Điều tra, nghiên cứu ký sinh trùng giáp xác chân tơ (cirripedia) trên cua biển (scylla sp) trong nuôi ao đất tại vùng ven biển nam định

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM    KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Tên đề tài: Bước đầu xác định khả sinh enzyme xylanase từ số chủng nấm, ứng dụng để sản xuất prebiotic xylooligosaccharide Sinh viên thực : Lê Thị Huế Lớp : BQCBB Khóa : K54 Người hướng dẫn : TS Nguyễn Hồng Anh Bộ mơn Hóa sinh - Cơng nghệ sinh học thực phẩm HÀ NỘI, 5/2013 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu Khóa luận trung thực Tơi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực Khóa luận cám ơn thơng tin trích dẫn chun đề ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 23 tháng năm 2013 i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực tập Bộ mơn Hóa sinh – Cơng nghệ sinh học thực phẩm, khoa Công Nghệ Thực Phẩm phòng Cơng nghệ vi sinh, khoa Cơng nghệ Sinh Học quan tâm, giúp đỡ dìu dắt tận tình thầy giáo, cán phòng thí nghiệm Bộ mơn, cố gắng nỗ lực thân, tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Hồng Anh tận tình hướng dẫn dạy dỗ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Qua xin gửi lời cảm ơn đến tồn thể Phòng, Ban khoa Công Nghệ Thực Phẩm khoa Công Nghệ Sinh Học toàn thể bạn bè giúp đỡ, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập thực tập tốt nghiệp Và cuối cùng, với tất lòng kính trọng biết ơn vô hạn, xin gửi lời cảm ơn tới Bố, Mẹ, Ông, Bà người thân nuôi nấng, động viên tạo động lực cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu Hà Nội, ngày 23 tháng năm 2013 i MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU .iv DANH MỤC CÁC BẢNG .v DANH MỤC CÁC HÌNH vii PHẦN THỨ NHẤT – MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích – Yêu cầu 1.2.1 Mục đích .2 1.2.2 Yêu cầu PHẦN THỨ HAI - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Xylan 2.1.1 Giới thiệu xylan .3 2.1.2 Nguồn cung cấp xylan 2.1.3 Tính chất xylan 2.1.4 Ứng dụng xylan sản xuất XOS .7 2.2 Enzyme xylanase .7 2.2.1 Giới thiệu hệ enzyme xylanase 2.2.2 Nguồn enzyme xylanase tự nhiên ứng dụng 2.2.3 Tình hình nghiên cứu enzyme xylanase 11 2.3 Giới thiệu chung số chủng nấm sợi 12 2.4 Prebiotic Xylooligosaccharide (XOS) 14 PHẦN THỨ BA 16 ĐỐI TƯỢNG - NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Đối tượng địa điểm nghiên cứu 16 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu 16 3.1.3 Dụng cụ hóa chất nghiên cứu .16 3.2 Nội dung nghiên cứu 18 3.2.1 Xác định hoạt tính enzyme xylanse số chủng nấm mốc ni mơi trường có xylan từ lõi ngô 19 3.2.2 Xác định ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy tới khả sinh enzyme chủng nấm mốc .19 3.2.3 Xác định ảnh hưởng nồng độ chất xylan từ lõi ngô tới khả sinh enzyme xylanase chủng nấm mốc 19 3.2.4 Tinh xác định hoạt độ riêng enzyme xylanase chủng nấm mốc có khả sinh enzyme 19 3.3 Phương pháp nghiên cứu .20 3.3.1 Phương pháp nuôi cấy nấm mốc 20 3.3.2 Phương pháp sản xuất xylan từ lõi ngô 20 3.3.3 Phương pháp chuẩn bị dịch huyền phù