Đề tài thực hiện nhằm tăng cường công tác nghiên cứu khoa học và giám sát một số bệnh bị lãng quên tại cộng đồng ở một số tỉnh biên giới Việt Nam - Campuchia, và nhằm xác định tỷ lệ nhiễm các loại giun, sán (giun lươn, chó mèo, sán gạo và sán lá dây) ở một số cộng đồng điểm nghiên cứu.
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Nghiên cứu Y học KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM GIUN SÁN TẠI CỘNG ĐỒNG DÂN CƯ KHU VỰC BIÊN GIỚI VIỆT NAM – CAMPUCHIA BẰNG KỸ THUẬT ELISA Lê Thành Đồng*, Trịnh Ngọc Hải*, Hồng Thị Mai Anh*, Phạm Nguyễn Thúy Vy* TĨM TẮT Đặt vấn đề: Nước ta thuộc vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa nóng và ẩm, chính vì vậy bệnh giun sán rất phổ biến. Biểu hiện lâm sàng rất đa dạng, phong phú. Xét nghiệm huyết thanh chẩn đốn bằng kỹ thuật ELISAđể gián tiếp chẩn đoán bệnh nhiễm giun sán đang được quan tâm.Đề tài thực hiện nhằm tăng cường công tác nghiên cứu khoa học và giám sát một số bệnh bị lãng quên tại cộng đồng ở một số tỉnh Biên giới Việt Nam – Campuchia. Mục tiêu nghiên cứu: Xác định tỷ lệ nhiễm các loại giun, sán (giun lươn, chó mèo, sán gạo và sán lá dây) ở một số cộng đồng điểm nghiên cứu. Phương pháp nghiên cứu: Sử dụng kỹ thuật ELISA xét nghiệm tìm kháng thể giun lươn, sán gạo, ấu trùng giun đũa chó, mèo, ấu trùng sán dây trong các mẫu huyết thanh tại các tỉnh An Giang, Đồng Tháp, Bình Phước, Kiên Giang, Long An và Tây Ninh, trong thời gian từ tháng 4 năm 2012 đến tháng 9 năm 2013. Kết quả: Tổng số mẫu thu thập là 2151. Tỷ lệ mẫu dương tính là 64%. Số lam thu thập là 1.283, trong số đó số mẫu có bạch cầu ái toan trên 5% là 734 mẫu (chiếm 57,2% Kết luận: Tỷ lệ nhiễm giun sán (lươn, đũa chó mèo, sán gạo, sán dây) chiếm 64%. Tỷ lệ nhiễm giun đũa chó mèo là cao nhất chiếm trên 51%. Tỷ lệ nhiễm phối hợp 2 loại là 24%, 3 loại là 9,2% và 4 loại giun sán là 3,5%. Từ khóa: Giun sán, ELISA ABSTRACT HELMINTHTEST RESULTS IN THE COMMUNITY IN BORDER AREAS OF VIETNAM – CAMBODIA BY ELISA METHODOLOGY Le Thanh Dong, Trinh Ngoc Hai, Hoang Thi Mai Anh, Pham Nguyen Thuy Vy * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 18 ‐ Supplement of No 6‐ 2014: 321 – 325 Background: Our country under the tropical monsoon climate hot and humid, so very popular cysticercosis. The clinical manifestations are varied and plentiful. Serology tests using indirect ELISA for diagnosis of helminth infections are interested.Threadundertaken tostrengthenscientific researchandmonitoringneglecteddiseasesin the communityin someFrontier ProvinceVietnamCambodia. Objectives: Determine the prevalence of type worms ( worm eels, dogs and cats, tapeworm and fluke wire rice ) in a number of research communities. Method:Using ELISA method for determinationantibody of strongyloidiasis, rice fluke, roundworm larvae dogs, cats, tapeworm larvae in serum samples at An Giang, Dong Thap, Binh Phuoc, Kien Giang, Long An and Tay Ninh, from April 2012 to September 2013 . Results: The total sample was collected in 2,151 . The percentage of positive samples was 64 %. 1,283 slide samples is collected, samples of which have eosinophils than 5% of the 734 samples (representing57.2%). Conclusion: The prevalence of helminths (threadworm, toxocara canis, toxocara cati, tapeworms) accounted for 64 %. The rate of dog and cat roundworm infection is the highest, occupying over 51 %. The prevalence of * ViệnSốt rét ‐ Ký sinh trùng – cơn trùng TP.HồChí Minh Tác giả liên lạc: PGS. TS. LêThànhĐồng ĐT: 0839239946 Chun Đề Y Tế Cơng Cộng Email: lethanhdong@gmail.com 321 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 type 2 coordination is 24 %, of type 3is 9.2 % and of type 4is 3.5 %. Keywords: Helminths, ELISA ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, các bệnh nhiệt đới bị lãng quên (Neglected Tropical Diseases‐NTDs) đang được Tổ chức Y tế thế giới và Bộ Y tế Việt Nam quan tâm. Những bệnh này xuất hiện ngày càng nhiều tại một số vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới. Một trong số các căn bệnh bị lãng qn đó là nhóm bệnh ký sinh trùng đường ruột, chúng góp phần khơng nhỏ làm ảnh hưởng, gây thiệt hại nền kinh tế và sức khỏe của cộng đồng. Nước ta thuộc vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa nóng và ẩm, chính vì vậy bệnh giun sán rất phổ biến. Biểu hiện lâm sàng rất đa dạng, phong phú. Tùy vị trí ký sinh mà chúng gây triệu chứng lâm sàng tương ứng, rất dễ nhầm lẫn với những bệnh lý nội, ngoại khoa khác ở đường tiêu hóa. Như bệnh nhân nhiễm giun lươn thường bị chẩn đốn nhầm với các bệnh lý khác của dạ dày – tá tràng, rối loạn tiêu hóa. Ngày nay, trào lưu phát triển khoa học không ngừng, việc xét nghiệm cận lâm sàng là rất cần thiết. Đưa các tiêu chuẩn chẩn đoán theo một khung chẩn đoán cụ thể từng bệnh (bao gồm tiêu chuẩn lâm sàng, cận lâm sàng; tiêu chuẩn chính và phụ) để giúp các thầy thuốc lâm sàng dựa vào đó đưa ra quyết định điều trị cho bệnh nhân chính xác hơn. Làm thế nào để chẩn đốn và phát hiện một cách chính xác ca bệnh vẫn còn nhiều phức tạp và khó khăn vì các triệu chứng lâm sàng khá giống với một số bệnh lý nội khoa, truyền nhiễm và bệnh về da khác. Xét nghiệm theo tiêu chuẩn vàng cho từng bệnh khơng phải lúc nào chúng ta cũng có thể thực hiện được hoặc thực hiện nhưng không chỉ ra kết quả dương tính, nên một số bệnh ký sinh trùng phải nhờ đến xét nghiệm huyết thanh chẩn đoán như ELISA, IFA, để gián tiếp chẩn đốn. Tuy nhiên, vấn đề độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị dự đốn âm tính, dương tính và tính chính xác của từng xét nghiệm vẫn còn hạn 322 chế và chưa có biện pháp khắc phục. Điều này đã dẫn đến chẩn đốn khơng đúng hậu quả là dùng thuốc khơng cần thiết, tăng độc tính cho cơ thể. Bệnh viện Y học Nhiệt đới Thành phố Hồ Chí Minh đã nghiên cứu vai trò của kỹ thuật ELISA trong chẩn đốn phân biệt bệnh nhiễm giun lươn. Vấn đề chẩn đoán bệnh giun lươn gây viêm dạ dày – tá tràng cho thấy kỹ thuật ELISA là phương pháp phát hiện bệnh với tỷ lệ cao nhất và nhanh. Các phương pháp khác như nội soi, sinh thiết, soi phân tìm ấu trùng giun lươn nên bổ sung thêm nếu có điều kiện(2). Từ năm 1998, kỹ thuật