Qui trình phân tích viên CEFPODOXIM 100 dựa theo chuyên luận Cefpodoxime proxetil tablets và Cefpodoxime proxetil for oral suspension của USP 30, được thẩm định tại phòng QC, nhà máy Glomed, Khu Công Nghiệp VSIP. Thời gian thẩm định: từ ngày ……………đến ngày ………………... Nhằm xác định qui trình định lượng thích hợp để có kết quả phân tích đúng và đáng tin cậy trong khoảng định lượng. 1.2 TỔNG QUAN Kết quả thẩm định cho thấy rằng qui trình được đề cập trong đề cương là thích hợp cho áp dụng chính thức với các đặc tính sau đây được chứng minh: 1.2.1 Tính đặc hiệu: các tá dược không gây ảnh hưởng nào cho kết quả định lượng 1.2.2 Diện tích đỉnh của các chất phân tích phụ thuộc tuyến tính một cách chặt chẽ vào nồng độ chất phân tích. 1.2.3 Hệ thống thiết bị cho các diện tích đỉnh lặp lại tốt đối với một dung dịch. 1.2.4 Phương pháp định lượng cho kết quả lặp lại tốt. 1.2.5 Kết quả phân tích là đáng tin cậy với độ đúng > 99%. 2 ĐIỀU KIỆN THỰC NGHIỆM 2.1 TRÁCH NHIỆM THỰC HIỆN 2.1.1 Kiểm nghiệm viên thứ nhất thực hiện thử nghiệm: tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ chính xác, độ đúng phương pháp. 2.1.2 Kiểm nghiệm viên thứ hai thực hiện thử nghiệm: lặp lại độ chính xác phương pháp với một số thông số sắc ký được thay đổi để xác lập độ thô, độ chính xác trung gian. 2.2 MẪU THỬ VÀ CHẤT CHUẨN Mẫu thử nghiệm: Viên Cefpodoxim 100, trộn lẫn 50 viên Chất chuẩn: Cefpodoxim proxetil lô WS 10001, hàm lượng 70,585% Cefpodoxim trong chế phẩm nguyên trạng. 2.3 THIẾT BỊ: Hệ thống HPLC Agilent 2100, ngày hiệu chuẩn 17092009, ngày hiệu chuẩn kế tiếp 17092010 Cân phân tích Toledo chia độ 0,01 mg. Cân phân tích Toledo chia độ 0,01g.
BÁO CÁO THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VIÊN CEFPODOXIM 100 mg MỤC LỤC GIỚI THIỆU 1.1 MỤC ĐÍCH 1.2 TỔNG QUAN 2 ĐIỀU KIỆN THỰC NGHIỆM 2.1 TRÁCH NHIỆM THỰC HIỆN 2.2 MẪU THỬ VÀ CHẤT CHUẨN 2.3 THIẾT BỊ: 2.4 THUỐC THỬ 2.5 PHA ĐỘNG: 2.6 ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ: 3 KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH 3.1 TÍNH TƯƠNG THÍCH CỦA HỆ THỐNG 3.2 TÍNH ĐẶC HIỆU 3.3 TÍNH TUYẾN TÍNH (R2 ≥ 0,999) 3.4 ĐỘ ĐÚNG (TỶ LỆ PHỤC HỒI 98% - 102%) 3.5 ĐỘ CHÍNH XÁC PHƯƠNG PHÁP (RSD ≤ 1,0%) 3.6 KHOẢNG XÁC ĐỊNH 3.7 ĐỘ THƠ VÀ ĐỘ CHÍNH XÁC TRUNG GIAN 3.8 ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA DUNG DỊCH CHUẨN 3.9 GHI NHẬN TRONG KHI THẨM ĐỊNH 10 3.10 DỮ LIỆU ĐÍNH KÈM 10 BIỆN LUẬN 11 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 11 GIỚI THIỆU 1.1 MỤC ĐÍCH Qui trình phân tích viên CEFPODOXIM 100 dựa theo chuyên luận Cefpodoxime proxetil tablets Cefpodoxime proxetil for oral suspension USP 30, thẩm định phòng QC, nhà máy Glomed, Khu Cơng Nghiệp VSIP Thời gian thẩm định: từ ngày ……………đến ngày ……………… Nhằm xác định qui trình định lượng thích hợp để có kết phân tích đáng tin cậy khoảng định lượng 1.2 TỔNG QUAN Kết thẩm định cho thấy qui trình đề cập đề cương thích hợp cho áp dụng thức với đặc tính sau chứng minh: 1.2.1 Tính đặc hiệu: tá dược khơng gây ảnh hưởng cho kết định lượng 1.2.2 Diện tích đỉnh chất phân