Đứng trước tình trạng này, các nhà khoa học đã và đang nghiên cứu để đưa ra những phương pháp mới trong phòng trừ và tiêu diệt các loại sâu bộ hại cây trồng mà không ảnh hưởng đến môi trường cũng như sức khỏe con người. Xu hướng nghiên cứu hiện nay đang tập trung vào việc nghiên cứu sử dụng vi nấm, vi khuẩn, ký sinh thiên địch hay các loại hợp chất thứ cấp từ thảo mộc để kiểm soát sinh học cây trồng. Những chế phẩm sinh học này ít ảnh hưởng đến các sinh vật sống khác, dễ phân hủy, không gây độc cho người sử dụng nông phẩm và dễ sử dụng nên đang rất được quanĐứng trước tình trạng này, các nhà khoa học đã và đang nghiên cứu để đưa ra những phương pháp mới trong phòng trừ và tiêu diệt các loại sâu bộ hại cây trồng mà không ảnh hưởng đến môi trường cũng như sức khỏe con người. Xu hướng nghiên cứu hiện nay đang tập trung vào việc nghiên cứu sử dụng vi nấm, vi khuẩn, ký sinh thiên địch hay các loại hợp chất thứ cấp từ thảo mộc để kiểm soát sinh học cây trồng. Những chế phẩm sinh học này ít ảnh hưởng đến các sinh vật sống khác, dễ phân hủy, không gây độc cho người sử dụng nông phẩm và dễ sử dụng nên đang rất được quanĐứng trước tình trạng này, các nhà khoa học đã và đang nghiên cứu để đưa ra những phương pháp mới trong phòng trừ và tiêu diệt các loại sâu bộ hại cây trồng mà không ảnh hưởng đến môi trường cũng như sức khỏe con người. Xu hướng nghiên cứu hiện nay đang tập trung vào việc nghiên cứu sử dụng vi nấm, vi khuẩn, ký sinh thiên địch hay các loại hợp chất thứ cấp từ thảo mộc để kiểm soát sinh học cây trồng. Những chế phẩm sinh học này ít ảnh hưởng đến các sinh vật sống khác, dễ phân hủy, không gây độc cho người sử dụng nông phẩm và dễ sử dụng nên đang rất được quan
MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN Tổng quan neem Một số thông tin khái quát neem Giá trị số ứng dụng neem .5 Neem dùng làm dược liệu Neem dùng mỹ phẩm Neem dùng thuốc bảo vệ thực vật phân bón Thành phần hóa học hạt neem Diterpenoid .9 Triterpenoid dẫn xuất chúng Triterpene Meliacin 11 Các hoạt chất 14 Azadirachtin 14 Meliantriol 15 Salannin .15 Nimbin Nimbidin 15 Một số nghiên cứu phương pháp chiết tách azadirachtin 16 Một số nghiên cứu giới 16 Một số hướng tiếp cận quy mơ phịng thí nghiệm .16 Các sáng chế .18 Các nghiên cứu nước .21 Một số thành phần thuốc bảo vệ thực vật 22 Phương thức tác động phổ tác động hoạt chất 25 Đối với côn trùng 25 Phương thức tác động 25 Cơ chế tác động 27 Phổ tác động 28 Đối với vi nấm 29 Đối với tuyến trùng 29 Tính bền hoạt chất 29 1 2 CHƯƠNG ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN 32 Mục tiêu đề tài .32 Phương pháp thực 32 Nguyên liệu 32 Khảo sát quy trình ép dầu 33 Chiết xuất định lượng hoạt chất 34 CHƯƠNG KẾT QUẢ SƠ BỘ .37 Kết khảo sát quy trình ép dầu 37 Kết sơ phản ứng màu với vanillin/methanol .39 CHƯƠNG KẾT LUẬN 43 4.1 Bàn luận kết sơ 43 4.1 Kết luận 43 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Đặc điểm hình thái neem Hình 1.2 Tricyclic diterpene từ hạt neem Hình 1.3 Neemtriterpenoid 10 Hình 1.4 Neem triterpene 11 Hình 1.5 Các limonoid với hệ thống vòng nguyên vẹn 12 Hình 1.6 Các limonoid mở vịng 13 Hình 1.7 Công thức cấu tạo azadirachtin A B 14 Hình 1.8 Cơng thức cấu tạo nimbin nimbidin 16 Hình 1.9 Các đường tác động dự kiến azadirachtin thông qua trung gian ecdysone 28 Hình 2.1 Nội dung nghiên cứu 32 Hình 2.2 Quy trình chiết đơn giản không loại béo 34 Hình 2.3 Quy trình chiết có loại béo .36 Hình 3.1 Đồ thị so sánh hiệu suất thu dầu thời gian đạt áp lực khác áp lực 200 kg/cm2 39 Hình 3.2 Đồ thị so sánh hiệu suất thu dầu thời gian đạt áp lực khác áp lực 190 kg/cm2 39 Hình 3.3 Phản ứng màu dầu neem dầu dừa .40 Hình 3.4 Dịch chiết pha loãng sau thực phản ứng màu 41 Hình 3.5 Phổ UV-Vis dịch chiết sau pha loãng 42 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các hoạt chất neem hoạt tính chúng .5 Bảng 1.2 Một số tính chất hóa lý azadirachtin 15 Bảng 1.3 Thông tin thành phần chế phẩm 19 Bảng 1.4 Kết đánh giá độ bền chế phẩm 19 Bảng 1.5 Ảnh hưởng pH tính bền azadirachtin .30 Bảng 1.6 Ảnh hưởng nhiệt độ tính bền hoạt chất dạng khác 31 Bảng 3.1 Kết ép dầu áp lực 200 kg/cm2 .37 Bảng 3.2 Kết ép dầu áp lực 190 kg/cm2 .38 Mở đầu Việt Nam nước nông nghiệp từ lâu đời nông nghiệp ngành chiếm tỷ trọng lớn kinh tế nước ta Nền sản xuất nông nghiệp nước ta phải đối đầu với thách thức lớn muốn đưa sản phẩm nông nghiệp Việt Nam thị trường quốc tế nước ta phát triển theo chiều rộng chính, suất hiệu Nguyên nhân cho việc lạc hậu thiếu chun mơn hóa q trình canh tác sản xuất dẫn đến sản phẩm chất lượng, khơng đạt tiêu chuẩn xuất khẩu, phần dư khâu kiểm tra trình sử dụng thuốc bảo vệ thực vật không đạt Thực trạng nông nghiệp nước ta phải đối mặt với nhiều loại sâu, bọ hại trồng nên việc sử dụng thuốc bảo vệ thực vật điều tránh khỏi, thuốc trừ sâu hóa học sử dụng nhiều Dù sử dụng rộng rãi biện pháp hóa học ngày bộc lộ khuyết điểm Đầu tiên, dư lượng thuốc trừ sâu thải môi trường ngày lớn, ảnh hưởng trực tiếp đến môi trường, sức khỏe người gây cân sinh thái Điều nghiêm trọng việc sử dụng liều lượng, không quy trình sử dụng thuốc thời gian thu hoạch để lại dư lượng thuốc trừ sâu vượt q mức quy định cho phép nơng sản Có thể nhận tin tức việc bị ép giá, bị trả lại hàng, không qua khâu kiểm định xuất qua nước tiên tiến quen thuộc mặt báo Dư lượng thuốc trừ sâu nông sản nguyên nhân gây nhiễm độc cho khoảng 1.5 triệu người năm tồn giới, có 25 nghìn người bị tử vong (WHO-1998) Đứng trước tình trạng này, nhà khoa học nghiên cứu để đưa phương pháp phòng trừ tiêu diệt loại sâu hại trồng mà không ảnh hưởng đến môi trường sức khỏe người Xu hướng nghiên cứu tập trung vào việc nghiên cứu sử dụng vi nấm, vi khuẩn, ký sinh thiên địch hay loại hợp chất thứ cấp từ thảo mộc để kiểm soát sinh học trồng Những chế phẩm sinh học ảnh hưởng đến sinh vật sống khác, dễ phân hủy, không gây độc cho người sử dụng nông phẩm dễ sử dụng nên quan tâm Cây neem (Azadirachta Indica A Juss) loại thảo mộc có đặc tính kháng sâu bọ, trùng nghiên cứu sử dụng nước ta nhiều nước khác giới Bánh neem sau ép dầu phụ phẩm sử dụng cho mục đích Nhằm tìm phương pháp tối ưu hóa việc sử dụng phụ phẩm từ hạt neem sau q trình ép dầu để phịng trừ tiêu diệt sâu bọ nên cần tiến hành nghiên cứu đề tài “Khảo sát quy trình ép dầu neem chiết hoạt chất Azadirachtin với limonoid bánh neem để ứng dụng làm thuốc trừ sâu” Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan neem 1.1.1 Một số thông tin khái quát neem Tên khoa học: Azadirachta indica A.Juss Được nhà khoa học Andriew Henri Laurent de Jussieu miêu tả khoa học lần năm 1830 Tên thường gọi: xoan ấn độ, neem tree (tiếng Anh), xoan Ấn Độ, nim (tiếng La-tinh), xoan chịu hạn, xoan trắng Bộ: Rutales Bộ phụ: Rutineae Họ: Meliaceae (Mahogany family) Chi: Melieae Giống: Azadirachta Loài: Indica Hình 1.1 Đặc điểm hình thái neem A-Nhánh thân neem; B-Lá neem; C-Hạt neem chín; D-Hạt neem khơ; E- Nhân hạt neem Cây neem lớn nhanh, thông thường đạt chiều cao 15-20 m, cao 3540 m có Thân có đường kính khoảng 2.5 m, nhánh trưởng thành vươn dài đến 10 m Lá neem thường xanh quanh năm, gặp hạn thiếu nước dội rụng Tuổi thọ trung bình neem lên đến 200 năm [1] Quả: bắt đầu trồng từ đến năm, cho suất cao ổn định sau đến 10 năm, trung bình trưởng thành cho từ 30-35 kg quả/ năm Quả trơn láng hình bầu dục dài khoảng cm, chín có màu vàng màu vàng xanh, thịt Quả phát triển chín vịng 1-2 tháng Hạt gồm vỏ nhân, có 1-3 nhân hạt [1] Cây neem xem có nguồn gốc từ vùng Assam Burma, nhiên nguồn gốc xác chưa biết Hiện neem sống khu vực nhiệt đới bán nhiệt đới, chúng trồng rộng rãi 30 quốc gia, đặc biệt vùng dọc theo phía nam hoang mạc Sahara Ấn Độ nước trồng xoan chịu hạn lớn giới, neem trồng khắp nơi xem loài tiêu biểu quốc gia với gần 25 triệu neem cho 442.300 hạt/ năm tạo khoảng 88.400 dầu neem 353.800 bánh dầu [2] Ở Việt Nam, neem trồng nhiều nơi Kiên Giang, Châu Đốc Ninh Thuận gọi xoan chịu hạn để phân biệt với xoan địa phương (Melia azedarach) trồng phổ biến nước ta [81] 1.1.2 Giá trị số ứng dụng neem Neem sử dụng nhiều nông nghiệp công nghiệp, đặc biệt trồng trọt công nghiệp dược phẩm, mỹ phẩm Tại Ấn Độ, neem từ lâu xem tài sản quý khả thích nghi rộng với mơi trường sống tính đa dạng sản phẩm từ neem 1.1.2.1 Neem dùng làm dược liệu Gỗ neem biết đến bền, ngồi gỗ phận hoa, hạt, nhân hạt, lá, vỏ nhựa neem sử dụng với nhiều mục đích khác Khả dùng làm dược liệu chúng ứng dụng từ lâu thu hút đầu tư nghiên cứu