh hƣởng đáng kể đến sức khỏe đặc biệt với trẻ em, ngƣời già gây thiệt hại kinh tế Moraxella catarrhalis nguyên gây phần lớn trƣờng hợp mắc bệnh nhiễm khuẩn hô hấp, đặc biệt đƣợc coi nhƣ tác nhân gây bệnh viêm tai phổ biến thứ ba sau Streptococcus pneumoniae Haemophilus influenzae Trong M catarrhalis kháng lại hầu hết chất kháng sinh thuộc nhóm beta-lactam, nhạy cảm với cephalosporin hệ 2, ciprofloxacin thuộc họ quinolon Thực trạng kháng kháng sinh M catarrhalis nói riêng, vi khuẩn gây bệnh truyền nhiễm nói chung đem đến gánh nặng kinh tế, xã hội việc thay kháng sinh hệ cũ kháng sinh hệ đắt tiền Với phát triển ngành công nghệ sinh học đại đem lại triển vọng lớn cho Y học tìm kiếm thêm hợp chất tự nhiên hỗ trợ cho việc phòng điều trị bệnh Các hợp chất góp phần giảm tác dụng phụ không mong muốn 10 Hình 3.16 Vòng vô khuẩn với M cataharrlis mẫu giấm táo mèo lên men tự nhiên sau tháng Nhƣ vậy, qua trình nghiên cứu cho thấy: dịch lên men táo mèo sau tháng có khả ức chế đƣợc vi khuẩnM catarrhalis kháng kháng sinh, vi khuẩn chiếm tỷ lệ cao, gây nhiễm đƣờng hô hấp ngƣời Đây kết nghiên cứu ban đầu, khả quan góp phần khẳng định giá trị sử dụng nƣớc táo mèo lên men theo phƣơng thức dân gian để phòng chống bệnh viêm nhiễm đƣờng hô hấp Bản chất vấn đề phần đƣợc sáng tỏ qua kết nghiên cứu Vì thời gian có hạn nên nhiều thí nghiệm cần phải đƣợc thực thêm Chúng hy vọng có điều kiện để tiếp tục đƣợc nghiên cứu vấn đề này, sản xuất đƣợc dịch lên men táo mèo nhƣ thực phẩm chức góp phần phòng, chống bệnh viêm nhiễm đƣờng hô hấp ngƣời 66 KẾT LUẬN Sau tiến hành nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn Moraxella catarrhalis kháng kháng sinh gây viêm đƣờng hô hấp dịch lên men táo mèo, thu đƣợc số kết sau: Dịch lên men táo mèo có khả kháng M catarrhalis kháng kháng sinh pH nồng độ chất dịch ảnh hƣởng đến hoạt tính kháng M catarrhalis Đã phân lập, tuyển chọn đƣợc chủng TM5.2 từ dịch lên men táo mèo có hoạt tính kháng khuẩn M catarrhalis mạnh ổn định nhất.Chủng TM5.2 thuộc loài Bacillus subtilis, chi Bacillus, có khả sinh trƣởng tốt môi trƣờng LB, nguồn cacbon tinh bột, nguồn nitơ cao nấm men, pH 7, nhiệt độ 300C, thời gian lên men thích hợp 48- 72 Tách chiết đƣợc phân đoạn có hoạt tính kháng M catarrhalis từ dịch lên men chủng TM5.2 xác định đƣợc MS phân đoạn có nhiều khả dẫn xuất thuộc nhóm fengycin flavonoid Từ dịch chiết táo mèo tách chiết đƣợc phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn M catarrhalis Các phân đoạn có hoạt tính kháng M catarrhalis từ dịch lên men chủng TM5.2 dịch chiết táo mèo chứa nhiều chất khác Hoạt tính kháng khuẩn chủng M catarrhalis phân đoạn kháng khuẩn thu đƣợc từ dịch chiết táo mèo liên quan đến hàm lƣợng có mặt số chất thuộc nhóm nhóm flavonoit ankaloit Đã đƣa đƣợc công thức lên men táo mèo cho kết phòng chống đƣợc vi khuẩnM catarrhalistốt KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu thử nghiệm tác dụng dƣợc lý dịch lên men táo mèo Tạo đƣợc chế phẩm bán thị trƣờng để hỗ trợ phòng chống bệnh lien quan đến viêm đƣờng hô hấp 