Nghiên cứu tác dụng chống lại một số vi khuẩn kháng kháng sinh (Moraxella catarrhalis) gây nhiễm đƣờng hô hấp trên ở ngƣời của dịch lên men quả táo mèo (Docynia indica)

Nghiên cứu tác dụng chống lại một số vi khuẩn kháng kháng sinh Moraxella catarrhalis gây nhiễm đường hô hấp trên ở người của dịch lên men quả táo mèo Docynia indica Nguyễn Thị Minh Th

Nghiên cứu tác dụng chống lại một số vi khuẩn

kháng kháng sinh (Moraxella catarrhalis) gây

nhiễm đường hô hấp trên ở người của dịch lên

men quả táo mèo (Docynia indica)

Nguyễn Thị Minh Thư

Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn ThS ngành: Vi sinh vật học; Mã số: 60 42 40

Người hướng dẫn: TS Bùi Thị Việt Hà

Năm bảo vệ: 2012

Abstract: Trình bày tổng quan về bệnh nhiễm khuẩn hô hấp ở người, chất kháng

sinh, cây táo mèo và dịch chiết từ quả táo mèo Sử dụng các phương pháp nghiên cứu như: Phương pháp lên men quả táo mèo; Phương pháp phân lập vi khuẩn; Xác định hoạt tính kháng sinh và enzym; Bảo quản giống; Xác định sinh khối bằng phương pháp đo mật độ quang học-OD; Xác định các yếu tố ảnh hưởng tới khả năng sinh trưởng và hoạt tính kháng khuẩn của vi khuẩn; Tách chiết các hợp chất trong dịch lên men vi khuẩn và giấm táo mèo; Khảo sát sơ bộ thành phần hóa học dịch chiết quả táo mèo và phân đoạn kháng khuẩn để làm rõ khả năng chống lại vi khuẩn kháng kháng sinh gây nhiễm đường hô hấp trên ở người của dịch lên men quả táo mèo Trình bày các kết quả đạt được: hoạt tính kháng của dịch lên men quả táo mèo; tuyển chọn chủng vi sinh; điều kiện nuôi cấy thích hợp cho sinh trưởng và hoạt tính kháng sinh; tách chiết chất kháng khuẩn từ dịch chiết táo mèo

và dịch lên men vi khuẩn

Keywords: Vi sinh vật học; Vi khuẩn kháng kháng sinh; Viêm đường hô hấp; Dịch lên men; Táo mèo

Content

MỞ ĐẦU

Nhiễm khuẩn đường hô hấp cấp là bệnh lý có tỷ lệ tử vong đứng đầu trong số 10 bệnh lý nhiễm khuẩn ở các nước có thu nhập thấp Chương trình toàn cầu về phòng chống nhiễm khuẩn hô hấp cấp đã được WHO phát động, tại Việt Nam chương trình này đã được triển khai từ năm 1984 Kiểm soát và phòng chống bệnh được ưu tiên hàng đầu tại các nước đang phát triển trong đó có Việt Nam, nhưng đã và đang chịu tác động bất lợi của sự phát triển và lan truyền tình trạng kháng kháng sinh của vi khuẩn gây bệnh

Bệnh nhiễm khuẩn đường hô hấp cấp gồm nhiễm khuẩn đường hô hấp trên và nhiễm khuẩn đường hô hấp dưới Tỷ lệ mắc bệnh nhiễm khuẩn đường hô hấp trên chiếm phần lớn so với các bệnh về hô hấp khác, là bệnh thường gặp, mắc hàng năm, theo mùa nhưng có thể gây nhiều biến chứng nặng như viêm tai giữa, viêm màng não, áp xe não,

áp xe sau thành họng Khi mắc viêm đường hô hấp trên có thể lây nhiễm xuống đường hô hấp dưới gây viêm khí, phế quản và viêm phổi nặng Có thể thấy bệnh gây ảnh hưởng đáng kể đến sức khỏe đặc biệt với trẻ em, người già và gây thiệt hại kinh tế