ELISA đã được sử dụng phổ biến tại nhiều bệnh viện ở Thành phố Hồ Chí Minh, ghi nhận một số kết quả: Kỹ thuật ELISA với kháng nguyên được điều chế sẵn từ ấu trùng giun lươn cho kết quả khá tốt. Mẫu dương tính đạt ở độ pha lỗng 1/800 trở lên, độ nhạy của kỹ thuật ELISA trong chẩn đốn bệnh giun lươn là 93%, độ đặc hiệu là 95%, giá trị tiên đốn là 93% (2). Các số liệu cho thấy các bệnh do giun, sán là một vấn đề y tế cần phải giải quyết nếu muốn cải thiện sức khoẻ của người dân nói chung, cũng như sự phát triển thể lực và trí lực của trẻ em trong lứa tuổi học đường nói riêng. Tuy nhiên, cần phải xác định tỷ lệ nhiễm giun, sán một cách cụ thể cho từng đối tượng, từng vùng địa lý khác nhau, vì tùy theo tỷ lệ và cường độ nhiễm bệnh, ý thức vệ sinh của đối tượng, mức độ ơ nhiễm trứng giun, sán ở ngoại cảnh (nước, đất, thực phẩm…) mà các biện pháp can thiệp có thể khác nhau về mức độ và quy mơ. Vùng biên giới Tây Nam giữa Việt Nam ‐ Campuchia có 6 tỉnh của Việt Nam là Bình Phước, Tây Ninh, Long An, Đồng Tháp, An Giang và Kiên Giang tiếp giáp với 8 tỉnh của Campuchia là Mondolkiri, Kratie, Kampong Cham, Svay Rieng, Prey Veng, Kandal, Takeo và Kampot. Một báo cáo của UNICEF, dựa trên các Chuyên Đề Y Tế Công Cộng Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Nghiên cứu Y học số liệu điều tra trước đó, đã ước tính tỷ lệ nhiễm giun đũa và giun tóc trong cộng đồng dân cư của Campuchia vào năm 2002 tại các tỉnh biên giới Campuchia ‐ Việt Nam là cao (3). Vấn đề cần nắm bắt thực trạng nhiễm giun sán tại biên giới các nước với Việt Nam là rất thiết thực và cần được quan tâm hơn. Nhằm tăng cường cơng tác nghiên cứu khoa học và giám sát một số bệnh bị lãng qn tại cộng đồng ở một số tỉnh Biên giới Việt Nam ‐ Campuchia, chúng tơi tiến hành thực hiện đề tài với: + Lấy máu tĩnh mạch bằng kim và ống chích vơ trùng (2 ml). + Rút kim và bơm nhẹ máu vào ống đựng tp có chứa heparin. + Để n và bảo quản mẫu máu trong thùng xốp có chứa đá khơ, chuyển ngay từ thực địa về Viện Sốt rét ‐ KST ‐ CT TP. Hồ Chí Minh. ‐ Các bước thực hiện: + Pha nước rửa P2 (1/20 lần trong nước cất). + Chuẩn bị giá để kháng nguyên. Rửa lại bằng dung dịch rửa P2. Mục tiêu nghiên cứu + Pha P3 theo tỷ lệ 1/10 nước cất. Cho 90 μl dung dịch P3 vào các giếng. Xác định tỷ lệ nhiễm các loại giun, sán (giun lươn, chó mèo, sán gạo và sán lá dây) bằng kỹ thuật ELISA ở một số cộng đồng dân cư nghiên cứu. + Pha loãng huyết thanh trong nước cất. Tỷ lệ pha là 1/40. Hút 10 μl vào các giếng rồi trộn đều. ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Các mẫu huyết thanh thu thập được tại cộng đồng dân cư điểm nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu Tại các tỉnh An Giang, Đồng Tháp, Bình Phước, Kiên Giang, Long An và Tây Ninh. Phân tích mẫu bằng kỹ thuật elisa tại Viện Sốt rét – KST – CT Tp. Hồ Chí Minh. Thời gian nghiên cứu Tháng 4 năm 2012 đến tháng 9 năm 2013. Phương pháp nghiên cứu Chọn mẫu Thu thập mẫu ngẫu nhiên tại các điểm nghiên cứu. Kỹ thuật ELISA xét nghiệm tìm kháng thể giun lươn, sán gạo, ấu trùng giun đũa chó, mèo, ấu