XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CAO RAU má và CAO DIẾP cá

Trong vài thập kỷ gần đây, các nước trên thế giới đang đẩy mạnh việc nghiên cứu các chế phẩm thuốc mới từ cây thuốc. Thị trường dược liệu và thuốc có nguồn gốc từ dược liệu đang đem lại nguồn thu lớn cho các quốc gia có tiềm năng về cây thuốc. Việt Nam nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa nên có hệ sinh thái phong phú và đa dạng, một tiềm năng to lớn về tài nguyên cây thuốc nói riêng và tài nguyên dược liệu nói chung. Trong đó, có hai loại dược liệu phổ biến là dược liệu rau má và dược liệu diếp cá, được nhân dân ta sử dụng hàng ngày trong các bữa ăn ngoài ra còn được sử dụng làm thuốc với công dụng của rau má là mát gan, giải độc gan, mau liền sẹo 5, còn diếp cá được dùng để điều trị trĩ, táo bón, làm thuốc bảo vệ thành mạch 6. Ở Việt Nam cũng có nhiều công trình nghiên cứu về dược liệu rau má như “Hoàn thiện quy trình công nghệ sản xuất kem chữa bỏng Dermafix từ dầu mù u, mỡ trăn, saponin rau má”, ngoài ra còn có một số chế phẩm trên thị trường được bào chế từ dược liệu rau má, diếp cá như Helaf®, Cenditan®… Tuy nhiên, để được xem như một nguồn nguyên liệu làm thuốc, các sản phẩm có nguồn gốc từ dược liệu phải có chất lượng được đảm bảo, tiêu chuẩn khoa học rõ ràng… đạt các yêu cầu làm thuốc theo các quy định của GMP. Trong khi đó, công nghiệp chiết xuất dược liệu của Việt Nam chưa phát triển mạnh, phương pháp chiết xuất chỉ là dạng thô sơ như nấu cao, cô cao trực tiếp. Hạn chế lớn nhất hiện nay của nước ta trong việc khai thác sử dụng cây thuốc và các sản phẩm từ cây thuốc là vấn đề chất lượng, do một số nguyên nhân sau: • Do không được tiêu chuẩn hóa và kiểm định đúng mức, các cây thuốc, cao thuốc có chất lượng không ổn định, không đồng nhất, nhiều khi không có tác dụng điều trị do không có hoặc chứa ít hoạt chất. • Việc kiểm nghiệm các dược liệu, nguyên liệu và thành phẩm từ dược liệu chỉ được thực hiện sơ sài, không đến nơi đến chốn do thiếu tiêu chuẩn và phương pháp thích hợp. Phương pháp kiểm nghiệm của Dược điển Việt Nam hiện nay không phản ánh được chất lượng của dược liệu. Vì vậy, việc hoàn thiện quy trình chiết xuất và nâng cao chất lượng các cao chiết xuất từ dược liệu để cung cấp cho công nghiệp bào chế dược phẩm là việc làm cấp bách và thực tế. Chính vì thế, chúng tôi tiến hành đề tài: “Xây dựng quy trình chiết xuất cao Rau má và cao Diếp cá”. Nội dung nghiên cứu bao gồm: • Kiểm nghiệm dược liệu Rau má và Diếp cá. • Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng acid asiaticcao Rau má. • Xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng quercetincao Diếp cá. • Tối ưu hóa quy trình chiết xuất cao Rau má và cao Diếp cá. • Đề xuất phương pháp kiểm nghiệm cao Rau má và cao Diếp cá.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ LINH TUYỀN XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CAO RAU MÁ VÀ CAO DIẾP CÁ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2009 BỘ Y TẾ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CAO RAU MÁ VÀ CAO DIẾP CÁ Chuyên ngành: Bào chế - Công nghiệp Dược Mã số: 60.73.