Nghiên cứu phương pháp định lượng rotundin trong viên bao sen vông r

Bộ Giáo dục đào tạo y tế Trường Đại học Dược Hà Nội Võ thị Quế Nghiên cứu phương pháp định lượng rotundin Viên Bao sen vông r Luận văn thạc sĩ dược học Hà Nội - 2008 Bộ giáo dục đào tạo y tế Trường Đại học Dược Hà Nội Võ thị quế Nghiên cứu phương pháp định lượng rotundin viên Bao sen vông r Luận văn thạc sĩ dược học Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 60.73.15 Ng­êi h­íng dÉn khoa häc: PGS.TS.Th¸i Ngun Hïng Thu Hà Nội - 2008 Lời cảm ơn Trong trình thực khoá luận tốt nghiệp, nhận bảo tận tình thầy cô, quan tâm gia đình bạn bè Những giúp đỡ quý báu giúp đỡ hoàn thành khoá luận này, đồng thời cho hiểu biết thêm nhiều điều tư công việc ứng xử sống Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS TS Thái Nguyễn Hùng Thu người thầy giành nhiều thời gian, công sức tận tình hướng dẫn giúp đỡ hoàn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: Các thầy cô giáo, anh chị em kỹ thuật viên Bộ môn Hoá phân tích, Phòng Thí nghiệm Trung tâm, đồng nghiệp lãnh đạo Công ty Cổ phần Dược phẩm Trung ương II tạo điều kiện tốt để hoàn thành khoá luận Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, người thân bạn bè động viên, khích lệ nhiều để có thêm nhiệt tình say mê nghiên cứu khoa học Hà Nội Tháng 09- 2008 Dược sĩ Võ Thị Quế Mục Lục Đặt vấn đề 01 Ch­¬ngI - Tæng quan 02 1.1 RoTUNDIN 02 1.1.1.C«ng thøc cÊu tạo, số tính chất tác dụng dược lý 02 1.1.1 Các phương pháp định tính 03 1.1.2 Các phương pháp định lượng 03 1.2 Viên Sen Vông R 06 1.2.1.Thành phần tác dụng viên Sen vông – R 06 1.2.2 Thµnh phần tác dụng Sen 06 1.2.3 Thành phần tác dụng Vông 07 1.3 S¾c ký líp máng 08 1.3.1 Nguyên tắc cđa s¾c ký líp máng 09 1.3.2 HƯ sè di chun R f 10 R R 1.3.3 Pha tÜnh - ChÊt hÊp phô 11 1.3.4 Pha ®éng 11 1.3.5 Kü thuật tiến hành sắc ký lớp mỏng 12 1.3.6 øng dơng cđa s¾c ký líp máng ph©n tÝch kiĨm nghiƯm 15 1.3.7 Các ý chuẩn bị mỏng cho định lượng 18 1.3.8 Các biện pháp xử lý vết mỏng định lượng 19 1.4 Sơ lược sắc ký lỏng hiệu cao 21 Chương II - Đối tượng phương pháp nghiên cứu 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2 Néi dung phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Xây dựng phương pháp định lượng nhanh SKLM so sánh với HPTLC 23 2.2.2 ¸p dụng phương pháp xác định số mẫu viên Sen vông R 24 2.2.3 So sánh số phương pháp định lượng Rotundin viên Sen vông R 24 2.3 Điều kiện nghiên cứu 24 2.3.1 Máy móc dụng cụ thí nghiệm 24 2.3.2 Ho¸ chÊt 25 2.4 Xư lý kÕt qu¶ 25 Ch­¬ng III- KÕt Thực nghiệm Bàn luận 26 3.