tích phụ thuộc tuyến tính cách chặt chẽ vào nồng độ chất phân tích 1.2.3 Hệ thống thiết bị cho diện tích đỉnh lặp lại tốt dung dịch 1.2.4 Phương pháp định lượng cho kết lặp lại tốt 1.2.5 Kết phân tích đáng tin cậy với độ > 99% ĐIỀU KIỆN THỰC NGHIỆM 2.1 TRÁCH NHIỆM THỰC HIỆN 2.1.1 Kiểm nghiệm viên thứ thực thử nghiệm: tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ xác, độ phương pháp 2.1.2 Kiểm nghiệm viên thứ hai thực thử nghiệm: lặp lại độ xác phương pháp với số thơng số sắc ký thay đổi để xác lập độ thô, độ xác trung gian Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim 2.2 MẪU THỬ VÀ CHẤT CHUẨN Mẫu thử nghiệm: Viên Cefpodoxim 100, trộn lẫn 50 viên Chất chuẩn: Cefpodoxim proxetil lô WS 10001, hàm lượng 70,585% Cefpodoxim chế phẩm nguyên trạng 2.3 THIẾT BỊ: Hệ thống HPLC Agilent 2100, ngày hiệu chuẩn 17-09-2009, ngày hiệu chuẩn 17-09-2010 Cân phân tích Toledo chia độ 0,01 mg Cân phân tích Toledo chia độ 0,01g 2.4 THUỐC THỬ Nước cất lần, cung cấp máy cất nước Pure – Hit Still phòng thí nghiệm Acetonitrile (HPLC) Methanol (HPLC) Amoni acetat (AR) 2.5 PHA ĐỘNG: Pha động: Acetonitril – Dung dịch amoni acetat 0,02M (32:68) Dung dịch amoni acetat 0,02M: Hòa tan 1,54g amoni acetat nước cất vừa đủ 1000mL Dung mơi hòa tan: Acetonitril – nước (40: 60) 2.6 ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ: Cột Eclipse XDB - C18 (150 mm x 4,6 mm), µm Tốc độ dòng: 1,9 ml/phút Detector UV: 235 nm Thể tích tiêm: 20 µl Nhiệt độ cột: 30oC Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim Kết luận: Đạt yêu cầu KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH 3.1 TÍNH TƯƠNG THÍCH CỦA HỆ THỐNG 3.1.1 Dung dịch chuẩn gốc: Cân chuyển xác 70,98 mg cefpodoxim proxetil chuẩn vào bình định mức 100 mL, thêm khoảng 10 mL methanol, lắc cho tan hồn tồn, thêm dung mơi hòa tan vừa đủ đến vạch, trộn 3.1.2 Dung dịch chuẩn: Lấy 5,0mL dung dịch chuẩn gốc pha loãng tiếp với dung mơi hòa tan đến 50,0mL, trộn Lọc qua màng lọc 0,45µm Tiêm mũi vào hệ thống Hệ thống ổn định có tính lặp lại tốt Độ phân giải đỉnh Cefpodoxim proxetil S-epimer đỉnh Cefpodoxim proxetil R-epimer là: 2,729(Tiêu chuẩn ≥ 2,5) Hệ số kéo đuôi đỉnh đồng phân Cefpodoxim proxetil R-epimer là: 1,061(Tiêu chuẩn ≤ 1,5) RSD tổng diện tích đỉnh đồng phân Cefpodoxim proxetil R-epimer đồng phân Cefpodoxim proxetil S-epimer lần tiêm lặp lại dung dịch chuẩn: 0,17% (Tiêu chuẩn ≤1,0%) 3.2 TÍNH ĐẶC HIỆU Cân chuyển 103,94mg placebo viên, cho vào bình định mức 100mL, thêm khoảng 40 mL dung mơi hòa tan, lắc, siêu âm phút, thêm dung mơi hòa tan vừa đủ đến vạch, lắc đều, để lắng phút Hút 5mL dung dịch này, thêm dung mơi hòa tan vừa đủ 100mL, trộn Lọc qua màng lọc 0,45µm Khai triển sắc ký theo điều kiện Sắc ký đồ dung dịch placebo không cho đỉnh trùng với đỉnh Cefpodoxim proxetil S Cefpodoxim proxetil R sắc ký đồ dung dịch chuẩn Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim Kết luận: Đạt yêu cầu Kết luận: Đạt yêu cầu 3.3 TÍNH TUYẾN TÍNH (R2 ≥ 0,999) Tính tuyến tính tổng diện tích đỉnh Cefpodoxim proxetil S Cefpodoxim proxetil R