Viêm khớp mạn tính là rối loạn viêm mạn tính, thường tiến triển, có đặc điểm viêm đa khớp đối xứng với các triệu chứng toàn thân. Những thay đổi trong sưng viêm mạn tính có thể dẫn đến mất khoảng khớp, mất di động khớp, dính xương, nhỏ khớp, co cứng gân. Các biến dạng khớp làm hạn chế cử động, gây đau đớn cho bệnh nhân. Điều trị viêm khớp mạn tính phải dùng thuốc trong khoảng thời gian dài, điều trị tích cực để làm chậm tiến triển bệnh. 3 Nhóm thuốc thường được sử dụng trong điều trị viêm khớp mạn tính là nhóm kháng viêm không steroid (NSAIDs). Các NSAIDs ức chế enzym cyclooxygenase (COX) là enzym tổng hợp prostaglandin. COX1 có vai trò tổng hợp loại prostaglandin điều hoà các chức năng như giãn mạch, co mạch, co phế quản, bài tiết dịch vị, bài tiết insulin. COX2 có vai trò tổng hợp loại prostaglandin có vai trò quan trọng trong phản ứng viêm và gây đau. Những NSAIDs thế hệ trước ức chế luôn cả 2 dạng đồng phân COX1, COX2 nên gây nhiều tác dụng phụ, nhất là tác dụng phụ trên dạ dày. Những NSAIDs thế hệ mới ức chế chuyên biệt trên COX2 nên ít gây tác dụng phụ hơn, ví dụ như meloxicam, nimesulid, celecoxib…. Nimesulid có hoạt tính kháng viêm mạnh, liều sử dụng thấp (100mg x 2 lầnngày), ít tác dụng phụ trên hệ tiêu hoá, phù hợp với đặc điểm điều trị lâu dài trong bệnh viêm khớp mạn tính. Tuy nhiên do nimesulid kém tan trong nước (độ tan trong nước ở 20 oC là 0,014 mgmL) nên sinh khả dụng của các chế phẩm chứa nimesulid dạng quy ước như viên nén, viên nang thường thấp, ảnh hưởng đến hiệu quả điều trị. Để sử dụng nimesulid đạt hiệu quả tối đa trong điều trị viêm khớp mạn tính thì cần phải nâng cao sinh khả dụng của dạng thuốc, trong trường hợp này phải làm tăng độ tan của nimesulid trong môi trường nước. Tạo phức giữa hoạt chất và cyclodextrin là một hướng giải quyết vấn đề tăng độ tan của các hoạt chất khó tan trong môi trường nước. 16 Mục tiêu tổng quát của đề tài này là nghiên cứu điều chế, đánh giá sự tạo phức giữa nimesulid và cyclodextrin và các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả tạo phức nhằm phục vụ cho việc thiết kế công thức viên nén chứa phức hợp nimesulidcyclodextrin có sinh khả dụng cao về sau. Mục tiêu tổng quát của đề tài sẽ được cụ thể hoá qua ba mục tiêu nhỏ sau: 1. Xây dựng quy trình định lượng nimesulid trong phức hợp nimesulidcyclodextrin 2. Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng của các phương pháp, yếu tố điều chế trên mức độ làm tăng độ hoà tan của hoạt chất nimesulid 3. Xây dựng tiêu chuẩn phức hợp nimesulidcyclodextrin dùng cho quy trình điều chế viên nén chứa nimesulid có sinh khả dụng cao.