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký 26 3.1.1 B¶n máng 26 3.1.2 Chän hƯ dung m«i khai triĨn 26 3.1.3 Khảo sát cách đưa mẫu lên mỏng 30 3.1.4 Hiện màu vết mỏng 30 3.2 Lùa chän ®iỊu kiƯn xư lý mÉu 31 3.2.1 Kh¶o sát chọn dung môi xử lý mẫu 31 3.2.2 KiÓm tra tÝnh chän lọc phương pháp 34 3.2.3 ChuÈn bÞ mÉu 35 3.3 Xö lý mỏng HPTLC 36 3.4 Khảo sát khả định lượng SKLM phối hợp với máy quét văn phòng xử lý ảnh 37 3.4.1 Lý phối hợp 37 3.4.2 Quét ảnh mỏng xử lý vết ảnh thu 37 3.4.3 Khảo sát tương quan kích thước vết nồng độ mẫu 40 3.4.4 Khảo sát độ lặp lại phương pháp 43 3.4.5 Khảo sát độ phương ph¸p 44 3.4.6 ứng dụng phương pháp định lượng SKLM để định l­ỵng chÕ phÈm 45 3.5 So sánh số phương pháp định lượng Rotundin viên nén Sen vông R 47 3.5.1 Định lượng Rotundin viên nén Sen vông R HPLC 47 3.5.2 So sánh số phương pháp định lượng Rotundin viên Sen vông R 51 3.6 Bµn LuËn 54 3.6.1 Sù cần thiết phải có phương pháp định lượng nhanh sản xuất 54 3.6.2 Về cách pha mẫu 55 3.6.3 VỊ chän lùa t­¬ng quan diƯn tÝch vÕt nồng độ mẫu 55 3.6.4 Về cách thu hình ảnh mỏng 55 3.6.5 So sánh kết phương pháp HPTLC, HPLC đo bạc 57 3.6.6 ý nghĩa đề tài 58 Ch­¬ng IV-KÕt luËn 59 4.1.KÕt luËn 59 4.2 KIÕn nghÞ 60 Tài liệu tham khảo 61 Nh÷ng ch÷ viết tắt luận văn chữ viết tắt CCD camera (Charge – coupled device ý nghÜa HÖ thèng camera kết hợp camera) DĐVN Dược điển Việt Nam Quang phỉ hång ngo¹i chun FTIR d¹ng Fourier HPLC ( High performance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography) HPTLC ( High performance thin layer S¾c ký lớp mỏng hiệu cao Chromatography) KTCL Kiểm tra chÊt l­ỵng KTS Kü tht sè MS Khèi phổ 9.TCCS Tiêu chuẩn sở 10.TT Thuốc thử 11.TNTT Thí nghiệm trung tâm 12 SKLM Sắc ký lớp mỏng 13 UV Tử ngoại 14 UV/vis Tử ngoại - khả kiến Danh mục Bảng Bảng Bảng 3.1 Bảng 3.2 B¶ng 3.3 B¶ng 3.4 B¶ng 3.5 B¶ng 3.6 B¶ng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Nội dung Kết khảo sát số hệ dung môi khai triển Kết khảo sát tương quan diện tích vết với nồng độ mẫu logarit nồng độ mẫu Tương quan chiều cao pic HPTLC với nồng độ mẫu Kết khảo sát độ lặp lại chiều cao pic HPTLC diện tích vết Khảo sát độ phương pháp SKLM với kết hợp xử lý ảnh Kết định lượng mẫu chế phẩm theo phương pháp HPTLC SKLM với kết hợp xử lý ảnh Kết định lượng số mẫu chế phẩm theo phương pháp HPLC HPTLC Kết định lượng Rotundin viên Sen vông R (lô 20208) phương pháp HPLC So sánh kết định lượng viên Sen vông R (lô 20208) phương pháp HPLC, HPTLC đo bạc Trang 29 41 41 44 45 47 52 53 53 So sánh việc xử lý ảnh SKLM với kết hợp xử lý Bảng 3.10 ảnh dùng máy ảnh kỹ thuật số, máy quét HPTLC 56 Danh mục hình Hình Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Nội dung Sắc ký đồ triển khai với hệ dung dịch Rotundin chuẩn Sắc ký đồ triển khai với hệ dung dịch Rotundin chuẩn Sắc ký đồ triển khai với hệ mẫu Rotundin viên Sen vông - R Bàn chấm mẫu sắc ký CAMAG Bản mỏng với mẫu thử xử lý khác chụp ¶nh d­íi b­íc sãng 366nm HPTLC Trang 28 28 29 30 33 Hình 3.6 Sắc ký đồ HPTLC mẫu cồn 34 Hình 3.7 Bản mỏng với mẫu thử có thêm không thêm palmatin 35 Hình 3.8 Chọn công cụ điều chỉnh độ sáng độ tương phản 38 Hình 3.9 Chỉnh độ sáng độ tương phản để có vết rõ 38 Hình3.10 H×nh 3.11 H×nh 3.12 H×nh 3.13 H×nh 3.14 H×nh 3.15 Chän c«ng Measure Tool tõ c«ng cđa Photoshop Chän c«ng Color Range… tõ menu select cđa Photoshop Chọn mầu khoanh vùng hộp thoại Color Range Xác định kích thước vết sau sử dụng Color Range §­êng chuÈn Rotundin HPTLC §­êng chuÈn Rotundin sắc ký lớp mỏng kết hợp máy tính 39 39 39 40 42 43 H×nh H×nh 3.16 Néi dung ảnh chụp định lượng viên Sen vông R HPTLC phương pháp so sánh Trang 46 Hình 3.17 Sắc ký đồ mẫu thử pha methanol 48 Hình 3.18 Sắc ký đồ mẫu thử pha pha động 49 Hình 3.19 Sắc ký đồ mẫu thử chiết chloroform 49 Hình 3.20 Sắc ký đồ dung dịch mẫu chuẩn Rotundin 51 Hình 3.21 Sắc ký đồ mẫu thử Rotundin viên Sen vông - R 51 Phỉ hÊp thơ UV-VIS cđa mÉu Rotundin chn thử Hình 3.22 pha động 57 -50- Trong phạm vi đề tài này, không tiến hành đầy đủ qui trình thẩm định phương pháp định lượng HPLC Quá trình thẩm định phương pháp định lượng HPLC tiến hành nghiên cứu khác [11] Chúng khảo sát trình xử lý mẫu áp dụng định lượng viên nén Sen vông R để lấy kết trung bình nhằm so sánh kết phương pháp với phương pháp khác Mẫu chuẩn: Hoà tan khoảng 0,0420g Rotundin chuẩn 60 mL pha động, lắc siêu âm cho tan hoàn toàn, định mức thành 100 mL dung dịch Hút xác mL dung dịch cho vào bình định mức 25 ml, bổ sung pha động đến vạch Lắc lọc qua màng lọc 0,45 àm Mẫu thử: Cân xác lượng bột viên tương đương 20 mg Rotundin vào cốc có mỏ, thêm 30 mL cloroform đem lắc siêu âm 30 phút, lọc qua giấy lọc thấm ẩm cloroform Cắn lại tiếp tục đem lắc siêu âm với cloroform thêm lần nữa, lần lắc với 20 mL cloroform Lần cuối cho giấy lọc vào lắc siêu âm Gộp dịch lọc cloroform đem cô cách thuỷ đến gần cạn, để bay tự nhiên Cắn đem hoà tan pha động định mức thành 50 mL dung dịch, lọc qua giấy lọc Hút xác mL dịch lọc cho vào bình định mức 25 mL, bổ sung pha động đến vạch Lắc lọc qua màng lọc 0,45 àm Sắc ký mẫu chuẩn mẫu thử với điều kiện mục 3.5.1.1 thu hình 3.20 3.21 -51- Hình 3.20 - Sắc ký đồ dung dịch mẫu chuẩn Rotundin Hình 3.21 - Sắc ký đồ mẫu thử Rotundin viên Sen vông R 3.5.2.So sánh số phương pháp định lượng Rotundin viên Sen vông R: Tiến hành định lượng với lô viên nén Sen vông R, lô làm mẫu, kết định lượng trung bình ghi bảng 3.7 -52- Bảng 3.7 - Kết định lượng số mẫu chế phẩm theo phương pháp HPLC HPTLC Hàm lượng % so với nhãn Hàm lượng Rotundin (mg/viên) Số lô sản xuất Khối lượng trung bình viªn (g) 10107 0,2208 87,57 13,14 13,92 20907 0,2203 92,33 13,85 14,07 31007 0,2221 93,83 14,07 15,10 41007 0,2334 95,65 14,35 14,38 20208 0,2208 93,36 13,94 13,81 30408 0,2205 90,76 13,61 13,74 tÝnh theo HPLC tÝnh theo HPLC tÝnh theo HPTLC p = 0,1252 So sánh giá trị trung bình hàm lượng Rotundin mẫu với phương pháp định lượng HPLC HPTLC Kết cho thấy khác biệt hàm lượng