trùng sán dây Kít do Cơng ty TNHH Thương mại hóa chất Việt Sinh sản xuất, địa chỉ: 71 Ỷ Lan, phường Hiệp Tân, quận Tân Bình Tp. Hồ Chí Minh. Ngày sản xuất: 9 ‐2012, hạn sử dụng: 9 ‐ 2013. ‐ Kỹ thuật lấy mẫu: Chun Đề Y Tế Cơng Cộng + Ủ 450C/ 30’‐1h hoặc 370C/1h‐1h30’.Rửa lại 5 lầnbằng P2, đậpchokhơ. + Pha P4/P3 (tỷlệ 1/200), hút 100 μl P4 đã pha với P3 cho vào mỗi giếng. Ủ 450C /30’. + Pha dung dịch P5a +P5b theo tỷ lệ 1:1. Hút vào mỗi giếng 100 μl dung dịch P5a+P5b. + Đọc kết quả sau 20 phút. ‐ Cách đọc kết quả: + Chứng âm không màu hay màu rất nhạt. Chứng dương màu xanh nước biển. + Bệnh phẩm: so sánh với màu của chứng âm và chứng dương. Các mẫu dương tính phải đạt độ pha lỗng huyết thanh từ 1/800 trở lên, nếu nhỏ hơn hoặc bằng 1/400 được coi là âm tính. Xử lý kết quả: Xử lý theo phần mềm được cài sẵn của máy ELISA. Độ tin cậy 95% và độ lệch chuẩn 2SD 0,05. KẾT QUẢ Bảng 1: Tỷ lệ dương tính chung cho cả 4 loại giun sán (giun lươn, chó mèo, sán gạo và sán lá dây) TT Tên tỉnh An Giang BìnhPhước ĐồngTháp KiênGiang Tổng mẫu Dương tính 94 72 (77%) 672 378 (56%) 271 184 (67%) 612 417 (68) Âm tính 28 (23%) 294 (44%) 87 (23%) 195 (22%) 323 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 TT Tên tỉnh Long An TâyNinh Tổngsố Tổng mẫu Dương tính Âm tính 94 87 (92%) (8%) 408 239 (59%) 169 (41%) 2151 1374 (64%) 777 (36%) Tổng số mẫu thu thập là 2.151. Tỷ lệ mẫu dương tính chung cho 4 loại giun là 64%. Bảng 2: Tỷ lệ nhiễm từng loại giun sán tại các tỉnh TT Giun đũa Giun Sán Gạo Sán dây Chó mèo Lươn An Giang 64 22 14 25 BìnhPhước 290 106 78 78 ĐồngTháp 158 29 30 62 KiênGiang 328 93 47 122 Long An 74 35 27 37 TâyNinh 186 88 39 55 1.100 373 379 Tổngsố 235 (12%) (51%) (18.4%) (18.6%) Tên tỉnh Số người nhiễm giun đũa chó mèo cao hơn hẳn so với các loại giun sán khác: trên 51%. Nhiễm thấp nhất là sán gạo: 11%. Bảng 3: Tỷ lệ nhiễm phối hợp các loại giun sán TT Tên tỉnh An Giang BìnhPhước ĐồngTháp KiênGiang Long An TâyNinh Tổngsố loại loại loại 12 13 87 30 11 39 12 12 113 34 18 14 73 19 333 (24%) 126 (9.2%) 48 (3.5%) Số mẫu nhiễm phối hợp 2 loại giun sán chiếm tỷ lệ cao nhất 24%, nhiễm phối hợp 4 loại là thấp nhất 3,5%. Bảng 4: Tỷ lệ bạchcầu ái toan >5% tính theo số mẫu TT Tên tỉnh Tổng số lam Số lam >5% Tỷ lệ % An Giang 72 32 44.4% BìnhPhước 350 245 70% ĐồngTháp 178 88 49.4% KiênGiang 383 215 56.1% Long An 83 44 53.0% TâyNinh 217 110 50.7% Tổngsố 1.283 734 57.2% Nhận xét: Số lam thu thập là 1.283, trong số đó số mẫu có bạch cầu ái toan trên 5% là 734 mẫu (chiếm 57,2%). 324 BÀN LUẬN Bệnh do nhiễm ký sinh trùng chủ yếu qua đường ăn uống hoặc tiếp xúc qua da. Ở đường ăn uống, việc lây nhiễm gặp phải chủ yếu khi con người sử dụng các loại thực phẩm sống, chưa qua chế biến hoặc chế biến chưa kỹ, nấu chưa chín. Ở đường tiếp xúc qua da, ký sinh trùng có thể lây nhiễm khi con người tiếp xúc với những bề mặt có chứa giun, sán… trong q trình lao động, sinh hoạt; ký sinh trùng sẽ đi vào mạch máu rồi tấn cơng các cơ quan nội tạng. Tác hại của bệnh do nhiễm ký sinh trùng phụ thuộc nhiều vào cơ quan mà ký sinh