Moraxella catarrhalis là căn nguyên gây ra phần lớn các trường hợp mắc bệnh nhiễm khuẩn hô hấp, đặc biệt hiện nay được coi như tác nhân gây bệnh viêm tai giữa phổ biến thứ ba sau Streptococcus pneumoniae và Haemophilus influenzae Trong khi đó M catarrhalis hiện đã kháng lại hầu hết các chất kháng sinh thuộc nhóm beta-lactam, chỉ còn nhạy cảm với cephalosporin thế hệ 2, 3 và ciprofloxacin thuộc họ quinolon Thực trạng kháng kháng sinh của M catarrhalis nói riêng, các vi khuẩn gây bệnh truyền nhiễm nói chung đã và đang đem đến gánh nặng kinh tế, xã hội trong việc thay thế kháng sinh thế

hệ cũ bằng kháng sinh thế hệ mới đắt tiền Với sự phát triển của ngành công nghệ sinh học hiện đại đem lại một triển vọng lớn cho nền Y học khi tìm kiếm thêm những hợp chất

tự nhiên hỗ trợ cho việc phòng và điều trị bệnh trên Các hợp chất này góp phần giảm tác dụng phụ không mong muốn của các hợp chất tổng hợp, giảm gánh nặng về mặt kinh tế cho người bệnh và xã hội

Từ ngàn xưa, ông cha ta đã lưu truyền rất nhiều bài thuốc dân gian từ cây, cỏ chữa các bệnh đường hô hấp và rất nhiều bệnh khác Hiện nay táo mèo và các sản phẩm chế biến

từ táo mèo đặc biệt là giấm táo mèo được lan truyền rộng rãi trong cộng đồng như một bài thuốc chống béo phì, tăng cường miễn dịch, kháng khuẩn, giảm chứng suy hô hấp Trên thế giới cây táo mèo phân bố tại Trung Quốc, Ấn Độ, Myanma, tại Việt Nam tập trung ở các tỉnh Yên Bái, Sơn La, Lào Cai, Lai Châu và Lâm Đồng Năm 2010 đã có những nghiên cứu sơ bộ với kết quả khả quan về tác dụng kháng khuẩn, trong đó có M catarrhalis gây bệnh hô hấp của dịch lên men quả táo mèo đã mở ra một hướng nghiên cứu mới cũng như định hướng ứng dụng của dịch lên men quả táo mèo trong việc hỗ trợ

và nâng cao thể trạng cho con người Với mục tiêu góp phần chứng minh và làm sáng tỏ vai trò chủ đạo của các tác nhân có trong dịch lên men quả táo mèo theo kinh nghiệm dân gian, đặc biệt là công dụng kháng vi khuẩn gây viêm đường hô hấp trên đã kháng kháng

sinh thông dụng, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “ Nghiên cứu tác dụng chống lại vi khuẩn kháng kháng sinh (Moraxella catarrhalis) gây nhiễm đường hô hấp trên ở người của dịch lên men quả táo mèo (Docynia indica)”

Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 BỆNH NHIỄM KHUẨN HÔ HẤP Ở NGƯỜI

Nhiễm khuẩn hô hấp là tình trạng một hoặc một số bộ phận thuộc bộ máy hô hấp

bị viêm nhiễm do vi khuẩn hoặc virut gây ra

1.2.1 Đặc điểm hình thái và nuôi cấy

Moraxella catarrhalis lần đầu tiên được mô tả vào năm 1896, gọi là Micrococcus catarrhalis sau đó đổi thành Neisseria catarrhalis đến năm 1984 đổi là Moraxella (Branhamella) catarrhalis thuộc chi Moraxella, họ Moraxellaceae [27]

1.2.2 Vai trò của Moraxella catarrhalis trong bệnh nhiễm khuẩn hô hấp

Nhiều nghiên cứu trên thế giới và trong nước đã chỉ ra rằng M catarrhalis là một trong những tác nhân gây bệnh quan trọng nhất đối với đường hô hấp

