nghiên cứu tác dụng kháng viêm của koh i trên chuột nhất trắng

MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv MỞ ĐẦU .1 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Chƣơng - TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ VIÊM KHỚP .4 1.2 TỔNG QUAN VỀ CHẾ PHẨM RƢỢU THUỐC KOH I 1.3 CÁC MƠ HÌNH KHÁNG VIÊM [8][9][7] .10 Chƣơng - ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .12 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 12 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.3 THỐNG KÊ VÀ ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ 14 Chƣơng - KẾT QUẢ 15 Chƣơng - BÀN LUẬN .19 Chƣơng - KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .20 TÀI LIỆU THAM KHẢO 21 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 0.1 Thể tích chân chuột trước sau gây viêm (ml) 15 Bảng 0.2 mức độ giảm phù chân chuột lô thử nghiệm so với lô nước cất _ 17 Bảng 0.3 Mức độ giảm viêm chân chuột lô thử nghiệm so với lô rượu trắng 17 DANH MỤC CÁC HÌNH Biểu đồ 3.1 Giảm độ phù chân chuột sau tiêm carrageenin 16 Biểu đồ 3.2 Mức độ giảm viêm chân chuột lô thử nghiệm so với lô nước cất 17 Biểu đồ 3.3 Mức độ giảm phù chân chuột lô thử nghiệm so với lô rượu trắng 18 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DD : Dung dịch YHCT : Y Học Cổ Truyền MỞ ĐẦU Viêm khớp bệnh thƣờng gặp lứa tuổi trung niên ngƣời già HIện tỉ lệ bệnh ngày tăng lên, tỷ lệ mắc bệnh giới từ 0,3-0,5% dân số 15 tuổi Các thuốc kháng viêm giảm đau ( diclofenac, meloxicam ) thƣờng đƣợc sử dụng để điều trị bệnh lý Tuy nhiên, thời gian sử dụng dài ngày, nguy gây ảnh hƣởng xấu đến sức khỏe ngƣời bệnh khó tránh khỏi Do vậy, chế phẩm từ dƣợc liệu sản xuất nƣớc ngày đƣợc sử dụng nhiều để giảm bớt chi phí điều trị tác dụng phụ thuốc tân dƣợc Chế phẩm rƣợu thuốc KOH I đƣợc bào chế thành rƣợu thuốc từ dƣợc liệu dễ trồng Việt Nam Hoài sơn, Cỏ xƣớc ( Ngƣu tất nam), Cam thảo dây, Đinh lăng Khổ qua Dƣợc liệu sau thu hái đƣợc rửa sạch, phơi sấy khơ sau chiết với rƣợu 40% Phƣơng pháp bào chế đơn giản, dƣợc liệu dễ kiếm, rẻ tiền ƣu điểm trình sản xuất chế phẩm Theo Những thuốc vị thuốc Việt nam GS.Ts Đỗ Tất Lợi Cỏ xƣớc dƣợc liệu thƣờng đƣợc trồng ven đƣờng mọc hoang Việt Nam, thân Cỏ xƣớc theo y học cổ truyền có vị đắng,chua, tính bình có tác dụng nhiệt, tiêu viêm, lợi tiểu lƣu thơng khí huyết thƣờng dùng để mạnh gân xƣơng, bổ can thận dùng chữa bệnh phong thấp tê mỏi, cƣớc khí [3] Theo Tài liệu Từ điển thuốc Việt nam tác giả Võ Văn Chi ghi nhận Cam thảo dây có vị mát, tác dụng kiện tỳ, nhiệt, giải độc, lợi tiểu Chất Amellin có tác dụng chống đái tháo đƣờng triệu chứng bệnh đái tháo đƣờng Đinh lăng có tác dụng giải độc, bổ huyết, tăng sữa, tiêu thực tiêu sƣng viêm[4].Khổ qua đƣợc nhiều nghiên cứu ghi nhận có tác dụng hạ đƣờng huyết số nghiên cứu cho thấy có tác dụng hạ acid uric máu Hoài sơn tác dụng tăng hệ miễn dịch, cải thiện hệ tiêu hóa, hạ đƣờng huyết , hạ mỡ máu, chống oxy hóa, kháng ung thƣ [5].Các thành phần chế phẩm phần lớn có tác dụng nhiệt, giải độc, tiêu viêm Hiện chế phẩm rƣợu thuốc KOH I đƣợc lƣu hành dƣới dạng thực phẩm chức dùng để hỗ trợ điều trị bệnh xƣơng khớp hạ acid uric Kết nghiên cứu đề tài năm 2016 thu đuợc chế phẩm có tác dụng hạ acid uric mơ hình gây tăng acid uric cấp kali oxanat liều 300mg/kg Theo nghiên cứu trƣớc cho thấy tăng acid uric nguyên nhân gây bệnh lý khác mà biểu thƣờng thấy khớp Khi acid uric lắng đọng màng hoạt dịch gây viêm khớp, nội tạng gây viêm mạch máu, viêm màng tim, viêm màng não Việc nghiên cứu chế phẩm kết hợp điều trị hạ acid uric máu hạn chế biến chứng tăng acid uric gây trở thành nhu cầu cấp thiết dự phòng điều trị bệnh lý tăng acid uric gây Trên sở chúng tơi tiên hành nghiên cứu tác dụng kháng viêm chế phẩm rƣợu thuốc KOH I chuột nhắt trắng Đƣa thị trƣờng chế phẩm đạt hiệu an toàn điều trị bệnh xƣơng khớp MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU Mục tiêu tổng quát Nghiên cứu tác dụng kháng viêm chế phẩm thuốc Y Học Cổ Truyền Mục tiêu cụ thể Nghiên cứu tác dụng kháng viêm rƣợu thuốc KOH I chuột nhắt trắng Chƣơng - TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ VIÊM KHỚP Bệnh khớp bệnh thƣờng gặp độ tuổi trung niên già Viêm khớp tình trạng viêm hay nhiều khớp xƣơng,nhƣ hai đầu gối, cổ tay phần cột sống Hai loại thƣờng găp viêm khớp viêm xƣơng khớp viêm khớp dạng thấp với triệu chứng đau đớn, cứng khớp, sƣng đỏ hạn chế vận động Yếu tố nguy dẫn đến viêm khớp bao gồm lịch sử gia đình, tuổi tác, giới tính, thƣơng tích, bệnh béo phì gout Nguy nhiều loại viêm khớp bệnh gout thƣờng tăng lên theo độ tuổi Bệnh viêm xƣơng khớp gặp phụ nữ nhiều viêm quanh khớp gout lại gặp nhiều nam giới Bệnh Gout ảnh hƣởng tói – 2% dân số ngƣời lớn bệnh lý viêm khớp thƣờng gặp nam giới Trong vài thập niên gân dây bệnh gia tăng nhanh Việt Nam Thế giới Bệnh Gout bệnh lý viêm khớp kiểm sốt đƣợc điều trị đau viêm cấp, giảm acid uric, kiểm soát bệnh kèm thay đổi lối sống[20] Viêm khớp đƣợc điều trị phẫu thuật, thuốc Tây Y, thuốc Y Học Cổ Truyền điều trị không dùng thuốc nhƣ Vật lý trị liệu, xoa bóp, bấm huyệt 1.2 TỔNG QUAN VỀ CHẾ PHẨM RƢỢU THUỐC KOH I Thành phần rƣợu thuốc KOH I gồm Cỏ xƣớc, Đinh lăng, Cam thảo nam, Hoài sơn, Khổ qua Chế phẩm đƣợc lƣu hành thị trƣờng dƣới dạng thực phẩm chức dùng để hỗ trợ điều trị tăng acid uric máu hỗ trợ điều trị xƣơng khớp Thành phẩm đƣợc đăng ký theo tiêu chuẩn an toàn vệ sinh thực phẩm Chế phẩm có độ rƣợu 37%, liều dung 30ml/ lần, ngày uống từ – lần Chế phẩm rƣợu thuốc phổ biến bào chế thuốc Y Học Cổ Truyền Rƣợu đƣợc làm rƣợu trắng nồng độ cao ngâm nguyên liệu thảo dƣợc động vật có dƣợc tính theo phƣơng pháp YHCT đƣợc dùng nhƣ loại rƣợu để uống ẩm thực để chữa bệnh Ƣu điểm chế phẩm rƣợu thuốc dễ bào chế, dễ bảo quản, giữ đƣợc mùi vị dƣợc liệu, phát huy tác dụng mạnh nhanh tính dẫn thuốc rƣợu Tuy nhiên rƣợu có nhiều nhƣợc điểm