HƯỚNG dẫn THỰC HÀNH CÔNG NGHỆ sản XUẤT dược PHẨM

NỘI DUNG HƯỚNG DẪN THỰC HÀNH CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT DƯỢC PHẨM Sinh viên phải đọc kỹ thực tập, nghiên cứu phần lý thuyết liên quan học Yêu cầu phải học thuộc giải thích quy trình sản xuất Sinh viên phải chuẩn bị trước nhà từ mục đến mục báo cáo theo mẫu, phần 5,6,7 hoàn thiện trình thực hành Phải nắm vững mục an tồn lao động cơng việc làm, trước thực hành Giảng viên kiểm tra: An tồn lao động, lý thuyết liên quan, q trình tiến hành làm thực tập Phải tuân thủ quy định bước tiến hành quy trình thực tập, không tự ý thay đổi Lắp ráp sử dụng dụng cụ, thiết bị phải theo nguyên tắc quy định theo dẫn giáo viên Phải tuyệt đối chấp hành quy định nội quy an toàn lao động Khi vỡ hỏng dụng cụ phải báo cáo với giáo viên hướng dẫn Nếu đánh vỡ hỏng dụng cụ không báo cáo mà bị phát thực tập coi không đạt kết Sinh viên phải ghi chép đầy đủ số liệu, công việc tiến hành thực cách tính tốn, nhận xét thực tập vào báo cáo Phải tôn trọng chấp hành nghiêm chỉnh nội quy thực tập, không tự ý bỏ nơi khác phạm vi thực tập, cần đâu phải đồng ý giảng viên hướng dẫn Sau làm xong thực tập, nhóm sinh viên phải nộp hết sản phẩm, báo cáo kết cho giáo viên phải ký tên vào sổ theo dõi sản phẩm Mỗi sinh viên phải nộp báo cáo thực tập sau kết thúc thực tập Sinh viên thực tập không đạt yêu cầu, không nộp báo cáo thực tập phải thực tập lại Kết học tập sinh viên giáo viên hướng dẫn đánh giá thông qua: - Kiểm tra kiến thức liên quan trước sau thực tập - Ý thức chấp hành nội quy, ý thức tổ chức kỷ luật giữ gìn trật tự, vệ sinh - Kỹ thuật, kỹ thao tác kết sản phẩm thu thực tập - Báo cáo thực tập 10 Sau ngày thực tập tổ trưởng phải có trách nhiệm phân cơng trực nhật vệ sinh phòng thực tập, tắt điện, nước, quạt… QUY ĐỊNH VỀ AN TỒN LAO ĐỘNG 1 Đối với dung mơi dễ cháy phải cẩn thận, bình, lọ đựng dung môi dễ cháy nổ phải đậy kín để cách xa nguồn nhiệt Đối với dụng cụ thiết bị sử dụng cần ý: - Sử dụng dụng cụ thủy tinh đun nóng phải nhẹ nhàng, tránh nóng lạnh đột ngột dễ gây nứt vỡ - Khi đun nóng thiết bị chiết nóng nồi đun cách thủy phải thường xuyên kiểm tra lượng nước nồi đun, thiếu phải bổ xung thêm nước, cạn gây cháy dụng cụ - Khi đun nóng chai lọ có chứa dung mơi dễ bay hơi, khơng đậy kín, tránh khơng hướng miệng chai, lọ phía có người - Khi lắc dụng cụ thủy tinh (bình gạn, chai lọ ) có chứa dung mơi nóng, phải mở nút để dung mơi ngồi (tránh nổ vỡ) Khi mở nút phải hướng miệng chai lọ phía khơng có người Đối với hóa chất sử dụng phải thận trọng: - Tránh khơng để rơi hóa chất người hay quần áo gây bỏng da, ăn da, cháy… - Khi pha loãng dung dịch acid hay kiềm đặc, yêu cầu phải rót từ từ dung dịch vào nước khuấy đều, tuyệt đối không làm ngược lại, không cầm dung dịch pha tay tỏa nhiệt mạnh - Tuyệt đối khơng dùng miệng hút dung dịch kiềm đặc, acid đặc, chất độc dễ bay - Mở nút chai lọ để lấy hóa chất, dùng xong phải đậy nút lại - Khi khuấy trộn dung môi dễ bay dung môi hữu không cúi mặt vào dung môi đặc biệt dung mơi q trình chiết nóng, để tránh dung môi không bốc thẳng vào mặt gây mệt mỏi khó chịu Phần 1: KỸ THUẬT TỔNG HỢP HĨA DƯỢC Bài 1: TỔNG HỢP ASPIRIN Mục tiêu Trình bày nguyên tắc phản ứng acyl hoá nguyên lý phản