 Các nghiên cứu trên thế giới:

Trên thế giới có nhiều nghiên cứu chỉ ra M catarrhalis là nguyên nhân phổ biến gây bệnh viêm đường hô hấp M catarrhalis là vi khuẩn cộng sinh phổ biến ở vòm họng của trẻ em [41], một nghiên cứu trên 120 trẻ sơ sinh đã cho thấy 66% trẻ một tuổi mang

vi khuẩn, tăng lên đến 77,5% ở trẻ hai năm tuổi, điều này cho thấy trẻ em có nguy cơ cao

bị các bệnh đường hô hấp, đặc biệt là hô hấp trên [20]

 Các nghiên cứu tại Việt Nam

Việt Nam với đặc điểm khí hậu nóng ẩm, trong những năm gần đây lại chịu tác động mạnh của biến đổi khí hậu đã tạo điều kiện thuận lợi cho các vi sinh vật gây bệnh phát triển Trên thế giới, Việt Nam là một trong những quốc gia có tỷ lệ các bệnh nhiễm khuẩn cao nhất, trong đó nhiễm khuẩn đường hô hấp trên chiếm tỷ lệ cao

1.2.3 Tính kháng kháng sinh của Moraxella catarrhalis

1.3 CHẤT KHÁNG SINH

1.3.1 Khái niệm

Chất kháng sinh là những chất hữu cơ có nguồn gốc từ sinh vật (vi sinh vật, thực vật, động vật), có khả năng diệt hoặc kìm hãm sự phát triển các vi sinh vật khác, các chất kháng sinh thường có tác dụng mạnh ở nồng độ thấp và đặc hiệu lên các vi sinh vật khác nhau [49]

1.3.2 Chất kháng sinh có nguồn gốc từ vi khuẩn

1.3.2.1 Khái quát lịch sử nghiên cứu

Những năm 1940-1959 được coi là thời kỳ hoàng kim của chất kháng sinh, hàng loạt chất được tách chiết và xác định: actonomixin (Waksman, 1940), chloramphenicol (Erhlich, 1947), chlotetracylin (Dugar, 1948), tetracyclin (Lloyd Conover, 1955), nystatin (1957) dùng trong điều trị bệnh nhiễm nấm Ngày nay, số lượng chất kháng sinh đã được phát hiện lên tới trên 10.000 chất, trong đó hàng trăm chất được dùng trong y học thực tiễn Năm 1981, amoxicillin ra đời, là một kháng sinh bán tổng hợp và lần đầu tiên được bán vào năm 1998 dưới tên thương mại là amoxicillin, amoxil và trimox

1.3.2.2 Phân loại

Chất kháng sinh được phân loại theo nhiều cách khác nhau, tùy theo mục đích nghiên cứu

và cách sử dụng chất kháng sinh

 Bacteriocin

Hiện nay con người đang phải đối mặt với thời kỳ “hậu kháng sinh” bởi tình trạng kháng thuốc, sự xuất hiện của các chủng vi khuẩn đa kháng thuốc, sự thiếu hụt các nhóm kháng sinh mới [35] Trong bối cảnh này song song với việc phát triển các chất kháng sinh phổ rộng thì việc nghiên cứu bacteriocin là vấn đề rất đáng được quan tâm

1.3.3 Chất kháng khuẩn thực vật

1.3.3.1 Khái niệm

Kháng khuẩn thực vật là tên gọi chung chỉ các hợp chất hữu cơ có trong thực vật

có tác dụng tiêu diệt hay kìm hãm sự phát triển của vi sinh vật Các chất kháng khuẩn thường có tác dụng đặc hiệu lên các loài vi sinh vật khác nhau ở nồng độ thường rất nhỏ [50]

Những tính chất này có thể thuộc nhiều cấu trúc hóa học khác nhau như: ankaloit, tannin, flavonoit, tinh dầu

