Nghiên cứu mức độ kháng kháng sinh của vibrio alginolyticus trên tôm hùm bông (panulirus ornatus) bị bệnh đỏ thân nuôi lồng tại tỉnh

LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nêu luận văn cơng trình nghiên cứu tơi với cho phép sử dụng chung số liệu chủ nhiệm đề tài “Đánh giá thực trạng sử dụng kháng sinh, tượng kháng thuốc vi khuẩn đề xuất giải pháp phòng trị bệnh tơm hùm ni lồng bè hiệu vùng biển Phú Yên” thuộc chương trình đề tài nghiên cứu khoa học cấp tỉnh Viện Nghiên cứu Ni trồng Thủy sản III chủ trì, số liệu trung thực, chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tác giả Nguyễn Tường Vy LỜI CẢM ƠN Để hồn thành đề tài này, tơi nhận giúp đỡ từ nhiều phía Trước hết, tơi xin chân thành bày tỏ lời biết ơn sâu sắc đến thầy cô trường Đại học Nha Trang Đặc biệt, thầy cô khoa Nuôi Trồng Thủy Sản giúp tơi có kiến thức chun ngành bản, quý báu cần thiết Đặc biệt chân thành cảm ơn TS Võ Văn Nha TS Nguyễn Văn Minh, hai người trực tiếp hướng dẫn, định hướng đề tài giúp đỡ suốt q trình thực tập Tơi bày tỏ lòng cảm ơn đến: - Các anh chị thuộc Trung tâm quốc gia quan trắc cảnh báo mơi trường phòng ngừa dịch bệnh thủy sản khu vực miền trung, Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản III tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thực đề tài - Chi cục Thú y huyện Sông Cầu, Chi cục Thú y huyện Tuy An bà ngư dân hai huyện giúp đỡ thời gian điều tra thu mẫu Cuối xin gởi lời cảm ơn đến ba mẹ, bạn bè bên cạnh động viên cổ vũ suốt thời gian học tập MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN .i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi MỞ ĐẦU TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một vài đặc điểm vi khuẩn Vibrio alginolyticus 1.1.1 Vị trí phân loại Vibrio alginolyticus 1.1.2 Đặc điểm phân bố Vibrio alginolyticus 3 1.1.3 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa Vibrio alginolyticus .4 1.1.4 Yếu tố gây độc Vibrio alginolyticus 1.2 Những nghiên cứu giới có liên quan đến luận văn 1.2.1 Tình hình ni bệnh tơm hùm ni giới 1.2.1.1 Tình hình ni 1.2.1.2 Tình hình bệnh .7 1.2.2.Tình hình sử dụng thuốc kháng sinh nuôi trồng thủy sản giới 1.2.2.1 Khái niệm kháng sinh 1.2.2.2 Các nhóm kháng sinh thường sử dụng ni trồng thủy sản 1.2.2.3 Tình hình sử dụng kháng sinh 11 1.2.3 Những nghiên cứu khả kháng kháng sinh số loài vi khuẩn gây bệnh thủy sản nuôi giới 11 1.2.3.1 Khái niệm kháng kháng sinh 11 1.2.3.2 Cơ chế kháng thuốc 12 1.2.3.3 Những nghiên cứu tượng kháng kháng sinh số loài vi khuẩn gây bệnh thủy sản nuôi giới 12 1.3 Những nghiên cứu Việt Nam có liên quan đến luận văn 13 1.3.1 Tình hình ni bệnh tôm hùm nuôi lồng Việt Nam 13 1.3.2 Hiện trạng sử dụng thuốc kháng sinh nuôi trồng thủy sản nuôi tôm hùm lồng Việt Nam 15 1.3.3 Những nghiên cứu khả kháng kháng sinh vi khuẩn Vibrio alginolyticus phân lập tôm hùm nuôi lồng Việt Nam 16 1.4 Đặc điểm điều kiện tự nhiên tỉnh Phú Yên 17 1.4.1 Vị trí địa lý 17 1.4.2 Địa hình 17 1.4.2.1 Vùng đất liền .17 1.4.2.2 Bờ biển 17 1.4.3 Một số đặc điểm thủy văn .18 1.4.3.1 Hải lưu 18 1.4.3.2 Độ mặn .18 1.4.3.3 Nhiệt độ .18 Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng, phạm vi, thời gian địa điểm nghiên cứu 19 2.1.1 Đối tượng: Vi khuẩn Vibrio alginolyticus 19 2.1.2 Phạm vi: Vi khuẩn Vibrio alginolyticus tôm hùm bị bệnh đỏ thân nuôi lồng vùng biển Phú Yên .19 2.1.3 Thời gian: từ ngày 06/12/2013 đến 1/11/2014 19 2.1.4 Địa điểm 