1 CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm khớp mạn tính rối loạn viêm mạn tính, thường tiến triển, có đặc điểm viêm đa khớp đối xứng với triệu chứng toàn thân Những thay đổi sưng viêm mạn tính dẫn đến khoảng khớp, di động khớp, dính xương, nhỏ khớp, co cứng gân Các biến dạng khớp làm hạn chế cử động, gây đau đớn cho bệnh nhân Điều trò viêm khớp mạn tính phải dùng thuốc khoảng thời gian dài, điều trò tích cực để làm chậm tiến triển bệnh [3] Nhóm thuốc thường sử dụng điều trò viêm khớp mạn tính nhóm kháng viêm không steroid (NSAIDs) Các NSAIDs ức chế enzym cyclooxygenase (COX) enzym tổng hợp prostaglandin COX-1 có vai trò tổng hợp loại prostaglandin điều hoà chức giãn mạch, co mạch, co phế quản, tiết dòch vò, tiết insulin COX-2 có vai trò tổng hợp loại prostaglandin có vai trò quan trọng phản ứng viêm gây đau Những NSAIDs hệ trước ức chế dạng đồng phân COX-1, COX-2 nên gây nhiều tác dụng phụ, tác dụng phụ dày Những NSAIDs hệ ức chế chuyên biệt COX-2 nên gây tác dụng phụ hơn, ví dụ meloxicam, nimesulid, celecoxib… Nimesulid có hoạt tính kháng viêm mạnh, liều sử dụng thấp (100mg x lần/ngày), tác dụng phụ hệ tiêu hoá, phù hợp với đặc điểm điều trò lâu dài bệnh viêm khớp mạn tính Tuy nhiên nimesulid tan nước (độ tan nước 20 oC 0,014 mg/mL) nên sinh khả dụng chế phẩm chứa nimesulid dạng quy ước viên nén, viên nang thường thấp, ảnh hưởng đến hiệu điều trò Để sử dụng nimesulid đạt hiệu tối đa điều trò viêm khớp mạn tính cần phải nâng cao sinh khả dụng dạng thuốc, trường hợp phải làm tăng độ tan nimesulid môi trường nước Tạo phức hoạt chất cyclodextrin hướng giải vấn đề tăng độ tan hoạt chất khó tan môi trường nước [16] Mục tiêu tổng quát đề tài nghiên cứu điều chế, đánh giá tạo phức nimesulid β-cyclodextrin yếu tố ảnh hưởng đến hiệu tạo phức nhằm phục vụ cho việc thiết kế công thức viên nén chứa phức hợp nimesulid-β-cyclodextrin có sinh khả dụng cao sau Mục tiêu tổng quát đề tài cụ thể hoá qua ba mục tiêu nhỏ sau: Xây dựng quy trình đònh lượng nimesulid phức hợp nimesulid-β-cyclodextrin Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng phương pháp, yếu tố điều chế mức độ làm tăng độ hoà tan hoạt chất nimesulid 3 Xây dựng tiêu chuẩn phức hợp nimesulid-β-cyclodextrin dùng cho quy trình điều chế viên nén chứa nimesulid có sinh khả dụng cao CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 THUỐC KHÁNG VIÊM KHÔNG STEROID 2.1.1 Phản ứng viêm Viêm phản ứng phức tạp thể, khởi phát sau tế bào bò tổn thương Phản ứng viêm có biểu lâm sàng: sưng, nóng, đỏ, đau kèm theo rối loạn chức quan bò viêm Đứng góc độ lâm sàng, phản ứng viêm thường xem có hại cho thể viêm gây đau, nóng sốt…Đứng góc độ sinh lý bệnh học, phản ứng viêm đáp ứng bảo vệ nhằm đưa thể trở lại tình trạng trước bò tổn thương để trì đònh dòch nội môi Nhưng giống đáp ứng miễn dòch, đáp ứng viêm không phù hợp có gia tăng mức, viêm trở thành có hại cho người bệnh đau đớn, tổn thương mô lành kế cận, rối loạn chức Những biến đổi chủ yếu phản ứng viêm: - Rối loạn tuần hoàn: bao gồm rối loạn vận mạch, thành lập dòch viêm, bạch cầu xuyên mạch tượng thực bào - Rối loạn chuyển hoá - Tổn thương tổ chức - Tăng sinh tế bào Các chất trung gian prostaglandin, leucotrien, histamin, thromboxan dưỡng bào tổng hợp sau chòu tác động nguyên nhân gây viêm, có vai trò quan trọng viêm Nếu chất trung gian sản xuất nhiều làm cho phản ứng viêm gia tăng thái Prostaglandin gây tăng tính thấm thành mạch làm xung huyết ổ viêm, gây tượng hoá hướng động thu hút bạch cầu vận động đến ổ viêm tham gia đáp ứng viêm, xảy tượng thực bào phóng thích enzym Đây nguyên nhân gây tổn thương thứ phát mô lành kế cận [5] 2.1.2 Các thuốc kháng viêm không steroid Nhóm thuốc kháng viêm không steroid (NSAIDs) bao gồm thuốc có tác động hạ nhiệt, giảm đau, kháng viêm Cơ chế tác dụng nhóm thuốc NSAIDs xác đònh ức chế trình sinh tổng hợp prostaglandinchất trung gian phản ứng viêm, cách ức chế enzym cyclooxygenase (COX) Enzym cyclooxygensae có dạng đồng phân COX-1 COX-2 Cả hai dạng COX-1, COX-2 chuyển hoá acid arachidonic thành prostaglandin, phân bố vai trò sinh lý chúng khác nhau: COX-1 biểu nhiều nơi thể, thực số chức mang tính nội cân trì bình thường niêm mạc dày, ảnh hưởng tưới máu thận kết tập tiểu cầu; COX-2 có vai trò đáp ứng viêm, liên quan đến việc sản xuất prostaglandin gây đau thúc đẩy trình viêm [3] Đa số thuốc NSAIDs cổ điển thường ức chế COX-1 lẫn COX-2, gây nhiều tác dụng phụ dày, thận rối loạn tiểu cầu Các thuốc NSAIDs hệ nimesulid, meloxicam, celecoxib ức chế chuyên biệt COX-2 nên gây tác dụng phụ nhóm NSAIDs cổ điển Phân loại thuốc NSAIDs theo cấu trúc NSAIDs cổ điển - Nhóm acid aryl-carboxylic: aspirin, acid mefenamic… - Nhóm acid aryl heteroaryl acetic: diclofenac, indomethacin… - Nhóm acid aryl heteroaryl propionic: ibuprofen, naproxen… - Nhóm mang tính acid có chức enol: phenylbutazon, piroxicam… NSAIDs ức chế chuyên biệt COX-2 - Nhóm sulfonanilid: nimesulid, flosulid… - Nhóm vicinal diaryl heterocyl: celecoxip, rofecoxib, valdecoxib, etoricoxib… 2.2 NIMESULID 2.2.1 Tính chất lý hóa Hình 2.1 Công thức phân tử nimesulid Công thức phân tử dạng rút gọn: C13H12N2O5S Danh pháp hoá học: 4-nitro-2-phenoxy methanesulfonanilid Khối lượng phân tử: 308,31 đvC Nimesulid tồn dạng bột màu vàng nhạt, có điểm chảy khoảng 147-149 0C Nimesulid acid yếu, có pKa = 6,4 - 6,8 Nimesulid tan nước (độ tan nước 