ứng tổng hợp aspirin Tiến hành bước tổng hợp aspirin theo qui trình Tổng hợp aspirin đạt hiệu suất yêu cầu Trình bày giải thích quy trình sản xuất KIẾN THỨC CẦN CHUẨN BỊ TRƯỚC - Aspirin, acid salicylic: cơng thức, tính chất lý hóa, tác dụng dược lý - Phản ứng acyl hóa: nguyên tắc - Tổng hợp aspirin từ acid salicylic phản ứng acyl hóa: nguyên tắc, cách tiến hành - Tiêu chuẩn thành phẩm theo DĐVN IV THỰC HÀNH Nguyên tắc chung Phản ứng tổng hợp aspirin phản ứng acyl hóa, nhóm alcol từ salicylic acid phản ứng với anhydrid acetic để tạo nên ester Sơ đồ phản ứng: O O OH + Acid salicylic H3C O O O OH OH O CH3 O CH3 O Anhydrid acetic Aspirin + H3C Acid acetic Nguyên liệu, hóa chất thiết bị, dụng cụ Nguyên liệu, hóa chất Acid salicylic khan DD Anhydrid acetic Acid sulfuric đặc Ethanol 960 Nước cất Số lượng 10,00g 14 ml giọt 30 ml 75ml Thiết bị, dụng cụ Bình nón 100ml Nhiệt kế 1000 Nồi cách thủy Bộ lọc hút Buchner Tủ sấy Qui trình tổng hợp Tổng hợp: - Chuẩn bị thiết bị, dụng cụ - Cân đong ngun liệu, hóa chất, dung mơi CH3 Số lượng chiếc chiếc - Cân xác khoảng 10,00g acid salicylic khan (mới sấy) đong 14 ml anhydrid acetic cho vào bình nón 100ml, thêm giọt acid sulfuric đặc vào, lắc kỹ Đun cách thủy 50 - 600C, khuấy 45 phút đến acid salicylic tan hết - Để hỗn hợp phản ứng nguội đến nhiệt độ phòng, khuấy - Thêm từ từ 150 ml nước cất, khuấy kỹ, aspirin tủa Lọc qua phễu Buchner lấy tủa Tinh chế: - Hòa tan tủa aspirin thơ thu 30 ml ethanol nóng, sau đổ từ từ dung dịch vào 75ml nước nóng (nếu aspirin kết tủa lại đun nóng cho tan hết) - Để dung dịch nguội đến nhiệt độ phòng, aspirin kết tinh dạng tinh thể Lọc hút kiệt, thu tinh thể hình kim - Sấy khô 500C 24giờ - Cân tính hiệu suất Tiêu chuẩn nguyên liệu Bột kết tinh trắng, vị chua, tan 300 phần nước, tan cồn, ete, cloroform, dung dịch kiềm, không cho phản ứng với FeCl3 Tỷ trọng 1,40 g/cm³ Nhiệt độ nóng chy 132-136C Kiểm nghiệm ASpirin Định tính aspirin 1.1 Tính acid aspirin - Đặt vài tinh thể aspirin lên giấy quì xanh, thêm vào vài giọt nớc Phần giấy quì có aspirin nớc chuyển sang màu đỏ 1.2 Xác định acid salicylic acid acetic - Đun sôi khoảng 0,2 g chế phẩm với 4ml dung dịch NaOH 10% phút - Để nguội thêm 5ml H2SO4 10% khuấy - Lọc lấy tủa đồng thời giữ lại phần dịch lọc - Xác định acid salicylic: + Rửa tủa nớc cất + Cho tủa vào ống nghiệm, thêm 1ml ethanol 96 lắc cho tan + Thêm 3ml nớc cất, lắc + Thêm từ từ dung dịch FeCl3 5% có màu tím - Xác định acid acetic + Thêm thừa bột CaCO3 vào dịch lọc, lắc kỹ cho hết sủi bọt, lọc + Thêm vào dịch lọc vài giọt dung dịch FeCl 5% xuất màu hồng Định lợng aspirin - Trung tính hoá ethanol dïng chØ thÞ phenolphtalein - Nhá - giọt thị phenolphtalein vào 10ml dung dịch ethanol 960 Quan sát màu dung dịch (Nếu làm bình trung tính khoảng 20ml) - Nếu không màu, thêm từ từ dung dịch NaOH 0,1N dung dịch có màu hồng nhạt - Cân xác khoảng 0,3000g chế phẩm cho vào bình nón m1, m2 - Thêm 10ml ethanol trung tính hoá chuẩn bị lắc cho tan - Làm lạnh dung dịch xuống - 100C - Thêm 0,2ml thị phenolphtalein Chuẩn ®é b»ng dung dÞch NaOH 0,1N cho ®Õn dung dịch có màu hồng bền vững - Ghi thể tích NaOH 0,1N dùng - Tính hàm lợng aspirin aspirin dợc dụng Chế phẩm aspirin dợc dụng phải có hàm lợng từ 99,5 - 100,5% 0,01802 KNaOH VNaOH P% = 100 mcp Bài 2: TỔNG HỢP DIETHYLPHTALAT Mục tiêu Trình bày nguyên tắc phản ứng ester hoá nguyên lý phản ứng tổng hợp diethylphtalat Tiến hành bước tổng hợp diethylphtalat theo qui trình Tổng hợp diethylphtalat đạt hiệu suất yêu cầu viết báo cáo thực tập KIẾN THỨC CẦN CHUẨN BỊ TRƯỚC - Diethylphtalat, anhydrid phthalic: cơng thức, tính chất lý hóa, tác dụng dược lý - Phản ứng ester hóa: nguyên tắc - Tổng hợp diethylphtalat: nguyên tắc, cách tiến hành - Tiêu chuẩn thành phẩm theo DĐVN IV THỰC HÀNH Nguyên tắc chung Phản ứng tổng hợp diethylphtalat phản ứng ester hóa xảy qua hai giai đoạn: giai đoạn đầu ethanol cộng hợp vào anhydrid phthalic tạo thành monoester Sau ester hố monoester thành diethylphtalat Sơ đồ phản ứng: Nguyên liệu, hóa chất thiết bị, dụng cụ Nguyên liệu, hóa chất Số lượng Thiết bị, dụng cụ Số lượng Anhydrid phtalic 45,55g Bình đáy tròn 500ml, 1000ml Natri carbonat bão hòa Vừa đủ Bình gạn 100ml, 500ml Acid sulfuric đặc 16,5ml Bình nón 100ml Ethanol 960 45,5ml Nhiệt kế 1000 Natri sulfat khan 3,3g Nồi cách thủy Than hoạt 0,4g Chỉ thị pH Nước cất 75ml Cốc mỏ Quy trình tổng hợp Tổng hợp: - Chuẩn bị thiết bị, dụng cụ - Cân đong nguyên liệu, hóa chất, dung môi - Cho 45,55g (0,3 mol) anhydrid phtalic 45,5ml (0,8mol) ethanol vào bình đáy tròn 500ml Lắc kỹ, thêm từ từ 16,5ml (d=1,83; 0,3mol) acid sulfuric đặc, lắc kỹ khoảng 10 - 15 phút - Lắp sinh hàn đun cách dầu 1000C, lắc Sau tan hết, đun tiếp (nếu đun cách thủy đun 6giờ) - Để nguội đến nhiệt độ phòng Tinh chế: - Đổ vào bình gạn, rửa lần, lần 20ml nước, gạn lấy lớp dầu - Gộp nước rửa lần lại, sau pha lỗng với nước, lắc nhẹ Gạn lấy lớp DEP lắng xuống - Thêm dần dung dịch Na2CO3 bão hòa pH=8, lắc mạnh để lắng, gạn lấy lớp dầu diethylphtalat Lớp nước chứa muối natri monoester phtalat - Rửa lớp dầu với nước cất đến pH=7 - Gạn lớp dầu vào bình nón khơ, thêm 3,3g Na2SO4 khan 0,4g than hoạt - Đun 900C 10 phút Lọc loại cặn - Cân, tính hiệu suất Tiêu chuẩn nguyên liệu Chất lỏng, suốt, không màu màu ngà vàng, sánh dầu, có mùi thơm nhẹ Tỷ trọng d20 =1,123 - 1,125, độ sôi 2950C Không tan nước, dễ tan ethanol ether An tồn lao động Anhydrid phtalic: độc, dễ bay hơi, kích ứng niêm mạc Acid sulfuric: ăn da, gây bỏng KIỂM NGHIỆM DIETHYLPHTALAT - Sản phẩm kiểm nghiệm theo tiêu chuẩn DĐVN IV Giới hạn acid Hoà tan 20,0 g chế phẩm 50ml ethanol 96% (TT) trung hoà với dung dịch phenolphtalein (CT) Nhỏ dung dịch natri nitrit 0,1N tới xuất màu hồng bền vững 30 giây Lượng dung dịch natri hydroxyd 0,1N tiêu thụ không 0,1ml Định lượng Cân 0,750g chế phẩm vào bình thuỷ tinh trung tính 250ml Thêm 25,0ml dung dịch kali hydroxyd 0,5M ethanol vài viên đá bọt Đun sôi cách thuỷ sinh hàn ngược giờ, Thêm 1ml dung dịch phenolphtalein chuẩn độ dung dich acid hydrocloric 0,5M Song song làm mẫu trắng.1ml dung dịch KOH 0,5M ethanol tương đương với 55,56mg diethylphtalat Bài 3: TỔNG HỢP PARACETAMOL Mục tiêu Trình bày nguyên tắc phản ứng nitro hoá, khử hoá, acyl hoá nguyên lý phản ứng tổng hợp paracetamol từ phenol Tiến hành bước tổng hợp paracetamol theo qui trình Tổng hợp paracetamol đạt hiệu suất yêu cầu Trình bày giải thích quy trình sản xuất KIẾN THỨC CẦN CHUẨN BỊ TRƯỚC - Paracetamol: cơng thức, tính