xylan .20 ii 3.3.4 Phương pháp xác định hoạt tính xylanase theo phương pháp định lượng đường khử với thuốc thử DNS 21 3.3.5.Xác định hàm lượng protein thiết bị so màu Eppendorf Biophotometer plus 23 3.3.6.Tinh enzyme (NH4)2SO4 24 PHẦN THỨ TƯ 25 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Hình thái đại thể chủng nấm mốc .25 4.2 Xác định hoạt tính enzyme xylanase số chủng nấm mốc ni mơi trường có xylan từ lõi ngô 27 4.3 Xác định ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae Trichoderma 29 4.4 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae Trichoderma 31 4.5 Tinh xác định hoạt độ riêng enzyme xylanase chủng nấm mốc có khả sinh enzyme cao .34 PHẨN THỨ NĂM 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .36 5.1 Kết luận 36 5.2 Đề nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 Tài liệu tiếng Việt 37 PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU A.oryzae : Aspergillus oryzae A.niger : Aspergillus niger A.flavus : Aspergillus flavus Abs : Absorbance (Độ hấp thụ quang) DNS : 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoic acid PDA : Potato dextrose agar XOS : Xylooligosaccharide iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần hợp chất lõi ngô .4 Bảng 2.2 Thành phần hemicellulose sinh khối thực vật Bảng 3.1 Dụng cụ sử dụng nghiên cứu 17 Bảng 3.2: Phản ứng DNS với nồng độ xylose khác .22 Bảng 4.2 Hoạt tính enzyme xylanase số chủng nấm mốc ni mơi trường có xylan từ lõi ngô 28 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme 29 chủng A.oryzae .29 Kết ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme chủng Trichoderma thể bảng 4.4 hình 4.7: .30 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme 30 chủng Trichoderma 30 Bảng 4.5 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae 32 U/l 32 2% 32 4% 32 6% 32 8% 32 10% 32 24h 32 21,06±0,043 .32 28,76±0,031 .32 38,88±0,073 .32 9,47±0,034 .32 4,75±0,033 .32 48h 32 48,60±0,046 .32 61,45±0,035 .32 66,98±0,022 .32 18,26±0,042 .32 6,06±0,045 .32 72h 32 65,77±0,035 .32 v 81,26±0,067 .32 113,91±0,096 32 21,67±0,031 .32 7,84±0,022 .32 96h 32 88,05±0,075 .32 12,95±0,008 .32 177,72±0,046 32 32,90±0,041 .32 8,89±0,022 .32 120h 32 41,59±0,045 .32 68,05±0,045 .32 81,43±0,061 .32 23,45±0,046 .32 4,65±0,067 .32 144h 32 20,81±0,021 .32 37,23±0,041 .32 56,04±0,024 .32 18,09±0,008 .32 3,07±0,072 .32 Bảng 4.6 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng Trichoderma 33 Bảng 4.7 Hoạt tính enzyme xylanase tính theo lít dịch ni cấy 34 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc xylan [29] Hình 2.2 Cơ chế cắt xylan enzyme endoxylanase [27] Hình 2.3 Cấu trúc không gian Endo-1,4-β Xylanase [26] Xylanase báo cáo lần vào năm 1955 Đó enzyme thủy phân xylan, phá vỡ liên kết ß1,4-xylanosidic xylan thành nhiều xylo-oligosaccharide có độ dài khác [16] Cho đến nay, có 87 xylanase xác định cấu trúc lập thể Hầu hết xylanase vi sinh vật protein đơn phân tử Tuy nhiên, xylanase đa phân tử ngày miêu tả nhiều Những enzyme chứa cấu trúc coi vị trí xúc tác (catalytic domain – CD) vài