19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu đề tài luận văn .20 2.2.2 Phương pháp điều tra thực trạng nuôi sử dụng kháng sinh phòng trị bệnh vi khuẩn tơm hùm nuôi lồng vùng biển tỉnh Phú Yên 21 2.2.2.1 Nguồn thông tin thứ cấp 21 2.2.2.2 Nguồn thông tin sơ cấp .21 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu xác định tượng kháng kháng sinh Vibrio alginolyticus tôm hùm bệnh đỏ thân .22 2.2.3.1 Phương pháp thu xử lý mẫu tôm hùm 22 2.2.3.2 Phương pháp nuôi cấy, phân lập, định danh vi khuẩn Vibrio alginolyticus 22 2.2.3.3 Phương pháp lập kháng sinh đồ: .23 2.2.3.4 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu 24 2.3 Phương pháp xử lý số liệu 26 2.3.1 Phân tích trạng nghề ni 26 2.3.2 Phần mềm xử lý số liệu 26 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Kết điều tra trạng nghề nuôi sử dụng kháng sinh tôm hùm nuôi lồng Phú Yên năm 2014 27 3.1.1 Vùng ni trình độ học vấn người ni tơm hùm Phú Yên 27 3.1.2 Hiện trạng nuôi bệnh tôm hùm nuôi lồng Phú Yên đầu năm 2014 .28 3.1.3 Hiện trạng sử dụng kháng sinh nuôi tôm hùm lồng Phú Yên đầu năm 2014 29 3.1.3.1.Thực trạng sử dụng kháng sinh nuôi tôm hùm lồng Phú Yên đầu năm 2014 .29 3.1.3.2.Đánh giá hiệu việc dùng thuốc kháng sinh phòng trị bệnh đỏ thân tôm hùm nuôi lồng Phú Yên dựa kết điều tra.33 3.2 Kết nuôi cấy phân lập định danh vi khuẩn .34 3.2.1 Kết xác định dấu hiệu bệnh lý đặc trưng tôm hùm bị bệnh đỏ thân vùng thu mẫu khác 34 3.2.2 Kết xác định hình thái, đặc điểm sinh lý, sinh hóa Vibrio alginolyticus phân lập vùng thu mẫu khác 36 3.2.2.1 Hình thái vi khuẩn Vibrio alginolyticus 36 3.2.2.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa vi khuẩn Vibrio alginolyticus .37 3.3.1 Kết kháng sinh đồ chủng vi khuẩn Vibrio alginolyticus phân lập từ tôm hùm bị đỏ thân vùng nuôi khác 39 3.3.2 Kết xác định nồng độ ức chế tối thiểu kháng sinh (MIC) với vi khuẩn Vibrio alginolyticus phân lập từ tôm hùm bị đỏ thân vùng nuôi khác 45 3.3.2.1 Kết thử kháng sinh có nồng độ cao 45 3.3.2.2 Kết xác định nồng độ ức chế tối thiểu MIC .45 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 4.1 Kết luận 48 4.2 Kiến nghị .48 TÀI LIỆU THAM KHẢO .49 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACIAR: (Centre for International Agricultural Research): Trung tâm Nghiên cứu Nông nghiệp Quốc tế Australia ASIAN: (Association of Southeast Asian Nations): Hiệp hội Quốc gia Đơng Nam Á CARD: Chương trình Hợp tác Nơng nghiệp Phát triển nông thôn CL: Chiều dài giáp đầu ngực CLSI: (The Clinical and Laboratory Standards Institure) Viện Tiêu chuẩn Lâm sàng Xét ngiệm CFU: (Colony Forming Units): Đơn vị khuẩn lạc MIC; (Minimal Inhibitory Concentration): Nồng độ ức chế tối thiểu NTTS: Nuôi trồng thủy sản NN&PTNT: Nông nghiệp phát triển nông thôn TCBS: (hiosulfate Citrate Bile Salts Agar): môi trường nuôi cấy chọn lọc cho vi khuẩn Vibrio TCVN: Tiêu chuẩn Việt Nam TSA: (Tryptic Soy Agar): môi trường nuôi cấy không chọn lọc R-plasmid: (resistant plasmid): loại plasmid chứa hay nhiều gen có khả sản xuất loại protein (chủ yếu enzym) kháng lại kháng sinh dược chất UBND: Ủy ban nhân dân UI: (International Units): Đơn vị quốc tế DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1:Phân bố số lượng phiếu điều tra trạng nuôi sử dụng thuốc kháng sinh phòng trị bênh tơm hùm nuôi lồng năm 2014 21 Bảng 2.2: Số lượng mẫu tôm hùm thu để phân lập Vibrio alginolyticus 22 Bảng 3.1: Trình độ học vấn chủ hộ nuôi tôm hùm lồng đầu năm 2014 (n=221) 27 Bảng 3.2: Một số bệnh/hội chứng tôm hùm nuôi lồng Phú Yên năm 2014 (n=221) 29 Bảng 3.3: Tỷ lệ số hộ sử dụng kháng sinh phòng trị bệnh tơm hùm Phú Yên .30 Bảng 3.4: Các loại kháng sinh sử dụng phòng trị bệnh tôm hùm nuôi lồng Phú Yên đầu năm 2014 (n=221) 31 Bảng 3.5: Tỷ lệ người nuôi tôm hùm biết đến loại kháng sinh cấm sử dụng nuôi trồng thủy sản (n=221) 32 Bảng 3.6: Hiệu sử dụng thuốc kháng sinh phòng trị bệnh đỏ thân năm 2014 .33 Bảng 3.7: Đặc điểm mẫu tôm hùm thu Phú Yên 35 Bảng 3.8: Đặc điểm khuẩn lạc, hình dạng kích thước chủng vi khuẩn Vibrio alginolyticus phân lập tôm hùm bị bệnh đỏ thân nuôi vùng nuôi tỉnh Phú Yên 36 Bảng 3.9: Đặc điểm sinh hóa 12 chủng Vibrio alginolyticus phân lập ba vùng địa lý khác 38 Bảng 3.10: Khả kháng kháng sinh vi khuẩn Vibrio alginolyticusphân lập từ tôm hùm bị bệnh đỏ thân 40 Bảng 3.11: Tỷ lệ phần trăm nhạy, nhạy trung bình kháng chủng vi khuẩn với loại kháng sinh 41 Bảng 3.12: Kết thử kháng sinh có nồng độ cao lên vi khuẩn Vibrio alginolyticus .45 Bảng 3.13: Kết xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) kháng sinh vi khuẩn Vibrio alginolyticus 46 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Vi khuẩn Vibrio alginolyticus .3 Hình 1.2: Các đường trao đổi kháng thuốc vi khuẩn động vật người Hình 2.1: Sơ đồ vùng điều tra thu mẫu 19 Hình 2.2: Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu đề tài luận văn 20 Hình 2.3: Sơ đồ thực kháng sinh đồ vi khuẩn V.alginolyticus phân lập tôm hùm đỏ thân 24 Hình 2.4: Sơ đồ thực pha loãng kháng sinh để nghiên cứu nồng độ ức chế tối thiểu MIC .26 Hình 3.1: Số lượng lồng ni tơm hùm 28 Hình 3.2: Sản lượng tôm hùm nuôi lồng 28 Hình 3.3: Tơm hùm bị bệnh đỏ thân 36 Hình 3.4: khuẩn lạc vi khuẩn Vibrio alginolyticus môi trường TCBS (A) vi khuẩn Vibrio alginolyticus nhuộm Gram (B) 37 Hình 3.5: Đường kính vơ trùng vi khuẩn Vibrio alginolyticus phân lập từ tôm hùm bị bệnh đỏ thân thu Xuân Phương 40 Hình 3.6: Thí nghiệm xác định nồng độ ức chế (MIC) gentamicine lên vi khuẩn Vibrio alginolyticus thu An Chấn .46 52 13 Võ Văn Nha, 2007 Nghiên cứu xây dựng giải pháp bảo vệ phát triển nguồn lợi tôm hùm Báo cáo tổng kết khoa hoc kỹ thuật đề tài, Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản III, Bộ thủy sản, 86-107 14 Viên Đại Phúc, 2011 Tìm hiểu tác nhân gây bệnh lở loét cá chẽm (Lates calcarifer) nuôi lồng biển Nha Trang - Khánh Hòa Luận văn Thạc sĩ Viện nghiên cứu NTTS III, Khánh Hòa 15 Mai Văn Tài, Tống Hồi Nam, Lý Thị Thanh Loan, vàPhạm Văn Tình, 2004 Điều tra đánh giá trạng loại thuốc, hóa chất chế phẩm sinh học dùng ni trồng thủy sản nhằm đề xuất giải pháp quản lý Báo cáo đề tài khoa hoc Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản I, 24 16 Bùi Quang Tề, 2006 Bệnh học thủy sản Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản I 17 Bùi Thị Thoa, 2003 Thuốc kháng sinh nguyên tắc sử dụng chăn nuôi NXB Hà Nội, 3023 18 Nguyễn Thị Bích Thúy, 2003 Điều tra kỹ thuật khai thác tơm hùm giống thí nghiệm ương nuôi tôm hùm (Panulius ornatus) vùng biển tỉnh Phú Yên Báo cáo khoa học 00641, 10-52 19 Nguyễn Thị Bích Thúy, 1993 Nghiên cứu kỹ thuật ni nâng cấp số lồi tơm Hùm có giá trị kinh tế ven biển miền Trung Đề tài nghiên cứu cấp nhà nước KN04-05 thuộc chương trình "phát triển đối tượng thủy sản có giá trị kinh tế" Trung tâm nghiên cứu nuôi trồng thủy sản III, Nha Trang 20 Nguyễn Thị Thanh Thuỳ, 2005 Tìm