chất lý hóa, tác dụng dược lý - Phản ứng nitro hoá, khử hoá, acyl hoá: nguyên tắc - Tổng hợp paracetamol: nguyên tắc, cách tiến hành - Tiêu chuẩn thành phẩm theo DĐVN IV THỰC HÀNH Nguyên tắc: Paracetamol thuốc hạ nhiệt giảm đau, tổng hợp từ phenol Quá trình điều chế qua giai đoạn sau: 1- Nitrozo hoá phenol tác nhân nitrozoni (tạo từ acid sulfuric natri nitrit) thu hỗn hợp hai đồng phân o–nitrosophenol p-nitrosophenol Tách riêng hai đồng phân phương pháp cất kéo nước 2- Khử hoá p-nitrosophenol Fe/HCl Na2S/NaOH thu p-aminophenol 3- Acyl hoá p-aminophenol Ac2O paracetamol Giai đoạn 1: Tổng hợp para – nitrosophenol Nguyên lý phản ứng: H 2S O OH + + 2N aNO HNO2 Nguyên liệu, hóa chất ON 2HN O Số lượng OH + N a 2S O + H 2O Thiết bị, dụng cụ Số lượng Phenol kỹ thuật 50ml Cốc inox 1000ml Natri nitrit 50g Máy khuấy từ, khuấy Acid sulfuric 22% 170ml Nhiệt kế 1000 Đá làm lạnh khay Bình nhỏ giọt 100ml Bộ lọc hút Buchner 10 2.3 Qui trình chiết xuất a Chuẩn bị nguyên liệu Hạt mã tiền sau chọn loại tốt (hàm lượng > 1%), đem ngâm cho mềm, thái mỏng (khoảng 1mm), sấy khô 60-800C 48 giờ, xay thành bột thơ Cân bột hạt mã tiền (300g/nhóm) b Kiềm hóa Bột mã tiền cho vào khay men, trộn với nước sữa vôi (khoảng 300ml), đảo kỹ thành dạng bột nhão, vun thành đống, ủ khoảng 24h Sau làm tơi làm khơ khay men (Sau kết thúc giai đoạn kiềm hóa phải ngâm rửa khay men ngay) c Chiết xuất Nguyên tắc chiết: Chiết phương pháp ngâm nóng, số lần chiết khoảng lần Thời gian chiết khoảng 1,5-2giờ/lần (tùy theo điều kiện cụ thể) Lượng dung môi khoảng 1000ml/lần đầu Tiến hành: Lắp lưới lót bơng vào bình chiết, cho bột dược liệu kiềm hóa vào, đổ dung môi, khuấy trộn để dung môi tiếp xúc tốt với dược liệu Sau mẻ chiết, mở van cho dịch chiết chảy vào bình thủy tinh nút mài lít Sau lại đổ dung mơi vào bình chiết để chiết mẻ sau d Tinh chế - Tạo muối sulfat tan nước alcaloid: Cho khoảng 300ml dung dịch H2SO4 3% vào bình chứa dịch chiết mẻ đầu, lắc thật kỹ khoảng 10 phút Để yên cho phân lớp (cho tới lớp lại lớp có bề mặt phân chia pha) Sau gạn dung mơi vào xơ nhựa (đem thu hồi để chiết cho mẻ sau) Trong bình thủy tinh lại lớp nước acid mẻ đầu, dịch chiết mẻ sau cho vào lắc với lớp nước acid mẻ trước, sau lại để phân lớp gạn riêng dung môi… Cứ làm mẻ cuối (chú ý: đổ lần acid vào dịch chiết mẻ đầu, mẻ sau phải thử pH lớp nước acid, pH khoảng 1-2 được, chưa đủ độ acid phải bổ xung thêm) Cuối đổ lớp nước acid vào cốc đun 400ml, đem đun nóng nồi cách thủy, khuấy kỹ, lọc nóng (khơng cần rửa) lấy dịch lọc Sau đó, gạn nóng bình gạn, loại bỏ hết dung môi Hứng lấy lớp nước acid vào cốc đun 250ml (là dung dịch muối sulfat alcaloid) - Tạo tủa alcaloid tồn phần: Kiềm hóa lớp nước acid dung dịch Na 2CO3 bão hòa, vừa nhỏ kiềm vừa khuấy dung dịch hết sủi bọt, điều chỉnh pH = 10-11, để nguội cho kết tủa hết (khoảng 20 phút) có tủa alcaloid tồn phần dạng base Lọc hút chân không qua phễu 20 Buchner Sau hút cái, tiến hành rửa tủa phễu nước cất, rửa lần lần lượng nước cất khoảng thể tích tủa Loại bỏ nước nước rửa Chuyển tủa sang cốc đun bé loại 100ml - Tạo muối nitrat alcaloid (loại brucin): Nguyên tắc loại brucin: dựa vào độ tan khác muối, tạo muối nitrat alcaloid pH = - 4,5, tạo dung dịch bão hòa cho strychnin