nhƣ hạn chế số đối tƣợng sử dụng nhƣ trẻ em, phần đông phụ nữ phận ngƣời uống rƣợu, mẫn cảm với cồn Rƣợu tác nhân gây nguy ung thƣ[1] [2],rƣợu gây mệt mỏi, gây nghiện sau say.Ngồi rƣợu cịn gây rối loạn chuyển hóa, gây tăng men gan, xơ gan, viêm loét dày tá tràng… Rƣợu thuốc chế phẩm thuốc nên cần đƣợc sử dụng liều lƣợng, ngƣời, bệnh không tùy tiện lạm dụng để uống Uống điều độ, khoảng – đơn vị cồn ( 10 – 30g) ngày kết hợp với ăn uống lành mạnh Tổ chức Y Tế Thế Giới ƣớc lƣợng đơn vị uống chuẩn chứa 10g cồn tƣơng đƣơng 30ml rƣợu mạnh 40% cồn; 100ml rƣợu vang ( 13,5% cồn ) Tuân thủ tối đa 14 đơn vị tuần với nữ 21 đơn vị nam tránh uống đơn vị ngày (1) Các vị thuốc chế phẩm rƣợu thuốc KOH I 1.2.1 Cỏ xƣớc [4], [5] Cỏ xƣớc hay tên gọi khác ngƣu tất nam có tên khoa học Achyranthes aspera L thuốc họ rau Dền Mô tả Cây thảo sống hàng năm hay hai năm, cao khoảng 1m Rễ nhỏ , cong queo, bé dần từ cổ rễ đến chóp rễ, dài 10 – 15cm, đƣờng kính – mm Lá mọc đối, mép lƣợn sóng Hoa nhiều mọc thành bơng dài 20 – 30 cm, Quả nang có bắc tồn thành gai nhọn Hạt hình trứng dài Sinh thái Cây mọc bãi cỏ, nƣơng rẫy cũ, quanh làng bản, ven đƣờng đi, bờ bụi nơi có ánh sáng đất tốt, tới độ cao 1500m Ra hoa vào mùa hè thu Tác dụng dƣợc lý Chất Muxin hòa tan nƣớc; điều kiện axit loãng nhiệt độ phân giải thành chất protit hyrat carbon Có tính chất bổ nhiệt độ 45 – 55°C khả thủy phân chất đƣờng men hồi sơn cao, axit lỗng tiêu hóa lần trọng lƣợng đƣờng Nhật dùng hoài sơn chữa khỏi bệnh đái tháo đƣờng dùng insulin mà khơng khỏi Ngồi việc sử dụng thực phẩm hồi sơn cịn đƣợc dùng Y học cổ truyền Hoài sơn coi thuốc bổ có tính thu sáp, dùng trƣờng hợp ăn uống khó tiêu, viêm ruột, di tinh, đái đêm, mồ trộm, đái đƣờng Hồi sơn theo tài liệu cổ có vị tính bình vào kinh tỳ vị, phế thận Có tác dụng mạnh bổ tỳ tả, bổ phế thận, sinh tân khát, bình suyễn sáp tinh Dùng chữa tả lỵ lâu ngày, tiêu khát, hƣ hao sinh ho, di tinh, đới hạ, tiểu tiện nhiều lần Liều dùng 10 – 20g dƣới dạng thuốc sắc bột 1.2.5 Khổ qua [4], [5] Khổ qua tên khoa học Momordica charantia L thuộ họ bầu bí Cucurbitaceae Mơ tả Dây leo tua Thân có cạnh Lá mọc so le, chia – thùy, mép khía rang, gân có lơng ngắn Hoa đực hoa mọc riêng lẻ nách lá, có cuống dài Cánh hoa màu vàng nhạt Quả hình thoi dài, mặt ngồi có nhiều u lồi, chin màu vàng hồng Hạt dẹp có màng đỏ bao quanh Sinh thái Loài cổ nhiệt đới, mọc hoang dại rừng thứ sinh, ven sông suối, gần làng Bộ phận dùng Quả, hoa rễ Fructus Flos et Radix momordiae charantiae Thành phần hóa học Trong có tinh dầu, glucoside, saponin alkaloid momordicin; cịn có vitamin B1 C; carotein, adenine, detain Hạt chứa dầu chất đắng có enzyme tiêu protein Tính vị tác dụng Cây có vị đắng tính hàn, khơng có độc, có tác dụng giải nhiệt, giải lao, tâm, sang mắt có vị đắng, tính hàn, khơng có độc, lúc xanh có tính giải nhiệt, tiêu đờm, sang mắt, mát tim, nhuận tràng, bổ thận, nuôi can huyết, bớt mệt mỏi, giảm bớt đau xƣơng khớp Quả chin có tác dụng bổ thận, kiện tỳ, dƣỡng huyết 1.3 CÁC MÔ HÌNH KHÁNG VIÊM [8][9][7] 1.3.1 Gây phù chân chuột carrageenan [8] Đo thể tích bàn chân phải sau chuột nhắt trƣớc thí nghiệm chuột dƣợc uống thuốc thử nghiệm nƣớc cất.Sau giờ, tiêm dung dịch carrageenan 1% (0,025 mL) vào dƣới da gan bàn chân phải.