viên phương pháp HPLC HPTLC ý nghĩa thống kê (p =0,1252) Theo tiêu chuẩn sở, Rotundin viên Sen vông R định lượng phương pháp đo bạc sau tiến hành chiết cloroform Chúng tiến hành định lượng lô 20208 phương pháp HPLC, HPTLC đo bạc Mỗi phương pháp làm lần để lấy giá trị trung bình so sánh kết với Kết chi tiết với phương pháp HPLC thu bảng 3.8 Trong mẫu định lượng khác ngày so với mẫu 3, Mẫu pha lượng mẫu cân tương đương 40mg Rotundin vào bình định mức 50mL dung dịch, hút 5mL pha thµnh 50 mL MÉu 3,4,5 còng -53- pha lượng mẫu cân thành 50mL dung dịch, hút 3mL pha thành 25mL dung dịch đo Bảng 3.8 - Kết định lượng Rotundin viên Sen vông R (lô 20208) phương pháp HPLC Mẫu chuẩn STT MÉu thö m c (g) S (mAu*s) 0,0420 311,7 R R 0,0423 393,1 S (mAu*s) 231,1 m t (g) Hàm lượng Rotundin (mg/viên) 0,2298 13,98 232,0 0,2300 14,03 366,5 0,3072 13,86 366,0 0,3061 13,89 369,7 0,3086 13,92 R R Trung bình 13,94 Bảng 3.9 - So sánh kết định lượng viên Sen vông R (lô 20208) phương pháp HPLC, HPTLC đo bạc STT Trung bình RSD (%) S2 P Hàm lượng Rotundin (mg/ viên) theo pp Đo bạc theo pp HPLC theo pp HPTLC 12,85 12,47 12,36 12,47 12,63 12,56 1,52 0,0363 13,98 14,03 13,86 13,89 13,92 13,94 0,49 0,0047 13,76 13,83 13,78 14,07 13,63 13,81 1,17 0,0259 3,41.10-07 P p 0,1579 3,44.10-06 P -54- Các số liệu thực nghiệm thu từ phương pháp với lần thử khác mô tả bảng 3.9 Kết xử lý thống kê cho thấy khác độ tập trung liệu phương pháp khác ý nghĩa thống kê Các test F pp đo bạc-HPLC, HPLC-HPTLC HPTLC - đo bạc có giá trị p lớn 0,05 với giá trị cụ thể là: 0,0737 ; 0,1281 0,7527 Giá trị trung bình thu phương pháp HPLC HPTLC khác ý nghĩa thống kê (p=0,1579) phương pháp với phương pháp đo bạc khác có ý nghĩa thông kê với giá trị p thu nhỏ (3.10-7 3.10-6) P P P P 3.6 Bµn LuËn: 3.6.1 Sù cần thiết phải có phương pháp định lượng nhanh sản xuất: Rotundin viên Sen vông R trước đưa vào sản xuất qua khâu kiểm tra nguyên liệu đạt tiêu chuẩn hàm lượng theo DĐVN III (bản bổ xung, yêu cầu hàm lượng Rotundin phải lớn 98,0% tính theo chế phẩm khan) §èi víi c¸c chÕ phÈm chØ chøa nhÊt mét thành phần Rotundin việc định lượng tương đối dễ dàng qui định số dược điển Tuy nhiên có mặt số alcaloid thành phần khác cao sen, cao vông gây trở ngại cho trình định lượng nhanh phải qua trình chiết tách Xác định hàm lượng Rotundin hạt để điều chỉnh khối lượng viên cho thành phẩm đạt yêu cầu hàm lượng yêu cầu thiếu Việc cần tiến hành nhanh với sai số cho phép để trình sản xuất diễn liên tục Chưa tính đến sai số, phương pháp định lượng Rotundin nêu tiêu chuẩn sở không đáp ứng thời gian chờ đợi khâu kiểm tra bán thành phẩm trình sản xuất Mặt khác, phương pháp -55- định lượng cần có phải không đòi hỏi trang thiết bị phức tạp để triển khai phân xưởng sản xuất Phương pháp định lượng Rotundin SKLM kết hợp với xử lý ảnh máy tính cần thời gian