nitrat kết tinh được, brucin tan nước Thử brucin: Nhỏ giọt dd HNO3 đặc vào vài hạt tinh thể, có brucin thấy xuất màu đỏ hồng Tiến hành: Cho lượng nước cho vừa đủ ngập tủa alcaloid toàn phần, đun nồi cách thủy, vừa khuấy vừa nhỏ dần dd HNO 3% tủa tan hết pH = 4-4,5 (chú ý: đủ pH mà tủa chưa tan hết phải bổ sung thêm nước tan hết, dung dịch bị lỗng phải bớt để tạo dung dịch bão hòa) Để kết tinh qua đêm tạo tinh thể hình kim, thường kết thành chùm Lọc qua phễu Buchner nhỏ Rửa tinh thể lần nước cất Loại bỏ nước Chuyển tinh thể sang cốc đun 100ml - Tẩy màu than hoạt: Trước tiên phải hòa tan nóng tinh thể vào lượng nước vừa đủ, đun nồi cách thủy, khuấy cho tan hết Thêm khoảng 0,5g than hoạt, khuấy 10 phút, lọc nóng (các dụng cụ phải tráng nhúng nước nóng), rửa bã nước cất sơi (nước rửa đồng thời nước tráng cốc) Loại bã than hoạt Chuyển dịch lọc vào cốc 100ml rửa - Tạo sản phẩm strychnin sulfat: + Chuyển từ dạng muối sang dạng base: Muốn chuyển alcaloid từ dạng muối nitrat sang dạng muối sulfat, trước tiên ta phải chuyển sang dạng base Kiềm hóa dịch lọc dd Na2CO3 bão hòa, vừa nhỏ vừa khuấy hết sủi bọt chỉnh pH= 10-11 Để nguội cho tủa hết (khoảng 20 phút) Lọc lấy tủa base, rửa tủa nước cất, loại bỏ nước nước rửa + Chuyển strychnin base sang dạng muối sulfat: Cho lượng nước vào tủa cho vừa đủ ngập tủa, đun nồi cách thủy, vừa khuấy vừa nhỏ dd H 2SO4 3% tủa tan hết chỉnh pH = - 4,5 Để kết tinh qua đêm Lọc lấy tinh thể, hút rửa nước cất Rửa tủa lần, lần lượng nước khoảng lượng tủa Sau rửa ý hút kiệt nước để sấy cho nhanh Rải tinh thể đĩa petri Sấy 60-70 0C đến khô (khoảng 60-90 phút) 21 + Thu hồi nước cái: Nước chứa dạng muối sulfat sau lọc nhóm gộp lại vào cốc 100ml, đến dung dịch bão hòa, để kết tinh, lọc, rửa, sấy khô, cân, sản phẩm thu hồi chia cho nhóm Cân riêng sản phẩm nhóm, ghi kết vào sổ, ký tên nộp sản phẩm e Đóng gói: lọ kín, để nơi khô ráo, tránh ánh sáng f Kiểm nghiệm: - Định lượng strychnin sản phẩm:Theo DĐVN IV, NXB Y học, HN,2009, trang 579 Bài 5: CHIẾT RUTIN TỪ NỤ HOA HỊE Mục tiêu Trình bày đặc điểm nguyên liệu sản phẩm Thực kỹ thuật chiết xuất, tinh chế Trình bày giải thích qui trình sản xuất I RUTIN - Công thức cấu tạo: - Tên khoa học: 3,3’,4’,5,7 - pentahydroxyflavon 3- rutinosid - Tính chất: Rutin bột kết tinh màu vàng hay vàng ánh xanh, không mùi, bay có mùi đặc trưng, để ngồi ánh sáng màu sẫm lại Tinh thể ngậm phân tử, chuyển sang dạng khan sấy 12 110 0C áp suất giảm (10 mmHg) Điểm chảy: khoảng 2100C kèm theo phân hủy Độ tan: 1g rutin tan khoảng 8000ml nước, 200ml nước sôi, 650ml ethanol, 60ml ethanol sôi, … Rutin dễ tan pyridin, tan methanol dung dịch kiềm loãng Thực tế không tan aceton, cloroform, ether, benzen carbon disulfit Do cấu trúc glycosid nên rutin dễ bị thủy phân enzym có sẵn dược liệu acid Rutin bị ảnh hưởng dung dịch kiềm mà bị ảnh hưởng 22 dung dịch kiềm đậm đặc nhiệt độ cao Rutin thủy phân cho quercetin, glucose rhamnose Phản ứng thủy phân: Rutin  Quercetin + Glucose + Rhamnose - Cơng dụng: Rutin có tác dụng làm bền vững làm giảm tính thấm mao mạch Rutin sử dụng để phòng chữa trường hợp xuất huyết người bị xơ vữa động mạch huyết áp cao… THỰC HÀNH 2.1 Nguyên liệu: hoa hòe sấy khơ, độ ẩm nhỏ 10%, tỷ lệ rutin hoa hòe phải