Đo thể tích bàn chân phải sau chuột (tồn bàn chân) sau tiêm carrageenan giờ, ngày, ngày, ngày Tác dụng kháng viêm đƣợc biểu diễn % mức độ giảm sƣng phù chân chuột lô thử nghiệm so với lô chứng uống nƣớc cất nhóm đối chiếu uống Meloxicam 8mg/kg 1.3.2 Gây viêm màng bụng carrageenan Chuột đƣợc uống thuốc thử nƣớc cất trƣớc ngày Sau gây viêm màng bụng cấp dung dịch carrageenan 0,05g + forrmaldehyd 1,4ml pha 100ml nƣớc muối sinh lý Thể tích tiêm 1ml/100g chuột vào khoang bụng cho chuột Sau 2h gây viêm, mổ bụng chuột hút dịch viêm Đo thể tích đếm số lƣợng bạch cầu/ml Định lƣợng protein dịch viêm 1.3.3 Gây viêm mạn Gây viêm mạn tính cách cấy sợi amiant trọng lƣợng 6mg tiệt trùng ( sấy 120°C vòng 1h) đƣợc tẩm dung dịch carragenan 1% vào da sau gáy chuột Sau cấy u hạt, chuột đƣợc uống nƣớc cất thuốc thử liên tục vòng ngày Ngày thứ tiến hành giết chuột cloroform, bóc tách khối u hạt, sấy khơ nhiệt độ 56°C vòng 18h Cân trọng lƣợng u hạt sau đƣợc sấy khơ Mơ hình nghiên cứu tác dụng kháng viêm gây phù chân chuột tiêm carragenan cho kết ổn định, đáng tin cậy, phƣơng pháp nghiên cứu thuận tiện có sẵn thiết bị đo thể tích chân cht, kinh phí phù hợp chúng tơi sử dụng mơ hình để tiến hành nghiên cứu tác dụng kháng viêm chế phẩm KOH I phạm vi đề tài Chƣơng - ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU Vật liệu nghiên cứu Rƣợu thuốc KOH I ( Cỏ xƣớc, Khổ qua, Hoài Sơn, Đinh Lăng, Cam thảo nam) có độ rƣợu 37%, liều dung 30ml/ lần, ngày uống đến lần Chế phẩm dùng để điều trị chứng tăng acid uric máu hỗ trợ điều trị xƣơng khớp Động vật nghiên cứu Chuột nhắt trắng đực, chúng Swiss albino, 5- tuần tuổi, trọng lƣợng trung bình 20 ± g, đƣợc cung cấp Viện Parteur Thành phố Hồ Chí Minh Chuột đƣợc để ổn định tuần trƣớc thử nghiệm Chuột đƣợc nuôi đầy đủ thực phẩm viên uống nƣớc tinh khiết Thể tích cho uống hay tiêm phúc mơ 0,1 ml/10g thể trọng chuột Thuốc đối chiếu hóa chất NaCl 0.9% Carrageenin ( Sigma Aldrich, USA) Dung dịch carrageenan pha dung dịch NaCl 0.9%, nồng độ carregeenin 1% đƣợc pha trƣớc thử nghiệm để carrageenan trƣơng nở Dung dịch chống thấm Ornano imbidente hang Ugo Basile, Ý Meloxicam ( Pymepharco 7,5mg) Ethanol 37% ( pha từ Ethanol 90%) Nƣớc cất Thiết bị dụng cụ Lồng nuôi chuột, kim cho uống,lọ đựng mẫu… Máy đo thể tích chân chuột (Plethysmormeter), Model 7140 hãng Ugo basile, Ý Cân phân tích Mettler Tolerdo, AB204, độ nhạy 0,0001mg Đũa thủy tinh, bercher 100ml 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Cơ sở tính liều Dựa sở liều sử dụng ngƣời quy đổi liều chuột, liều sử dụng để nghiên cứu đƣợc tính liều chuột = 12 × liều