hiểu bệnh lở loét cá mú (Serrranidea) nuôi Khánh Hoà Luận văn Thạc sĩ, Viện Nghiên Cứu NTTS III, Khánh Hoà 21 Trần Thanh Thúy, Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ học hội chứng bệnh sữa tôm hùm ni Khánh Hòa Phú n 2008, Luận văn thạc sĩ 22 Huỳnh Thị Tú, Nguyễn Thanh Phương, Frédéric Silvestre, Caroline Douny, Châu Tài Tảo, Guy Maghuin-Rogister, vàPatrick Kestemont, 2006 Khảo sát tình hình sử dụng thuốc hóa chất nuôi tôm tồn lưu enroflooxacin furazonlidone tơm sú (Penaeus monodo) Tạp chí khoa học đại học Cần Thơ, 70-78 53 23 Lê Anh Tuấn, Nguyễn Trọng Nho, vàJohn Hambrey, 2000 Hiện trạng nuôi lồng biển Việt Nam Báo cáo hội thảo khoa học nuôi lồng biển Trường đại học Nha Trang, 1-15 24 Bùi Kim Tùng, Bùi Kim Hoàng, vàBùi Kim Tân, 2001 Thuốc kháng sinh Sở khoa học công nghệ tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu, 255 25 Đỗ Văn Vinh, 2011 Tìm hiểu bệnh sữa bệnh đỏ thân xảy tôm hùm (Panulirus spp.) nuôi lồng Phú Yên Luận văn đại học II TÀI LIỆU TIẾNG ANH 26 Aguirre-Guzmán, G., Mejia Ruz, H., and Ascencio, F., 2004 A review of extracellular virulence product of Vibrio species important in diseases of cultivated shrimp Aquac Res 35, 1395–1404 27 Alderman, D.J and Hastings, T.S., 1998 Antibiotic use in aquaculture: development of antibiotic resistance-potential for consumer health risks Int J Food Sci Technol 33, 139-155 28 Austin, B., 2007 Bacterial fish pathogens Disease of farmed and wild fish Fourth Edition Springer 29 Banerjee, S., Ooi, M.C., Shariff, M., and Khatoon, H., 2011 Antibiotic Resistant Salmonella and Vibrio Associated with Farmed Litopenaeus vannamei The Scientific World Journal, 2012 30 Bauer, A.W and Kirby, W.M.M., 1966 Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method American Journal of Clinical Pathology, 45, 493-496 31 Bayer, R.C and Daniel, P.C., 1987 Safety and effeacy of oxytetracycline for control of gaffkemia in the American lobster, Homarus americanus Fish Res, 5, 71-82 32 Bergey, J., 2001 Taxonomic Outline of the procarytic gener Bergey`s Manual of Systematic Bacterioloycy 33 Claudio, M., Kehrenberg, C., Ulep, C., Schwarz, S., and Roberts, M.C., 2003 Diversity of tetracycline resistance genes in Bacteria from Chilean Salmon Farms Agents and chemotherapy, Mar 2003, 883-888 54 34 Esteve, C., Biosca, E.G., and Amaro, C., 1993 Virulence of Aeromonas hydrophila and some other bacteria isolated from European eels Anguilla anguilla reared in fresh water Dis Aquat Org 16, 15–20 35 Evans, L.H and Brock, J.A., 1994 Disease of spiny lobster Blackwell, London, 461-472 36 Frerichs, G.N., 1993 Isolation and Identification of fish bacterial pathogens Institute of Aquacuture University of Stirling Scotland 37 Hoa, T.T.T., Oanh, D.T.H., and Phuong, N.T., 2001 Characterization and pathogenicity of Vibrio Bacteria isolated from freshwater prawn (Macrobrachium rosenbergii) harcheries Part 1: Isolation and Identificationof Vibrio spp from Larval stages 38 Hormansdorfer, S., Wentges, H., Neugebaur-Büchler, K., and Bauer, J., 2000 Isolation of Vibrio alginolyticus from seawater aquaria Int J Infect, Dis 25, 735-740 39 Josenhans, C and Suerbaum, S., 2002 The role of motility as a virulence factor in bacteria International journal of medical Microbiology, 291 (8), 605-614 40 Kitancharoen, N and Hatai, K., 1995 A marine omycete atkinsiella panulirata from philozoma of spiny lobster Panulirus japonicus