chiếm khoảng 20  28% Hoa hòe (Sophora japonica L Fabaceae) Cây hoa hòe cao từ 5-7m, kép hình lơng chim, mọc so le Ở Việt Nam, trồng nhiều nơi, trồng tập trung Thái Bình, Nghệ An, Hà Nam Nhân dân phân biệt hòe nếp hòe tẻ Hòe nếp loại có nhiều hoa, hoa to đều, nở thành nhiều đợt, có màu sẫm hơn, cuống dài, vồng cao, phân cành Hòe nếp có suất nụ hoa cao so với hòe tẻ Trong hòe, rutin có phận hàm lượng rutin hoa cao nụ có hàm lượng cao nụ trở thành hoa Do người ta dùng nụ hoa hòe để chiết lấy rutin Dung mơi: dung dịch kiềm lỗng (dung dịch natri borat 4%) Hóa chất Natri borat Na2CO3 bột HCl đậm đặc Ethanol 960 Diethyl ether Rutin chuẩn Methanol Dung dịch natri nitrit 5% (TT) Dung dịch nhôm nitrat 10% (TT) Dung dịch NaOH 10% (TT) Ether (TT) Dung dịch acid acetic 0,02N (TT) Thiết bị, dụng cụ Bình chiết Bộ cất cồn, bình Soxhlet Bơm chân khơng Phễu lọc Buchner Phễu thủy tinh xốp G4 Nồi đun cách thủy Tủ sấy Bộ bình cầu có sinh hàn hồi lưu Cân kỹ thuật Cốc đun loại 400, 250, 100ml 2.2 Sơ đồ qui trình chiết xuất 23 DƯỢC LIỆU Dược liệu diệt men Diệt men Rửa dd HCl 0,5% Lọc Nước rửa Dược liệu xử lý Chiết xuất Na2CO3 3% Lọc Bã dược liệu Dịch chiết Để kết tinh Lọc Nước Tủa Rutin thô Tạp pH=3 (4) Hòa tan Cách thủy HCl 10% Cồn 960 (1g/7ml )MeOH Nước 1g/25ml Lọc Dịch lọc Cồn thu hồi Cô cất Dd bão hòa Để kết tinh Lọc Sấy Nước SẢN PHẨM RUTIN 2.3 Mô tả giai đoạn chiết xuất a Chuẩn bị nguyên liệu - Hoa hòe chọn, đạt hàm lượng theo tiêu chuẩn ( 20%) - Phơi sấy khơ hoa hòe, độ ẩm nhỏ 10%, cân nguyên liệu (300g) - Rửa dược liệu nước acid HCl 0,5% cách đổ ngập dược liệu, khuấy trộn, ngâm phút rút bỏ nước acid Rửa lần nước acid Cuối lại rửa cho acid nước đến pH = b Chiết xuất 24 Nguyên tắc chiết: Chiết phương pháp ngâm nguội, dung môi chiết dung dịch Na2CO3  4% Lượng nguyên liệu 300g/mẻ Số lần chiết lần/mẻ Thời gian chiết 34 h/lần chiết (tùy theo điều kiện cụ thể) Lượng dung môi: 1200ml/mẻ Tiến hành: lắp lưới lót bơng vào bình chiết, cho bột dược liệu xử lý vào, đổ dung môi, khuấy trộn để dung môi tiếp xúc tốt với dược liệu Sau mẻ chiết, mở van cho dịch chiết chảy vào bình chứa thủy tinh lít Sau lại đổ dung mơi vào bình chiết để chiết mẻ sau c Tinh chế - Tạo tủa thô: dùng dung dịch acid HCl 10% cho vào dịch chiết, khuấy trộn, chỉnh đến pH=3 Để kết tinh qua đêm nhiệt độ phòng Lọc lấy tủa phễu Buchner Rửa tủa cho hết acid nước cất đến pH= 67 Hút kiệt thu tủa rutin thô - Tinh chế cách cho kết tinh lại cồn: hòa tan tủa thơ cồn nồi đun cách thủy bình cầu có lắp sinh hàn hồi lưu Lọc nóng phễu Buchner để loại tạp Dịch lọc thu đem cô cất cồn để tạo dung dịch bão hòa Cồn cất đem thu hồi Để kết tinh rutin qua đêm nhiệt độ phòng Lọc lấy tủa rutin, rửa tủa nước cất Sấy tủa đến khô 60 700C, thu sản phẩm rutin tinh chế d Kiểm nghiệm Định lượng rutin sản phẩm: Theo DĐVN III, NXB Y học, HN, 2002, trang 252 e Bảo quản: Trong bao bì kín, tránh ánh sáng để nơi khô mát 25 Bài CHIẾT ROTUNDIN TỪ CỦ BÌNH VƠI Mục tiêu Nêu đặc điểm ngun liệu củ bình vơi sản phẩm rotundin Thực kỹ thuật: chuẩn bị nguyên liệu, chiết xuất, tinh chế, thu sản phẩm cuối rotundin Trình bày giải thích quy trình sản xuất ROTUNDIN - Cơng thức phân tử: C21H25NO4 - Tên khoa học: 5,8,13,13a – tetrahydro - 2,3,9,10 - tetramethoxy - 