1.3.4 Cơ chế kháng khuẩn

Chất kháng sinh có thành phần và cấu trúc hóa học đặc trưng nên không có một cơ chế tác dụng chung đối với vi sinh vật Đặc tính và cơ chế phụ thuộc vào bản chất hóa học của từng chất, nồng độ và cấu trúc của vi sinh vật Nhìn chung chất kháng sinh có các cơ chế tác dụng như sau:

1.4 CÂY TÁO MÈO VÀ DỊCH CHIẾT TỪ QUẢ TÁO MÈO

1.4.1 Đặc điểm thực vật học

Cây táo mèo hay còn gọi là cây chua chát, tên khoa học là Docynia indica, thuộc họ hoa hồng (Rosaceae)

1.4.2 Sự phân bố

Cây táo mèo là cây ưa sáng, ưa khí hậu ẩm mát của vùng nhiệt đới núi cao, nhiệt

độ trung bình năm 15- 180C, lượng mưa 1.500 – 3.800mm/năm và độ ẩm trung bình khoảng 85%

1.4.3 Tác dụng dược lý

Quả táo mèo được dùng phổ biến trong Đông y, có thể dùng thay thế hay tương tự như vị thuốc sơn tra với nhiều tác dụng như làm thuốc bổ tỳ, vị, kích thích tiêu hóa, giúp

ăn ngon, dễ tiêu chống đầy bụng, ợ chua, giúp tăng cường miễm dịch, giảm cholesterol,

hạ mỡ máu, đại tiện xuất huyết, chữa toàn thân đau mỏi dưới dạng thuốc sắc, cao lỏng hoặc tán bột uống

Điều đáng chú ý nhất táo mèo có tác dụng hạ huyết áp nhờ làm giãn mạch ngoại vi Mặt khác còn giúp hạ mỡ máu, chống huyết khối làm giãn động mạch vành, cải thiện sức

co bóp của cơ tim, phòng chống tích cực các biến chứng do cao huyết áp gây ra

Ngoài ra, chúng còn có tác dụng ức chế các trực khuẩn: thương hàn, bạch hầu, lị, tụ cầu vàng, giảm chứng suy hô hấp…

1.4.4 Thành phần hóa học

Theo nghiên cứu của Đinh Thị Kim Chung [5] cho biết khối lượng trung bình của quả táo mèo tại 2 vùng Yên Bái và Lào Cai là 20,5 ± 0,5 g, nước chiếm tỷ lệ 84,6%, đường 4,81%, axit tổng số 1,47% và pH là 2,9

Theo kết quả khảo sát định tính dịch chiết từ quả táo mèo thấy có đủ các nhóm hợp chất như: Flavonoit, tannin, ankaloit, glycozit có tác dụng kháng khuẩn rất có hiệu quả Giấm táo chứa axit malic, axit acetic, hàm lượng enzym cao rất tốt cho tiêu hóa

1.4.5 Tình hình nghiên cứu táo mèo tại Việt Nam

Hiện nay trên thế giới chưa có nhiều nghiên cứu về cây táo mèo Docynia indica, đặc biệt

là về tác dụng kháng khuẩn của quả táo mèo

Tại Việt Nam, nghiên cứu của Nguyễn Thị Thanh Loan [15] cho thấy tác dụng chống béo phì và giảm trọng luợng của dịch chiết quả Táo mèo Docynia indica (Wall.) Decne trên

mô hình chuột béo phì thực nghiệm Theo Vũ Thị Hạnh Tâm [20] nghiên cứu và ghi nhận vai trò hạ lipit và đường huyết của dịch chiết quả táo mèo trên chuột Hoàng Thị Minh Tân [21] quả và lá táo mèo có khả năng chống rối loạn trao đổi gluxit và lipit Vũ Thị Huê, Bùi Thị Việt Hà [49] đã có những nghiên cứu sơ bộ ghi nhận về tác dụng kháng khuẩn của dịch lên men quả táo mèo