Mycoscience, 36, 97-104 41 Korun, J., Gulince, A., and Karaca, M., 2013 Antibiotic resistance and plasmid profile of Vibrio alginolyticus stains isolated from cultured european sea bass Bull Vet Inst Pulawy, 57, 173-177 42 Lajnef, R., Snoussi, M., Romalde, J.L., Nozha, C., and Hassen, A., 2012 Comparative study on the antibiotic susceptibility and plasmid profiles of Vibrio alginolyticus strains isolated from four Tunisian marine biotopes World J microbiol biotechnol 43 Le, X.V., Munekage, Y., and Kato, S., 2005 Antibiotic resistance in bacteria from shrimp farming in mangrove areas Science of the total environment, 349, 95-105 44 Lee, S.W and Najiah, M., 2009 Antimicrobial property of 2- hydroxypropane1,2,3-tricarboxylic acid isolated from Citrus microcarpa extract Agricul Sci China 8, 880-886 55 45 Lee, S.W., Najiah, M., Wendy, W., and Nadiah, M., 2009 Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil of Syzgium aromaticum flower bud (clove) against fish systemic bacteria isolated from aquaculture sites Front Agricul China 3, 332-336 46 Lee, S.W and Wendy, W., 2012 Characterization of Vibrio alginolyticus isolated from white leg shrimp (Litopenaeus vannamei) with emphasis on its antibiogram and heavy metal resistance pattern Veterinarski arhiv 82, 221-227 47 Najiah, M and Lee, S.W., 2008 Outbreak Vibriosis of Mantis Shrimp (Squilla sp.) World J Agricul Sci 4, 137-139 48 Narjol, G., Blackstone, G.M., and DePaola, A., 2006 Characterization of a Vibrio alginolyticus Strain, Isolated from Alaskan Oysters, Carrying a Hemolysin Gene Similar to the Thermostable Direct Hemolysin-elated emolysin Gene (trh) of Vibrio parahaemolyticus Applied and Environmental Microbiology, Dec 2006, Vol 72, No 12, 7925–7929 49 Pender, J and Stobberingh, E.E., 2007 Antibiotic resistace of motile aeromonads in indoor catfish and farms in the southern part of the Nethelands International journal of antimicrobial agents, 261-265 50 Philips, B.F., 2006 Lobster, Biology, Management, aquaculture and fisheries, Blackwell UK, Blackwell 51 Philips, B.F and Kittaka, J., 2000 Spiny lobster fisheries and culture WileyBlackwell, 6-25 52 Phuong, N.T., Oanh, D.T.H., Dung, T.T., and Sinh, L.X., 2005 Bacterial resistance to antimicrobials use in Shrimp and Fish farms in the Mekong delta, Vietnam Proceedin of the international workshop on: Antibiotic resistance in Asian aquaculture environments 53 Prescott, J.F., 2000 Antimicrobial drug resistane and it's epidemiolog In antimicrobial therapy in veterinary medicine Lowa State University, 27-48 54 Reimschuessel, R and Miller, R.A., Antimicrobial drug use in aquaculture, in Antimicrobial Therapy in Veterinary Medicine, Giguère, S., Prescott, J.F., Baggot, D., Walker, R.D., and Dowling, P.M., Editors 2006, Blackwell Publishing Ltd, Oxford p 241-248 56 55 Sakazaki, R.T., Karashimada, T., Yuda, K., Sakai, S., and Asakawa, Y., 1979 Enummeration of and hygienic standard of food safety for Vibrio parahaemolyticus Arch Lebensmittelhyg, 30, 103-105 56 Schmidt, A.S., Bruun, M.S., Dalsgaard, I., and Larsen, J.L., 2001 Incidence, distribution, and spread of tetracycline resistance determinants and integronassociated antibiotic resistance genes among motile aeromonads from a fish farming environment Appl Environ.Microbiol, 67, 5675-5682 57 Snoussi, M., Noumi, E., Usai, D., Sechi, L.A., Zanetti, S., and Bakhrouf, A., 2008 Distribution