định lượng khoảng 20-30 phút phù hợp với điều kiện kiểm tra bán thành phẩm viên trình sản xuất Các thiết bị cần thiết đơn giản, rẻ tiền phổ biến đơn vị nên sử dụng phối hợp với nhiều mục đích 3.6.2 Về cách pha mẫu: Đối với phương pháp SKLM, dịch chấm sắc ký không thiết phải thật tinh khiết mà yêu cầu dung môi hoà tan hoàn toàn Rotundin vết Rotundin tách rời hoàn toàn khỏi hỗn hợp chất khác Qua khảo sát thực nghiệm chọn cồn làm dung môi hoà tan vừa đạt yêu cầu vừa đảm bảo nhanh chóng, rẻ tiền không độc hại Đối với phương pháp HPLC yêu cầu pic sắc ký đồ phải tách rời nhau, dịch chiết phải tương đối tinh khiết để đảm bảo không ảnh hưởng đến cột sắc ký Do chọn phương pháp chiết Rotundin cloroform, cô cạn, hoà tan pha động tiêm Phương pháp nhiều thời gian pic thu gọn tách rời, đạt độ cao 3.6.3 Về chọn lựa tương quan diện tích vết nồng độ mẫu: Nhiều tác giả sử dụng tương quan diện tích vết với nồng độ mẫu Trong trờng hợp nghiên cứu hình dáng vết hình tròn mà hình ellipse tương quan không thật tuyến tính Thử nghiệm khảo sát quan hệ diện tích vết với logarit nồng độ kết khả quan nhiều Do chọn quan hệ để xây dựng đường chuẩn phép định lượng 3.6.4 Về cách thu hình ảnh mỏng: Sử dụng máy quét ảnh văn phòng sở tận dụng thiết bị tin học có -56- Phòng đảm bảo chất lượng Nếu có máy ảnh kỹ thuật số có độ phân giải từ megapixel trở lên việc thu thập hình ảnh nhanh chóng kết phép đo tốt Chúng thử nghiệm chụp ảnh mỏng số 38 đo mật độ vết HPTLC quét ảnh máy quét sau màu đo kích thước Kết so sánh thể hiƯn ë b¶ng 3.10 KÕt qu¶ cho thÊy cïng mét mỏng hệ số tương quan tỷ lệ thu hồi nâng lên đáng kể Với nồng độ tăng thêm 0,1619mg/mL tỷ lệ thu hồi nâng lên từ 93,48% (trong sử dụng máy quét) lên 97,75% sử dụng máy ảnh kỹ thuật số Lợi có nhờ số điểm ảnh tăng lên nên sai số đo giảm Bảng 3.10 - So sánh việc xử lý ảnh SKLM với kết hợp xử lý ảnh dùng máy ảnh kỹ thuật số, máy quét HPTLC Vết Lg(C* 100) S1 W H W*H W*H H HPTLC (Pixel) (pixel) (pixel) ảnh máy ảnh KTS ảnh máy quét 1,3852 836 523 437228 6900 2078,20 S2 1,5613 1321 891 1177011 12600 2623,20 S3 1,7831 1846 1298 2396108 20350 3241,30 S4 1,9873 2099 1511 3171589 23750 3853,50 S5 2,0842 2215 1492 3304780 29400 4427,80 HƯ sè t­¬ng quan r 0,9928 0,9919 R 0,9901 Máy ảnh kỹ thuật số ngày phổ biến nên việc ứng dụng khả thi Tuy nhiên với thu hình ảnh máy ảnh kỹ thuật số người tiến hành cần có kinh nghiệm sử dụng máy quét Tốt trường hợp cần có giá để cố định máy chụp ảnh tránh chụp không thẳng góc với mỏng -57- Kết so sánh thống kê phương pháp định lượng máy HPTLC sử dụng máy quét kết hợp với xử lý ảnh cho thấy khác hàm lượng mẫu ý nghĩa Vì để kiểm tra bán thành phẩm, sở sản xuất trang bị máy quét văn phòng kết hợp với máy tính cá nhân để đo diện tích vết thay phải trang bị máy HPTLC tốn nhiều chi phí 3.6.5 So sánh kết phương pháp HPTLC, HPLC đo