Nghiên cứu phương pháp định lượng diltiazem trong huyết tương người bằng sắc ký lỏng khối phổ (LC MS)

ĐẶT VẤN ĐỀ   !"#$ %&!'"()*+, '" (!"#-'" -.",/012313%43%,5 '"1, 67869:;<=> ??(:*@;A>BCD).E";<=*@;A4 ,F '"G ,H IG)0 $36J"!$(E3K"L7,M#"N, 6O $!??"# )@P03 .E"&"!. 78E! ?Q, 7K("#M,RS"-S",G ) *.M3$S %# ,"4'"1 9,NMO I6J+ JT M'"6.E";<=*@;A!T""#BUV3WXD)AI" M"#$,6S"1Y3$%(7!03"# $2L 3"#  NS""%$ 8 , 97Z 7"%6.E")*J"M%L"I"G,! S"13[%\M47]^_W]U]_**`[\*3WC_a_W]U]S Hướng dẫn báo cáo số liệu nghiên cứu sinh khả dụng/ tương đương sinh học trong đăng ký thuốc)*N3[%\M4".Z (!, 97Z7"%6.E";<=,R*@;A P b$ "#".c"#  N3#,L35 @P03d'"1N:U>"#++Q N7,M'"$EUW!, 9:W>e "#7,MQN$27Mf) =g+ :=*h> %"#  N$9Y. i9%4,S"1&?"Z3 %,N - 1 - 7$jHQF )*.10,N! 7,MQ6WN"#'"$27Mf)k%# ,,4.E"6J"!N7,M $27Mf$E,N!3,L"I".E"S ;<=3*@;A#=*hS"IMJ"!lM) @.E";<=*@;A"# $"=*hm.3 %,e%"'"(I". JG'"K"LM3Ji/ n"G21 "#,1(: "3"M?3"35>)o"G 2"#,1(0RS"$H,P%"# , n"0!!p n"$S"IN!G6Q '"G2"#)A?e3",?!71 ",N,S"n!"3$!"m2!, /?!.G1RS"$ H)q2L3?G26O 1Rr+, e'"1.36 76,M'"6i 2JL) A#G2sq_k;_k;076(SK"L G23N,S",,(. E"69EN)F" %S%N2R ",3K"LG29S",. E"MO $ !)*".3QF K"L &!  t6HE9&NM) FL3mM Sc uNghiên cứu phương pháp định lượng Diltiazem trong huyết tương người bằng sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS)v 9.""c U).E"JG'"Ji/ n"1=*h,"M ?078sq`k; W)*O 1?G24JG) - 2 - PHẦN 1. TỔNG QUAN 1.1. TỔNG QUAN VỀ DILTIAZEM 1.1.1. Đặc điểm cấu tạo và tính chất hóa lý [24,28] a. Công thức cấu tạo ` qEGicq WW A WC  W w a ;)Aq ` <#Gicax])X^_ , ` *.,(cU3x`[+g,g+`a:xA>`,+3y`:+,J>`x`BW` : + ,>+D`W3y`,`W`:a` +,J+>3 ,,,,+3 b. Tính chất vật lý, hóa họcc ` [%M,Rb "Z3 ) ` %$6c*lW]V3x ] qMWUW3] ] q) ` A#G7#cs,z:,,_>{W3VX) ` =N "##,3|, 3,+,3 ,++)=N7+#,,,|, 3++)=,$M =*h,"M?78?Mb}b.S $ - 3 - "N7+PM78" e"?G ,,|, 3, +3+++3`+J5 ` =N90MUGi,,.$ 1=*h+,?"O%7N) ` zf!9~F`Fc@-!9,"1A W ;w a ]3Wk WyC 3,"1S WyV )=,$N"." MO $178,Mf!9~F,R Azsq++,~F) ` •$'".c€UU] ] M€UUC ]€ ) 1.1.2. Tác dụng dược lý, dược động học: a. Tác dụng dược lý [3,4,5,21] =g+  %n!7+g,g+$9Y. •$% N N,N),md L n"Si? ,$ L 1 36 ,7$?  L n"Sm!)*"#i9,S"1" ZH"M) b. Dược động học [16,23,25,26]: `*"#!"+,0."$3716Q 7QEH)*,M7G0"0 7eHb'"0"#)*"#71"$'"II"3N, S"!"