20 oC: 0,014 mg/mL) Độ tan nimesulid nước tăng dần theo pH Hệ số phân bố Log P (noctanol/nước) 1,788 [16], [18] 2.2.2 Chỉ đònh, liều dùng, tác dụng phụ - Chỉ đònh: kháng viêm giảm đau viêm xương khớp mạn tính, bệnh thấp khớp, đau viêm hậu phẫu v.v… - Liều dùng: người lớn 100 mg x 2lần/ngày, uống với nước sau ăn - Tác dụng phụ: ợ nóng, buồn nôn, đau dày, dò ứng da v.v…[16] 2.2.3 Phương pháp kiểm nghiệm 2.2.3.1 Đònh tính nimesulid nguyên liệu chế phẩm Sắc ký lớp mỏng Điều kiện sắc ký: - Bản mỏng silicagel GF 254 (Merck) - Bình sắc ký, chứa dung môi khai triển - Đèn soi UV CN-15LC (Vilbert Lourmat 254/365 nm) - Pha động: chloroform-ethyl acetat (95:5) Phát hiện: soi mỏng ánh sáng tử ngoại, bước sóng 254 nm Yêu cầu: vết sắc ký mẫu thử mẫu chuẩn phải có Rf màu sắc Quang phổ hồng ngoại (IR) Yêu cầu: phổ hồng ngoại mẫu chuẩn mẫu thử phải giống Quang phổ tử ngoại-khả kiến (UV-Vis) Tiến hành: quét phổ UV-Vis khoảng bước sóng 200500 nm, dùng ethanol làm mẫu trắng Yêu cầu: phổ UV-Vis mẫu thử phải giống phổ mẫu chuẩn, có cực đại bước sóng 296 nm, bước sóng 331 nm, cực tiểu bước sóng 260 nm [1], [6] 2.2.3.2 Đònh lượng nimesulid nguyên liệu chế phẩm Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Điều kiện sắc ký: - Cột: Hypersil RP C18, x 250 mm, μm - Dectector: UV 230 nm - Tốc độ dòng: mL/phút - Thể tích tiêm: 10 μl - Pha động: dung dòch đệm pH 7,0 - methanol (45:65) Xây dựng đường cong chuẩn độ biểu diễn phụ thuộc diện tích đỉnh S theo nồng độ, xác đònh phương trình hồi quy tuyến tính Dựa vào phương trình tính toán suy hàm lượng nimesulid chế phẩm [1], [6] Phương pháp phổ đạo hàm bậc Tiến hành: ghi phổ UV-Vis mẫu chuẩn mẫu thử, từ bước sóng 500nm đến bước sóng 200 nm, với mẫu trắng ethanol Xác đònh λmin = 260 nm Chọn phương pháp thông số tính tích phân Xác đònh phổ đạo hàm bậc tính giá trò f ’’(A) bước sóng 260 nm 10 Căn vào giá trò f ’’(A) bước sóng 260 nm dung dòch chuẩn dung dòch thử, tính hàm lượng nimesulid chế phẩm [1], [7] Phương pháp quang phổ UV-Vis Đo độ hấp thu dung dòch nimesulid pH 7,4 bước sóng 397 nm, dựa vào độ hấp thu dãy dung dòch nimesulid chuẩn, xây dựng phương trình hồi quy, từ tính hàm lượng nimesulid mẫu thử [14], [18] 2.2.4 Dược động học Các thông số dược động học nimesulid trình bày Bảng 2.1 Bảng 2.1 Tóm tắt đặc tính dược động học nimesulid Thông số Giá trò Thời điểm đạt nồng độ tối đa huyết 1,22 – 2,75 tương (Tmax) Nồng độ tối đa huyết tương (Cmax) 2,86 – 6,50 mg/L Diện tích đường cong (AUC) 14,65 – 54,09 mg Thể tích phân bố (VD) 0,18-0,39 L/kg Tỉ lệ kết hợp với protein huyết tương 93 – 96 % Thời gian bán thải (T1/2) 1,8 – 4,73 Hệ số thải (Clnimesulid) 31,02-106,16 mL/h/kg