từ nhiều nhà khoa học giới Nhiều báo cáo chứng minh neem có khả kháng viêm, kháng sinh, kháng khuẩn tốt [2] Bảng 1.1 Các hoạt chất neem hoạt tính chúng [2] ST T Tên chất Bộ phận chứa chất [3] [4] [5] [6] [7, 8] [9] [10] [10] [11] [12] [13] [14] [15, 16] [16] [17] [18] Vỏ Kháng khuẩn [20] Lá Kháng nấm [21] Kháng viêm Hỗ trợ điều trị khối u ung thư [22] Vỏ Kháng viêm [24] Vỏ Hỗ trợ điều hòa hệ miễn dịch [25] Nimbidin Hạt Azadirachtin Nimbin Hạt Hạt Nimbolide Hạt Gedunin Hạt Mahmoodin Hạt Gallic acid, Catechin Vỏ 10 11 12 13 NB-2-Peptidoglucan Tài liệu tham khảo Kháng viêm Chống viêm khớp Hạ sốt Hạ đường huyết Chống viêm dày Chất diệt tinh trùng Kháng nấm Kháng khuẩn Lợi tiểu Chống sốt rét Chất diệt tinh trùng Chống sốt rét Kháng khuẩn Chống sốt rét Kháng nấm Kháng khuẩn Kháng viêm Hỗ trợ điều hòa hệ miễn dịch Margolone, margolonone isomargolonone Cyclic trisuphide cyclic tetrasulphide Polysaccharides Polysaccharides G1A, G1B Polysaccharides G2A, G3A Hoạt tính sinh học Vỏ [19] [23] Ngồi cơng dụng trên, vỏ neem cịn có tác dụng cầm máu, bổ gan, trị đàm, … Lá neem báo cáo chữa stress điều khiển tỷ lệ sinh sản,… Tại số vùng Andhra Pradesh, nông dân thường cho gia súc ăn neem sau sinh để tăng tiết sữa Ngồi neem cịn có tác dụng phịng trị bệnh giun sán cho gia súc kiểm soát nhiều loại tác nhân gây bệnh khác Nhiều nơi dùng non làm rau ăn vừa bổ sung khoáng chất, vừa phịng ngừa giun sán viêm nhiễm đường ruột Ở Ấn Độ, dân gian thường lấy neem để gần trẻ em giúp ngăn ngừa bệnh ho gà 1.1.2.2 Neem dùng mỹ phẩm Dầu neem có hoạt tính kháng khuẩn tốt, có khả tiêu diệt loại vi khuẩn gây mụn nên ưa chuộng liệu pháp tự nhiên điều trị mụn cho da cách phối chúng vào dầu sản phẩm mỹ phẩm, dùng trực tiếp lên da để điều trị mụn trứng cá, mụn nhọt [26] Cũng nhờ khả kháng khuẩn mà dịch chiết neem tiêu diệt vi khuẩn, mảng bám men răng, dịch chiết neem phối vào kem đánh sử dụng hàng ngày để giảm thiểu nguy mắc bệnh miệng nha chu [2] Ngoài ra, sản phẩm khác dầu gội, sữa tắm,… phối dịch chiết neem vào để tăng tính diệt khuẩn 1.1.2.3 Neem dùng thuốc bảo vệ thực vật phân bón Tất phận neem có chứa hàng loạt hoạt chất có hoạt tính sinh học cao [27] Dịch chiết lá, nhân hạt neem, bánh dầu neem, dầu neem [28] hay dẫn xuất chúng sử dụng để điều chế sản phẩm trừ sâu Cơng dụng limonoid có tác dụng gây ngán ăn, ức chế vòng đời sinh trưởng côn trùng xua đuổi côn trùng hiệu Từ xa xưa, nông dân Ấn Độ nhiều khu vực khác giới lấy dịch chiết cồn neem để làm thuốc bảo vệ thực vật cách xay nhỏ lá, hạt hay bã neem, sau ngâm cồn cồn nước lấy dịch chiết đem phun lên [1] Cơ chế tác động neem côn trùng làm rõ phần sau Bánh dầu neem phụ phẩm có giá trị cơng nghiệp ép dầu Bánh dầu chứa khoảng 1,07- 1,36% lưu huỳnh, 2-3% nitơ, 2-3% đạm, 1% photpho, 1,4% kali 10 - Số lần ép: 1, 2, 3, lần Sau lần ép, ta lấy bánh neem xay 90 giây - tiếp tục ép Trạng thái nguyên liệu: có vỏ khơng có vỏ Khi ép hạt neem cịn ngun vỏ, quy trình tương tự trên, ngoại trừ bước tách vỏ sấy 2.3.2 Chiết xuất định lượng hoạt chất 2.3.2.1 Quy trình chiết Quy trình chiết định lượng phương pháp UV-Vis Bánh neem sau ép dầu Xay đến kích thước định Dung môi chiết Chiết rắn - lỏng Lọc “? Dịch chiết 38 Bay dung môi Chất rắn chứa AZRL Hình 2.2 Quy trình chiết đơn giản không loại béo Đây phương pháp chiết lựa chọn để khảo sát tối ưu quy trình Tuy hoạt chất cuối thu cịn lẫn dầu có độ tinh khiết azadirachtin không cao, nêu trên, hoạt chất khác dầu neem làm tăng độ bền hoạt tính sản phẩm thuốc trừ sâu sau Các yếu tố khảo sát để tối ưu hóa quy trình chiết trên: Kích thước nguyên liệu Dung mơi: khảo sát hệ dung mơi ethanol-nước để tìm độ cồn thích hợp Nhiệt độ chiết: nhiệt độ sôi, 70 oC, 60 oC, 50oC, 40oC Tỷ lệ rắn-lỏng: khảo sát tỷ lệ 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 Thời gian chiết: 30, 40, 50, 60 phút Quy trình định lượng phương pháp UV-Vis Azadirachtin có màu nhạt, khơng thể nhìn mắt thường khơng màu vùng vis Azadirachtin có bước sóng hấp thu cực đại thấp (217 nm - vùng UV) nên ta cần tăng khả màu chất để có thể… Nguyên tắc phương pháp định lượng UV-Vis: - Thực phản ứng mẫu azadirachtin chuẩn dịch chiết từ nhân hạt neem với vanillin môi trường acid Quét phổ UV-Vis vùng bước - sóng 