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO I TÀI LIỆU VIỆT NAM Nguyễn Văn Bản (1996), Phân tích sàng lọc hóa thực vật, Tập II, tr 132-169 Nguyễn Đình Bảng (1992), “Vấn đề kháng sinh Tai Mũi Họng” ,Chuyên đề Tai Mũi Họng, tr 20-24 Nguyễn Thị Ngọc Bích (2007), Nghiên cứu giá trị phương pháp cấy đờm tìm vi khuẩn chẩn đoán nguyên nhân nhiễm khuẩn hô hấp, Luận văn tốt nghiệp bác sỹ chuyên khoa II, Học viên Quân y Phạm Văn Ca (2005), “Tần suất bắt gặp Moraxella catarrhalis vi khuẩn gây bệnh mức độ kháng thuốc Việt Nam”, Tạp chí Y học dự phòng, 15(1), tr 55 – 59 Đinh Thị Kim Chung (2007), “Ảnh hƣởng số yếu tố tới trình lên men vang tóa mèo (Docynia indica)”, Tạp chí KH&CN, 45(2), tr 87 – 92 Danh lục loài Thực vật(2006), Tập II Bùi Xuân Đồng (2000), Vi nấm dùng công nghệ sinh học, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Đào Đình Đức, Lê Đăng Hà, Phạm Văn Ca (1996), Tình hình nhiễm khuẩn kháng kháng sinh số vi khuẩn gây bệnh bệnh viện Bạch Mai năm (1990-1994), Một số công trình nghiên cứu độ nhạy cảm vi khuẩn với thuốc khánh sinh (1994-1995), tr 30-32 Bùi Thị Việt Hà (2006), Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật Việt Nam, Luận án Tiến sỹ sinh học 10 Nguyễn Minh Hải, Nguyễn Tiền (2007), “ Nghiên cứu nguyên vi khuẩn đờm tính nhạy cảm kháng sinh chúng đợt bùng phát COPD”, Tạp chí y học lâm sàng, 108 11 Trần Thị Thu Hằng (2009), Thuốc sử dụng hóa trị liệu, Dược lực học, Nxb Phƣơng Đông, tr 681 – 685 12 Phạm Thị Hóa, Lê Kim Phụng, Lƣơng Lệ Nhi (2010), Hợp chất thiên nhiên thuốc y học cổ truyền, Dược học cổ truyền, Bộ môn dƣợc học cổ truyền, tr 11 – 24 13 Nguyễn Hồng Lâm, (2009), Nghiên cứu tình hình kháng kháng sinh vi khuẩn Moraxella catarrhalis khả măng gây bệnh chúng bệnh viện Tai Mũi Họng Trung Ương từ tháng năm 2007 đến tháng năm 2008, Khóa luận tốt nghiệp, trƣờng Đại hoc Khoa Học Tự nhiên 14 Phạm Thùy Linh (2010), Nghiên cứu công nghệ sản xuất sử dụng chất diệt khuẩn sinh học (nicin enterocin) dùng bảo quản nông sản thực phẩm, Luận án tiến sỹ sinh học, Viện công nghệ Sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam 15 Nguyễn Thị Thanh Loan (2011), “ Tác dụng chống béo phì giảm trọng lƣợng dịch chiết táo mèo Docynia indica (Wall.) Decne mô hình chuột béo phì thực nghiệm”, Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội, 27, tr 125 – 133 16 Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học 17 Vũ Văn Ngũ (1987), Các tác nhân gây viêm cấp tính đường hô hấp trẻ em tuổi, Nxb Y học, tr 3-7 18 Nguyễn Phi Kim Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nxb ĐH Quốc gia TP Hồ Chí Minh 19 Đỗ Quyết (2010), “Nguyên nhân vi khuẩn giai đoạn đầu sau đợt bùng phát bệnh phổi tắc nghẽn mạn tính”, Tạp chí y – dược học quân sự, 20 Vũ Thị Hạnh Tâm (2011), Nghiên cứu tác dụng hạ lipid đường huyết dịch chiết táo mèo (Docynia indica (Wall.) Dene) mô hình chuột thực nghiệm, Luận văn tốt nghiệp, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội 21 Hoàng Thị Minh Tân (2009), Nghiên cứu tách chiết số hợp chất tự nhiên từ táo mèo có tác dụng chống rối loạn trao đổi gluxit, lipid, Luận