Chương 2 - NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

2.1 NGUYÊN LIỆU

2.1.1 Nguồn giống

Các chủng Vi sinh vật kiểm định lấy từ Bảo tàng Giống chuẩn VSV, Viện VSV và Công Nghệ Sinh học - ĐH Quốc gia Hà Nội, gồm các chủng; Shigella flexneri Klebsiella 814;E coli 883; Salmolella typhi 897; Vibrio

VTCC-B-652, Moraxella catarrhalis ATCC 43617

Chủng Moraxella catarrhalis kháng kháng sinh, Staphylococcus aureus phân lập tại Bệnh viện Tai – Mũi – Họng Trung ương

2.1.2 Hóa chất và thiết bị

• Hóa chất

- Các thành phần hóa chất dùng làm môi trường

- Các hóa chất dùng trong tách chiết hợp chất thiên nhiên: DMSO, silicagel, florisil 100- 200 U.S.mesh,ethylaxetat, metanol, n-Butanol,…

• Thiết bị: tủ ấm, máy lắc ổn nhiệt, máy đo pH, máy ly tâm lạnh, máy cô chân không, thiết bị đông khô, hệ thống chiết pha rắn, cột sắc ký…

2.2 PHƯƠNG PHÁP

2.2.1 Phương pháp lên men quả táo mèo

Sử dụng 1kg quả táo mèo tươi, rửa sạch, cắt thành các phần nhỏ, để nguyên hạt, cho vào bình thủy tinh Bổ sung 3 lít nước đun sôi ấm (khoảng 400C), 300 g đường, 30 g muối , đậy kín bình bằng vải màn Sau một tháng thu dịch lên men quả táo mèo – giấm táo mèo

2.2.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn

Dịch lên men quả táo mèo đã thu được nhỏ vào các giếng thạch trên đĩa petri có chứa sẵn

vi khuẩn Moraxalla catarrhalis Để trong tủ lạnh từ 4-8 giờ, sau đó để vào tủ ấm Kết quả sau 72 giờ cho thấy giấm táo mèo có khả năng ức chế sự sinh trưởng của vi khuẩn M catarrhalis Vì vậy, tiến hành phân lập vi khuẩn từ dịch lên men quả táo mèo Pha loãng dịch giấm bằng nước cất khử trùng theo hệ thập phân ở các nồng độ khác nhau từ 10-1 đến 10-6 và tran đều trên đĩa petri chứa môi trường thạch thường để tìm chủng vi khuẩn

có hoạt tính mong muốn

2.2.3 Xác định hoạt tính kháng sinh và enzym

2.2.3.1 Xác định hoạt tính kháng khuẩn bằng phương pháp đục lỗ thạch

2.2.3.2 Xác định hoạt tính enzym

2.2.4 Bảo quản giống

Vi khuẩn được nuôi trong ống thạch nghiêng thạch thường, nuôi ở nhiệt độ phòng Sau khoảng 10-14 ngày khi vi khuẩn đã mọc tốt cất vào tủ mát ở nhiệt độ 4-6oC Sau 1-2 tháng cấy truyền lại một lần

2.2.5 Xác định sinh khối bằng phương pháp đo mật độ quang học-OD

Số lượng tế bào VSV trong dịch nuôi có thể xác định gián tiếp bằng cách đo mật độ quang học Dịch nuôi được pha loãng 5 lần, đo OD ở bước sóng 620nm

2.2.6 Xác định các yếu tố ảnh hưởng tới khả năng sinh trưởng và hoạt tính kháng khuẩn của vi khuẩn

Vi khuẩn được lên men trên môi trường dịch thể trong bình nón dung tích 250ml với các thành phần và các yếu tố liên quan như sau:

• Lựa chọn môi trường nuôi cấy thích hợp

• Ảnh hưởng của pH

• Ảnh hưởng của nguồn cacbon

• Ảnh hưởng của nguồn nitơ

• Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy

2.2.7 Tách chiết các hợp chất trong dịch lên men vi khuẩn và dịch lên men quả táo mèo [18]

2.2.7.1 Phương pháp đông khô

Đông khô là quá trình mà nước được lấy ra khỏi mẫu khi các mẫu đang ở trạng thái lạnh sâu Ở đây mẫu được làm l ạnh trong môi trường chân không Thiết bị đông khô sẽ hút nước và cuối cùng mẫu được làm khô đến mức nhất định (mẫu được hàn kín để cho môi trường chứa mẫu là chân không) Đây là phương pháp phổ biến có hiệu quả cao dùng để bảo quản các đối tượng vi sinh vật khác nhau như nấm sợi, nấm men, vi khuẩn và một số virut nhưng đôi khi cũng được sử du ̣ng để đưa di ̣ch chiết thành da ̣ng cao chiết

2.2.7.2 Phương pháp sắc ký cột

2.2.7.3 Phương pháp kiểm tra phân đoa ̣n bằng sắc ký bản mỏng

2.2.8 Khảo sát sơ bộ thành phần hóa học dịch chiết quả táo mèo và phân đoạn kháng khuẩn

2.2.8.1 Thử định tính flavonoit

2.2.8.2 Thử định tính tannin

2.2.8.3 Thử định tính ankaloit

2.2.8.4 Thử định tính glicozit

Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1 HOẠT TÍNH KHÁNG Moraxella catarrhalis CỦA DỊCH LÊN MEN QUẢ TÁO MÈO

Quả táo mèo tươi lên men sau một tháng xuất hiện lớp màng trắng, dịch có màu vàng trong, mùi thơm, vị chua thanh, pH 4,3 Tiến hành thu dịch, thử hoạt tính kháng M catarrhalis kháng kháng sinh, thấy dung dịch này có hoạt tính kháng kháng với kích thước vòng kháng 20mm Dùng nước cất pha loãng dịch lên men táo mèo theo các tỷ lệ thể tích (ml) khác nhau: V1: V2= 1: 1, 1:2, 1:3, 1:4 Trong đó V1 là thể tích dịch lên men quả táo mèo, V2 là thể tích nước cất Sau đó đem kiểm tra hoạt tính kháng M catarrhalis Kết quả như sau:

3.2 TUYỂN CHỌN CHỦNG VI SINH VẬT

3.2.1 Phân lập và tuyển chọn chủng vi sinh vật kháng Moraxella catarrhalis

Tiến hành phân lập vi khuẩn từ mẫu dịch lên men quả táo mèo trên môi trường thạch thường thu được 5 chủng vi sinh vật, trong đó có 4 chủng có hoạt tính kháng khuẩn Moraxella catarrhalis (bảng 3.2) đặc điểm sau:

TM2.2: Khuẩn lạc nhỏ, màu vàng, có vành phóng xạ xung quanh, bóng- nhầy, bên ngoài đục hơn phía trong của khuẩn lạc

TM5.1: Khuẩn lạc nhỏ, màu vàng, bề mặt nhầy – bóng, tròn, lồi và có kích thước nhỏ TM5.2: Khuẩn lạc nhỏ, màu trắng, bề mặt trơn, mép viền, giữa có nhân trắng nhỏ

TM5.4: Khuẩn lạc nhỏ, màu trắng, tròn, bề mặt trơn, không bóng

Bảng 3.3: Hoạt tính kháng khuẩn của chủng TM5.2 lên các chủng vi khuẩn kiểm định

E coli VTCC-B-883 Staphylococus aureus Salmolella typhi

VTCC-B-897 Shigella flexneri

HTKK (D- d mm) 12 10 16 9

3.2.2 Phân loại chủng vi khuẩn đã tuyển chọn

Hình 3.1 Vị trí phân loại của chủng TM5.2 với các loài quan hệ họ hàng gần

3.3 LỰA CHỌN ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY THÍCH HỢP CHO SINH TRƯỞNG VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CHỦNG TM5.2