vị trí gắn với carbohydrate (carbohydrate-binding domain-CBDs) Những xylanase chứa CBDs có hiệu thủy phân cao trường hợp chất kết tinh nồng độ cao bề mặt chất lỏng [14] Hình 3.1 Đường chuẩn Xylose 23 Hình 4.1 Hình thái nấm mốc Aspergillus niger 25 Hình 4.2 Hình thái nấm mốc Aspergillus oryaze 26 Hình 4.3 Hình thái nấm mốc Trichoderma .26 Hình 4.4 Hình thái nấm mốc Aspergillus flavus 27 Hình 4.5 Đồ thị biểu diễn hoạt độ enzyme xylanase số chủng nấm mốc ni mơi trường có xylan từ lõi ngô .28 Hình 4.6 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme 30 chủng A.oryzae .30 Hình 4.7 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme 31 chủng Trichoderma 31 Hình 4.8 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae 32 Hình 4.10 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng Trichoderma…………………………………………………………………………….32 vii PHẦN THỨ NHẤT – MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Ngày nay, điều kiện sống người ngày nâng cao nhu cầu sử dụng thực phẩm tốt cho sức khỏe ngày tăng Một xu hướng thực phẩm đã, hướng tới tương lai thực phẩm chức năng, kích thích phát triển hệ vi sinh vật có lợi (probiotic) hệ tiêu hóa người sử dụng [2] Để đạt điều đó, ngày nhà sản xuất thực phẩm sử dụng hai phương thức bổ sung trực tiếp chủng vi khuẩn có lợi bổ sung chất (prebiotic) vào thực phẩm nhằm hỗ trợ phát triển vi khuẩn đường ruột Tuy nhiên, việc phân lập vi khuẩn probiotic cho phù hợp tồn môi trường axit dịch vị dày điều không dễ dàng [25] Vì thế, xu hướng bổ sung prebiotic vào thực phẩm tập trung hơn, prebiotic khơng bị phân hủy hệ tiêu hóa người nguyên vẹn vào đến ruột già [11] Ngồi ra, prebiotic chứng minh có nhiều tác dụng tốt cho người tiêu dùng lứa tuổi cải thiện hệ miễn dịch; giúp hấp thụ canxi; ngăn ngừa số loại ung thư [25] Xylooligosaccharide (XOS) số prebiotic quan tâm nghiên cứu lợi ích mà mang lại XOS thu nhận từ nguồn phế phụ phẩm nơng nghiệp bã mía, rơm rạ, lõi ngô Tuy nhiên công nghệ tách chiết XOS từ nguồn cho hiệu suất không cao, đắt tiền, áp dụng quy mô công nghiệp Công nghệ enzyme nghiên cứu sử dụng nhiều sản xuất prebiotic nói chung XOS nói riêng cho hiệu suất cao cơng nghệ thân thiện với môi trường Để sản xuất XOS enzyme cần sử dụng endoxylanase Enzyme có thể tìm thấy nhiều đối tượng khác nhau, nhiên enzyme từ vi sinh vật quan tâm khả phát triển nhanh, hiệu suất thu hồi lớn [5] Trong tự nhiên, có nhiều loại vi khuẩn nấm mốc tiết xylanase, xylanase nấm mốc tiết xylanase quan tâm chúng có hoạt tính ổn định [7].Vì lí chúng tơi tiến hành đề tài: “Bước chủng có hoạt tính cao chủng lại Vì thế, chúng tơi định chọn A.oryzae Trichoderma làm hai chủng cho thí nghiệm 4.3 Xác định ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae Trichoderma Chúng tiến hành nuôi cấy thử nghiệm chủng A.oryzae Trichoderma mơi trường có bổ sung xylan 1% nhiệt độ 250C, 300 C, 370C, 400C tiến hành xác định hoạt tính enzyme thời gian ni cấy để xác định ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme xylanase Thí nghiệm thực ln nhắc lại ba lần lấy giá trị trung bình Kết ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae thể bảng 4.3 hình 4.6: Bảng 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae U/l 250C 300C 370C 400C 24h 6,41±0,023 17,14±0,056 19,16±0,051 7,25±0,034 48h 14,25±0,031 41,35±0,031 27,94±0,022 10,54±0,042 72h 22,40±0,036 51,82±0,067 35,37±0,031 19,12±0,031 96h 28,80±0,075 70,98±0,009 44,95±0,046 23,76±0,041 120h 14,54±0,045 57,85±0,045 26,19±0,061 10,65±0,046 144h 11,06±0,021 32,20±0,041 15,19±0,024 3,55±0,008 29 Hình 4.6 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae Từ bảng 4.3 hình 4.6 ta thấy nhiệt độ ni cấy thích hợp cho chủng A.oryzae sinh xylanase 300C sau 96h ni cấy khả sinh enzyme xylanase cao nhất, đạt 71 (U/l) Kết ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme chủng Trichoderma thể bảng 4.4 hình 4.7: Bảng 4.4 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme chủng Trichoderma U/l 250C 300C 370C 400C 24h 8,72±0,072 19,59±0,054 24,19±0,044 6,65±0,022 48h 19,81±0,056 31,59±0,031 32,97±0,022 9,65±0,042 72h 26,96±0,036 51,94±0,067 39,81±0,031 21,98±0,031 96h 18,48±0,045 39,24±0,071 26,87±0,046 14,95±0,041 120h 15,87±0,035 23,62±0,045 16,56±0,076 10,68±0,046 144h 10,51±0,035 16,38±0,041 14,71±0,024 6,77±0,072 30 Hình 4.7 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả sinh enzyme chủng Trichoderma Từ bảng 4.4 hình 4.7, ta thấy nhiệt độ thích hợp cho chủng Trichoderma sinh enzyme xylanase 300C sau 72h ni cấy khả sinh enzyme xylanase cao đạt 51 (U/l) Như vậy, nhiệt độ ni cấy thích hợp cho tạo thành enzyme xylanase hai chủng nấm mốc Trichoderma A.oryzae 300C 4.4 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae Trichoderma Vì nhiệt độ ni cấy thích hợp cho tạo thành enzyme xylanase hai chủng nấm mốc Trichoderma A.oryzae 300Cnên tiến hành nuôi cấy thử nghiệm hai chủng A.oryzae Trichoderma mơi trường bổ sung xylan từ lõi ngơ có nồng độ 2%, 4%, 6%, 8%, 10% nhiệt độ 300C để xác định ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme xylanase Dịch nuôi cấy lấy thời điểm khác để xác định hoạt tính enzyme xylanase Thí nghiệm ln nhắc lại ba lần lấy giá trị trung bình Kết ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae thể bảng 4.5: 31 Bảng 4.5 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae U/l 2% 4% 6% 8% 10% 4,75±0,033 24h 21,06±0,043 28,76±0,031 38,88±0,073 9,47±0,034 48h 48,60±0,046 61,45±0,035 66,98±0,022 18,26±0,042 6,06±0,045 72h 65,77±0,035 81,26±0,067 113,91±0,096 21,67±0,031 7,84±0,022 96h 88,05±0,075 12,95±0,008 177,72±0,046 32,90±0,041 8,89±0,022 120h 41,59±0,045 68,05±0,045 81,43±0,061 23,45±0,046 4,65±0,067 144h 20,81±0,021 37,23±0,041 56,04±0,024 18,09±0,008 3,07±0,072 Hình 4.8 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng A.oryzae Từ bảng 4.5 hình 4.8 ta thấy, nồng độ chất xylan thích hợp cho A.oryzae phát triển sinh enzyme xylanase 6% hoạt tính đạt cao sau 96h, ni cấy A.oryzae mơi trường có bổ sung 6% chất 177 (U/l) 32 Kết ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng Trichoderma thể bảng 4.6 hình 4.9: Bảng 4.6 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng Trichoderma U/l 2% 4% 6% 8% 10% 24h 16,80±0,035 28,26±0,076 30,84±0,097 12,15±0,034 8,184±0,058 48h 30,32±0,023 72h 60,04±0,017 112,3±0,024 74,86±0,032 22,83±0,021 12,84±0,034 96h 41,78±0,046 71,16±0,041 43,42±0,046 19,56±0,056 10,08±0,045 68,4±0,026 39,89±0,085 19,56±0,007 9,821±0,077 120h 28,26±0,036 60,22±0,039 31,19±0,041 8,27±0,096 4,48±0,082 Hình 4.9 Ảnh hưởng nồng độ chất tới khả sinh enzyme chủng Trichoderma Từ bảng 4.6 hình 4.9 ta thấy, nồng độ chất xylan thích hợp cho Trichoderma phát triển sinh enzyme xylanase 4% hoạt tính đạt cao sau 72h, nuôi cấy Trichoderma mơi trường có bổ sung 4% chất xylan 112 (U/l) 33 Như vậy, sau nuôi cấy chủng A.oryzae Trichoderma số điện kiện nhiệt độ chất khác chúng tơi tìm chủng A.oryzae chủng có khả sinh enzyme xylanase cao Trichoderma Chính thế, chúng tơi chọn A.oryzae làm chủng nuôi cấy để tinh xác định hoạt tính riêng 4.5 Tinh xác định hoạt độ riêng enzyme xylanase chủng nấm mốc có khả sinh enzyme cao Chúng tiến hành nuôi cấy chủng A.oryzae môi trường PDA có bổ sung 6% chất xylan, nhiệt độ 30 0C tiến hành thu dịch môi trường nuôi cấy sau 96h Dịch nuôi cấy mang li tâm 6000 vòng/phút, 0C phút để thu dịch enzyme xylanase Dịch enzyme xylanase thu mang tinh cách cho từ từ (NH 4)2SO4 bão hòa 40, 50, 60 70% vào dịch enzyme khuấy cho tan hết Sau kết tủa tủ lạnh vòng li tâm lấy tủa (6000 v/p 4oC phút) Dịch enzyme xylanase tinh xác định hàm lượng protein máy đo Eppendorf Biophotometer plus xác định hoạt tính xylanase dựa theo phương pháp định lượng đường khử với thuốc thử DNS Thí nghiệm ln lặp lại ba lần lấy giá trị trung bình Kết thu bảng 4.7: Bảng 4.7 Hoạt tính enzyme xylanase tính theo lít dịch ni cấy Enzyme Tổng hoạt tính (U) Tổng protein (mg) Hoạt tính riêng (U/mg) Hiệu suất thu hồi (%) Trước kết tủa 1,795 80 0,022 100 Kết tủa 40% (NH4)2SO4 0,429 15 0,029 32,30% Kết tủa 50% (NH4)2SO4 0,421 10 0,042 29,00% Kết tủa 60% (NH4)2SO4 0,408 14 0,029 28,30% Kết tủa 70% (NH4)2SO4 0,406 15 0,027 27,60% 34 Chúng tơi dựa vào hoạt tính riêng enzyme xylanase để xác định khả kết tủa enzyme xylanase (NH4)2SO4 Hoạt tính riêng cao chứng tỏ khả kết tủa protein enzyme (NH4)2SO4 tốt, độ enzyme cao Qua khảo sát kết tinh 10ml enzyme với nồng độ muối (NH4)2SO4 có nồng độ bão hòa khác chúng tơi nhận thấy hoạt tính riêng enzyme tinh 50% (NH4)2SO4 cao (0.042 U/l) với hiệu suất thu hồi 29% thấp tinh nồng độ 70% (0.027 U/l) với hiệu suất thu hồi 27.6% 35 PHẨN THỨ NĂM KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Trên sở kết thu đưa kết luận sau: Nhiệt độ tối thích để nấm mốc Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus flavus Trichoderma sinh enzyme xylanase 300C Nồng độ chất xylan thích hợp cho chủng Aspergillus oryzae sinh enzyme xylanase 6% sau 96h nuôi cấy Nồng độ chất xylan thích hợp cho chủng Trichoderma sinh enzyme xylanase 4% sau 72h nuôi cấy Khi tiến hành tinh enzyme xylanase muối NH 4SO4, chúng tơi thấy hoạt tính riêng enzyme xylanase đạt giá trị cao tiến hành tinh nồng độ muối NH4SO4 50% 5.2 Đề nghị Do thời gian thực tập