văn thạc sỹ sinh học 22 WHO (2015), Gánh nặng bệnh tật toàn cầu: cập nhật 2015 II TÀI LIỆU TIẾNG ANH 23 Akinjogunla, O.J and Eghafona, N.O (2011), “Prevalence, Haemolytic activities and flouroquinolones susceptibility profiles of Moraxella catarrhalis, Streptococcus pneumoniae associated with acut otitis media”, Nature and Science, 9(6), pp 85 – 92 24 Austria R (1981), “Pneumococcus: The first one hundred years”, Rev Infect, 3, pp – 183 25 Borris, R.P (1996), “ Natural products research: perspective from a major pharmaceutical company”, J Ethnopharmacol, 51, pp 29 – 38 26 Catlin BW (1990), “Branhamella catarrhalis: an organism gaining respect as a pathogen”, Clinical Microbiology Reviews, 3, pp 293 – 320 27 Cees M Verduin, Cees Hol, Andre Fleer, Hans van Dijk, and Alexvan Belkum (2002), “ Moraxella catarrhalis: from Emerging to Established pathogen”, Clinical Microbiology Reviews, 15(1), pp 125 – 144 28 Chen H., Hoover D.G (2003), “Bacteriocins and their food application”, Compre Rev in Foood Scien Food Safety,2(3), pp 82-100 29 Cleveland J., Montville T J., Nes I F., Chikindas M L (2001), “Bacteriocins: Safe, natural antimicrobials for food preservation”, Int J Food Microbiol, 71, pp 1-20 30 Critchley et al (2002), “Antimicrobial resistance among respiratory pathogens collected in Thailand during 1999- 2000”, J Chemother, 14, pp 147- 154 31 Dask, R.K.S Tiwari and D.K.Shrivastava (2010), “ Techniques for evaluation of medicinal plant products as antimicrobial agent: Curent methods and future trends”, Journal of Medicinal Plants Research, (2), pp 104-111 32 Ejlertsen T, Thisted E, Ebbesen F, Olesen B, Renneberg J (1994), “ Branhamella catarrhalis in children and adults A study of prevalence, time of coloisation, and association with upper and lower respiratory tract infections”, J Infect, 29, pp 23- 31 33 Fang G., Fine M., Orloff J., et al (1990), “New and emerging etilogies for community – acquired pneumonia with implications for therapy”, Medicine, 69, pp 307 – 316 34 FAO yearbook (2008), pp 35 – 37 35 Frances M.Boyle, Paul R Georghiou, martyn H Tilse & Joseph G McCormack (1991), " Branhamella (Moraxella) catarrhalis: pathogenic significance in respiratory infection", The Medical Journal of Australia, 154, pp.592-596 36 Hongli Qiu, Wakako Kumita, Kenya Sato, Shinichi Nakajima, Hiroyuki Nishiyama, Ryoichi Saito, Etsuko Sawabe, Emi Ono, Toshio Chidaand Noboru Okamura (2009), “uspA1 of Moraxella catarrhalis Clinical Isolates in Japan and its Relationship with Adherence to HEp-2 Cells”, Med Dent Sci, 56, pp 61-67 37 Jacobs MR (1996), “ Increaing importance f antibiotic – resistant Streptococcus pneumoniae in acute otitis media”, Pediatric Infect Dis J 15, pp 940 – 943 38 Karalus, R., and A.Campagnan (2000), “Moraxella catarrhalis, a review of an important human mucosal pathogen”, Microbes Infect, 2, pp 547 – 559 39 Klaenhammer T.R (1993), “Genetics of bacteriocins produced by lactic acid bacteria”, FEMS Microbiol Rev, 12, pp 39-85 40 Krystal, Reval, LauraA.Dobbs, Sungeeta Narr, Janak