$")*j"#.M,+,:,6 ^]`^x‚>)FLS""!C] =*h3P%"#, "M?NN,6W]]_ )*2G7#7"Mly M^_3,6M"'"G3-$,6W}a‚,6N 7Mf'"")*076,6y`^0) - 4 - `;6O "$7,P c o =++g+ :U> o  ,,+ +g+ :W> o =++`` ,,+ +g+ :y> o =++g+ `,J:a> o =++w`+ +g+ :x> o =++3w`+ +g+ :C> ` <JG?G2=*h,1(? I$N1,6V`U]_ :U_W]MU_y] q J >6 76,ƒ~q  „^]‚ƒ~q … ) c. Chỉ định và cách dùng By3a3xD − sS"0c~#C] 3yI %H) − †S"1"Zc~#C] g+ 3yI %p,R QI"78S"y] 3aI %3HS"IM, ,6U`W")†#0771"Zf13$ 06$L S"lyC]`a^] ) − †S"1H"Mc=0%,R6$L  S"7I",6C]`UW] 3WI %pEUa %I3$ HS"M"IMS"# ‡yC] ) d. Lưu ý khác khi dùng thuốc BWUD ` Tác dụng phụ : *"#$G$1"2S"Q %#07) <,6y]‚07"#LR9 , "#.'"M6HG4 Ng+ )e 7"R!EI"37"P3$ RfG) - 5 - ` Chống chỉ định: o ˆ#,N,N%mJ,37#!%W%y) o kn6 g+ ) o ;"!‰ +,""Mf) o 1 L x]m) 1.1.3. Một số phương pháp định lượng DTZ trong dịch sinh học @RG2"#,1(EN3nS" !3P%,N!!# n"IG2S".& be."I"?76"c ` *2R",cG7=*hN!n, n"3 R7!"$$E?) ` @%N,cP%"#,1(0!!3& b?6$%N,) − *0G2 n"Z#c# n"G2 ,*@;A!S"3M"0G2T,$6 QM'"6G2) k%#?G2=*h,1(fQ76U)Uc - 6 - Bảng 1.1:Một số phương pháp phân tích DTZ trong huyết tương Stt Tài liệu Xử lý mẫu Phương pháp phân tích Thời gian phân tích mẫu (phút) LLOQ (ng/ml) U BUWD <M,+78+,+ sq}k;_k; Š;‹ Ux U W ByWD qMZ:;zŠ> Azsq}~F WUx U] W] y BXD qMZ:;zŠ> Azsq}~F Wy^ Ux W3x a BU^D qMb}b78+ ++ A""!Mx])a`x^)^‚ :sq_k;_k;> Š;‹:€> W W x BUXD qMb}b78+J+} ,,|, `,,, :C]ca]cx> Azsq`~F WyX UW y C BUaD <S $78"1 <Aqwy]3]Uk3PM78 +++)*M9M78 Aq]3]Uk+ 7? &2?"$&Z 78Aq])]]Wk Azsq`~F Ux x V BUyD <S $78 ,"|P Mb}b78 +`+` 7"++ Azsq`Œs X W ^ BWWD qMZ:;zŠ> :sq_k;_k;> Š;‹:€> y U X BVD <S $78 ,"|P Azsq}~F Ua U] - 7 - M78+++) Wxa U] B^D <S $PMb}b 78+`7" +++ Azsq}~F Wa] Ux U *lM'"6.E"S1=*h,"M?3m !c - zzUc;i9++,#f3zz$" N1 N."I":U_ >K"LJi/ n"?678,+3P 01=*hW!"$2)*".NM ?0G2 n"'":Ux•>30 ;<=*@;A) - zzWc@1=*h78Azsq++,~FQ7$ WUx 3zz$" M71f7M$9QS" 7,G2)*".3 0G2 n":Ux m>3N1W]_ „U_U]q J ?Ji/ n" 78MZ2;<= *@;A) - zzyc@1P0=*h!"$2$i 9++,~FQ7$Wy^ 3".?Ji/ n" 78MZ#T 30G2 n"N'":Uxm>) - zzac;i9++,#fK"LJi/ n"78Mb }b3N1N."I"0G2Z)*" .?$""!M!:x])a`x^)^‚>f 1) - zzxc;i9++,~FQ7$WyX ?Ji/ n"?678Mb}b3zz$N1 :y_ > 0G2 n"'":UWm>) - 8 - - zzCc;i9++,~F3zz1P0=*hC !"$$3N1:y_ > 0G2 n"'":Uxm>?Ji/ n"78 Mb}b'"W,NGS"#) - zzVc;i9++,"•'"3zz$N1 :W_ >30G2 n"'":X•>)*"0, =*h"•'"M.66EN,n !"•'"3S"#0ENŽG#) - zz^c;i9++,#f3zz1P0 =*h!"$3N1!:U_ >30 G2 n"'":ym>)*".?Ji/ n"78MZ#T 0mE9M) - zzXc;i9++,~FQ7$Wxa ?Ji/ n"78Mb}b3 zzN1 :U]_ >0G2 n"'":Uam> - zzU]c;i9++,~FQ7$Wa] ?Ji/ n"?678Mb}b3zz$N1 :U_ >0G2 n"N'":Uxm> - 9 - 1.2. TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP LC/MS [10,11] 1.2.1. Khái niệm ;Z/b#fK"LG2$M6H G!,‡7%LZ/b"H, (High performance liquid chromatography - Azsq)6HG2 ##: _g>7%L#f:Mass spectrometry - MS>)  1.2.2. Phân loại =, G2#f:Mass analyser>3#sq_k;$y ,N?76c ` *E (Quadrupole)c $a2R,,3W#" $278")q,I#'"Tr• ++,3e,71,71L,E) ` [n,:Ion trap>c!6,"+,J,Z#3I# '"TˆŒf(,,‡b:7n ,>) ` •,07: Time-of-flight tube)c,$##" r$07"3,G+,07) FMWS",N."N,#k;_k; c+`'"",+ ,R +    +, ++3o`*,|35A# k;_k;G2,G 6 3!