3.3.1 Lựa chọn môi trường nuôi cấy thích hợp

3.3.2 Nguồn cacbon thích hợp

3.3.3 Nguồn nitơ thích hợp

3.3.4 Lựa chọn pH nuôi cấy thích hợp

3.3.5 Lựa chọn nhiệt độ thích hợp

3.3.6 Lựa chọn thời gian nuôi cấy thích hợp

3.4 TÁCH CHIẾT CHẤT KHÁNG KHUẨN TỪ DỊCH CHIẾT TÁO MÈO VÀ DỊCH LÊN MEN VI KHUẨN

3.4.1 Khảo sát hệ dung môi rửa giải và pha rắn hấp phụ

3.4.2 Tách chiết phân đoạn chất kháng khuẩn của dịch lên men vi khuẩn

3.4.3 Tách chiết phân đoạn chất kháng khuẩn từ dịch chiết táo mèo

3.4.3.1 Hoạt tính kháng khuẩn của cao dịch chiết táo mèo

Dịch táo mèo được cô quay chân không thành cao sau đó lấy cao thử hoạt tính kháng khuẩn M catarrhalis ở các mức nồng độ (mg/ml) khác nhau: 0,1; 1; 10; 100 mg/ml Kết quả thu nhận được như sau:

3.4.3.2 Tách chiết phân đoạn chất kháng khuẩn từ dịch chiết táo mèo

Sau khi đã khẳng định cao dịch chiết táo mèo có hoạt tính kháng khuẩn, tiến hành đưa cao lên cột sắc ký tách phân đoạn với chất hấp phụ và hệ dung môi rửa giải như đã lựa chọn ở trên Các phân đoạn thu được trong ống nghiệm đem tiến hành kiểm tra trên sắc ký bản mỏng để thu gom các phân đoạn có kết quả triển khai tương tự nhau trong cùng một hệ dung môi có kết quả giống nhau Thu được 15 phân đoạn, cất chân không riêng từng phân đoạn ở 400C để đuổi dung môi và phần còn lại được lấy ra đem thử hoạt tính kháng khuẩn M catarrhalis Cuối cùng thu được 3 phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn M catarrhalis ký hiệu là : PĐ1, PĐ2, PĐ3

3.4.4 Sắc ký bản mỏng các phân đoạn kháng khuẩn của dịch lên men chủng TM5.2 và dịch chiết táo mèo

3.5 NGHIÊN CỨU SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO DỊCH CHIẾT TÁO MÈO

VÀ CÁC PHÂN ĐOẠN

KẾT LUẬN

Sau khi tiến hành nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn Moraxella catarrhalis kháng kháng sinh gây viêm đường hô hấp trên của dịch lên men quả táo mèo, chúng tôi thu được một

số kết quả sau:

1 Dịch lên men quả táo mèo có khả năng kháng M catarrhalis kháng kháng sinh pH

và nồng độ các chất trong dịch ảnh hưởng đến hoạt tính kháng M catarrhalis

2 Phân lập, tuyển chọn được chủng TM5.2 từ dịch lên men quả táo mèo có hoạt tính kháng khuẩn M catarrhalis mạnh nhất và ổn định nhất

3 Chủng TM5.2 thuộc loài Bacillus subtilis, chi Bacillus, có khả năng sinh trưởng tốt trên môi trường LB, nguồn cacbon là tinh bột, nguồn nitơ là cao nấm men, pH 7, nhiệt

độ 300C, thời gian lên men thích hợp là 48- 72 giờ

4 Tách chiết được 2 phân đoạn có hoạt tính kháng M catarrhalis từ dịch lên men chủng TM5.2 Từ dịch chiết quả táo mèo tách chiết được 3 phân đoạn có hoạt tính kháng khuẩn M catarrhalis

5 Các phân đoạn có hoạt tính kháng M catarrhalis từ dịch lên men chủng TM5.2 và dịch chiết quả táo mèo đều chứa nhiều chất khác nhau