A.Patel, Jame J.Grady, Tasnee Chonmaitree (2007), “Incidence of Acute Otiris Media and Sinusitis complicating Upper Respiratory Tract Infection: The effect of age”, Pediatric, 119(6), pp 1408- 1412 41 M.C.Enright, H.Mc Kenzie (1997), “Moraxella (Branhamella) catarrhalis – clinical and molecular aspects of a redicovered pathogen”, J.Med Microbiol, 46, pp 360- 371 42 Marjorie Murphy Cowan (1999), “ Plant products as antimicrobial agents”, Clinical Microbiology Reviews, 12(4), pp 564- 582 43 Meyer GA, Shope TR, Waecker NJ, Lanningham FH (1995), “ Moraxella (Branhamella) catarrhalis bacteremia in children A report of two patients and review of literature”, Clin Pediatr, 34, pp 146- 150 44 Moerman, D.E (1996), “ An analysis of the food plants and drug plants of native North America”, I.Ethopharmacol, 58, pp 85- 88 45 Riley M.A., Wertz J.E (2002), “Bacteriocins: evolution, ecology, and application”, Annual Review of Microbiology, 56, pp 117-137 46 Rohani (1999), “Antimicrobial resistance among respiratory pathogens collected in Malaysia”, Int Med Res J, 3, pp 57 47 Timothy F Murphy, G Iyer Parameswaran, (2009), “Moraxella catarrhalis, a Human Respiratory Tract Pathogen”,Clinical Infectious Diseases, 49, pp 124–31 48 Vaneechoutte M, Verschraegen G, Clayeys G, Weise B, Van den Abeele (1990), “Respiratory tract carrier rates of Moraxella (Branhamella) catarrhalis in adults and children and interpretation of the isolation of M.catarrhalis from sputum”, J Clin Microbiol, 28, pp 2674 – 2680 49 Vu Thi Hue, Bui Thi Viet Ha (2010), “ Study on antibacterial activity toward bacteria causing upper respiratory (Moraxella catarrhalis) of Bacillus sp TM1.2 isolated from vinegar Docynia fruit (Docynia indica(Wall.) Decne)”, J Scien anh Technol, 26(4), pp 537-542 50 Nongnuch Vannittanakom and Wolfgang Loefler, 1986, FENGYCIN – a novel antifungal lipopeptide antibiotic producecd by Bacillus subtilis F-29-3, The Journal of antibiotics, J Antibiot (Tokyo) Jul;39(7):888-901 51 Vivek Rangarajan, Gunaseelan Dhanarajan, Ramkrishna Sen, 2015, Bioprocess design for selective enhancement of fengycin production by a marine isolate Bacillus megaterium, Biochemical Engineering Journal 99 (2015) 147–155 52 Omar Chtioui, Krasimir Dimitrov, Fre´de´rique Gancel, Pascal Dhulster, Iordan Nikov, 2014, Selective fengycin production in a modified rotating discs bioreactor, Bioprocess Biosyst Eng (2014) 37:107–114 53.European Bioinformatics Institute (2009) Bacteria Genomes – Bacillus subtilis 54 Huffnagle, Gary and Wernick, Sarah, 2007, The Probiotics Revolution New York, NY: Bantam Dell 55 Taylor, John R and Mitchell, Deborah, 2007, The Wonder of Probiotics New York, NY: St Martin’s Press 56 U.S Environmental Protection Agency (2007) Biotechnology Program Under Toxic Substances Control Act (TSCA) Bacillus subtilis Final Risk Assessment PHỤ LỤC Phụ lục 01 Thành phần môi trƣờng nuôi cấy VSV sử dụng nghiên cứu Môi trƣờng thạch thƣờng Peptone 10g Nƣớc mắm 20ml Thạch 16g Nƣớc cất 1000ml pH Môi trƣờng LB Peptone 10g Cao nấm men 5g NaCl 