400-700 nm để xác định bước sóng hấp thu cực đại (�max) AZRL Lập đường chuẩn: thực phản ứng dung dịch chất chuẩn nồng độ - khác (0.01 mg/ml – 0.1 mg/ml) với vanillin, đo dộ hấp thu A �max Thực phản mẫu dịch chiết với vanillin, đo độ hấp thu �max Dựa vào đồ thị đường chuẩn ta tính nồng độ AZRL có dịch chiết Các bước tiến hành - Hòa tan cao chiết bánh neem vào dichloromethane để thu dung dịch có - nồng độ 1mg/ml (dung dịch cần định lượng) Thêm 7ml dung dịch vừa pha vào 2ml dung dịch vanillin/methanol (20 mg/ml) Lắc bình phản ứng để ổn định nhiệt độ phút 39 - Thêm 3ml dung dịch H2SO4 98% vào Lượng acid chia thành lần thêm (mỗi lần 1ml), sau lần thêm cần khuấy hỗn hợp tay vòng - 10s Thêm 7ml methanol vào để chuyển hỗn hợp từ pha thành dung dịch đồng - có màu xanh lá-xanh dương Để hỗn hợp ổn định phút nhiệt độ phòng trước đo phổ vùng Vis - bước sóng �max khảo sát Mẫu blank pha giống trên, thay 7ml dung dịch cần định lượng thành 7ml dung môi dichloromethane - 2.3.2.2 Quy trình chiết có loại béo Bánh neem sau ép dầu Dung mơi chiết Xay đến kích thước định Chiết rắn - lỏng Lọc “? Dịch chiết Bay dung môi Chất rắn chứa AZRL Hexane Lọc bỏ pha hexane Chất rắn chứa AZRL Hình 2.4 Quy trình chiết có loại béo 40 Quy trình chiết có loại béo đề xuất để thực việc định lượng azadirachtin tiến hành phương pháp HPLC 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ SƠ BỘ Kết ép dầu neem từ hạt có vỏ 3.1 Mỗi thí nghiệm ép dầu thực với 2.5 kg hạt nguyên vỏ, số lần ép cố định ban đầu 3, thời gian lần ép tính từ lúc đạt áp lực 10 phút để khảo sát lượng dầu lần khảo sát gồm thí nghiệm lặp lại Khảo sát 1, 2, 3, bảng kết tương ứng với thời gian từ lúc bắt đầu đến lúc đạt áp lực 90, 60, 45 30 giây Hiệu suất thu dầu tính theo cơng thức: Kết lượng dầu ép (ml) áp lực 200 kg/cm2 Bảng 3.1 Kết ép dầu áp lực 200 kg/cm2 Khảo sát Lần ép Tổng lượng dầu Tổng lượng dầu Tổng lượng dầu Thí nghiệm 50 230 90 Thí nghiệm 120 280 90 Thí Nghiệm 105 280 100 Lượng dầu trung bình 91.67 263.33 93.33 Hiệu suất thu dầu 3.67 10.53 3.73 370 460 418 448.33 17.93 100 270 90 128 320 90 125 300 110 117.67 296.67 96.67 4.71 11.87 3.87 490 538 507 511 20.44 78 250 90 107 290 110 128 290 100 104.33 276.67 100 4.17 11.07 485 535 518 481 19.24 Kết lượng dầu ép (ml) áp lực 190 kg/cm2 Bảng 3.2 Kết ép dầu áp lực 190 kg/cm2 Khảo sát Lần ép Thí nghiệm 40 350 80 Thí nghiệm 40 360 90 Thí Nghiệm 32 310 100 Lượng dầu trung bình 37.33 340 90 Hiệu suất thu dầu 1.49 13.6 3.6 42 Tổng lượng dầu Tổng lượng dầu Tổng lượng dầu Tổng lượng dầu 470 490 442 467.33 18.69 55 340 100 52 290 100 55 330 100 54 320 100 2.16 12.8 495 442 485 474 18.96 65 310 100 67 350 95 58 280 140 63.33 313.33 111 67 2.53 12.53 4.47 475 512 478 488.33 19.53 60 290 130 60 280 100 124 270 110 81.33 280 113.33 3.25 11.2 4.53 480 440 504 474.67 18.99 Hình 3.1 Đồ thị so sánh hiệu suất thu dầu tốc độ ép khác áp lực Hiệu suất 200 kg/cm2 Hình 3.1 Đồ thị so sánh hiệu suất thu dầu thời gian đạt áp lực khác áp lực 190 kg/cm2 Kết sơ phản ứng màu với vanillin/methanol Phản ứng màu với loại dầu - Pha dung dịch vanillin/methanol có nồng độ 20 mg/ml - Cho ml dầu neem dầu dừa vào becher nhỏ, thêm ml dichloromethane - vào bình để hịa tan hồn tồn lượng dầu Các bước sau thực giống nêu phương pháp định lượng UV- - Vis Mẫu blank chuẩn bị tương tự thay dầu neem dầu dừa - dichloromethane Kết thu (hình 3.1): • Bình chứa dầu neem: dung dịch chuyển sang màu xanh dương tím có • ánh xanh Bình chứa dầu dừa: dung dịch chuyển sang màu vàng cam 43 Hình 3.3 Phản ứng màu dầu neem dầu dừa Kết cho thấy dầu neem có chứa lượng azadirachtin định nên có phản ứng màu, cịn dầu dừa khơng Vì thế, thấy khả làm màu azadirachtin dung dịch vanillin/methanol môi trường acid mạnh khả thi Kết sơ chiết định lượng azadirachtin phương pháp UV-Vis - 10g bánh neem (có vỏ) xay nhỏ chiết với dung môi methanol với tỉ lệ - rắn-lỏng 1:10 Cô quay đuổi dung môi để thu cao chiết Các bước tiến hành với mô tả mục phương pháp tiến hành định lượng phương pháp UV-Vis Dịch sau phản ứng tiếp tục - pha loãng gấp lần methanol Kết thu được: • Dịch hịa tan cao chiết có xảy phản ứng màu với dung dịch • vanillin/methanol (hình 3.2) Tiến hành quét phổ UV-Vis (hình 3.3) thu phổ có