Góp phần nghiên cứu phương pháp định lượng artesunat trong chế phẩm viên nén

BỘ Y TÊ' BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ■ TRƯỜNG ĐẠI HỌC ■ ■ Dược HÀ NỘI ■ ■ ĐỖ THỊ THẢO GÓP PHẦN NGHIÊN cứu PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ARTESUNAT TRONG CH ế PHẨM LUẬN VĂN THẠC SỸ ■ • CHUYÊN NGÀNH: KIỂM n g h iệ m Mà SỐ : 3.02.05 v iê n n é n Dược dược ■ PHẨM HỌC ■ độc chất học Hướng dẫn khoa Ììọr TS TRẦN ĐỨC HẬU HÀ NỘI - 2001 M ởl e ả n t đ n ^ r u ií h ê í ỉ i < ie iti í4 tíu t t lt n h e tia (S a n ụ iá m h ìỉu , ^ p k ị n ụ e e b t n ê t i tr ế iự ^ i liM lừ i th u h ỉè n ỉ u ậ t t lù í t t n ụ Q ^ ê i x in h ÌL iẬ t t í ja 'à i ỉk ầ iẬ ỊỊÌú p tở đ ìm it t o sau it ụ q u a n e ủ u ỉ ò i it d t iỉ p đ ỗ ’ lù k Ỉ i 'u t ị ỉ t i ỉta t t t lt ữ t t ụ ỉ r h t lt h ọ f tạ p n ỈL ẩ Ì t ổ ỉ t í ẫ n f it ã U itth q u lu u t f t l'u ’e 'ttg ÌÍÌM I iu e h ề ttụ tíh n , ỊỊÌ ú ft đ õ ’ i k o ú f e e p h è it ị ^ O ổ n '!H ')à n ê i tr m t ụ ỉm u Ị lù ê í ổ n tr a *1 í ự e ả tn t t t jh ih n í n h quụ Q C rầ tt ^ Đ ứ a n h iễ u e ttụ h íu t t p tìtt g ií/íp i í t ố i m tẩ ỉrh di ttahìitt eứu tùi íUựe hiệtt /ỉiíỊtt tiủết • • • íTiờ/ e ũ tn ị x in ’Ỹ ĩr itụ ^ ì d t t t d lu â n ỗ ì Q ĩê i ĩt ũ â ip m tụ ụ ù íp O iồ t t iồ it '? ỗ o ú O J tt’o 'e - itỡ ’, it Ị ú t n t ì ỉ đ ĩễ u k lè t t itê tm tt t t ù iị t ò ỉ af'/Vf h tj t ẩ e n h ă tt t ụ i ỦẨÍỪ itư n ií t â t t it ã t í it c ú e t k ầ ụ ^ Đ i k o ỉ ^ O đ e '3 f)ù t i k ũ ù n th n h Pm ả tn íị ttụ h iê í Ổ*1 t i t ấ t e ả t ậ p th è tù í lừ te ê n e ù u ụ , t ô i !%ồ e ìín q itỗ ế tụ íù è tt íừ t ịt ê i lò it ợ eẩm ụ it t p đết ụ ì it ẵ đ ìễ th , hạn í ĩỉ đ ĩ t i h t ì ù t t th n h tù í ítụ i Í t í â t t ix ă n tù tụ Hà N ội, tháng 11 năm 2001 Đ ỗ Thi Thảo MUC LUC Đ Ặ T VAN Đ Ể PHẦN 1- TỔNG QƯAN 1.1 Tong quart vê cáy hao hoa vàng hoạt chất 1.1.1 C ây h ao h o a vàng 1.1.2 T hành p h ần h o học hao h o a vàng 1.2 Đ ại cương vê artesunat 1.2.1 1.2.2 1.2.3 1.2.4 1.2.5 1.2.6 1.2.7 C ông thức P hương pháp điều c h ế T ính ch ất artesu n at Cơ c h ế tác d ụ n g D ược đ ộ n g học Đ ộc tính ’ C h ế phẩm 8 11 11 12 12 13 1.3 Các phương pháp định lượng artesunat nguyên liệu 13 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 1.3.5 1.3.6 1.3.7 Phương pháp đo q u an g phổ hấp thụ vùng tử ngoại Phương pháp H PLC với D etecto r u v Phươiìg pháp H PL C với d etecto r k húc xạ kế P hương pháp H PL C với d etecto r điện h o Phương pháp đo k iềm m ôi trường nước Phưonig pháp đo kiềm tro n g m ôi trưòỉng k han Phương pháp đo phổ hấp thụ vùng k h ả kiến d ạng m uối h y d ro x am at sắt 1.3.8 Các phương pháp địn h lượng khác: 1.4 Các phương pháp định lượng artesunat viên nén áp dụng nước ta 13 