Nimesulid hấp thu tốt ruột non, thức ăn có ảnh hưởng đến hấp thu Nimesulid hấp thu tốt bụng đói 40 100 80 Nimesulid Phức Z1 60 Phức Y1 Phức X1 Độ hoà tan (%) Phức Z2 40 Phức Y2 Phức X2 20 0 10 15 20 25 30 Thời điểm (phút) Hình 4.5 Độ hoà tan nimesulid phức pH 7,4 4.4.2 So sánh độ hoà tan 4.4.2.1.Các phức điều chế với phương pháp khác Kết so sánh độ hoà tan phức tỷ lệ trình bày Bảng 4.5 41 Bảng 4.5 Giá trò f1, f2 so sánh độ hoà tan phức tỉ lệ So sánh phức Phức X1-Phức Y1 Phức X1-Phức Z1 Phức Z1-Phức Y1 Phức X2-Phức Y2 Phức X2-Phức Z2 Phức Z2-Phức Y2 Yếu tố f1 25,36 Yếu tố f2 38,21 14,61 49,86 9,38 55,56 17,47 43,11 16,34 45,26 1,33 85,00 Đánh giá Độ hoà tan khác Độ hoà tan khác Độ hoà tan tương tự Độ hoà tan khác Độ hoà tan khác Độ hoà tan tương tự phức phức phức phức phức phức Nhận xét: - Độ hoà tan phức điều chế từ phương pháp X khác biệt so với phương pháp Y, Z (độ hoà tan thấp thời điểm) - Độ hoà tan phức điều chế từ phương pháp Y phương pháp Z tương tự Tuy nhiên phức Y có độ hoà tan cao phức Z khoảng 20 phút 4.4.2.2.Các phức điều chế với tỉ lệ số mol khác Kết so sánh độ hoà tan phức phương pháp điều chế trình bày Bảng 4.6 42 Bảng 4.6 Giá trò f1, f2 so sánh độ hoà tan phức phương pháp điều chế So sánh phức Phức X1-Phức X2 Phức Y1-Phức Y2 Phức Z1-Phức Z2 Yếu tố f1 10,64 Yếu tố f2 56,23 3,78 67,50 12,31 49,46 Đánh giá Độ hoà tan phức tương tự Độ hoà tan phức tương tự Độ hoà tan phức khác Nhận xét: - Phương pháp X, Y cho kết phức có độ hoà tan tương tự thay đổi tỉ lệ số mol Tuy nhiên phức 1:2 có độ hoà tan cao phức 1:1 khoảng 20 phút - Trường hợp phức điều chế phương pháp Z, độ hoà tan phức Z2 Z1 khác Điều giải thích phương pháp Z tạo nhiều tinh thể phức dạng kết tinh Phức hợp nimesulid-β-cyclodextrin dạng kết tinh có tốc độ tan chậm dạng vô đònh hình Phức Z có nhiều β-cyclodextrin tự do, β-cyclodextrin tan nhanh vào môi trường, hỗ trợ việc hoà tan nimesulid nhanh so với phức Z1 4.5 ĐỊNH LƯNG NIMESULID TRONG PHỨC Hàm lượng nimesulid phức xác đònh phương pháp quang phổ UV theo mục 3.6 Kết trình bày Bảng 4.7 43 Bảng 4.7 Hàm lượng nimesulid phức Hàm lượng (%) Lần Phức X1 102,92 Phức Y1 102,37 Phức Z1 101,01 Phức X2 103,02 Lần 103,9 101,92 101,30 103,18 Lần 103,8 101,75 100,85 102,96 102,02 101,05 103,05 Trung bình 103,54 Phức Y2 101,2 100,7 100,6 100,9 Phức Z2 101,85 102,12 101,8 101,92 Các phức đạt hàm lượng quy đònh 100 ± % 4.6 ĐỘ TAN CỦA NIMESULID VÀ CÁC PHỨC TRONG pH 7,4 Kết độ tan nimesulid phức pH 7,4 trình bày Bảng 4.8 Hình 4.6 Bảng 4.8 Độ tan nimesulid phức pH 7,4 Độ tan (mg/mL) Hiệu gia tăng độ tan Nimesulid 0,049 Phức X1 0,383 7,81 lần Phức Y1 0,380 7,75 lần Phức Z1 0,385 7,85 lần