bước sóng hấp thu cực đại 620 nm, cực tiểu 496 nm với độ hấp thu 0.435 0.348 44 Hình 3.4 Dịch chiết pha loãng sau thực phản ứng màu 45 Hình 3.5 Phổ UV-Vis dịch chiết sau pha loãng Chương KẾT LUẬN 4.1 Bàn luận kết sơ Bàn luận kết ép dầu 46 - Hiệu suất thu dầu thời gian đạt áp lực khác chưa cho kết luận cụ thể, cần có thêm thí nghiệm để chọn thời gian thích hợp - Hiệu suất thu dầu tối đa áp lực 200 kg/cm (lớn mà máy ép hoạt động được) 190 kg/cm2 không cho thấy chênh lệch lớn, khơng cần thiết phải vận hành máy áp lực lớn ép dầu neem để tránh hư hỏng không cần thiết Cần tiến hành thêm thí nghiệm áp lực khác để chọn áp lực ép thích hợp cho hạt neem Bàn luận phản ứng màu phương pháp định lượng UV-Vis - Azadirachtin có phản ứng màu với vanillin/methanol môi trường acid - mạnh Phổ UV-Vis thu cho mũi hấp thu cực đại 620 nm, peak chất nhóm terpenoid Không xuất mũi hấp thu cực đại 577 nm azadirachtin [80] 4.2 - Kết luận Chưa thể kết luận phương pháp UV-Vis định lượng azadirachtin hay không, cần phải tiến hành thử phản ứng với chất chuẩn để tiếp tục đánh giá khả định lượng azadirachtin phương pháp - Tiến hành nghiên cứu để tìm hệ dung mơi cho phương pháp định lượng HPLC - Đây đề tài có ý nghĩa mặt khoa học thực tiễn, cần nghiên cứu để phát triển ứng dụng vào thực tế TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] [2] N R Council, Neem: a tree for solving global problems The Minerva Group, Inc., 2002 S Pankaj, T Lokeshwar, B Mukesh, and B J I r j o p Vishnu, "Review on neem (Azadirachta indica): thousand problems one solution," vol 2, no 12, pp 97-102, 2011 47 [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13] [14] [15] [16] [17] [18] [19] [20] [21] K Bhargava, M Gupta, G Gupta, and C J T I j o m r Mitra, "Anti-inflammatory activity of saponins and ot-her natural products," vol 58, no 6, p 724, 1970 N Pillai and G J P m Santhakumari, "Anti-arthritic and anti-inflammatory actions of nimbidin," vol 43, no 09, pp 59-63, 1981 S J M David, "Anti-pyretic of neem oil and its constituents," vol 12, pp 25-27, 1969 N Pillai and G J I j o m r Santhakumari, "Hypoglycaemic activity of Melia azadirachta Linn (neem)," 1981 N Pillai and G J P m Santhakumari, "Effects of nimbidin on acute and chronic gastroduodenal ulcer models in experimental animals," vol 50, no 02, pp 143-146, 1984 N P Radhakrishna, D Suganthan, C Seshadri, and G J T I J o M R Santhakumari, "Anti-gastric ulcer activity of nimbidin," vol 68, pp 169-175, 1978 V Sharma and K J T I j o m r Saksena, "Spermicidal action of sodium nimbinate," vol 47, no 3, p 322, 1959 P S MURTHY and M J I J P P Sirsi, "Pharmacological studies on Melia azadirachta, Linn.(no Meliaceae)," vol 2, pp 387-396, 1958 N Bhide, D Mehta, and R J I j o m s Lewis, "Diuretic action of sodium nimbidinate," vol 12, no 3, p 141, 1958 I W Jones, A A Denholm, S V Ley, H Lovell, A Wood, and R E J F m l Sinden, "Sexual development of malaria parasites is inhibited in vitro by the neem extract azadirachtin, and its semi-synthetic analogues," vol 120, no 3, pp 267-273, 1994 V N a S Sharma, K P., "sodium nimbidinate-in vitro study of its spermicidal action," Indian Journal of Medical Rearch, pp 1038-1042, 13 Dec 1959 W Rojanapo, S Suwanno, R Somaree, T Glinsukon, and Y J J S T Thebtaranonth, "Screening of Antioxidants from some Thia vegetables and herbs," vol 11, pp 177188, 1985 S Rochanakij, Y Thebtaranonth, C Yenjai, Y J T S A j o t m Yuthavong, and p health, "Nimbolide, a constituent of Azadirachta indica, inhibits Plasmodium falciparum in culture," vol 16, no 1, pp 66-72, 1985 S A Khalid, H Duddeck, and M J J o n p Gonzalez-Sierra, "Isolation and characterization of an antimalarial agent of the neem tree Azadirachta indica," vol 52, no 5, pp 922-927, 1989 B Sundarasivarao and J J C s Madhusudhanarao, "Antifungal activity of gedunin," 1977 S S A Devakumar C, "Applicability, Feasibility and Effcacy of Phytotherapy in Aquatic Animal Health Management," In: Randhawa and Parmar, B.S., Eds., Neem, (2nd edn), Society of Pesticide Science, New Delhi, India, pp 77-110, 1996 J Van der Nat, W Van der Sluis, H Van Dijk, K De Silva, and R J P m Labadie, "Activity-guided isolation and identification