14 15 15 15 16 16 16 17 l 4.1 Phương pháp q u an g phổ 1.4.2 Phươiìg pháp đo kiềm m trưịfng nước 17 18 1.5 18 N hận xét lựa chọn PHẨN - ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u 2.1 2.2 Đ ối tượng nghiên cứu P hương tiện, dụng cụ, hoá chất: 2.2.1 D ụng cụ, m áy m óc: 2.2.2 H ố chất 2.3 Phương pháp nghiên cứu 20 PHẦN - THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 3.1 Khảo sát tính đặc hiệu m ột sô phươ ng pháp sử dụng đ ể định lượng artesunat 21 21 3.1.1 K h ảo sát tính đăc hiêu phương pháp H PL C d etecto r u v 235nm 21 3.1.2 K hảo sát tính đặc hiệu củ a phương pháp đo quan g phổ hấp thụ vùng tử n goại 289nm 3.1.3 K hảo sát tính đặc h iệu củ a phương pháp đo quan g phổ hấp thụ vùng k h ả kiến 3.1.4 K hảo sát tính đặc hiệu phương pháp đo kiềm m ôi trường nước 3.2 Khảo sát lượng D H A ạcỉd succinic có m ặt viên nén artesunat m ột s ố sở sản x u ấ t 3.2.1 K h ảo sát lượng D H A có m ặt viên nén artesu n at m ộ t số sở sản x u ấ t 3.2.2 K h ảo sát lượng acid succinic có m ặt viên nén artesu n at m ộ t số sở sản x u ất 3.2.3 Đ ịn h lượng artesu n at viên nén theo phương pháp ghi tiêu ch u ẩn sở 3.3 Cải tiến phươ ng pháp định lượng artesunat đo quang p h ổ tử ngoại 289nm 3.3.1 Cải tiến phương pháp địn h lượng artesu n at ngu y ên liệu đo quan g phổ tử n goại 289nm 3.3.2 Cải tiến phương pháp định lượng aite su n a t viên n én b ằng đo q u an g phổ tử n goại 289nm 3.3.3 Đ án h giá phương pháp 3.3.3.1 X ác địn h tính c h ín h xác phương pháp 3.3.3.2 X ác đ ịn h tính đ ú n g phưofiig pháp 3.3.3.3 X ác đ ịn h tính tu y ến tính phương pháp 3.3.3.4 X ác đ ịn h tính đặc hiệu phương pháp 3.4 Cải tiến phư ng pháp định lượng artesunat đo quang p h ổ hấp thu vùng kh ả kiến 3.4.1 Cải tiến phương pháp địn h lượng artesu n at ngu y ên liệu đo quan g phổ h ấp thu vùng khả kiến 3.4.2 Cải tiến phưofiig pháp địn h lượng artesu n at viên nén đo quan g phổ h ấp thu vùng khả kiến 3.4.3 Đ áiih giá phương pháp 3.4.3.1 X ác địn h tính ch ín h xác phương pháp 3.4.3.2 X ác địn h tính đ ú n g phương pháp 3.4.3.3 X ác địn h tính tu y ến tính phương pháp 3.4.3.4 X ác địn h tính đặc hiệu phương pháp 3.5 B iện luận kết 24 26 27 28 28 31 33 35 35 36 38 38 39 40 41 42 42 44 46 46 46 48 49 50 KẾT LUẬN 51 TÀI LIỆU THAM KHẨO 53 ĐẶT VÂN ĐỂ Sốt rét m ộ t b ện h xã hội, dễ bị lây nhiễm , gây ký sinh tm n g sốt rét, ký sinh trù n g thuộc chi P lasm odium N hữ ng loài gây bệnh cho người chủ yếu gồm : - F la sm o d iu m fa lc ip a m n i - F la sm o d iu m m a la ria e - F lasn io d iu m vivax T rong đó, tỷ lệ m ắc bệnh F.fa lc ip a ru m 70% , F viva x 20 - 30% , p m a ìa ria e ch iếm tỷ lệ nhỏ, k h o ản g 1-2% Do đặc đ iểm tác nhân tru yền bệnh m uỗi, bệnh có tính ch