bạc: Trong chế phâm Sen vông- R Rotundin có nhiều alcaloid khác cao sen, vông có công thức cấu tạo khung isoquinoline giống Rotundin gây sai số trình định lượng theo TCCS Phỉ UV – VIS cđa dung dÞch mÉu chn thử pha động HPLC bước sóng 281nm cho thấy độ hấp thụ mẫu thử cao mẫu chuẩn (Hình 3.22) Tuy nhiên, mẫu phương pháp HPLC, diện tích pic mẫu thử lại nhỏ mẫu chuẩn sắc ký ®å cã thªm mét pic nhá ë thêi gian l­u 3,49 phút (hình 3.21) Đây alcaloid dạng base có hỗn hợp cao sen, vông hoà tan cloroform Hình 3.22 - Phỉ hÊp thơ UV-VIS cđa mÉu Rotundin chn vµ thư pha động -58- Khi định lượng phương pháp đo bạc, alcaloid dạng base tác dụng với acid tạo thành muối sử dụng AgNO để định lượng KI dư Vì R R dịch chiết cloroform alcaloid Rotundin mà có thêm alcaloid khác có cấu trúc tương tự, lượng KI phản ứng nhiều gây sai số thiếu Trong dùng phương pháp HPLC chất tách riêng, không ảnh hưởng đến kết thực mẫu Kết xử lý thống kê cho thấy khác hàm lượng xác định phương pháp đo bạc phương pháp sắc ký có ý nghĩa Trong phương pháp sắc ký với sai khác ý nghĩa thống kê kết định lượng sắc ký cho kết tốt Do nên bổ sung áp dụng phương pháp HPLC vào tiêu chuẩn sở để định lượng Rotundin viên Sen vông R Vì Phòng KTCL có trang bị thiết bị HPLC ngày sử dụng phổ biến HPTLC cho kết tương tự HPLC thiết bị chưa thật phổ biến tận dụng thiết bị văn phòng có để thay hệ thống xử lý mỏng Việc sử dụng cho kết chấp nhận kết thời gian phân tích phù hợp với yêu cầu kiểm tra chất lượng bán thành phẩm để điều chỉnh khối lượng viên sản xuất Phương pháp đo bạc có sai số lớn nhiều nguyên nhân nên sở sản xuất cần có hướng điều chỉnh lại TCCS cho phù hợp, góp phần giảm bớt tiêu hao nguyên liệu sản xuất có kết xác 3.6.6 ý nghĩa đề tài: Việc trang bị máy quét sở sản xuất tốn không nhiều chi phí Do kết nghiên cứu đề tài định lượng Rotundin bán thành phẩm viên Sen vông R b»ng SKLM lµ cã thĨ øng dơng vµo viƯc kiểm tra chất lượng trình sản xuất phân xưởng -59- Phần IV Kết luận 4.1.Kết luận: Qua nghiên cứu đề tài rút sè kÕt ln sau: Víi b¶n máng Silicagen 60 GF 254 (MERCK) hệ dung môi khai triển R R Cloroform: Aceton: Diethylamin (10:10:2) tách riêng Rotundin khỏi thành phần khác mẫu thử chuẩn bị từ viên nén Sen vông-R Cồn chọn làm dung môi chiết pha mẫu cồn đơn giản, không độc nhanh chóng, không bị sai số trình chiết xử lý dung môi khác Trong điều kiện sắc ký vết Rotundin có giá trị R f khoảng 0,68 R R có hình ellipse đường chuẩn phương pháp xác lập dựa quan hệ diện tích vết logarit nồng độ Phương pháp định lượng Rotundin SKLM kết hợp với xử lý ảnh máy tính cần thời gian định lượng khoảng 20-30 phút phù hợp với điều kiện kiểm tra bán thành phẩm viên trình sản xuất Phương pháp xây dựng thẩm định độ lặp lại tương đối tốt, khoảng nồng độ tuyến tính phù hợp với độ pha loãng mẫu có độ ®óng chÊp nhËn ®­ỵc víi tû lƯ thu