theo nồng độ khảo sát khoảng 60%; 80%; 100%; 120%; 160% nồng độ thiết kế cho định lượng Dung dịch 60% 80% 100% 120% 160% Dung dịch gốc ml 3,0 4,0 5,0 3,0 4,0 Dung mơi hòa tan vừa đủ ml 100 100 100 50 50 Đường biểu diễn tương quan diện tích đỉnh theo nồng độ dung dịch Hệ số tương quan đường thẳng hồi qui R2= 0,999 3.4 ĐỘ ĐÚNG (Tỷ lệ phục hồi 98% - 102%) Thêm xác khối lượng chất chuẩn cefpodoxim proxetil vào bình cân sẵn bột placebo viên cefpodoxim 100 theo đề cương Chuẩn bị mẫu nồng độ, nồng độ mẫu Cả kết thử nghiệm độ tất mức từ 60% đến 140% nồng độ thiết kế phương pháp nằm giới hạn cho phép 98 - 102% Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim Kết luận: độ đạt yêu cầu Kết quả: Nồng độ Lượng cefpodoxim cho vào Lượng cefpodoxim tìm lại Tỉ lệ phục hồi % (mg) 30,26 30,03 30,01 49,82 50,07 49,49 69,82 70,50 69,81 60 100 140 (mg) 30.07 29.77 30.02 49.83 49.59 48.77 69.96 69.25 69.06 Trung bình RSD Tỷ lệ phục hồi trung bình: 99,27% % 99.37 99.12 100.01 100.03 99.04 98.54 100.19 98.22 98.92 99,27 0,70 R = 99,97% ≥ 99,9 3.5 ĐỘ CHÍNH XÁC PHƯƠNG PHÁP (RSD ≤ 1,0%) Thử nghiệm thực kiểm nghiệm viên thứ cho kết sau: Dung dịch chuẩn: Cân chuyển xác 70,98 mg chất chuẩn cefpodoxim proxetil vào bình định mức 100mL, thêm khoảng 10mL methanol, lắc cho tan hồn tồn, thêm dung mơi hòa tan vừa đủ đến vạch, lắc Pha loãng tiếp 6,0mL dung dịch với dung mơi hòa tan đến 100,0mL , lắc Lọc qua màng 0,45µm Tiêm mũi vào hệ thống Dung dich thử: cân xác khoảng 170mg bột thuốc từ phần hỗn hợp bột chia từ khối bột đồng nhất, cho vào bình định mức 100mL, thêm 40 mL dung mơi hòa tan, siêu âm phút, lắc kỹ, thêm dung mơi hòa tan vừa đủ đến vạch, lắc đều, để lắng phút Hút xác 3,0ml dung dịch này, thêm dung mơi hòa tan vừa đủ 50,0ml, trộn Lọc qua màng lọc 0,45µm Lặp lại mẫu thử riêng biệt Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim Kết luận: Đạt yêu cầu Tiêm lặp lại lần cho mẫu thử vào hệ thống sắc ký, ghi sắc đồ diện tích đỉnh Khối lượng mẫu thử (mg) Hàm lượng (mg/viên) 172.47 99.656 166.95 99.158 169.52 100.286 167.72 99.417 173.30 100.099 171.29 100.335 Trung bình RSD (%) 3.6 KHOẢNG XÁC ĐỊNH Hàm lượng nhãn (%) 99.66 99.16 100.29 99.42 100.10 100.34 99,83 0,5 Căn vào kết độ đúng, độ xác tính tuyến tính trên, qui trình phân tích áp dụng với khoảng nồng độ cefpodoxim chứa mẫu thử từ 0,015 mg/mL đến 0,040mg/mL 3.7 ĐỘ THÔ VÀ ĐỘ CHÍNH XÁC TRUNG GIAN Thử nghiệm thực mẫu phân tích kiểm nghiệm viên thứ hai Thực lần giống tiến hành thử nghiệm độ xác phương pháp với thơng số thay đổi: Tốc độ dòng: 2,0 ml/phút Pha động: Acetonitril – Dung dịch amoni acetat 0,02M (31,5:68,5) Nhiệt độ cột 40oC Kết quả: Độ phân giải đỉnh Cefpodoxim proxetil S-epimer đỉnh Cefpodoxim proxetil R-epimer là: 2,614 (Tiêu chuẩn ≥ 2,5) Hệ số kéo đuôi đỉnh đồng phân Cefpodoxim proxetil R-epimer là: 1,138 RSD tổng diện tích đỉnh đồng phân Cefpodoxim proxetil R-epimer đồng phân Cefpodoxim proxetil S-epimer lần tiêm lặp lại dung dịch chuẩn: 0,40% Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim Khối lượng mẫu thử (mg) 174.66 169.08 