ngƣời/ 60 Tƣơng đƣơng liều chuột = (12 × 30) /60 = 6ml/kg Chế phẩm rƣợu thuốc cho chuột thử nghiệm liều 0,06ml/10g chuột 0,12ml/10g chuột 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng kháng viêm cấp rƣợu thuốc KOH I Mơ hình đƣợc tiến hành qua bƣớc nhƣ sau: Bƣớc : Đo thể tích chân phải chuột trƣớc thử nghiệm máy Plethysmometer ( đo lần lấy trung bình cộng) Bƣớc : Tiêm dƣới da gan bàn chân phải sau chuột với 0,05ml DD carrageenan 1% để gây viêm Chuột sau tiêm DD carrageenan đƣợc đặt vào giá đỡ để tránh nhiếm trùng chân Bƣớc : sau 3h, đo thể tích chân phải sau chuột (V3h) chuột có chân sung phù 50% so với bình thƣờng đƣợc chọn cho thử nghiệm đƣợc chia vào lô Cho chuột uống thuốc thể tích 0,2 mL/10g theo nhóm Lơ chứng: uống nƣớc cất 0,12ml/10g chuột Lô Chứng rƣợu : Uống 0,12ml/10g chuột Rƣợu trắng 37% Lô đối chiếu: Uống Meloxicam pha nƣớc cất liều mg/kg Lô thử 1: Uống rƣợu thuốc KOH I liều 0,12ml/10g Chuột đƣợc uống thuốc thử nghiệm ( lô thử lô đối chiếu) trƣớc tiêm DD carrageenan 1% Sau đƣợc cho uống ngày, liên tục ngày trƣớc đo thể tích chân chuột Bƣớc : Đo thể tích bàn chân phải sau chuột (toàn bàn chân) sau tiêm carrageenin giờ, ngày, ngày, ngày Bƣớc : từ kết đo thể tích chân chuột, tính mức độ phù chân chuột ( X%) lô Tác dụng kháng viêm đƣợc biểu diễn % mức độ giảm sƣng phù chân chuột lô thử nghiệm so với lơ chứng uống nƣớc cất nhóm đối chiếu uống Meloxicam 8mg/kg Độ sung phù chân chuột biểu thị mức độ viêm, đƣợc tính theo cơng thức X% = ( Vt- V0)/V0×100% X: độ phù tính theo % V0 : thể tích chân chuột trƣớc gây viêm Vt: thể tích chân chuột sau gây viêm Mức độ giảm viêm chân chuột lô thử nghiệm so với lơ chứng đƣợc tính theo cơng thức: % ức chế = ((x-y)/x )×100% X: mức độ viêm chân chuột lô chứng Y: mức độ viêm chân chuột lô đối chiếu hay lô thử nghiệm 2.3 THỐNG KÊ VÀ ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ Các số liệu đƣợc biểu thị trị số trung bình: M ± SEM (Standard error of the mean – sai số chuẩn giá trị trung bình) xử lý thống kê dựa vào phép kiểm One–Way ANOVA Student-Newman-Keuls test (phần mềm Jandel Scientific SigmaStat) Kết thử nghiệm đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% P < 0,05 so với lô chứng Chƣơng - KẾT QUẢ Tác dụng kháng viêm chế phẩm KOH I chuột nhắt trắng Bảng 0.1 Thể tích chân chuột trƣớc sau gây viêm (ml) Lô thử nghiệm Nƣớc cất Rƣợu trắng V0(ml) Thể tích chân chuột sau gây viêm (ml) 3h ngày 0,505 ± 0,925 ± 0,875 ± 1,035 ± 0,94 ± 0,095 0,225*** 0,155*** 0,205*** 0,22*** 100% 145,41% 142,29% 151,21% 146,28% 0,935 ± 0,885 ± 0,895 ± 0,805 ± 0,205*** 0,145*** 0,085*** 0,075*** 142,25% 138,98% 139,66% 132,92% 0,51 ± 0,14 0,88 ± 0,21 0,79 ± 0,14 0,82 ± 0,17* 100% 142,05% 135,44% 137,80% 0,98 ± 0,16 0,89 ± 0,04 141,33% 135,39% 0,54 ± 0,13 100% Meloxicam 0,575 ± KOH I 0,115 100% 0,615 ± 0,085** 117,07% 0,845 ± 0,715 ± 0,095** 0,085** 131,95% 119,58% Ghi chú: Khác biệt so với thử nghiệm Vo *:P