håi trung bình 94,89% Phương pháp áp dụng để định lượng Rotudin mẫu chế phẩm kết thu hàm lượng khác ý nghĩa thống kê so với sử dụng sắc ký lớp mỏng hiệu cao Các mẫu thử nghiệm đạt yêu cầu hàm lượng so với tiêu chuẩn sở -60- Phương pháp HPLC HPTLC áp dụng để định lượng Rotundin viên Sen vông R cho kết khác ý nghĩa Phương pháp đo bạc có nhiều sai số cho kết khác có ý nghĩa thống kê so với phương pháp sắc ký 4.2 KIến nghị: Đề nghị Công ty cổ phần dược phẩm Trung Ương II điều chỉnh lại TCCS, dùng phương pháp SKLM để kiểm tra bán thành phẩm dùng phương pháp HPLC để kiểm tra hàm lượng Rotundin chÕ phÈm Sen v«ng - R ∗ TiÕp tục nghiên cứu đề phương pháp định lượng alcaloid khác viên Sen vông R chẳng hạn nuciferin có cao sen để kiểm soát chặt chẽ chất lượng sản phẩm -61- Tài liệu tham khảo *Tài liệu tiếng Việt: Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội (2003), Bài giảng dược liệu tập II, NXB Y học, tr.5- 34, 94 100 Bộ môn dược học Quân sự, Học viện quân Y (2000), Tiêu chuẩn sở Rotundin sulfat Bộ Ytế (2002), Dược điển ViÖt Nam III, NXB Y häc, tr.321 - 322, 457, 503 Bộ Ytế (2006), Dược điển Việt Nam III (b¶n bỉ sung), NXB Y häc, tr.580 – 581 Bộ môn hoá hữu cơ, Trường đại học Dược Hà Nội (2005), Hoá học hữu cơ, Trung tâm thông tin thư viện Đại học Dược Hà Nội, tr 269 - 270 Bộ môn hoá phân tích, Trường đại học Dược Hà Nội (2006), Hoá phân tích II, Trung tâm thông tin thư viện Đại học Dược Hà Nội, tr 214 - 222 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Yhọc, tr.95-96 Nguyễn Minh Chính (2001), Nghiên cứu tách chiết Rotundin từ củ số loài bình vôi (thuộc chi Stephania Lour.), điều chế Rotundin sulfat để bào chế thuốc tiêm, Luận án tiến sĩ dược học, Học viện quân y, Hà Nội Công ty cổ phần Dược phẩm Trung Uơng II (2007), Tiêu chuẩn sở viên bao Sen vông R 10 Phạm thị Cúc (1984), Các số liệu kiểm nghiệm phương pháp sắc ký alcaloid chế phẩm, Luận án phó tiến sĩ dược học, Viện hoá dược, Trường đại học Y Budapest 11 Phạm Thị Duyên (2004), Nghiên cứu định tính định lượng L Tetrahydropalmatin dược liệu bình vôi chế phẩm viên hoàn BaloK, viên nang cứng Heantos phương pháp sắc ký lỏng -62- hiệu cao, Luận văn thạc sĩ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội 12 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học thuốc, Nhà xuất Y häc, tr.42 – 54, 199 - 201 13 NguyÔn Quèc Huy (2001), Nghiên cứu loài Stephania dielsiana.Y.C Wu thu hái Hà Tây, Luận văn thạc sỹ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội 14 Đỗ Tất Lợi (1999) Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr.786-788,779,787 15 Nguyễn Thị Nhung (2001), Nghiên cứu sen, đặc điểm thực vật thành phần hoá học sen, Luận văn thạc sĩ dược học, Trường đại học Dược Hà Nội 16 Thái Nguyễn Hùng Thu (2005), ứng dụng sắc ký lớp mỏng phân tích kiểm nghiệm thuốc, Bài giảng cao học chuyên ngành Kiểm nghiệm thuốc độc chất, Trường Đại học Dược Hà Nội 17 Thái Nguyễn Hùng Thu , Phan Đình Châu, Hồ Đức Cường (2000), "Phối hợp sắc ký lớp mỏng máy vi tính để định lượng sản phẩm số hỗn hợp phản ứng ether hoá dihydroartemisinin, Tạp chí Dược học, 2000, tr.20 - 23 18 Nguyễn Đức Toàn, Nguyễn Tuấn Anh, Phạm Thị Giảng (2001) Phát có mặt Rotundin hỗn hợp nhiều dược liệu phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, Thông báo kiểm nghiệm, (2), tr.8 - 11 19 Nguyễn Văn Tựu (1991), Nghiên cứu vông nem (eythrica orientalis.L) Murr số tỉnh miền bắc Việt nam, Luận án phó tiến sĩ khoa học, Trường Đại học Dược Hà Néi -63- 20 Kurt Randerath, (1974), S¾c ký líp máng, Nguyễn Hữu Bảy, Trần Trung Nam dịch, Nhà xuất Y häc, tr 102 – 107, 127 - 130 21 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thc ë ViƯt Nam, NXB Khoa häc vµ Kü tht, 2004, 210-215 22 Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng, Trần Thị Mỹ Linh, Phạm Hùng Việt (1985), Các phương pháp s¾c ký, NXB Khoa häc kü tht, 225-273 23 Ngun Tiến Vững (2000), Nghiên cứu thực vật, hoá học tác dụng sinh học số loài thuộc chi Stephania, Luận án Tiến sĩ, Trường đại học Dược Hµ Néi * Tµi liƯu tiÕng n­íc ngoµi: 24 W Dammertz and E Reich (2001), Planar chromatography and densitometry, Budapest 2001 25 Delavigne, Roger (1993), “Tetrahydropalmatin”, Journal francais codex Publ 680809, p.3 26 European Pharmacopoeia (2002), Elish Edition Vol I p 38 – 39, 61 - 65 27 D Jaenchen and E Reich (2000), Planar chromatography Intrumentation, London Academic Press, p 839-847 28 S.W Pelletier (1970) Chemistry of the alkaloids, Van Nostrand Reinhold company, P.56 – 58 29 Pharmacopoeiae of the People,s Republic of China(1997), English Edition P P Vol II, p.173 -174 30 Pharmacopoeiae of the People,s Republic of China (2000), English P P Edition, Vol I, P.A- 35,A-36,Vol II, p.599 -601 31 The Merck Index 12th edition (1996), p.1574 – 1575 P P 32 ¸.S¸rkoezi, G.Janics¸k, L Kursinazki, ¸ Kery (2007) “Alcaloid”, Camag biobliography service planar chromatography CBS 99, p.14 - 15 -64- 33 Joseph Sherma (2003), Handbook of Thin - Layer Chromatography, Marcel Dekker, 2003, p 277-306 34 World Health Organization, (1998) Quality control methods for medicinal plant, ... NO Phương pháp Dược điển Trung Quốc năm 2000 áp dụng để định lượng Rotundin nguyên liệu Tiêu chuẩn sở viên bao Sen vông - R dùng phương pháp để định lượng Rotundin trước phải chiết riêng Rotundin. .. nh­ sau: -8- R 1O N R 2O R3 O R1 H H H CH CH R Erysopin Erysonin Erysodin Erysovin Erysotrin R R R2 H CH CH H CH R3 CH H CH CH CH R R R R R R R R R Alcaloid toµn phần vông nem độc, LD 50 306,4mg/kg... lượng Rotundin viên nén Sen vông R 47 3.5.1 Định lượng Rotundin viên nén Sen vông R HPLC 47 3.5.2 So sánh số phương pháp định lượng Rotundin viên Sen vông R 51 3.6 Bµn