of Azadirachta indica bark extract constituents which specifically inhibit chemiluminescence production by activated human polymorphonuclear leukocytes," vol 57, no 01, pp 65-68, 1991 I Ara, B S Siddiqui, S Faizi, and S J J o t C S Siddiqui, Perkin Transactions 1, "Structurally novel diterpenoid constituents from the stem bark of Azadirachta indica (Meliaceae)," no 2, pp 343-345, 1989 N Pant, Garg, H S., Madhusudanan, K P and Bhakuni, D S., Fitoterapia, "Sulfurous compounds from Azadirachta indica leaves," vol 57, pp 302–304, 1986 48 [22] [23] [24] [25] [26] [27] [28] [29] [30] [31] [32] [33] [34] [35] [36] [37] [38] [39] [40] [41] [42] K Kakai T., J P Chem Abstr., "Anti-inflammatory Polysaccharides from Melia azadirachta," vol 100, 1984 T Fujiwara et al., "Studies on the structure of polysaccharides from the bark of Melia azadirachta," vol 30, no 11, pp 4025-4030, 1982 T Fujiwara et al., "Further studies on the structure of polysaccharides from the bark of Melia azadirachta," vol 32, no 4, pp 1385-1391, 1984 J Van der Nat, J Klerx, H Van Dijk, K De Silva, and R J J o e Labadie, "Immunomodulatory activity of an aqueous extract of Azadirachta indica stem bark," vol 19, no 2, pp 125-131, 1987 V Vijayan, S Aafreen, S Sakthivel, and K R J J o A D Reddy, "Formulation and characterization of solid lipid nanoparticles loaded Neem oil for topical treatment of acne," vol 2, no 4, pp 282-286, 2013 B Hicks, "Developments in the world of neem," Pesticide Outlook, vol 14, pp 102103, 2003 J D Stark, J F J J o A Walter, and F Chemistry, "Neem oil and neem oil components affect the efficacy of commercial neem insecticides," vol 43, no 2, pp 507-512, 1995 C S Kumar, M Srinivas, and S J P Yakkundi, "Limonoids from the seeds of Azadirachta indica," vol 43, no 2, pp 451-455, 1996 D Mongkholkhajornsilp, S Douglas, P L Douglas, A Elkamel, W Teppaitoon, and S J J o F E Pongamphai, "Supercritical CO2 extraction of nimbin from neem seeds––a modelling study," vol 71, no 4, pp 331-340, 2005 D J Hansen, J Cuomo, M Khan, R T Gallagher, and W P Ellenberger, "Advances in neem and azadirachtin chemistry and bioactivity," in ACS symposium series, 1994 I Ara, B S Siddiqui, S Faizi, and S J J o N P Siddiqui, "Tricyclic diterpenoids from the stem bark of Azadirachta indica," vol 51, no 6, pp 1054-1061, 1988 P S Jones, S V Ley, E D Morgan, and D J F o p p Santafianos, "The chemistry of the neem tree," vol 1, pp 19-45, 1989 P G Waterman and M F Grundon, Chemistry and chemical taxonomy of the Rutales Academic Press, 1983 D Lavie, E Levy, and M J T Jain, "Limonoids of biogenetic interest from Melia azadirachta L," vol 27, no 16, pp 3927-3939, 1971 J Connolly, K Handa, and R J T L McCrindle, "Further constituents of nim oil: The constitution of meldenin," vol 9, no 4, pp 437-440, 1968 R Pachapurkar, P Kornule, and C J C L Narayana, "A new hexacyclic tetranortriterpenoid," vol 3, no 4, pp 357-358, 1974 R B Yamasaki, J A J J o a Klocke, and f chemistry, "Structure-bioactivity relationships of azadirachtin, a potential insect control agent," vol 35, no 4, pp 467471, 1987 W Kraus and R J C B Cramer, "Pentanortriterpenoide aus Azadirachta indica A Juss (Meliaceae)," vol 114, no 7, pp 2375-2381, 1981 A Bruhn, M Bokel, and W J T l Kraus, "4α-6α-Dihydroxy-A-homoazadiron, ein neues tetranortriterpenoid aus Azadirachta indica A Juss (Meliaceae)," vol 25, no 34, pp 3691-3692, 1984 S SIDDIQUI, S FAIZI, and B J H Siddiqui, "Studies on the chemical constituents of Azadirachta indica A Juss (Meliaceae) I: Isolation and structure of a new tetranortriterpenoid-nimolicinol," vol 22, no 2, pp 295-298, 1984 H J A r o e Schmutterer, "Properties and potential of natural pesticides from the neem tree, Azadirachta indica," vol 35, no 1, pp 271-297, 1990 49 [43] [44] [45] [46] [47] [48] [49] [50] [51] [52] [53] [54] [55] [56] [57] [58] [59] T Govindachari, G Sandhya, and S G J C Raj, "Structure of Azadirachtin K, a New Tetranortriterpenoid from Azadirachta indica," vol 23, no 37, pp no-no, 1992 T R Govindachari, G Sandhya, and S P G J J o N P Raj, "Azadirachtins H and I: two new tetranortriterpenoids from Azadirachta indica," vol 55, no 5, pp 596-601, 1992 H O