trùng xâm nhập, có thể chia ra làm 3 mức độ khác nhau. Nặng nhất là ký sinh trùng xâm nhập vào hệ thần kinh trung ương như não, màng não, gây tác động trực tiếp, có tỉ lệ tử vong cao. Mức độ thứ 2 là ký sinh trùng xâm nhập cơ quan nội tạng, hay gặp nhất là gan, gây ra áp xe, kế đến là phổi, gây áp xe phổi, tổn thương màng phổi… Dạng bệnh này ít nguy cấp, nhưng có thể sẽ diễn biến nặng. Mức độ thứ 3 là ký sinh trùng gây tổn thương ở ngồi da, trường hợp này ít khi gây bệnh q nặng, nhưng thường kéo dài, gây khó chịu, ảnh hưởng đến sức khỏe và sinh hoạt hằng ngày của người bệnh. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi, tỷ lệ nhiễm giun đũa chó mèo là 51%. Tỷ lệ nhiễm cùng nhiều loại giun trong nghiên cứu của là: nhiễm phối hợp 2 loại 24%; 3 loại 9,2% và 4 loại 3,5%, tỷ lệ tương đối cao và phù hợp với một số nghiên cứu của các tác giả khác (1) Đa phần tỷ lệ bạch cầu ái toan tăng khi xét nghiệm ELISA dương tính, trong trường hợp này thì các bác sỹ kết hợp với một số triệu chứng lâm sàng khác sẵn sàng kê đơn thuốc cho bệnh nhân nhiễm giun đũa chó mèo. Trong nghiên cứu của chúng tôi, tỷ lệ bạch cầu ái toan > 5% song hành với tỷ lệ dương tính bằng kỹ thuật ELISA là 5,.2%. Chun Đề Y Tế Cơng Cộng Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ bản của Số 6 * 2014 Nghiên cứu Y học đồng xã Thạnh Tân, thị xã Tây Ninh. Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học Viện Sốt rét ‐ KST ‐ CT TP. HồChí Minh. Tr. 67‐78. KẾT LUẬN Tỷ lệ nhiễm giun sán (lươn, đũa chó mèo, sán gạo, sán dây) bằng kỹ thuật ELISA tại dân cư cộng đồng nghiên cứu chiếm 64%. Tỷ lệ nhiễm giun đũa chó mèo là cao nhất chiếm trên 51%. Trần Phủ Mạnh Siêu (2000), Ứng dụng phương pháp huyết thanh miễn dịch men trong chẩn đoán bệnh nhiễm giun lươn. LuậnvănThạcsỹ y học. ĐH Y dược Tp. HồChí Minh. Tr. 23‐45. World Health Organization (2008), Review on the Epidemiological Profile of Helminthiases and their Control in the Western Pacific Region, 1997‐2008. MVP/WPRO. Pp. 45‐67. Tỷ lệ nhiễm phối hợp 2 loại là 24%, 3 loại là 9,2% và 4 loại giun sán là 3,5%. TÀI LIỆU THAM KHẢO Ngày phản biện nhận xét bài báo: 19/6/2014 Ngày bài báo được đăng: 14/11/2014 NguyễnThị Khả Ái, Nguyễn Thị Thanh Hà và cs (2009). Khảo sát tình hình nhiễm ấu trùng giun đũa chó và các yếu tố liên quan ở cộng Chun Đề Y Tế Cơng Cộng Ngày nhận bài báo: 17/5/2014 325 ... số liệu điều tra trước đó, đã ước tính tỷ lệ nhiễm giun đũa và giun tóc trong cộng đồng dân cư của Campuchia vào năm 2002 tại các tỉnh biên giới Campuchia ‐ Việt Nam là cao (3). Vấn đề cần nắm bắt thực trạng nhiễm giun sán tại biên giới ... cứu khoa học Viện Sốt rét ‐ KST ‐ CT TP. HồChí Minh. Tr. 67‐78. KẾT LUẬN Tỷ lệ nhiễm giun sán (lươn, đũa chó mèo, sán gạo, sán dây) bằng kỹ thuật ELISA tại dân cư cộng đồng nghiên cứu chiếm 64%. Tỷ lệ nhiễm giun đũa chó ... Các mẫu huyết thanh thu thập được tại cộng đồng dân cư điểm nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu Tại các tỉnh An Giang, Đồng Tháp, Bình Phước, Kiên Giang, Long An và Tây Ninh. Phân tích mẫu bằng kỹ thuật elisa tại