$/,1 !J1!"mG,6HG21231) 1.2.3. Cấu tạo *I?76#sq_k; :AU)U>P c# Azsq3 k; RG,$:"esqk;>) - 10 - [...]... lấy phần huyết tương bảo quản ở -40 0C cho tới khi phân tích Định lượng DTZ trong các mẫu huyết tương NTN bằng phương pháp LCMS/MS đã được thẩm định Từ kết quả định lượng xác định các thông số dược động học như nồng độ cực đại trong huyết tương (C max), thời gian bán thải (t1/2) của DTZ trên NTN qua đó đánh giá khả năng ứng dụng của phương pháp phân tích đã được xây dựng trong các nghiên cứu sinh khả... kiện sắc ký thích hợp để có thể tiến hành định lượng DTZ trong huyết tương NTN bằng phương pháp HPLC với detector MS 2.3.1.3 Khảo sát qui trình xử lý mẫu, đánh giá ảnh hưởng của nền mẫu Dựa vào các tài liệu tham khảo, tiến hành khảo sát phương pháp xử lý mẫu, chiết tách DTZ từ huyết tương trờn cỏc mẫu chuẩn DTZ hoà tan trong pha động; mẫu huyết tương trắng và các mẫu chuẩn DTZ hoà tan trong huyết tương. .. chia làm 2 phần: phần 1 tiêm sắc ký ngay sau khi xử lý; phần 2 để trong autosampler chờ 12 giờ sau xử lý rồi tiêm sắc ký So sánh nồng độ DTZ của mẫu tiêm sắc ký ngay và mẫu tiêm sắc ký 12 giờ sau xử lý 2.3.3 Đánh giá khả năng phù hợp của phương pháp: Để đánh giá khả năng phù hợp của phương pháp đã xây dựng chúng tôi tiến hành định lượng xác định nồng độ DTZ trong các mẫu huyết tương của 3 NTN sử dụng DTZ... – 1000 µl + Bình định mức, dụng cụ thuỷ tinh (class A) dùng trong phân tích 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU - Mẫu trắng: Huyết tương trắng – Viện Huyết học và Truyền máu TW - Mẫu chuẩn hay mẫu thử tự tạo: Hoà tan DTZ chuẩn trong huyết tương trắng với các nồng độ thích hợp - Mẫu thử: Huyết tương của NTN sau khi uống thuốc DTZ chứng hoặc thử 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Xây dựng phương pháp phân tích 2.3.1.1... 2.3.2.3 Xác định giới hạn định lượng dưới (LLOQ) - 24 - Tiến hành sắc ký các mẫu trắng và mẫu chuẩn có nồng độ 5 ng/mL huyết tương với 6 mẫu độc lập Ghi lại đáp ứng pic của mẫu trắng và mẫu chuẩn Xác định đáp ứng pic của mẫu chuẩn, mẫu trắng Xác định độ đúng của phương pháp bằng cách so sánh giá trị định lượng được (tính từ đường chuẩn) với giá trị thực có trong mẫu Nồng độ được coi là giới hạn định lượng. .. hành định lượng bằng các kỹ thuật khác nhau, trong đó một kỹ thuật hay được dùng phổ biến hiện nay là sắc ký lỏng hiệu năng cao Hoạt chất