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Người thực hiện: DS Nguyễn Thị Linh Tuyền Người hướng dẫn khoa học: GS TS Nguyễn Minh Đức Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2009 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Nguyễn Thị Linh Tuyền iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ ix MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ RAU MÁ 1.2 TỔNG QUAN VỀ DIẾP CÁ 1.3 MỘT SỐ CHẾ PHẨM TRÊN THỊ TRƯỜNG 12 1.4 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU 13 1.5 NỘI DUNG CỦA MỘT TIÊU CHUẨN CAO DƯỢC LIỆU 16 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 18 2.1 NGUN LIỆU, HĨA CHẤT, DUNG MƠI, TRANG THIẾT BỊ .18 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .20 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .34 3.1 KẾT QUẢ KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU RAU MÁ 34 3.2 KẾT QUẢ KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU DIẾP CÁ 36 3.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT CAO RAU MÁ 40 3.4 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT CAO DIẾP CÁ 48 3.5 KIỂM NGHIỆM VÀ ĐỀ XUẤT TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM CAO RAU MÁ 56 3.6 ĐỀ XUẤT PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM CAO DIẾP CÁ 62 iv Chương BÀN LUẬN .67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .69 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DĐVN Dược điển Việt Nam v DD Dung dịch GMP Thực hành tốt sản xuất thuốc (Good Manufacturing Practice) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) QTCX Quy trình chiết xuất RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) Rt Thời gian lưu (Retention time) SKLM Sắc ký lớp mỏng STT Số thứ tự TB Trung bình TT DL:DM Tỷ lệ dược liệu/dung môi TT Thuốc thử UV Tử ngoại (Ultra Violet) vi DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Danh sách hóa chất, dung mơi Bảng 2.2 Danh sách trang thiết bị Bảng 2.3 Danh sách phần mềm chuyên dụng Bảng 3.4 Định tính dược liệu Rau má Bảng 3.5 Độ ẩm dược liệu Rau má Bảng 3.6 Tạp chất dược liệu Rau má Bảng 3.7 Định tính dược liệu Diếp cá Bảng 3.8 Kết xác định độ ẩm dược liệu Diếp cá Bảng 3.9 Tro toàn phần dược liệu Diếp cá Bảng 3.10 Hàm lượng tinh dầu dược liệu Diếp cá Bảng 3.11 Tạp chất dược liệu Diếp cá Bảng 3.12 Tỷ lệ vụn nát dược liệu Diếp cá Bảng 3.13 Các thông số sắc ký mẫu acid asiatic chuẩn Bảng 3.14 Các thông số sắc ký mẫu thử Bảng 3.15 Sự tương quan nồng độ diện tích đỉnh Bảng 3.16 Độ xác phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Bảng 3.17 Độ phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Bảng 3.18 Dữ liệu thực nghiệm quy trình chiết xuất cao Rau má Bảng 3.19 Liên quan nhân QTCX cao Rau má Bảng 3.20 Đánh giá mô hình nhân cao Rau má Bảng 3.21 Kết thực nghiệm giá trị dự đoán dược liệu Rau má Bảng 3.22 Các thông số sắc ký mẫu quercetin chuẩn Bảng 3.23 Các thông số sắc ký mẫu thử Bảng 3.24 Sự tương quan nồng độ diện tích đỉnh Bảng 3.25 Độ xác phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Bảng 3.26 Độ phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Bảng 3.27 Kết liệu thực nghiệm dược liệu Diếp cá theo thiết kế Bảng 3.28 Liên quan nhân quy trình chiết xuất cao Diếp cá Bảng 3.29 Đánh giá mô hình nhân cao Diếp cá Bảng 3.30 Kết thực nghiệm giá trị dự đoán dược liệu Diếp cá Bảng 3.31 Cắn không tan nước cao Rau má Bảng 3.32 Độ ẩm cao Rau má Bảng 3.33 Tro toàn phần cao Rau má Bảng 3.34 Tro