172.46 169.09 171.51 169.88 Trung bình RSD (%) Hàm lượng (mg/viên) 100.225 100.360 99.203 99.285 99.848 97.604 Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim Hàm lượng nhãn (%) 100.22 100.36 99.20 99.29 99.85 97.60 99,42 1,0 Kết Kếtquả quả:của phương kiểmsai nghiệm khôngviên kháckhông nhau.khác có ý nghĩa So sánh kết kiểm nghiệm viên với độ tin cậy 95% F-Test Two-Sample for Variances Variable 99,42 1,02 4,27 5,05 Mean Variance F F Critical one-tail F= 4,27 < F0,05= 5,05 Variable 99,83 0,24 t-Test: Two-Sample Assuming Equal Variances Variable 99,42 1,02 -0,89 2,23 Mean Variance t Stat t Critical two-tail t = 0,89 < t 0,0,5 = 2,23 3.8 ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA DUNG DỊCH CHUẨN Variable 99,83 0,24 Tiêm lặp lại lần dung dịch chuẩn bảo quản điều kiện thường thời điểm sau pha Thời gian (h) Tổng diện tích đỉnh Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim Độ lệch so với ban đầu Nhận xét: Tổng diện tích pic dung dịch chuẩn khơng ổn định theo thời gian 3.9 682.894 684.140 687.685 +0,18% +0,7% GHI NHẬN TRONG KHI THẨM ĐỊNH Tổng diện tích pic dung dịch chuẩn khơng ổn định theo thời gian có khuynh hướng tăng, phân tích mẫu qua đêm cần phải tiêm lại dung dịch chuẩn cách khoảng để tính tốn kết mẫu thử phân tích đêm để giảm thiểu sai số 3.10 DỮ LIỆU ĐÍNH KÈM Các sắc ký đồ dung dịch placebo khơng có đỉnh trùng với đỉnh Cefpodoxim proxetil S Cefpodoxim proxetil R Báo cáo độ tuyến tính diện tích đỉnh sắc ký đồ liên quan Báo cáo phân tích độ xác phương pháp kiểm nghiệm viên thứ thực sắc ký đồ liên quan Báo cáo phân tích độ xác trung gian, độ thô kiểm nghiệm viên thứ hai thực sắc ký đồ liên quan Báo cáo phân tích độ kiểm nghiệm viên thứ thực sắc ký đồ liên quan Báo cáo độ bền dung dịch theo thời gian kiểm nghiệm viên thứ thực sắc ký đồ liên quan Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim BIỆN LUẬN Kết thẩm định cho thấy hệ thống sắc ký cách pha chế dung dịch thích hợp cho việc định lượng viên CEFPODOXIM 100 Hệ thống pha động thay đổi để đạt tính tương thích tuỳ tình trạng cột Số lần tiêm dung dich chuẩn lần, RSD không 1,0% KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Phương pháp định lượng tiêu chuẩn kỹ thuật thành phẩm bán thành phẩm theo qui trình thẩm định cho kết đáng tin cậy khoảng xác định đnh lượng Thẩm định lại phương pháp có tình trạng lặp lại kết nằm tiêu chuẩn kỹ thuật Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim ... 169.88 Trung bình RSD (%) Hàm lượng (mg /viên) 100. 225 100. 360 99.203 99.285 99.848 97.604 Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim Hàm lượng nhãn (%) 100. 22 100. 36 99.20 99.29 99.85 97.60... Thời gian thẩm định: từ ngày ……………đến ngày ……………… Nhằm xác định qui trình định lượng thích hợp để có kết phân tích đáng tin cậy khoảng định lượng 1.2 TỔNG QUAN Kết thẩm định cho thấy qui trình đề... liên quan Báo cáo thẩm định quy trình định lượng Cefpodoxim BIỆN LUẬN Kết thẩm định cho thấy hệ thống sắc ký cách pha chế dung dịch thích hợp cho việc định lượng viên CEFPODOXIM 100 Hệ thống pha