sau khi đi qua cột sắc ký lỏng được đưa đến bộ phận phát hiện, gọi là detector Có nhiều loại detector được ghép nối với thiết bị sắc ký lỏng - Detector UV - Detector mảng diod - Detector huỳnh quang - Detector chỉ số khúc xạ - Detector điện hoá - Detector khối phổ. .. chuẩn pha trong huyết tương trắng, tiến hành trong cùng điều kiện Xác định độ đúng trong ngày bằng cách tính tỷ lệ % giá trị tìm thấy so với giá trị thực của các mẫu trong cùng 1 ngày Độ đúng của phương pháp tại mỗi nồng độ phải nằm trong khoảng từ 85% đến 115% Độ chính xác trong ngày thể hiện qua độ lệch chuẩn tương đối (RSD) giữa giá trị các lần định lượng của mỗi nồng độ được phân tích trong cùng... TRONG DỊCH SINH HỌC [17] 1.3.1 Các phương pháp chiết tách thuốc trong huyết tương[ 1,17]: Mẫu thuốc trong huyết tương phải được chiết tách trước khi đưa vào thiết bị phân tích Có 3 phương pháp chính được dùng để chiết tách hoạt chất ra khỏi dịch sinh học: a Phương pháp chiết pha rắn (SPE) : - Nguyên tắc: Là phương pháp tách riêng chất cần phân tích ra khỏi các tạp có trong nền mẫu, dựa trên sự khác nhau... và phổ m/z (b) 1.2.4 Ứng dụng LC/MS được ứng dụng trong các lĩnh vực: - Nghiên cứu hợp chất mới, đặc biệt nghiên cứu phát triển thuốc - Nghiên cứu xác định hợp chất sinh học phức tạp, định danh protein - Nghiên cứu tồn dư chất bảo vệ thực vật và hormon tăng trưởng - Phân tích thuốc trong dịch sinh học: dược động học, sinh khả dụng, tương đương sinh học, theo dõi điều trị… - 15 - 1.3 PHÂN TÍCH THUỐC TRONG. .. mảnh phổ m/z 235  86 của LID và m/z 267  181 của TMZ, khác điều kiện tạo mảnh phổ của DTZ nhiều, không thể sử dụng chung điều kiện khối phổ trong phân tích mẫu, cần tạo điều kiện khối phổ riêng Trong cùng một phương pháp phân tích không thể chạy hai điều kiện khối phổ khác nhau trên cùng một khoảng thời gian xác định Do vậy, chúng tôi lựa chọn FELO làm nội chuẩn để tiếp tục triển khai nghiên cứu 3.1.2 . t6HE9&NM) FL3mM Sc uNghiên cứu phương pháp định lượng Diltiazem trong huyết tương người bằng sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS)v 9.""c U).E"JG'"Ji/. zG2"#,1(c%(36 93??(3+,•S"15 - 15 - Hình 1.6: Sắc ký đồ tổng ion (a) và phổ m/z (b) :> :7> 1.3. PHÂN TÍCH THUỐC TRONG DỊCH SINH HỌC [17] 1.3.1. Các phương pháp chiết tách thuốc trong huyết tương[ 1,17]c kn""#,"M?6M, M71G2)q$y?2M,N! b1(c a Ji/78UK"L" M'"6 , "#) 1.3.2. Định lượng thuốc trong huyết tương bằng sắc ký lỏng với các loại detector BU]Dc *"#",NNbI1(3 M178K"L"3,$