6H - dibenzo[a,g] quinolizine - Tên khác: rotundin, gindarin, caseanin - Lý tính: rotundin alcaloid thể rắn, có màu trắng, khơng mùi, khơng vị Khơng tan nước, tan ehanol ether, tan chloroform, dễ tan acid sulfuric loãng Năng suất quay cực: rotundin thuộc loại tả tuyền có C bất đối Nhiệt độ nóng chảy : mp= 1470C - Hóa tính : Hóa tính L- tetrahydropalmatin có amin bậc cho muối hydroclorid - Cơng dụng: L-tetrahydropalmatin có tác dụng an thần, gây ngủ THỰC HÀNH 2.1 Chuẩn bị Ngun liệu: Củ bình vơi chọn lọc hàm lượng alcaloid tồn phần 2% tính theo dược liệu khơ Rotundin (L- tetrahydropalmatin) alcaloid có củ bình vơi Cây bình vơi gồm nhiều lồi dây leo có rễ thuộc chi stephania, họ Tiết dê – Menispermaceae Cây bình vơi gọi củ một, củ mối tròn, dây mối trơn , củ gà ấp, chi Stephania có khoảng 45 lồi, số lồi có Việt Nam: Stephania (Roxb), Miers, S kuinanensis H.S Lo et M Yang, S pierrei Diels, S brachyandra Diels, S cambodiana Gagnep, 26 Các lồi bình vơi phân bố rộng miền Bắc, Trung, Nam Thường gặp núi đá vôi: Tuyên Quang, Thái Nguyên, Phú Thọ, Hồ Bình, Cao Bằng, Lạng Sơn, Quảng Ninh, Thanh Hố, Lâm Đồng…Hiện ta thu hái củ bình vơi chủ yếu từ nguồn mọc hoang Hàm lượng rotundin thay đổi khác tuỳ theo loài tuỳ vùng thu hái Dung môi: Dầu hỏa (Dung dịch acid sulfuric 0,3%.) Hố chất: - Nước vơi - Amoniac 6N (TT) - Than hoạt - Dung dịch acid hydrocloric 5% - Ethanol 960 - Dung dịch acid sulfuric 0,1% - Cloroform, ether dầu hoả - Dung dịch kali hydroxyd 0,1N - Đỏ methyl (CT) Thiết bị dụng cụ: - Thiết bị chiết - Cốc đun loại 1000,500,250,100 ml… - Bình gạn 500 ml - Nồi đun cách thuỷ - Bơm chân không - Tủ sấy - Phễu lọc Buchner - Bình Soxhlet 27 2.1 Sơ đồ quy trình chiết xuất củ bình vơi tươi vỏ nâu đen cạo vỏ thái lát Lát mỏng tươi bột thô tươi Lát mỏng thô dd H2SO4 chiết bã 0,3% chiết dịch chiết trộn nước vôi dịch ép PH=9 khuấy nước dd H2SO4 bột thô khô dịch chiết dịch trộn lọc lọc nước L- tetrahydropalmatin thơ phơi, sấy khơ hồ tan nóng L- tetrahydropalmatin thô khô cồn 960 c/ thuỷ, kh/trộn tẩy màu, t=10’ dịch hoà tan dịch lọc nước để kết tinh, lọc L- tetrahydropalmatin kiểm nghiệm sấy,cân L- tetrahydropalmatin dược dụng 28 than hoạt c/thuỷ, kh/trộn 2.3 Mô tả giai đoạn chiết xuất a Chuẩn bị nguyên liệu Củ bình vơi tươi cạo vỏ nâu đen khô đem xay thành bột thô Lượng nguyên liệu 300g b Chiết xuất Chiết phương ngâm nóng dung môi chiết: Dầu hỏa Số lần chiết lần (mẻ) thời gian chiết khoảng 3giờ/mẻ (tuỳ điều kiện thực tế lượng dung môi chiết khoảng 1000 ml /mẻ ) + Nếu bột tươi: Đem ép lấy dịch chiết phần bã đem chiết dung dịch H 2SO4 0,3% thu dịch chiết Sau đem trộn dịch ép với dịch chiết thu dịch trộn, đem tinh chế + Nếu bột khô: Chiết dầu hỏa thu dịch chiết Trước tiên lắp lưới lót bơng vào bình chiết cho dược liệu vào, đổ dung môi khuấy trộn để dung môi tiếp xúc với dược liệu, khoảng 30 phút khuấy lần (chú ý khơng cho dung môi bốc thẳng lên mặt) Sau mẻ chiết mở van hứng dịch chiết cho chảy vào bình thuỷ tinh có nút mài loại 1000 ml, dung mơi vào bình chiết để chiết mẻ sau Như sau giai đoạn chiết ta thu alcaloid dạng muối sulfat tan nước Dịch chiết rút để lắng trong, gạn phần trong, phần đục lọc qua vải, gộp phần dịch c Tinh chế - Tạo muối sulfat tan nước alcaloid: Cho