of some virulence related-properties of Vibrio alginolyticus strains isolated from Mediterranean seawater (Bay of Khenis, Tunisia): investigation of eight Vinrio cholerae virulence genes Word J Microbiol Biotechnol, 24, 2133-2141 58 Stewart, J.E., The biology and management of lobster Academic, New York, 1, 301-342 59 Sugnaseelan, J., Ismail, S., Maurice, L., Bulan, G.T., Edwin, B., Kqueen, C.Y., and Radu, S., 2004 Isolation, antibiotic resistance and plasmid profiling of Vibrio alginolyticus from Cockles (Anadara granosa) Journal of food technology, 2, 50-55 60 Tangtrongpiros, J., 2005 Antibiotic resistance problem in Thailand Antibiotic resistance in Asian aquaculture environments prooceedings index 61 Thakur, A.B., Vaidya, R.B., and Suryawanshi, S.A., 2003 Pathogenicity and antibiotic susceptibility of Vibrio species isolated from moribund shrimps 62 Indian J Mar Sci 32, 71-75 Ulitzur, S., 1975 Effect of temperature, salf, pH and other factor on the development of peritrichous flagella in Vibrio alginolyticus Archives of Microbiology, 14, 285-288 63 Wang, Q., Liu, Q., Ma, Y., Rui, H., and Zhang, Y., 2007 LuxO controls extracellular protease, haemolytic activities and siderophore production in fish pathogen Vibrio alginolyticus J Appl Microbiol 103, 1525–1534 64 Wayne, N.J., 2006 Methods for broth dilution susceptibility testing of bacteria isolate from aquatic animals; informational supplement III CÁC TRANG WEB THAM KHẢO 57 65 http://en.wikipedia.org/wiki/Vibrio_alginolyticus 66 http://oceans.mit.edu/featured-stories/hidden-life-ocean-microbes 67 http://www.vifep.com.vn/hoat-dong-nghien-cuu/1025/Phat-trien-ben-vungnghenuoi-tom-hum-o-cac-tinh-ven-bien-mien-Trung.html PHỤ LỤC Phụ lục PHIẾU ĐIỀU TRA THÔNG TIN VỀ TÌNH HÌNH NI VÀ SỬ DỤNG THUỐC KHÁNG SINH TRONG PHỊNG VÀ TRỊ BỆNH TRÊN TƠM HÙM NI LỒNG BÈ Đơn vị: Tình hình ni tơm hùm lồng địa bàn Địa phương có quy hoạch việc ni tơm hùm địa bàn hay khơng? Có Khơng Nếu có vùng quy hoạch: ………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………… Tỷ lệ số hộ lồng/bè nuôi quy hoạch phần trăm: ………………………………………………………………………………………………… Xin ơng/bà cho biết q trình ni tơm địa phương có xuất bệnh khơng? Có Khơng Xin ơng/bà cho biết thơng tin bệnh địa phương: Tên bệnh Đỏ thân Đen mang Năm xuất bệnh địa phương Giai đoạn (ghi rõ kích cỡ) Mùa vụ Tỉ lệ chết Bệnh sữa Xin ông/bà cho biết việc sử dụng thuốc kháng sinh để phòng trị bệnh cho tơm Hùm địa phương có thực theo phát đồ quan có thẩm quyền khơng? Có Khơng Nếu có tỷ lệ phần trăm số hộ thực theo phát đồ bao nhiêu? Xin ông/bà cho biết địa phương có thường xuyên tập huấn cho người dân việc sử dụng kháng sinh phòng trị bệnh tơm hùm ni lồng/bè hay khơng? Có Khơng Nếu có xin ơng/bà cho biết lần/năm ……………………………………… Xin ông/bà cho biết hiệu việc sử dụng kháng sinh phòng trị bệnh tôm hùm nuôi lồng địa phương? Xin cho biết tồn khó khăn việc quản lý sử dụng thuốc kháng sinh địa phương: ., ngày tháng .năm 20 Xác nhận quyền địa phương nơi điều tra (Kí tên, đóng dấu) Phụ lục PHIẾU ĐIỀU TRA HIỆN TRẠNG SỬ DỤNG THUỐC KHÁNG SINH TRONG PHỊNG TRỊ BỆNH Ở TƠM HÙM I THƠNG TIN CHUNG CỦA HỘ: Họ tên: ………………… Tuổi: ………… Nam (nữ) ………… Nơi ở: Thôn ………………… Xã …………………………………… Huyện ……………………… Tỉnh …………………………………… Trình độ học vấn chủ hộ: Cấp Cấp Cấp Khơng biết chữ Trình độ chun mơn chủ hộ: Không cấp Sơ cấp Trung cấp Đại học đại học Số năm kinh nghiệm: …………năm II HIỆN TRẠNG NI Hình thức ni