ất dịch tễ quan trọng có th ể lan tràn thành dịch k hông p h át h iện ngăn chặn kịp thời Bệnh p h át triển n hiều nước th ế giới, đặc biệt nhữ ng nước nhiệt đới có k h í hậu ẩm thấp (nóng, ẩm , m a nhiều) T heo số liệu Tổ chức Y tế th ế giới (W H O ) có k h o ản g 100 đ ến 200 triệu ca sốt rét với m ức tử vong từ tới 1,5 triệu ca m ỗi n ăm [14],[21] T heo Bộ Y tế, nước ta h àn g n ăm có triệu ca sốt rét, có 30000 ca sốt rét ác tíiih [15] V iệc k iểm soát b ện h sốt rét khó khăn, có tới 1,7 tỷ người sinh sống nhữ ng vùng m trước sốt rét bị đẩy lùi, p h át triển m n h trở lại H iện ký sinh trùng sốt rét k háng lại hầu hết loại thuốc quen thuộc: Q uinin, C loroquin, Q uinacrin, M eflo q u in , làm cho việc đ iều trị sốt rét n g ày trở nên khó k hăn [21] D o vậy, ngày việc nghiên cứu tìm sản x u ất thuốc m ới chữa sốt rét đ ã trở thàiih m ộ t yêu cầu cấp bách V đầu thập n iên 70, nhà khoa học T rung Q uốc đ ã chiết xuất từ T hanh h ao h o a vàng m ột chất có tác dụng điều trị bệnh sốt rét gọi Q uing h ao su (Q H S) artem isinin, V iệt N am , T hanh hao hoa vàng đ ã trồ n g ch iết xuất artem isinin C hất có vịng S ecquiteipen lacto n có nhóm Peroxyd nội phân tử C hất đ ã chứng tỏ ^ có hiệu lực ch ố n g sốt rét tốt kể với nhữ ng b ệnh nhân m ắc chủng kháng thuốc, th ế nữa, artem isin in d ẫn ch ất có khả n ăn g vượt qua h àn g rào m áu n ão n ên có h iệu lực điều trị sốt rét thể não [9] T uy nhiên, độ tan củ a artem isin in nước tỷ lệ tái phát sau dùng cao n ên tác d ụ n g đ iều trị củ a artem isin in phần bị h ạn chế Đ ể h oàn thiện khả n ăn g điều trị củ a artem isin in , nhà k hoa học đ ã tiếp tục n g h iên cứu bán tổng hợp m ộ t số d ẫn ch ất m ới như: artesu n at, artereth er arterm eth er có tác d ụ n g đ iều trị cao h n artem isinin, đ n g thời sử d ụ n g đường tiêm T rong số ch ất artesu n at d ù n g phổ b iến n h ất h iện Nước ta h iện n ay đ ã sản xuất artesu n at đ an g đưa vào sản x u ất với q uy m ô lớn V iệc k iểm tra ch ất lượng viên n én artesu n at (dạng bào ch ế phổ b iến nh ất) q u an trọng T uy nhiên, thực tế, việc định lượng artesu n at viên n én sở cho thấy Iihiều điều b ất cập, thường cho kết q u ả cao, phụ thuộc người định lượng Đ ể làm sáng tỏ k ế t q uả định lượng n ó i trên, đồng thời góp phần làm sở xây dựng tiêu ch u ẩn Dược điển V iệt N am , đề tài , n g tiến h àn h đề tài: "G óp phần n g h iên cứu phương p háp định lượng artesu n at ch ế phẩm viên nén" với nhữ ng m ụ c tiêu sau: • X ác địn h tíiih đặc hiệu phương p háp định lượng artesu n at viên n én nước ta m ộ t số phương pháp định lượng artesu n at khác • T im cách tiến h ành định lượng m ới để có phương pháp đặc hiệu áp d ụ n g địn h lượng artesu n at viên nén PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vé cáv hao hoa vàng hoat chất nổ 1.1.1 Cây hao hoa vàns T hanh hao h o a vàng thuốc cổ truyền T m n g quốc sử d ụ n g lâu đời T ro n g tài liệu Y học cổ tru y ền T m n g Q uốc có nói đến Q u in g h ao ghi chép sớm n h ất chữ a tới 52 loại bện h , có b ện h sốt rét Từ đời H án, nhữ ng n ăm 168 tiuớ c C ông n g u y ên , người ta d ù n g Q u in g h ao để chữa bệnh N gười T rung Q uốc đ ã đề x u ất cách h sốt sau: dùng m ộ t nắm Q u in g h ao n g âm m ộ t lít nước, lọc lấy nước uống Sau đó, Lý Thời T rân viết tro n g “ B ản thảo cương m ụ c ” năm 1595 dùng ch ế p h ẩm Q u in g h ao để chữa lạiứi n sốt sốt rét N g ày nay, n h k h o a học xác địn h Q u in g h ao có tác dụng chữa sốt rét T h an h h ao h o a vàng tên k h o a học là: A rtem isia an n u a L A steraceae T heo Tổ chức Y tế th ế giới (W H O ), T rung Q uốc M ỹ có k h o ản g 40 loài thực vật thuộc chi A rtem isia, ng có lồi A rtem isia a m u a L chứa h o ạt ch ất có tác d ụ n g chữa sốt rét V iệt N am đ ã b iết có 15 lồi, có lồi dễ lứiầm lẫn với n h au là: A rtem isia capillaris, A rtem isia cam pestric, A rtem isia apiaceae H an ce A rtem isia an n u a L.; loài A rtem isia capillaris, A rtem isia cam p estric, A rtem isia ap iaceae H an ce k h ô n g a artem isin in [10] • Đ ặc đ iểm h ìn h th T hanh h ao h o a vàng: T hanh h ao h o a vàng loại thảo sống lâu năm , m ọc hoan g thành đám vùng đồi n ú i ven suối, ven sông C ây cao từ 1,5 - 2m L xẻ lông chim lần, th àn h p h iến h ẹp, phủ lơng m ềm Có m ù i thơm C ụm h o a hình cầu họp thành m ộ t ch u ỳ kép L bắc tổng bao, hình trứng ho ặc h ìn h bầu dục H oa m àu vàng lứiạt, m ỗ i cụ m h o a gồm sáu hoa: h o a lưỡng tíiih, xung quaiih h o a H oa có k ích thước 0,5- Im m Q uả b ế h ình trứng, dài Im m M ặt vỏ có tuyến chứa tin h dầu T rên thị trường T rung Q uốc, thư ờng bị trộn m ột khác gọi h o àn g cao h ay xú cao họ Cúc ng quan h năm m àu vàng lục có m ùi hơ i, hao h o a vàng thật m ùa thu m ới vàng, cị n trước có m àu lục [11] T h an h h ao h o a vàng phân b ố Iihiều nơi th ế giới n hư T rung Q uốc, N hật Bản, M ô n g cổ, Ấ i Đ ộ, Iran, Bắc M ỹ, Đ ô n g  u , [10],[11] Tại V iệt N am , T hanh h ao h o a vàng cịn có m ộ t số tên khác như; T hanh cao h o a vàng, n g ải si, ngải dại, ngải đắng, ngải hôi, ngải hoa vàng, ngải, , m ọc h o an g dại thàiứi cụm dọc ven sông, suối, ch ân đồi nơi ẩm thấp án h sáng nhiều C ây m ọc n hiều tỉn h phía Bắc như: L ạng Sơn, Q uảng N inh, Cao B ằng, Bắc K ạn, Thái N guyên, H Bắc, V ĩnh Phú, T uyên Q uang, H B ình, dọc tỉnh m iền T rung; T h an h H óa, N ghệ A n , [1 ],[1 1] Thời gian thu hái tố t n h ất vào tháng 8, lúc ch u ẩn bị h o a [11] 1.1.2 T hành phần