khoảng 300ml dung dịch H2SO4 3% vào bình chứa dịch chiết mẻ đầu, lắc thật kỹ khoảng 10 phút Để yên cho phân lớp (cho tới lớp lại lớp có bề mặt phân chia pha) Sau gạn dung mơi (đem thu hồi để chiết cho mẻ sau) Trong bình thủy tinh lại lớp nước acid mẻ đầu, dịch chiết mẻ sau cho vào lắc với lớp nước acid mẻ trước, sau lại để phân lớp gạn riêng dung môi… Cứ làm mẻ cuối (Chú ý: đổ lần acid vào dịch chiết mẻ đầu, mẻ sau phải thử pH lớp nước acid, pH khoảng 1-2 được, chưa đủ độ acid phải bổ xung thêm) Cuối đổ lớp nước acid vào cốc đun 400ml, đem đun nóng nồi cách thủy, khuấy kỹ, lọc nóng (khơng cần rửa) lấy dịch lọc Sau đó, gạn nóng bình gạn, loại bỏ hết dung môi Hứng lấy lớp nước acid vào cốc đun 250ml (là dung dịch muối sulfat alcaloid) - Tạo tủa thô: dịch thu sau gạn lọc cho tác dụng với bột dung dịch Na2CO3 bão hòa chỉnh pH = Để kết tủa Lọc lấy tủa alcaloid toàn phần, tủa sấy cho khơ Tủa alcaloid tồn phần thu phương pháp có chứa khoảng từ 10% đến 30% L tetrahydropalmatin 29 - Tẩy màu than hoạt: Cho ethanol 96 vào tủa thơ bình cầu, đun nồi cách thuỷ cho tan hết, cho than hoạt vào đun sơi 10phút Lọc nóng qua phễu Buchner loại bã than hoạt, lấy dịch lọc - Thu sản phẩm rotundin: Dịch lọc để kết tinh nhiệt độ phòng Lọc lấy tinh thể Sấy nhiệt độ 60 - 700C thu L - tetrahydropalmatin tinh khiết d Kiểm nghiệm Định lượng Rotundin : Theo DĐVN IV, NXB Y học, HN, 2009 trang 551 e Bảo quản: Trong lọ kín, để nơi khô ráo, tránh ánh sáng 30 MẪU BÁO CÁO THỰC TẬP Mẫu số (mẫu báo cáo thực tập chiết xuất) TÊN BÀI THỰC TẬP Họ tên: Lớp: Thực tập từ ngày đến ngày tháng năm Sản phẩm: - Tên - Nguồn gốc - Công thức - Tính chất Ngun liệu, dung mơi, hóa chất Thiết bị, dụng cụ An toàn lao động Sơ đồ quy trình sản xuất Mơ tả giai đoạn sản xuất Kết Nhận xét Ngày tháng năm Ký, ghi rõ họ tên 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2007), Kỹ thuật sản xuất dược phẩm, Nhà xuất Y học, tập 1,2 Bộ Y tế (2008), Kỹ thuật sản xuất dược phẩm, Nhà xuất Y học, tập 3 Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học Bộ môn Dược liệu (2012), Bài giảng Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội, tập 1,2 Bộ mơn Hóa Dược (2012), Hóa dược, Trường Đại học Dược Hà Nội, tập 1,2 Bộ môn Công nghiệp Dược (2009), Thực tập Kỹ thuật sản xuất dược phẩm, Trường Đại học Dược Hà Nội 32 33 MỤC LỤC Phần 1: KỸ THUẬT TỔNG HỢP HÓA DƯỢC Bài 1: TỔNG HỢP ASPIRIN Bài 2: TỔNG HỢP DIETHYLPHTALAT Bài 3: TỔNG HỢP PARACETAMOL Phần 2: CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU 15 Bài 4: CHIẾT STRYCHNIN TỪ HẠT Mà TIỀN 15 Bài 5: CHIẾT RUTIN TỪ NỤ HOA HÒE 21 Bài CHIẾT ROTUNDIN TỪ CỦ BÌNH VƠI 25 34 ... nguyên liệu củ bình vơi sản phẩm rotundin Thực kỹ thuật: chuẩn bị nguyên liệu, chiết xuất, tinh chế, thu sản phẩm cuối rotundin Trình bày giải thích quy trình sản xuất ROTUNDIN - Công thức phân tử:... cân, sản phẩm thu hồi chia cho nhóm Cân riêng sản phẩm nhóm, ghi kết vào sổ, ký tên nộp sản phẩm e Đóng gói: lọ kín, để nơi khơ ráo, tránh ánh sáng f Kiểm nghiệm: - Định lượng strychnin sản phẩm: Theo... HOA HÒE Mục tiêu Trình bày đặc điểm nguyên liệu sản phẩm Thực kỹ thuật chiết xuất, tinh chế Trình bày giải thích qui trình sản xuất I RUTIN - Công thức cấu tạo: - Tên khoa học: 3,3’,4’,5,7 -