Phức X2 0,730 14,89 lần Phức Y2 0,737 15,04 lần Phức Z2 0,744 15,18 lần 44 0.8 0.7 0.6 Độ tan 0.5 (mg/mL ) 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 Nimesulid Phức Z1Phức Y1Phức X1Phức Z2Phức Y2 Phức X2 Hình 4.6 Độ tan nimesulid phức pH 7,4 Độ tan phức 1:2 gấp gần lần so với độ tan phức 1:1, tương ứng với nồng độ tối đa β-cyclodextrin dung dòch phức 1:2 gấp lần so với dung dòch phức 1:1 Kết phân tích phương sai số liệu độ tan phức, cho thấy: - Độ tan phức vượt trội hẳn so với nimesulid nguyên liệu, chứng tỏ hiệu rõ rệt β-cyclodextrin việc làm tăng độ tan nimesulid môi trường nước - Độ tan phức 1:1 khác ý nghóa (p < 0,5) - Độ tan phức 1:2 khác ý nghóa (p >0,5) 45 - Độ tan phức không phụ thuộc vào phương pháp điều chế mà phụ thuộc vào nồng độ β-cyclodextrin có mặt dung dòch 4.7 LỰA CHỌN PHỨC THÍCH HP 4.7.1 Đánh giá độ hoà tan phức Đánh giá hiệu tạo phức độ hoà tan thời điểm phút 30 phút Thời điểm phút khoảng thời gian “tấn công” sau dùng thuốc, dạng thuốc có độ hoà tan cao vòng phút đầu nồng độ thuốc máu tăng nhanh, phát huy tác dụng ngay, giúp kiểm soát triệu chứng bệnh nhanh chóng Độ hoà tan thời điểm 30 phút thể khả giải phóng hoạt chất phức, độ hoà tan thời điểm lớn (> 80%) khả phóng thích gần 100% hoạt chất khỏi phức cao Kết phân tích phương sai số liệu độ hoà tan, cho thấy: Thời điểm phút - Độ hoà tan thời điểm phút đầu có khác có ý nghóa phức điều chế phương pháp khác (p > 0,5 , phức điều chế phương pháp Y có độ hoà tan cao nhất) 46 - Độ hoà tan thời điểm phút khác có ý nghóa phức 1:1 phức 1:2 (p < 0,5 , phức 1:2 có độ hoà tan cao phức 1:1) Thời điểm 30 phút - Độ hoà tan thời điểm 30 phút khác ý nghóa phương pháp Y phương pháp Z (p < 0,5) - Độ hoà tan thời điểm 30 phút khác có ý nghóa phương pháp X phương pháp lại (p < 0,5 , phương pháp X cho phức có độ hoà tan thấp hơn) - Độ hoà tan thời điểm 30 phút khác ý nghóa phức 1:1 phức 1:2 điều chế phương pháp Y (p > 0,5) - Độ hoà tan thời điểm 30 phút khác có ý nghóa phức 1:1 phức 1:2 điều chế từ phương pháp Z (p < 0,5) - Độ hoà tan thời điểm 30 phút khác có ý nghóa phức 1:1 phức 1:2 điều chế từ phương pháp X (p < 0,5) 4.7.2 Lựa chọn phức thích hợp Dựa nhận xét độ hoà tan phức điều chế phương pháp, tỉ lệ khác nhau, chọn 47 phương pháp Y để tiếp tục nghiên cứu yếu tố khác ảnh hưởng tới hiệu tạo phức như: thời gian điều chế, lượng dung môi Phức chuẩn để so sánh phức Y với tỉ lệ dung môi/bột 2:2, thời gian điều chế 45 phút Thời gian điều chế bố trí mức: 15 phút, 30 phút 45 phút Tỷ lệ dung môi/bột bố trí mức: 1:2, 1,5:2 2:2 Kết độ hoà tan phức Y1 trình bày Bảng 4.9, Bảng 4.10, Hình 4.7, Hình 4.8 Bảng 4.9 Độ hoà tan phức Y1 với thời gian