điều kiện thực tập hạn chế nên chúng tơi chưa thể tiến hành số thí nghiệm mong muốn Vì chúng tơi có số đề nghị cho nghiên cứu sau: - Tinh enzyme sắc ký lực, phương pháp cho hiệu suất thu hồi độ tinh enzyme cao so với phương pháp tủa enzyme (NH4)2SO4 - Tinh đặc tính hóa enzyme xylanase - Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất XOS (Xlylooligosaccharide) 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Phương Phú Công (2009) Nghiên cứu tuyển chọn chủng vi sinh vật sinh tổng hợp xylanase phế phụ phẩm nông nghiệp phục vụ chăn nuôi chiết xuất enzyme nuôi cấy số loại nấm ăn nấm dược liệu Luận văn Tiến sĩ Khoa học Sinh học Đại học Sư phạm Hà Nội Số 5, trang 20-25 Trần Phong Lan Đài (2011) Quy trình sản xuất Yaourt bổ sung probiotic, Khóa luận tốt nghiệp Đại học kĩ thuật cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh, trang 3-7 Đinh Hồng Duyên, Phạm Thị Thảo Nguyên, Phạm Thúy Kiều (2010) Đánh giá đặc tính sinh học định tên nấm dùng xử lý phế thải nông nghiệp Tạp chí khoa học phát triển Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Số 2, trang 287 – 295 Nguyễn Nguyệt Dung, Lê Văn Hoàng, Moxitrep M X (1998) Nghiên cứu sử dụng lõi ngô để chế biến đường tạo mơi trường sản xuất men Tạp chí Cơng nghệ Khoa học Môi trường Số 7, trang 322-326 Lương Đức Phẩm (2004) Công nghệ Vi sinh vật NXB Nông Nghiệp, trang 24-32 Trần Hữu Phong (2007) Nghiên cứu số đặc điểm xylanase thô tinh endo xylanase từ chủng Aspergillus niger ĐB 106 Đại học Sư phạm Hà Nội Nguyễn Hữu Quân (2009) Tuyển chọn, nuôi cấy chủng Aspergillus oryzae sinh tổng hợp endo-β-1,4-glucanase xác định tính chất lí hóa Luận văn thạc sĩ sinh học Đại học sư phạm Thái Nguyên Trang 23-27 Đỗ Thị Thơm (2012) Xác định đặc tính enzyme chitinase từ chủng vi sinh vật tái tổ hợp E.coli T7 Khóa luận tốt nghiệp Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội Nguyễn Thị Thu Thủy, Nguyễn Văn Thuật, Đỗ Thị Tuyên, Quyền Đình Thi (2009) Biểu đánh giá tính chất hóa lý xylanase tái tổ hợp từ chủng A oryzae VTCC – F187 Pichia pastoris GS115 Tạp chí khoa học phát triển Nhà xuất Đại học Thái Nguyên, trang 710 – 714 37 10.Nguyễn Thị Minh Trang (2007) Nghiên cứu thu nhận eznyme xylanase từ A.niger Tritoderma Viride phương pháp lên men bán rắn Đại học khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh, trang 27-36 11 Chế Minh Tùng (2008) Prebiotic chăn ni Tạp chí khoa học công nghệ Khoa chăn nuôi thú y, Đại học Nông Lâm TP HCM Số 3, trang 5-7 12 Báo cáo tổng kết Khoa học Kỹ thuật Viện Cơ điện Nông nghiệp Công nghệ Sau thu hoạch (2009) Nghiên cứu công nghệ sản xuất đường xylose từ lõi ngô, trang 32-40 Tài liệu nước 13 Abe K., Gomi K., Hasegawa F., Machida M (2006) Impact of Aspergillusoryzae genomics on industrial production of metabolites Mycopathologia 162:143–153 14 Adsul MG., Bastawde KB., Gokhale DV (2009) Biochem-ical characterization of two xylanases from yeast Pseudozyma hubeiensis producing only xylooli-gosaccharides Bioresour Technol 100: 6488-6495 15.Akpinar O., Erdogan K., Bostanci S (2009) Enzymatic production of