không tan acid cao Rau má 18 19 20 35 35 36 38 38 38 39 39 39 41 41 42 43 43 44 45 46 47 49 49 50 51 51 52 53 55 56 57 57 57 58 vii Bảng 3.35 Tro tan nước cao Rau má Bảng 3.36 pH cao Rau má Bảng 3.37 Giới hạn kim loại nặng cao Rau má Bảng 3.38 Hàm lượng acid asiatic cao Rau má Bảng 3.39 Đề xuất tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao Rau má Bảng 3.40 Cắn không tan nước cao Diếp cá Bảng 3.41 Độ ẩm cao Diếp cá Bảng 3.42 Tro toàn phần cao Diếp cá Bảng 3.43 Tro không tan acid hydrochlorid cao Diếp cá Bảng 3.44 Tro tan nước cao Diếp cá Bảng 3.45 pH cao Diếp cá Bảng 3.46 Giới hạn kim loại nặng cao Diếp cá Bảng 3.47 Kết định tính cao Diếp cá Bảng 3.48 Kết định lượng quercetin cao Diếp cá Bảng 3.49 Đề xuất tiêu chuẩn kiểm nghiệm cao Diếp cá 58 59 59 60 61 62 62 63 63 63 63 64 64 65 66 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cây Rau má Hình 1.2 Lá hoa Diếp cá Hình 3.3 Các cấu tử bột Rau má 35 Hình 3.4 Các cấu tử bột Diếp cá 37 Hình 3.5 Sắc ký đồ HPLC quy trình xử lý 40 Hình 3.6 Sự tương quan nồng độ diện tích đỉnh 42 Hình 3.7 Minh họa mối liên quan hàm lượng với độ cồn, số lần chiết 46 Hình 3.8 Hình SKLM dịch chiết quercetin CHCl3 48 Hình 3.9 Sự tương quan nồng độ diện tích đỉnh 50 Hình 3.10 Minh họa mối liên quan hiệu suất với độ cồn, TL DL/DM 54 Hình 3.11 Minh họa mối liên quan hàm lượng với độ cồn số lần chiết 54 Hình 3.12 SKLM cao Rau má 60 Hình 3.13 SKLM cao Diếp cá 65 ix DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết xuất cao Rau má, Diếp cá Sơ đồ 2.2 Quy trình xử lý để định lượng acid asiatic/cao Rau má Sơ đồ 2.3 Quy trình xử lý để định lượng acid asiatic/cao Rau má Sơ đồ 2.4 Quy trình xử lý mẫu để định lượng quercetin/cao Diếp cá 21 23 24 26 64 Chương BÀN LUẬN Quy trình chiết xuất cao Rau má cao Diếp cá xây dựng kiểm soát chặt chẽ chất lượng qua giai đoạn: từ kiểm nghiệm dược liệu, xây dựng quy trình định lượng đến việc xác định mối liên hệ nhân quả, tối ưu hóa, thực nghiệm kiểm chứng đề xuất phương pháp kiểm nghiệm cao Giai đoạn kiểm nghiệm dược liệu đề xuất phương pháp kiểm nghiệm cao Rau má cao Diếp cá thực dựa sở kết thực nghiệm tham khảo tiêu chuẩn có cao, dược liệu khác theo Dược điển Việt Nam III tài liệu tham khảo Quy trình định lượng acid asiatic cao Rau má định lượng quercetin cao Diếp cá phương pháp HPLC xây dựng thẩm định việc khảo sát tính tương thích hệ thống, tính tuyến tính, độ xác, độ Kết cho thấy hai quy trình định lượng phương pháp HPLC có tính xác độ tin cậy cao Điều thể tính tương thích hệ thống tốt, tính tuyến tính khoảng nồng độ phù hợp có R2 > 0,99, độ xác cao với RSD = 2,35% Rau má, Diếp cá có RSD = 2,8% dựa theo nồng độ khảo sát độ đạt với tỷ lệ phục hồi trung bình nằm khoảng từ 98 đến 102% Phần mềm thông minh FormRules giúp khảo sát xu hướng, mức độ quy luật liên quan nhân quả, giúp hiểu rõ biến độc lập x (nhân) ảnh hưởng đến biến phụ thuộc y (quả) có ảnh hưởng ảnh hưởng theo quy luật Kết từ phần mềm FormRules cho thấy: - Hiệu suất chiết cao Rau má có liên quan tới yếu tố khảo sát độ cồn số lần chiết thông qua mối liên quan nhân x1 trung bình cao - y1 cao, x3 cao y1 cao Hàm lượng acid asiatic cao Rau má chịu ảnh hưởng chủ yếu độ cồn, tỷ lệ dược liệu : dung môi, số lần chiết thông qua mối liên quan nhân x3 cao, x2 1/10 x1 cao y2 cao 65 - Hiệu suất chiết cao Diếp cá chịu ảnh hưởng yếu tố độ cồn, tỷ lệ - dược liệu: dung môi, số lần chiết Hàm lượng quercetin cao Diếp cá chịu ảnh hưởng chủ yếu độ cồn, tỷ lệ dược liệu : dung môi, số lần chiết Phần mềm INForm giúp tối ưu hóa thơng số quy trình chiết xuất cao Rau má cao Diếp cá Kết tối ưu kiểm chứng lại thực nghiệm cho thấy giá trị thực nghiệm có tính lặp lại cao phù hợp với giá trị đưa phần mềm INForm Như vậy, quy trình chiết xuất cao Rau má cao Diếp cá với hiệu suất chiết tối đa, hàm lượng hoạt chất cao xây dựng thành công nhờ hỗ trợ phần mềm Design-Expert, FormRules INForm Việc kết hợp phương pháp truyền thống với hỗ trợ phần mềm thông minh giúp giảm chi phí, cơng sức thời gian giai đoạn nghiên cứu Kiểm nghiệm cao Rau má Diếp cá xây dựng đề xuất tiêu chất lượng phù hợp cho cao chiết từ dược liệu Đặc biệt, đề tài hồn thiện quy trình định lượng hoạt chất có dược liệu phương pháp HPLC thẩm định, nâng cao mức chất lượng cho cao chiết Rau má Diếp cá 66 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Sau thời gian dài thực hiện, đề tài đạt kết sau: - Kiểm nghiệm dược liệu Rau má Diếp cá theo tiêu chuẩn chất lượng Dược điển Việt Nam III tiêu: cảm quan, soi bột, thử độ tinh khiết, định tính Tất tiêu đạt đúng, trừ phần định lượng hàm lượng tinh dầu Diếp cá chưa đạt (0,05% < 0,08 % theo yêu cầu) - Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng acid asiatic cao Rau má định lượng quercetin cao Diếp cá phương pháp HPLC với tính xác độ tin cậy cao - Chọn yếu tố ảnh hưởng quy trình chiết xuất thiết lập mối liên hệ nhân phần mềm FormRules, tối ưu hóa quy trình chiết xuất cao Rau má cao Diếp cá phần mềm INForm Đề tài tìm thông số tối ưu sau: - Dược liệu Rau má Độ cồn: C Dược liệu Diếp cá Độ cồn: B Tỷ lệ dược liệu : dung môi: 1/9 Tỷ lệ dược liệu/dung môi: 1/8 Số lần chiết: lần Số lần chiết: lần Xây dựng hoàn chỉnh quy trình chiết xuất cao Rau má Diếp cá quy mơ phòng thí nghiệm theo thơng số tối ưu để chiết xuất cao đạt tiêu chuẩn chất lượng tốt - Kiểm nghiệm đề xuất tiêu chuẩn chất lượng cho hai cao thành phẩm (cao Rau má cao Diếp cá) tiêu cảm quan, độ tan, cắn không tan nước, độ tinh khiết, pH, giới hạn nhiễm khuẩn, định tính đặc biệt định lượng hoạt chất cao dược liệu Quy trình chiết xuất cao Rau má cao Diếp cá vừa xây dựng dự kiến sở cho nghiên cứu sau quy mô pilot công nghiệp KIẾN NGHỊ 67 Đề tài cần tiếp tục với số nội dung sau:  Xây dựng tiêu chuẩn sở cho cao Rau má, cao Diếp cá  Nâng cấp cỡ lơ tối ưu hóa thơng số quy trình chiết xuất cao Rau má cao Diếp cá  Tiến hành quy trình chiết xuất cao Rau má, cao Diếp cá quy mô pilot quy mô công nghiệp  Xây dựng công thức quy trình bào chế cho viên có chứa cao Rau má, cao Diếp cá 68 TLTK - TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ môn Dược liệu, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh (2007), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, tr 103-118 Bùi Thị Mỹ Lan (2005), Nghiên cứu chiết xuất phân lập chất chuẩn từ dược liệu rau má, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Đại học Y Dược Tp HCM Dương Hồng Tố Quyên (2008), Điều chế chất đối chiếu từ dược liệu phục vụ công tác nghiên cứu kiểm nghiệm, Luận văn thạc sĩ dược học, Đại học Y Dược Tp HCM Đặng Văn Giáp Thiết kế & tối ưu hóa cơng thức quy