Lồng cố định (lồng găm) Lồng di chuyển(lồng sắt) Bè Lồng ni: Loại lồng Thể tích lồng (m3) Số lượng lồng (cái) Khoảng cách lồng Độ sâu mực nước đặt lồng(m) Lồng cách đáy Ương giống trắng Giống bò cạp Tôm lứa Tôm thương phẩm Loại tôm hùm nuôi Tôm hùm Tôm hùm đá khác…………… Tôm hùm tre Tơm hùm ma Mùa vụ thả ni chính: từ tháng…………………đến tháng…………………… Mùa vụ thả nuôi phụ: từ tháng………………… đến tháng…………………… 10 Nguồn giống Mua nội tỉnh Mua ngoại tỉnh Mua nội ngoại tỉnh Tự khai thác Nhập 11 Kích thướt giống mật độ thả giống Cỡ giống Giống trắng (0.2-3 g/con) Giống bò cạp (3-100 g/con) Tôm lứa (100200g/con) Tôm thương phẩm Mật độ 12 Nguồn ni có kiểm tra bệnh hay khơng? Có Không Kiểm tra bệnh: …………………………………………………………………… 13 Loại thức ăn sử dụng nuôi tôm Thức ăn tươi sống Thức ăn chế biến Thức ăn khác 14 Thành phần thức ăn : Giáp xác loài Thân mềm % loài Cá % loài Khác % loài Nguồn thức ăn lấy từ đâu………………………………………………………………………… % Có đảm bảo khơng lây lan nguồn bệnh hay không? …………………………… 15 Số lần cho ăn ngày: …………… lần/ngày 16 Thời gian cho ăn ngày? …………………………………………………… 17 Lượng thức ăn sử dụng ngày? kg/ngày 18 Trong trình ni ơng/bà có : Kiểm tra lồng hàng ngày Kiểm tra định kỳ (……….ngày/lần) Vệ sinh lồng nuôi (……… lần/vụ) Thay lưới Vớt thức ăn thừa Vệ sinh đáy lồng Di chuyển lồng khỏi vùng ô nhiễm Treo lồng 19 Sau vụ ni ơng/bà có vệ sinh lại lồng bè khơng Có Khơng III TÌNH HÌNH BỆNH ĐỎ THÂN TRÊN TÔM HÙM NUÔI LỒNG 20 Trong q trình ni ơng/bà có gặp bệnh đỏ thân tơm hùm ni lồng bè khơng? Có Không Số năm bị bệnh:………………………………………………………… … 21 Năm có nhiễm bệnh khơng? Có Khơng 22 Khi bệnh xảy có vấn đề bất thường? Nắng nóng kéo dài mưa kéo dài Độ mặn giảm Độ giảm Vấn đề khác:…………………………………………………………………… 23 Giai đoạn tôm bị bệnh:…………………………………………………………… 24 Tôm thường bị bệnh tháng nào? …………………………………………………… 25 Tỉ lệ lồng bị bệnh/tổng số lồng? …………………………………………………… 26 Tỷ lệ chết? ………………………………………………………………………… 27 Biện pháp xử lý? ……………………………………………………………………………………………… ……………………………………………… 28 Có lây lan lồng khơng? Có Khơng 29 Ơng/bà có biết tình hình nhiễm bệnh lồng bè xung quanh khơng? Có Khơng IV HIỆN TRẠNG SỬ DỤNG THUỐC KHÁNG SINH VÀ HĨA CHẤT TRONG PHỊNG VÀ TRỊ BỆNH TƠM HÙM: 27 Ơng/bà có sử dụng kháng sinh phòng trị bệnh tơm hùm khơng? Phòng Trị bệnh Phòng trị bệnh Khơng 28 Ơng/bà sử dụng thuốc kháng sinh năm rồi? …………………………………………………………………………………… 29 Nếu có sử dụng kháng sinh ơng bà dùng loại kháng sinh đây: (nếu chưa có tên ghi vào trống phía dưới) Phương pháp sử dụng Thời gian sử dụng STT Tên thuốc kháng sinh Tắm cho Trộn vào Tiêm vào Tiêm trực (ngày) thức ăn thức ăn tiếp vào tôm (giờ) (g/kg) (g/kg) thể tôm (ml/kg) Doxycyline Gentamycine Trimethoprime Cefofacine 30 Các chất phụ trợ thường dùng trộn kháng sinh vào thức ăn Dầu mực Dầu nành Khác 31 Ông/bà thường sử dụng thuốc cho tôm vào thời điểm nào? Khi dich bệnh xảy Tơm có dấu hiêu bệnh Tôm bắt đầu chết rải rác Thời điểm khác Nếu thời điểm khác xin ghi rõ: ………………… …………………………………………………………………………………………… 32 Ông /bà sử dụng thuốc kháng sinh để phòng trị bệnh theo hướng dẫn từ nguồn nào? Theo hướng dẫn quan quản lý Theo dẫn người bán Tự mua dùng Nguồn khác Nếu từ nguồn khác xin ghi rõ:…………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… 33 Theo ông/bà thuốc kháng sinh có ảnh hưởng đến ni tơm? Tơm chậm lớn Tơm bình thường Tỉ lệ sống thấp Ảnh hưởng khác Ảnh hưởng khác gì:……………………………………………………………… 34 Ơng/bà có biết loại