Xylooligosaccharide from selected agricultural wastes Food and Bioproducts Processing 87: 145-151 16 Bastawde KB (1992) Xylan structure, microbial xylanases, and their mode of xylanase activity J Biotechnol 23: 257-270 17 Deschamps F., Huet MC (1985) Xylanase production in solid-state fementation: a study of its properties App Microbiol Biotechnol 22: 177180 18.Machida D., Asai K., Sano M (2005) Genome sequencing and analysis of Aspergillus oryzae Nature 438: 157-1162 19.Nicole Goldman (2009) Methods for optimizing enzymatic hydrolysis of xylan to improve xylooligosaccharide yield MMG 445 Basic Biotechnology 5:31-36 20.Pinpanit Boonchuay, Thanongsak Chaiyaso (2012) Enzymatic production of xylooligosaccharides from corncob using endoxylanase from Steptomyces 38 thermovulgaris TISTR1948 1st Mae Fah Luang University International Conference 10: 2-4 21.Shibuya N., Iwasaki T (1985) Structural features of rice bran hemicellulose Phytochemistr 24: 285-289 22.Yoon K., Yang R., Xu S., Wang Z., Yang W.(2005) Aqueous extrac-tion of corncob xylan and production of xylooli-gosaccharides LWT – Food Science and Technol-ogy 38: 677-682 23.Yang R., Xu S., Woodams EE., Hang YD (2006) Enzymatic production of pentoses from the hemicellulose fraction of corn residues LWT – Food Science and Technology 39: 388-392 Tài liệu internet 24.http://www.nsl.hcmus.edu.vn/greenstone/collect/thesiskh/archives/HASH5e7 b.dir/5.PDF 25.http://updatebook.vn/threads/26852-Nhung-van-de-moi-trong-cong-nghethuc-pham-anh-huong-cua-prebiotic-den-suc-khoe 26.http://updatebook.vn/threads/40694-San-xuat-xylanase-bang-phuong-phaplen-men-be-mat 27.http://www.sigmaaldrich.com/life-science/metabolomics/enzymeexplorer/analytical-enzymes/enzymes-for-aer.html 28.http://doc.edu.vn/tai-lieu/luan-van-thiet-ke-vector-bieu-hien-gen-ma-hoaxylanase-trong-nam-moc-10826/ 29 http://www.scientificpsychic.com/fitness/carbohydrates2.html 30.http://updatebook.vn/threads/56444-enzym-xylanase-trong-cong-nghe-thucpham.htm 31.http://vaas.vn/kienthuc/cayngo/sanxuatngoovietnam.php 32.http://lhu.edu.vn/Data/News/388/files/Chuong_10.pdf 39 PHỤ LỤC Một số hình ảnh đề tài Lõi ngơ ngun liệu Lõi ngô sau nghiền 40 Lõi ngô sau ngâm NaOH 10% Dịch lõi ngô sau lọc làm 41 Lõi ngơ sau trung hòa H2SO4 5% Xylan thành phẩm 42 Xây dựng đường chuẩn (nồng độ Xylose tăng dần từ trái sang phải) Dịch enzyme xylanase kết tủa nồng độ (NH4)2SO4 40%, 50%, 60%, 70% (từ trái qua phải) 43 ... PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Đối tượng địa điểm nghiên cứu 16 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu 16 3.1.3 Dụng cụ hóa chất nghiên cứu ... dung nghiên cứu 18 3.2.1 Xác định hoạt tính enzyme xylanse số chủng nấm mốc nuôi môi trường có xylan từ lõi ngơ 19 3.2.2 Xác định ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy tới khả sinh. .. Dịch nuôi cấy lấy thời điểm sau 24h, 48h, 72h, 96h, 120h, 144h để xác định hoạt tính enzyme xylanase [10] 3.2.2 Xác định ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy tới khả sinh enzyme chủng nấm mốc Để xác định