trình Nhà xuất Y học (2002) Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập II, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 382-391 Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr 227230 Lê Thị Thu Hạnh (2001), Thăm dò thơng số tối ưu chiết xuất cao hạt gấc, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Đại học Y Dược Tp HCM Lý Bá Miên (2007), Góp phần nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn dược liệu diếp cá, Luận văn thạc sĩ dược học, Đại học Y Dược Tp HCM Nguyễn Thị Ngọc Phượng (2009), Tiêu chuẩn hóa bột cao diếp cá, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Đại học Y Dược Tp HCM 10 Hoàng Hương, Trần Quỳnh Hoa, Hà Việt Bảo, Nguyễn Danh Thục (2002), Góp phần nghiên cứu thành phần flavonoid chiết xuất từ Diếp cá TLTK - Houttuynia cordata Thunb., Việt Nam, Tạp chí dược học, Nhà xuất Bộ y tế, Hà Nội, 9, tr.13 – 15 11 Nguyễn Thị Châu Oanh (2004), Khảo sát tác dụng sinh học bước đầu tiêu chuẩn hóa tinh dầu diếp cá, Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học, Đại học Y Dược TPHCM 12 Phạm Xuân Sinh, Cao Văn Thu, Đinh Thị Thanh Thủy (1997), Nghiên cứu thành phần hóa học Diếp cá, Tạp chí dược học, Nhà xuất Bộ y tế, Hà Nội, 7, tr 7-9 13 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, trang 406 – 407, 949 TIEÁNG ANH 14 R K Verma, K G Bhartariya, M M Gupta and Sushil Kumar (1999), Reverse – phase High Performance Liquid Chormatography of Asiaticoside in Centella asiatica, Phytochem Anal., 10, 191 – 193 15 Prateek K Jain and Ram K Agrawal (2008), High Performance Liquid Chromatographic Analysis of Asiaticoside in Centella asiatica (L.) Urban, Chiang Mai J Sci., 35(3), 521 – 525 16 Pharmacopoeia of the people’s republic of China (2005), Volume I, pp 124 – 125, 138 – 139 17 Phensri Thongnopnua (2008), High – Performance liquid chromatographic determination of asiatic acid in human plasma, Thai J Pharma Sci., 32, 10 -16 18 P K Inamdar, R D Yeole, A B Ghogare, N J de Souza (1996), Determination of biologically active constituents in Centella asiatica, Journal of Chromatography, 747, 127 – 130 TLTK - 19 Jiang Meng, Kelvin Sze – Yin Leung, Zhihong Jiang, Xiaoping Dong, Zhongzhen Zhao, and Li – Jai Xu (2005), Establishment of HPLC – DAD – MS Fingerprint of Fresh Houttuynia cordata, Chem Pharm Bull., 53(12), 1604 – 1609 20 Feng – Lun Zhang, Ying – Jie Wei, Jia Zhu and Zhu – Nan Gong (2008), Simultaneous quantitation of three major triterpenoid glycosides in Centella asiatica extracts by high performance liquid chromatography with evaporative light scattering detection, Biomed Chromatogr., 22, 119 – 124 21 Yoshiyuki Kimura, Maho Sumiyoshi, Kei – ichiss Samukawa, Noriko Satake, Masahiro Sakanaka (2008), Facilitating action of asiaticoside at low doses on burn wound repair and its mechanism, European Journal of Pharmacology, 584, 415 – 423 22 Orawan Suwantong, Uracha Ruktanonchai, Pitt Supaphol (2008), Electrospun cellulose acetat fiber mats containing asiaticoside or Centella asiatica crude extract and release characteristics of asiaticoside, Polymer, 49, 4239 – 4247 23 Guangtao Jia, Xiuyang Lu (2008), Enrichment and purification of madecassoside and asiaticoside from Centella asiatica extracts with macroporous resins, Journal of Chromatography A, 