Kalinowski, K Ermel, and H J L A d C Schmutterer, "Strukturaufklärung eines Azadirachtinderivates aus dem Marrangobaum Azadirachta excelsa durch NMR‐ Spektroskopie," vol 1993, no 9, pp 1033-1035, 1993 W J S i o c Kraus, "Constituents of neem and related species A revised structure of azadirachtin," vol 26, pp 237-256, 1986 W Kraus, "Control of insect feeding and development by constituents of Melia azedarach and Azadirachta indica," in Natural pesticides from the Neem tree and other tropical plants Proc 3^< rd> Int Neem Conf., 1987, pp 111-125: Deutsche Gesellschaft ful Technische Zusammenarbeit (GTZ) H Rembold, H Forster, and C Czoppelt, "Structure and biological activity of azadirachtins A and B," in Proc 3rd Int Neem Conf., Nairobi, Kenya, 1986, pp 149160 R H Verkerk and D J J P s Wright, "Biological activity of neem seed kernel extracts and synthetic azadirachtin against larvae of Plutella xylostella L," vol 37, no 1, pp 83-91, 1993 J Dai, V A Yaylayan, G V Raghavan, J R J J o A Parè, and F Chemistry, "Extraction and colorimetric determination of azadirachtin-related limonoids in neem seed kernel," vol 47, no 9, pp 3738-3742, 1999 H Gunasena and B Marambe, Neem in Sri Lanka: a monograph University of Peradeniya-Oxford Forestry Institute (UK) Forestry Research Link, 1997 J A M de Paula, L F Brito, K L F N Caetano, M C de Morais Rodrigues, L L Borges, and E C J T da Conceiỗóo, "Ultrasound-assisted extraction of azadirachtin from dried entire fruits of Azadirachta indica A Juss.(Meliaceae) and its determination by a validated HPLC-PDA method," vol 149, pp 77-84, 2016 G Jadeja, R Maheshwari, and S J T J o S F Naik, "Extraction of natural insecticide azadirachtin from neem (Azadirachta indica A Juss) seed kernels using pressurized hot solvent," vol 56, no 3, pp 253-258, 2011 E Melwita, Y.-H J S Ju, and P Technology, "Separation of azadirachtin and other limonoids from crude neem oil via solvent precipitation," vol 74, no 2, pp 219-224, 2010 S R Damarla, S Sridhar, and M C Gopinathan, "Compositions containing neem seed extracts and saccharide," ed: Google Patents, 2002 P M Murali, "Process of preparing purified azadirachtin in powder form from neem seeds and storage stable aqueous composition containing azadirachtin," ed: Google Patents, 2001 Z Lidert, "Insecticidal hydrogenated neem extracts," ed: Google Patents, 1990 W Blaney and M J J o I P Simmonds, "A behavioural and electrophysiological study of the role of tarsal chemoreceptors in feeding by adults of Spodoptera, Heliothis virescens and Helicoverpa armigera," vol 36, no 10, pp 743-756, 1990 K A H Schmutterer, and H Rembold, "Natural pesticides from the neem tree (Azadirachta indica A Juss)," International Neem Conference 1980: Rottach-Egern, Germany, 1981 50 [60] [61] [62] [63] [64] [65] [66] [67] [68] [69] [70] [71] [72] [73] [74] [75] K A H Schmutterer, and H Rembold, "Natural pesticides from the neem tree (Azadirachta Indica A Juss)," Proceedings of the First International Neem Conference, Rottach-Egern, Federal Republic of Germany 16-18 Jun, 1980, 1981 B Joshi, G Ramaprasad, and S N J P Rao, "Neem seed kernel suspension as an antifeedant forSpodoptera Litura in a planted flue-cured Virginia tobacco crop," vol 12, no 1, pp 3-12, 1984 R C S a H S J V D Heyde, "Neem Oil and Neem Extract as Potential Insecticides for Control of Hemipterous Rice Pest," Proceedings of the 2nd International Neem Conference, Rauischholzhausen, pp 377-390, 25-28 May 1984 R Saxena, H Justo Jr, and P J J o e e Epino, "Evaluation and utilization of neem cake against the rice brown planthopper, Nilaparvata lugens (Homoptera: Delphacidae)," vol 77, no 2, pp 502-507, 1984 V Sharma, M Ansari, and R J J o t A M C A Razdan, "Mosquito repellent action of neem (Azadirachta indica) oil," vol 9, no 3, pp 359-360, 1993 S Singh and R J P Singh, "Neem (Azadirachta indica) seed kernel extracts and azadirachtin as oviposition deterrents against the melon fly (Bactrocera cucurbitae) and the oriental fruit fly (Bactrocera dorsalis)," vol 26, no 3, pp 191-197, 1998 K U K Shukla B.C., Gupta R and Maharana S., "Field efficacy of neem against rice and pigeonpea insect pests," Botanical pest control project Phase Asian Development Bank (TA# 5349) Proceedings of the final workshop, Philippines, vol 28 - 31 July 1992, pp 54-62, 1992 O J E e e a Koul, "Azadirachtin: I‐interaction with the development of red cotton bugs," vol 36, no 1, pp 85-88, 1984 T Gajmer, R Singh, R Saini, and S J J o a E Kalidhar, "Effect of methanolic extracts of neem (Azadirachta indica A Juss) and bakain (Melia azedarach L) seeds on oviposition and egg hatching of Earias vittella (Fab.)