điều chế khác Độ hoà tan (%) Thời điểm (phút) Y 1-15 phút Y 1-30 phút Y 1-45 phút 51,64 55,77 62,48 10 60,86 68,50 74,02 15 68,62 78,13 81,08 20 77,16 85,02 85,50 25 82,84 88,34 88,84 30 86,90 91,44 91,63 48 100 80 Nimesulid Phức Y1-15 phút Phức Y1-30 phút Phức Y1-45 phút Độ hòa tan (%) 60 40 20 0 10 15 20 25 30 Thời điểm (phút) Hình 4.7 Độ hoà tan phức Y với thời gian điều chế khác Bảng 4.10 Độ hoà tan phức Y với lượng dung môi khác Độ hoà tan (%) Thời điểm (phút) Y1-tỷ lệ 1:2 Y1-tỷ lệ 1,5:2 Y1-tỷ lệ 2:2 52,48 59,35 62,48 10 64,67 72,58 74,02 15 70,76 80,94 81,08 20 75,85 85,12 85,50 49 25 79,22 88,32 88,84 30 81,60 91,25 91,63 100 80 Nimesulid Phức Y1-tỷ lệ 1:2 Phức Y1-tỷ lệ 1,5:2 Phức Y1-tỷ lệ 2:2 Độ hoà tan (%) 60 40 20 0 10 15 20 25 30 Thời điểm (phút) Hình 4.8 Độ hoà tan phức Y1 với tỷ lệ dung môi/bột khác Kết phân tích phương sai số liệu độ hoà tan phức Y1, cho thấy: 50 Ảnh hưởng thời gian điều chế: - Độ hoà tan phức Y thời điểm phút khác có ý nghóa (p < 0,5) - Độ hoà tan điểm 30 phút khác ý nghóa phức Y1-30 phút Y1-45 phút (p > 0,5) - Độ hoà tan thời điểm 30 phút khác có ý nghóa phức Y1-15 phút hai phức lại (p < 0,5) Ảnh hưởng lượng dung môi: - Độ hoà tan phức Y 1-tỷ lệ1,5:2 Y1-tỷ lệ 2:2 khác ý nghóa thời điểm phút 30 phút (p > 0,5) - Độ hoà tan phức Y1-tỷ lệ1:2 khác có ý nghóa so với hai phức Y1-tỷ lệ1,5:2 Y1-tỷ lệ 2:2 (p < 0,5) Nhận xét: - Tất phức Y có độ hoà tan thời điểm 30 phút > 80% - Thời gian điều chế có ảnh hưởng quan trọng đến độ hoà tan phức Thời gian điều chế 45 phút cho phức có độ tan cao thời điểm phút đầu so với hai phức lại Thời gian điều chế 15 phút mức tối thiểu để điều chế phức có độ tan tốt (Q 30 80%) phút > 51 - Lượng dung môi/bột có ảnh hưởng quan trọng đến độ hoà tan phức Tỉ lệ dung môi/bột 2:2 cho độ hoà tan cao thời điểm phút đầu so với hai phức lại Tỉ lệ dung môi/bột 1:2 mức tối thiểu để điều chế phức có độ tan tốt (Q30 phút > 80 %) - Xét phương diện khả nâng cấp cỡ lô công nghiệp, chi phí sản xuất, thiết bò sản xuất tỉ lệ dung môi/bột 1:2 phù hợp Khi chọn tỉ lệ dung môi/bột 1:2 chọn thời gian điều chế 45 phút để nâng cao tiếp xúc nimesulid β-cyclodextrin nhằm tăng hiệu tạo phức 4.8 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CỦA PHỨC Tiêu chuẩn phức hợp nimesulid-β-cyclodextrin xây dựng sau: Phương pháp điều chế - Phương pháp Y - Tỉ lệ nimesulid β-cyclodextrin tính theo số mol 1:1 - Tỷ lệ dung môi/bột 1:2 - Thời gian điều chế 45 phút Độ ẩm 11,5 – 12,5 % 52 Độ hoà tan - Thiết bò: máy thử độ hoà tan kiểu cánh khuấy - Môi trường: 750 ml dung dòch đệm pH 7,4 - Tốc độ cánh khuấy: 100 vòng/ phút - Nhiệt độ: 37 oC ± - Phương pháp đònh lượng: quang phổ UV, bước sóng 397 nm - Yêu cầu: + Thời điểm phút: ≥ 60 % + Thời điểm 30 phút: ≥ 90 % Hàm lượng nimesulid phức - Phương pháp đònh lượng: quang phổ UV, bước sóng 397 nm - Yêu cầu: 95 – 105 % CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Đề tài thực việc sau: Có nhiều phương pháp để đònh lượng nimesulid phức hợp nimesulid-β-cyclodextrin phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, phương pháp phổ đạo hàm bậc 2, phương pháp quang phổ UV-Vis…Trong khoá luận này, phương pháp quang phổ UV-Vis chọn làm phương pháp đònh lượng nimesulid có ưu điểm đơn giản, nhanh chóng quy trình thẩm đònh đạt tất yêu cầu độ xác, độ tính tuyến tính 53 Để nâng cao sinh khả dụng nimesulid, biện pháp tạo phức với β-cyclodextrin lựa chọn β-cyclodextrin phối hợp tạo phức với nimesulid làm tăng độ hoà tan nimesulid lên gấp nhiều lần so với dạng dược chất ban đầu Trong số phương pháp tạo phức βcyclodextrin nimesulid, ba phương pháp X, Y, Z tiến hành khảo sát khoá luận Phương pháp Y cho thấy hiệu làm tăng độ hòa tan cao hẳn phương pháp X Phương pháp Y phương pháp Z có hiệu tăng độ hoà tan tương đương phương pháp Y điều chế phức đơn giản hơn, khả nâng cấp cỡ lô dễ so với phương pháp Z Do đó, phương pháp Y chọn để tiếp tục khảo sát yếu tố điều chế ảnh hưởng đến hiệu tạo phức: thời gian điều chế lượng dung môi sử dụng Kết cho thấy thời gian điều chế tối thiểu 30 phút tỷ lệ dung môi/bột 1:2 Tiêu chuẩn phức (độ ẩm, độ hòa tan hàm lượng nimesulid phức) xây dựng để làm sở cho việc điều chế phức cỡ lô lớn phục vụ cho việc nghiên cứu công thức viên nimesulid sinh khả dụng cao giai đoạn sau Những việc đề nghò tiếp tục thực giai đoạn tiếp theo: 54 - So sánh phương pháp quang phổ UV-Vis phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao đònh lượng nimesulid phức hợp nimesulid-β-cyclodextrin - Nâng cấp cỡ lô điều chế phức nimesulid-β-cyclodextrin để đánh giá hiệu phương pháp Y điều chế công nghiệp - Xây dựng công thức viên nén nimesulid-β-cyclodextrin sinh khả dụng cao ... vào phương trình hồi quy xây dựng tính nồng độ nimesulid mẫu thử, từ tính hàm lượng nimesulid phức 3.7 THẨM NIMESULID ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯNG 30 3.7.1 Độ xác độ Chuẩn bò dung dòch nimesulid 10... phương trình hồi quy, từ tính hàm lượng nimesulid mẫu thử [14], [18] 2.2.4 Dược động học Các thông số dược động học nimesulid trình bày Bảng 2.1 Bảng 2.1 Tóm tắt đặc tính dược động học nimesulid Thông... nhỏ sau: Xây dựng quy trình đònh lượng nimesulid phức hợp nimesulid- β-cyclodextrin Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng phương pháp, yếu tố điều chế mức độ làm tăng độ hoà tan hoạt chất nimesulid 3 Xây