hoá hoc T hanh hao hoa vàns: T ất phận tro n g T hanh hao h o a vàng có chứa tinh dầu h àm lượng tinh dầu T h an h hao kh ác nhau, phụ thuộc vào giống nơi trồng, d ao đ ộ n g từ k h o ản g 0,5 - 0,6% T inh dầu có m àu vàng n h ạt có m ùi long não với thàiứi p h ần chủ yếu cam phor, 1,8-cineol, p fam esen , |3 caryophyllen, p cubeben, artem isia ceton, p m y r c e n [ 1 ] - N gồi th àn h p h ần tinh dầu h o ạt ch ất có tác d ụ n g điều trị sốt rét artem isin in m n h k h o a học T ru n g Q uốc đ ã chiết tách xác định cấu tn ic từ năm 1972, m ộ t secq u iteip en lacton có cầu nối p ero x y d nội phân tử N gồi artem isin in , người ta cị n xác đ ịn h m ộ t loạt hợp ch ất secqiiiterpen khác sau [12]: D eoxy artem isin in A rtem isin in A rtem isitin (Q uin g h ao su II) H^C H 2Ơ ^C 00H A cid artem isinic Q uinghao Su I (A rtean u in A ) Q u in g h ao Su IV Q uinghao Su III D eoxy artem isin in A rtean n u in F CH3 Q uin g h ao Su V (A itean n u in E) H in h 1.1: H ợp chất serquiterpen 1.2 Đai cu(mg artesunat: 1.2.1 CƠÌ1 thức: A rtesu n at H ình 1.2: C ông thức artesunat - C ông thức phân tử củ a artesunat: - T rọng lượng phân tử: 384,4222 - T ên khoa học: a - d ih y d ro artem isin in succinat 2.2 P h n s pháp điều chế: Sự p h át h iện phân lập artem isin in từ A rtem isia an n u a m ộ t thành công lớn việc sử d ụ n g dược liệu để điều trị sốt rét A rtem isin in có hiệu lực m ạnh có tác d ụ n g n h an h n g ay chủ n g P lasm o d iu m khán g C loroquin T uy nhiên, th í n g h iệm lâm sàng cho thấy rằng, điều trị artem isinin tái phát xảy sófm so với dùng Cloroquin, bệnh nhân ký sinh trù n g tro n g m áu N h ằm tăng độ tan tăng hiệu lực điều trị artem isin in , người ta đ ã n g h iên cứu bán tổ n g hợp m ộ t số dẫn chất nó, q u an trọng n h ất artesunat A rtesu n at b án tổng hợp từ n g u y ên liệu ban đầu arteiTnisinin qua giai đ o ạn trung gian d ih y d ro a rtem isin in (D H A ) T rên sở phương pháp n h khoa học T ru n g Q uốc, D L K laym an, P.B rossi cộng sự, trường Đ ại học Dược H N ội b án tổ n g hợp artesu n at q u a hai giai đoạn với hiệu suất cao [12] ... p háp định lượng artesu n at ch ế phẩm viên nén" với nhữ ng m ụ c tiêu sau: • X ác địn h tíiih đặc hiệu phương p háp định lượng artesu n at viên n én nước ta m ộ t số phương pháp định lượng artesu... i lượng tru n g b ìn h viên nén A: h àm lượng artesu n at củ a m ỗ i viên ghi nhãn Á p d ụ n g đ ịn h lượng viên n én , k ế t q u ả ghi b ản g 3.3 B ảng 3.3: K ết định lượng artesunat viên nén. .. Phưonig pháp đo kiềm tro n g m trưịỉng k han Phương pháp đo phổ hấp thụ vùng k h ả kiến d ạng m uối h y d ro x am at sắt 1.3.8 Các phương pháp địn h lượng khác: 1.4 Các phương pháp định lượng artesunat