(Lep., Noctuidae)," vol 126, no 5, pp 238-243, 2002 P Medina, F Budia, L Tirry, G Smagghe, E J B S Vinuela, and Technology, "Compatibility of spinosad, tebufenozide and azadirachtin with eggs and pupae of the predator Chrysoperla carnea (Stephens) under laboratory conditions," vol 11, no 5, pp 597-610, 2001 D J O p h w c s e D e E o c r e p Casey Sclar, "Neem: mode of action of compounds present in extracts and formulations of Azadirachta indica seeds and their efficacy to pests of ornamental plants and to non-target species," 1994 G J C Brahmachari, "Neem—an omnipotent plant: a retrospection," vol 5, no 4, pp 408-421, 2004 Anon, "Annual Report for the division of Arable Crops Research 1984-85," Department of Agricultural Research, Department of Agricultural Research, Ministry of Agriculture, Government of Botswana, Gaborone, Botswana, 1986 E R a V Mariappan, "Effect of plant derivatives on rice blast pathogen, Pyricularia oryzae, blast infection and enzymes of paddy plants," Proceedings of The World Neem Conference, Bangalore, pp 78-79, 1993 H J Zeringue Jr and D J J o t A O C S Bhatnagar, "Inhibition of aflatoxin production inAspergillus flavus infected cotton bolls after treatment with neem (Azadirachta indica) leaf extracts," vol 67, no 4, pp 215-216, 1990 M Siddiqui and M J A f S Alam, Pflanzenschutz, Umweltschutz, "Effect of rootexudates of neem and Persian lilac on plant parasitic nematodes," vol 62, no 2, pp 33-35, 1989 51 [76] [77] [78] [79] [80] [81] [82] [83] [84] H G K Vijayalakshmi, and B Goswami, "Neem for the control of plant parasitic nematodes," Neem Newsletter, vol 2, no 4, pp 35-40, 1985 A P Jarvis, S Johnson, and E D J P s Morgan, "Stability of the natural insecticide azadirachtin in aqueous and organic solvents," vol 53, no 3, pp 217-222, 1998 B Ruch, "Quantification of azadirachtin in neem products and different compartments after neem-treatment," Proceeding of the Workshop "Neem and Pheromone", pp 50-56, 2001 A Mordue, E Morgan, A J C M I S B Nisbet, and M B Volume, "Azadirachtin, a natural product in insect control," vol 4, 2010 J Dai, V A Yaylayan, G Vijaya Raghavan, J R Pare, Z J J o a Liu, and f chemistry, "Multivariate calibration for the determination of total azadirachtin-related limonoids and simple terpenoids in neem extracts using vanillin assay," vol 49, no 3, pp 1169-1174, 2001 L C Định, “Giới thiệu xoan chịu hạn (Azadirachta indica A.Juss) nhập nội vào vùng cát nóng hạn Phan Thiết – Tuy Phong,” Sở Nông nghiệp Thuận Hải, 1991 D A Tuấn cộng sự, “Azadirachtin – Hoạt chất gây ngán ăn mạnh sâu khoang phân lập từ hạt neem (Azadirachta indica A.Juss) di thực vào Việt Nam,” Tuyển tập Hội nghị Khoa học Cơng nghệ hóa hữu tồn quốc lần thứ hai, trang 333-337, 2001, Nhà xuất nông nghiệp, Hà Nội V Đ Khoa, V.V Độ, N T Thắng, “Đánh giá độ độc chế phẩm phối trộn dầu neem với Bt (Baccillus thuringiensis) sâu xanh (Heliothis armigara) sâu tơ (Plutella xylostella),” Luận văn thạc sĩ Khoa học Nông nghiệp, 2004 N T Ý Nhi, “Nghiên cứu thành phần limonoid neem trồng Ninh Thuận,” Đại học Khoa học Tự Nhiên thành phố Hồ Chí Minh, 2012 52 ... trình ép dầu để phòng trừ tiêu diệt sâu bọ nên cần tiến hành nghiên cứu đề tài ? ?Khảo sát quy trình ép dầu neem chiết hoạt chất Azadirachtin với limonoid bánh neem để ứng dụng làm thuốc trừ sâu? ??... Nghiên cứu khảo sát quy trình ép dầu neem với mục tiêu thu thể tích dầu nhiều Xây dựng quy trình chiết hoạt chất azadirachtin với limonoid từ bã neem (azadirachtin related limonoid – AZRL) quy mô... quy trình chiết, sau tiến hành xây dựng công thức phối trộn hoạt chất vào sản phẩm thuốc trừ sâu đánh giá khả gây chết lên sâu hại rau 2.3.1 Khảo sát quy trình ép dầu Quy trình ép dầu Hạt neem