1193, 136 – 141 24 Chuen Lung Cheng, Jin Sheng Guo, John Luk, Marcel Wing Leung Koo (2004), The healing effects of Centella extract and asiaticoside on acetic acid induced gastric gastric ulcers in rats, Life Sciences, 74, 2237 – 2249 25 N A Zainol, S C Voo, M R Sarmidi, R A Aziz (2008), Profiling of Centella asiatica (L.) Urban extract, The Malaysian Journal of Analytical Sciences, Vol 12, No 2, 322 – 327 TLTK - 26 Chiang Y Y., Chang J S., Chen C C., Ng L T., Lin C C (2003), Anti-herpes simplex virus activity of Bidens pilosa and Houttuynia cordata, Am J Chin Med., 31(3), pp.355-362 27 Kim I S., Kim J H., Yun C Y., Kim D H., Lee J S (2007), The inhibitory effect of Houttuynia cordata extract on stem cell factor – induced HMC – cell migration, J Ethnopharmacol, 112(1), pp.90-95 28 Kim S K., Ruy S Y., No J., Choi S U., Kim Y S (2001), Cytotoxic alkaloids from Houttuynia cordata, Arch Pharm Res., 24(6), pp.518-521 29 Liang M M., Qi M L., Fu R N (2005), Flash evaporation and headspace solid–phase microextraction for analysis of the essential oils in traditional Chinese medicine Houttuynia cordata Thunb., Chinese Chemical Letters, 16(5), pp.659-662 30 Lu H., Wu X., Liang Y., Zhang J (2006), Variation in chemical composition and antibacterial activities of essential oils from two species of Houttuynia Thunb., Chem Pharm Bull., 54(7), pp.936-940 31 Lu H M., Liang Y Z., Yi L Z., Wu X J (2006), Anti-inflammatory effect of Houttuynia cordata injection, Journal of Ethnopharmacology, 104, pp.245-249 PL - PHỤ LỤC Phụ lục Ảnh hưởng độ cồn, số lần chiết tỷ lệ dược liệu: dung môi hàm lượng acid asiatic Minh họa mối liên quan hàm lượng acid asiatic với độ cồn, TL DL:DM Minh họa mối liên quan hàm lượng acid asiatic với độ cồn, số lần chiết Minh họa mối liên quan hàm lượng acid asiatic với TL DL:DM, số lần chiết Phụ lục Ảnh hưởng độ cồn, tỷ lệ dược liệu: dung môi số lần chiết hàm lượng quercetin hiệu suất chiết cao Diếp cá PL - Minh họa mối liên quan hiệu suất chiết với độ cồn, TL DL:DM Minh họa mối liên quan hiệu suất chiết với TL DL:DM, số lần chiết Minh họa mối liên quan hiệu suất chiết với độ cồn số lần chiết Minh họa mối liên quan hàm lượng quercetin với độ cồn, TL DL:DM PL - Minh họa mối liên quan hàm lượng quercetin với độ cồn, số lần chiết Phụ lục Sắc ký đồ acid asiatic Minh họa mối liên quan hàm lượng quercetin với TL DL:DM, số lần chiết PL - Hình phụ lục 3a Sắc ký đồ acid asiatic chuẩn Hình phụ lục 1b Sắc ký đồ mẫu thử Phụ lục Sắc ký đồ quercetin PL - Hình phụ lục 4a Sắc ký đồ quercetin chuẩn Hình phụ lục 2b Sắc ký đồ mẫu thử PL - ... LIỆU RAU MÁ 34 3.2 KẾT QUẢ KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU DIẾP CÁ 36 3.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT CAO RAU MÁ 40 3.4 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT CAO DIẾP CÁ 48 3.5 KIỂM NGHIỆM VÀ ĐỀ XUẤT TIÊU... quercetin /cao Diếp cá  Tối ưu hóa quy trình chiết xuất cao Rau má cao Diếp cá  Đề xuất phương pháp kiểm nghiệm cao Rau má cao Diếp cá 3 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ RAU MÁ Còn có... quy trình chiết xuất cao Rau má cao Diếp cá Nội dung nghiên cứu bao gồm:  Kiểm nghiệm dược liệu Rau má Diếp cá  Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng acid asiatic /cao Rau má  Xây dựng