kháng sinh bị cấm sử dụng nuôi trồng thủy sản khơng? Có Khơng 35 Ơng/bà biết loại kháng sinh cấm thông qua nguồn thông tin nào? Qua sách báo Qua lớp tập huấn Qua quan quản lý Qua nguồn thông tin khác Nguồn khác xin ghi rõ: …………………………………………………………… 36 Trong q trình ni ông/bà có sử dụng hóa chất để vệ sinh lồng (bè) ni khơng? Có Khơng Nếu có đánh dấu vào loại hóa chất dùng: Vơi nung (CaO) Bột đá vôi (CaCO3) Dolomite CaMg (CO3)2 Khác ………… Phương pháp sử dụng: ……………………………………………………………… Hiệu sử dụng: …………………………………………………………………… 37 Trong q trình ni ơng/bà có sử dụng hóa chất để phòng trị bệnh cho tơm hùm lồng (bè) ni khơng? Có Khơng Nếu có đánh dấu vào loại hóa chất dùng: Formol KMnO4 (thuốc tím) Chlorine H2O2 Phương pháp sử dụng: ……………………………………………………………… Hiệu sử dụng: …………………………………………………………………… 38 Trong q trình ni ơng/bà có sử dụng vitamin cho tơm hùm lồng (bè) ni khơng? Có Khơng Nếu có đánh dấu vào loại vitamin dùng: Vitamin C Vitamin B Vitamin tổng hợp Vitamin khác ………… Phương pháp sử dụng: ……………………………………………………………… Hiệu sử dụng: …………………………………………………………………… 39 Trong q trình ni ơng/bà có sử dụng men vi sinh cho tôm hùm lồng (bè) nuôi không? Có Khơng Nếu có đánh dấu vào loại men vi sinh dùng: Navet-Biozym QM-PROBIOTIC BoRemid Aqua Men vi sinh khác ………… Phương pháp sử dụng: ……………………………………………………………… Hiệu sử dụng: …………………………………………………………………… 40 Ơng /bà cho biết cách điều trị bệnh đỏ thân mà ông bà sử dụng khơng? Có Khơng Nếu có xin ghi rõ: ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… Ơng /bà cho biết hiệu việc điều trị bệnh đỏ thân khơng? Có Khơng Nếu có xin ghi cụ thể: ………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… 41 Ơng/bà cho biết loại kháng sinh mà ơng/bà dùng có hiệu việc phòng trị bệnh đỏ thân khơng: Có Khơng Nếu có xin ghi rõ: STT Tên thuốc Hiệu sử dụng Ít hiệu Hiệu Không hiệu 42 Ông /bà việc sử dụng thuốc kháng sinh phòng trị bệnh đỏ thân tơm hùm lồng (bè) xung quanh khơng? Có Khơng Nếu có xin ghi cụ thể: ………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… V KHÓ KHĂN, HƯỚNG PHÁT TRIỂN VÀ KIẾN NGHỊ Khó khăn Thiếu vốn Thiếu kỹ thuật nuôi Thị trường tiêu thụ Chất lượng giống Thiếu lao động Khó khăn khác Hướng phát triển nuôi tôm hùm lồng nông hộ: Không thay đổi Đầu tư kỹ thuật Tăng lồng ni Hình thức ni Kiến nghị gia đình: Giúp đỡ vốn Giúp đỡ kỹ thuật Quy hoạch vùng nuôi Kiến nghị khác Kiến nghị khác: …………………………………………………………………………… Chủ hộ (ký, ghi rõ họ tên) Xin trân trọng cảm ơn hợp tác ông(bà) ! …………, ngày …… tháng …… năm 2014 Điều tra viên (ký, ghi rõ họ tên) MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI A B C D E F A, B: Hình ảnh lồng sắt sử dụng Phú Yên C, D, E, F: Một số loại thức ăn sống làm thức ăn cho tơm hùm Phú n MỘT SỐ HÌNH ẢNH THUỐC KHÁNG SINH ĐƯỢC SỬ DỤNG TRONG PHÒNG ĐIỀU TRỊ BỆNH TÔM HÙM TẠI VÙNG BIỂN PHÚ YÊN ... trạng nuôi sử dụng kháng sinh phòng trị bệnh tơm hùm nuôi lồng vùng nuôi tỉnh Phú Yên Xác định mức độ kháng kháng sinh vi khuẩn Vibrio alginolyticus phân lập tôm hùm bệnh đỏ thân nuôi lồng tỉnh. .. kháng kháng sinh Vibrio alginolyticus tôm hùm (Panulirus ornatus) bị bệnh đỏ thân nuôi lồng tỉnh Phú Yên” Mục tiêu đề tài luận văn: Đánh giá tình hình sử dụng kháng sinh mức độ kháng kháng sinh. .. (2005) nghiên cứu khả kháng sinh vi khuẩn Vibrio alginolyticus phân lập từ tôm hùm nuôi lồng bị bệnh đỏ thân Kết thử độ nhạy 18 loại kháng sinh vi khuẩn Vibrio alginolyticus cho thấy, có loại kháng