5g Nƣớc cất 1000ml pH Môi trƣờng giá đỗ Giá đỗ Glucoza 100g 10g Nƣớc cất 1000ml pH 6,8 Phụ lục 02: Một số hình ảnh liên quan đến luận văn Hình 1: Khuẩn lạc chủng TM5.2 Hình 3: Khuẩn lạc M.catarrhalis Hình 2: Tế bào chủng TM5.2 (x 10.000) Hình 4: Tế bào M.catarrhalis Hình 5: Quả táo mèo Hình 6: Dịch lên men táo mèo Hình 7: Hoạt tính kháng M.catarrhalis dịch lên men táo mèo 1: Dịch lên men táo mèo nguyên chất (pH 4,3) 2: Dịch lên men táo mèo nguyên chất (pH 7) 3: Đối chứng Hình 8: Hoạt tính kháng M.catarrhalis dịch lên men táo mèo với tỷ lệ pha khác với nƣớc cất 1: Dịch lên men táo mèo nguyên chất 2: Tỷ lệ 1:1 3: Tỷ lệ 1:2 4: Tỷ lệ 1:3 5: Tỷ lệ 1:4 6: Đối chứng Hình 9: Hoạt tính kháng M.catarrhalis Hình 10: Hoạt tính kháng chủng TM5.2 M.catarrhalis phân đoạn 1: Dịch lên men TM5.2 tách chiết từ dịch lên men TM5.2 2: Đối chứng 1: PĐ 3: PĐ 2 - 4: Đối chứng Hình 11: Hoạt tính kháng khuẩn Hình 12: Hoạt tính kháng khuẩn M.catarrhalis cao dịch chiết táo M.catarrhalis phân đoạn mèo nồng độ khác tách chiết từ táo mèo 1: Nồng độ cao 50mg/ml 2: Nồng độ cao 1: PĐ 2: PĐ 100mg/ml 3: Đối chứng 3: PĐ PĐ PĐ Hình 13: Sắc ký mỏng phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn dịch lên men chủng TM5.2 4: Đối chứng PĐ PĐ PĐ Hình 14: Sắc ký mỏng phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết táo mèo [...]... khuẩn Moraxella catarrhalis gây vi m đƣờng hô hấp trên ở ngƣời của dịch lên men quả táo mèo Docynia 11 Chƣơng1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 BỆNH NHIỄM KHUẨN HÔ HẤP Ở NGƢỜI Nhiễm khuẩn hô hấp là tình trạng một hoặc một số bộ phận thuộc bộ máy hô hấp bị vi m nhiễm do vi khuẩn hoặc virut gây ra Về phƣơng diện lâm sàng, nhiễm khuẩn hô hấp gồm hai loại: nhiễm khuẩn hô hấp trên và nhiễm khuẩn hô hấp dƣới Nhiễm khuẩn. .. dụng của dịch lên men quả táo mèo trong vi c hỗ trợ và nâng cao thể trạng cho con ngƣời Với mục tiêu góp phần chứng minh và làm sáng tỏ vai trò chủ đạo của các tác nhân có trong dịch lên men quả táo mèo theo kinh nghiệm dân gian, đặc biệt là công dụng kháng vi khuẩn gây vi m đƣờng hô hấp trên đã kháng kháng sinh thông dụng, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: Nghiên cứu khả năng phòng chống vi khuẩn. .. Phƣơng pháp phân lập vi khuẩn Dịch lên men quả táo mèo đã thu đƣợc nhỏ vào các giếng thạch trên đĩa Petri có chứa sẵn vi khuẩn Moraxalla catarrhalis Để lạnh từ 4-8 giờ trong tủ lạnh, sau đó cất vào tủ ấm Kết quả sau 72 giờ cho thấy giấm táo mèo có khả năng ức chế sự sinh trƣởng của vi khuẩn M catarrhalis Vì vậy, tiến hành phân lập vi khuẩn từ dịch lên men quả táo mèo Pha loãng dịch giấm bằng nƣớc cất... trò của Moraxella catarrhalistrong bệnh nhiễm khuẩn hô hấp Nhiều nghiên cứu trên thế giới và trong nƣớc đã chỉ ra rằng M catarrhalis là một trong những tác nhân gây bệnh quan trọng nhất đối với đƣờng hô hấp  Các nghiên cứu trên thế giới: Trên thế giới có nhiều nghiên cứu chỉ ra M catarrhalis là nguyên nhân phổ biến gây bệnh vi m đƣờng hô hấp. M catarrhalis là vi khuẩn cộng sinh phổ biến ở vòm họng của. .. giảm chứng suy hô hấp Trên thế giới cây táo mèo phân bố tại Trung Quốc, Ấn Độ, Myanma, tại Vi t Nam tập trung ở các tỉnh Yên Bái, Sơn La, Lào Cai, Lai Châu và Lâm Đồng Năm 2010, nhóm tác giả đã có những nghiên cứu sơ bộ với kết quả khả quan về tác dụng kháng khuẩn của dịch lên men quả táo mèo đối với M Catarrhalis- gây bệnh đƣờng hô hấp ở ngƣời Các nghiên cứu này, đã mở ra một hƣớng nghiên cứu mới cũng... quả Táo mèo Docynia 27 indica (Wall.) Decne trên mô hình chuột béo phì thực nghiệm Theo Vũ Thị Hạnh Tâm [20] nghiên cứu và ghi nhận vai trò hạ lipit và đƣờng huyết của dịch chiết quả táo mèo trên chuột Hoàng Thị Minh Tân [21] quả và lá táo mèo có khả năng chống rối loạn trao đổi gluxit và lipit Vũ Thị Huê, Bùi Thị Vi t Hà [49] đã có những nghiên cứu sơ bộ ghi nhận về tác dụng kháng khuẩn của dịch lên. .. kháng khuẩn rất có hiệu quả Giấm táo chứa axit malic, axit acetic, hàm lƣợng enzym cao rất tốt cho tiêu hóa 1.4.5 Tình hình nghiên cứu táo mèo tại Vi t Nam Hiện nay trên thế giới chƣa có nhiều nghiên cứu về cây táo mèo Docynia indica, đặc biệt là về tác dụng kháng khuẩn của quả táo mèo Tại Vi t Nam, nghiên cứu của Nguyễn Thị Thanh Loan [15] cho thấy tác dụng chống béo phì và giảm trọng lƣợng của dịch. .. phì, tăng cƣờng khả năng miễn dịch và khả năng kháng khuẩn, chữa bệnh vi m đƣờng hô hấp: ho, vi m amidan 1.4.4 Thành phần hóa học Theo nghiên cứu của Đinh Thị Kim Chung [5] cho biết khối lƣợng trung bình của quả táo mèo tại 2 vùng Yên Bái và Lào Cai là 20,5 ± 0,5 g, nƣớc chiếm tỷ lệ 84,6%, đƣờng 4,81%, axit tổng số 1,47% và pH là 2,9 Theo kết quả khảo sát định tính dịch chiết từ quả táo mèo thấy có đủ... 2.2.1 Phƣơng pháp lên men quả táo mèo Táo mèo tƣơi, thu hoạch, rửa sạch, thái lát, bỏ lọ và sử dụng công thức lên men dƣới đây Sau một tháng lên thu dịch lên men quả táo mèo – giấm táo mèo Công thức 1: 1kg táo mèo + 150g sucrose + 3 lít nước cất Ngâm theo công thức 1 gồm 5 lọ, giảm dần lƣợng đƣờng mỗi lọ 0,5g kể từ lọ 1 + Lọ 1: 150g táo mèo + 22,5g sucrose + 0,45l nƣớc cất + Lọ 2: 150g táo mèo + 22g sucrose... hấp trên và nhiễm khuẩn hô hấp dƣới Nhiễm khuẩn hô hấp trên không phải là một bệnh lý riêng biệt mà gồm nhiều bệnh lý (các bệnh tai mũi họng) nhƣ: + Vi m mũi + Vi m họng + Vi m amidan + Vi m tai giữa + Vi m xoang Bệnh nhiễm khuẩn hô hấp dƣới đƣợc coi là bệnh cảnh nặng nhƣng trên thực tế bệnh chiếm tỷ lệ thấp và không dễ mắc Trong khi đó nhiễm khuẩn hô hấp trên là chứng bệnh thƣờng gặp hàng năm, mắc tái ... quan tác dụng kháng khuẩn dịch lên men táo mèo M Catarrhalis- gây bệnh đƣờng hô hấp ngƣời Các nghiên cứu này, mở hƣớng nghiên cứu nhƣ định hƣớng ứng dụng dịch lên men táo mèo vi c hỗ trợ nâng cao... có dịch lên men táo mèo theo kinh nghiệm dân gian, đặc biệt công dụng kháng vi khuẩn gây vi m đƣờng hô hấp kháng kháng sinh thông dụng, tiến hành thực đề tài: Nghiên cứu khả phòng chống vi khuẩn. .. chống vi khuẩn Moraxella catarrhalis gây vi m đƣờng hô hấp ngƣời dịch lên men táo mèo Docynia 11 Chƣơng1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 BỆNH NHIỄM KHUẨN HÔ HẤP Ở NGƢỜI Nhiễm khuẩn hô hấp tình trạng